專利名稱：鯉鯽雜交魚的選育方法及其遠緣雜交品系的建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種魚類的遠緣雜交方法，尤其涉及一種以鯉魚為母本、鯽魚為父本的遠緣雜交方法。
背景技術(shù)：
雜交技術(shù)是改良魚類性狀常用的方法，親緣關(guān)系在種間或種間以上的雜交一般稱為遠緣雜交。遠緣雜交作為一種重要的魚類遺傳育種和性狀改良方法，它可以整合整套外源基因，從而改變雜交后代基因的表達調(diào)控，使得雜交后代可能在生長速度、抗逆性、抗病性以及肉質(zhì)等方面表現(xiàn)出雜種優(yōu)勢。如紅鯽與湘江野鯉的屬間遠緣雜交形成的雜交后代具有生長速度快、肉質(zhì)鮮嫩、抗病力強、存活率高等優(yōu)點?，F(xiàn)今一般的觀點認為鯽魚和鯉魚間雜交一代是完全不育的，如何利用和改進現(xiàn)有的生物學(xué)技術(shù)和方法來對現(xiàn)有的自然魚種進行遺傳改良以獲得性狀更為優(yōu)良、品種更加豐富和對遺傳研究更有意義的新型多倍體魚，就成為本領(lǐng)域技術(shù)人員長期面臨和需要解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種所獲雜交魚品種優(yōu)良的鯉鯽雜交魚的選育方法，還提供一種所獲雜交魚品種優(yōu)良的鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系建立的方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出的技術(shù)方案為一種鯉鯽雜交魚的選育方法，包括以下步驟首先，以錦鯉為母本親魚，以紅鯽為父本親魚，對所述父、母本親魚先進行人工催產(chǎn)，再進行人工干法授精，將受精卵置于培養(yǎng)皿中進行流水孵化，再對孵化出的魚苗進行飼養(yǎng)、檢測，進而選育出雌性或雄性可育的鯉鯽雜交F1代個體。上述鯉鯽雜交魚的選育方法中，所述母本親魚選取兩齡以上、無病態(tài)、發(fā)育良好、性成熟特征明顯的錦鯉，所述父本親魚選取兩齡以上、無病態(tài)、發(fā)育良好、性成熟特征明顯的紅鯽；所述父、母本親魚在進行人工催產(chǎn)前，先放入親魚池內(nèi)人工精養(yǎng)3 4個月。上述鯉鯽雜交魚的選育方法中，所述人工催產(chǎn)的具體操作步驟優(yōu)選包括在4月初至5月下旬，水溫維持在20°C 26°C，對母本親魚先注射絨毛膜促性腺激素(HCG)與黃體素釋放激素類似物(LRH-A)的混合液催產(chǎn)，其中絨毛膜促性腺激素的用量為600IU/kg 800IU/kg，黃體素釋放激素類似物的用量為10ug/kg 20ug/kg ;再對父本親魚注射絨毛膜促性腺激素與黃體素釋放激素類似物的混合液，相比母本親魚，其注射劑量減半；然后按I (5 10)的數(shù)量比將注射后的母本親魚、父本親魚放入同一產(chǎn)卵池(水面面積為80 m2左右)中，然后向產(chǎn)卵池中沖水(視水情及時向池中沖水，尤其在產(chǎn)卵前3h 4h)，注入一定水量后停止沖水并讓父、母本親魚在靜水中催產(chǎn)，直至其開始順利產(chǎn)卵和產(chǎn)精。上述的鯉鯽雜交魚的選育方法中，所述檢測過程包括利用流式細胞測定DNA含量以及利用腎細胞染色體制備工藝檢測飼養(yǎng)后鯉鯽雜交魚的染色體倍性。上述本發(fā)明的技術(shù)方案中，錦鯉與紅鯽的屬間遠緣雜交形成的雜交后代F1除具有生長速度快、肉質(zhì)鮮嫩、抗病力強、存活率高等優(yōu)點外，體背還明顯增高，頭部顏色金灰相間，鱗片外緣呈金黃色，背部呈整齊的金黃色，是一種外形優(yōu)美、體色獨特、具有良好觀賞價值及應(yīng)用前景的雜交魚。更重要的是，傳統(tǒng)觀點認為鯽魚和鯉魚間雜交一代是完全不育的，但通過采用本發(fā)明的上述選育方法，我們在雜交F1代的雌性和雄性群體中穩(wěn)定地獲得了可育的個體，并且通過后續(xù)的研究發(fā)現(xiàn)，前述雜交F1代的可育個體經(jīng)過自交可穩(wěn)定制備鯉鯽雜交二倍體F2代，這為后續(xù)異源四倍體魚的培育奠定了堅實的基礎(chǔ)。作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系的建立方法，將上述選育方法獲得的鯉鯽雜交F1代中的雄性雜交魚和雌性雜交魚進行自交，培育得到鯉鯽雜交F2代。通過鯉鯽雜交F1自交可以穩(wěn)定獲得鯉鯽雜交F2代，經(jīng)過我們的檢測研究發(fā)現(xiàn)，鯉鯽雜交F2代同樣兩性可育。通過對F2進行自交，有望在其后代F3中發(fā)現(xiàn)兩性可育并可穩(wěn)定遺傳的四倍體，利用異源四倍體鯽鯉與二倍體雜交，則有望制備具有生長速度快、抗逆性強、不育的三倍體鯽(鯉)魚，可見，鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系的建立將具有明顯的經(jīng)濟效益和社會效益。上述的鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系的建立方法，所述自交的具體方法為將兩齡以上的所述雄性雜交魚和雌性雜交魚放入親魚池內(nèi)，先進行人工催產(chǎn)，再進行人工干法授精和流水孵化，最后進行飼養(yǎng)，直至魚苗長成后經(jīng)檢測獲得鯉鯽雜交F2代二倍體魚。上述的鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系的建立方法中，所述雜交魚的人工催產(chǎn)過程優(yōu)選包括當(dāng)繁殖季節(jié)水溫穩(wěn)定在20°c 26°C時，選擇腹部膨大、輕壓腹部能擠出墨綠色卵子的雌性雜交魚個體作為母本親魚，選擇擠出水樣精液的雄性雜交魚個體，利用普通光學(xué)顯微鏡對精液進行鏡檢，選擇精液中有活精子的雄性雜交魚個體作為父本親魚，然后先對母本注射黃體素釋放激素類似物(LRH-A)、絨毛膜促性腺激素(HCG)及地歐酮(DOM)的混合催產(chǎn)劑進行催產(chǎn)，所述黃體素釋放激素類似物的用量為10ug/kg 15ug/kg，所述絨毛膜促性腺激素的用量為500IU/kg 1000IU/kg，所述地歐酮的用量為lmg/kg ;母本親魚注射完成后4h 5h再注射父本親魚，父本親魚的黃體素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素的注射劑量相比母本親魚減半，且父本親魚不注射地歐酮；注射完畢后按I : (5 10)的數(shù)量比將母、父本親魚放入同一(水面面積為80 m2左右，水深為Im左右)產(chǎn)卵池中，然后在產(chǎn)卵前3h 4h (據(jù)水情及時)向池中沖水，此后停止注水，讓魚在靜水中催產(chǎn)，直至其開始順利產(chǎn)卵和產(chǎn)精。上述的鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系的建立方法，在所述自交的人工干法授精過程中，選取不帶粘稠物質(zhì)、游離自如的卵子進行干法人工授精。將獲得的受精卵進行孵化，待魚苗全部孵出后，繼續(xù)在玻璃培養(yǎng)皿中培育2天，再將魚苗放入網(wǎng)箱中繼續(xù)飼養(yǎng)，其中清水的高度從30cm高逐漸提升,在一周內(nèi)升高到O. 8m I. 2m,當(dāng)魚苗長到3cm 4cm長時,轉(zhuǎn)入池塘中飼養(yǎng)；I 2天后潑灑豆?jié){，2 3次/天，力求細、勻，直至魚苗長成后經(jīng)檢測獲得鯉鯽雜交F2代二倍體魚。所述自交的檢測過程優(yōu)選包括利用流式細胞測定DNA含量以及利用腎細胞染色體制備工藝檢測飼養(yǎng)后鯉鯽雜交魚的染色體倍性。本發(fā)明的上述技術(shù)方案中，錦鯉iColorcarp)在生物學(xué)上屬于鯉形目、鯉科、鯉屬
、鯉iCyprinus carpio Zizwaew1S),是人們對自然魚種進行雜交選育而形成的一種典型的觀賞性魚，錦鯉具有體格健美、色彩艷麗、花紋美麗、泳姿優(yōu)美等優(yōu)點，有“水中活寶石”和“會游泳的藝術(shù)品”之稱。紅鯽同樣隸屬于鯉科(Cyprinit/ae )、鯽屬(Carassius )、鯽種(Ckra1S1Siw1S auratus)中的二倍體魚(2n=100),其體形優(yōu)美,抗逆性強，肉質(zhì)細嫩。本發(fā)明通過屬間的遠源雜交，整合了父母本花紋美麗、體型健美、抗逆性強等優(yōu)點；其次，本發(fā)明也克服了遠源雜交不能成活或者成活率低的問題；在同等養(yǎng)殖條件下，本發(fā)明方法培育的鯉鯽F1具有高受精率和高孵化率，鯉鯽體色獨特，鯉鯽的頭部顏色金灰相間，鱗片外緣呈金黃色，背部呈整齊的金黃色，具有良好的觀賞價值及應(yīng)用前景。已有的研究表明，利用紅鯽(2n=100)為母本及湘江野鯉(2n = 100)為父本產(chǎn)生的遠緣雜交后代中，F(xiàn)1 - F2為二倍體(2n=100)，而在二倍體F2個體中，存在能分別產(chǎn)生二倍體卵子和二倍體精子的雌、雄個體，二倍體卵子和二倍體精子結(jié)合，形成了兩性可育的四倍體魚(F3)。目前四倍體鯽鯉已連續(xù)繁殖了 20代(F3 - F22),形成了一個遺傳性狀穩(wěn)定的四倍體魚群體(4n = 200)。而本發(fā)明中利用錦鯉和紅鯽進行屬間遠緣雜交，獲得的鯉鯽F1兩性可育，通過進一步的自交，已成功選育出鯉鯽F2群體，形成了鯉鯽雜交魚品系，這為選育異源四倍體魚品系奠定了堅實的基礎(chǔ)。通過繼續(xù)在錦鯉(2n=100)和紅鯽(2n=100)的雜交后代中進行多代選育，也有望獲得兩種新型四倍體資源一四倍體鯉鯽。因此，二倍體鯉鯽的培育，不僅為優(yōu)良品種的選育奠定了良好基礎(chǔ)，而且為后續(xù)的新型多倍體魚的選育提供了寶貴的資源，對今后的遺傳育種及生物進化學(xué)的研究具有重要意義。


圖I為本發(fā)明中錦鯉(早)X圖2為本發(fā)明中錦鯉(早)X圖3為本發(fā)明中錦鯉(早)X圖4為本發(fā)明中錦鯉(早)X圖5為本發(fā)明中錦鯉(早)X圖6為本發(fā)明中錦鯉(早)X圖7為本發(fā)明中錦鯉(早)X圖8為本發(fā)明中錦鯉(早)X
紅鯽(S)F1后代的外形照片。
紅鯽U ) F1的DNA含量圖。
紅鯽U ) F1后代的染色體(2n=100) t紅鯽U ) F1的精巢性腺切片。
紅鯽U ) F1的卵巢性腺切片。
紅鯽U ) F2后代的外形照片。
紅鯽U ) F2的DNA含量圖。
紅鯽U )F2后代的染色體(2n=100)t
具體實施例方式以下結(jié)合說明書附圖和具體優(yōu)選的實施例對本發(fā)明作進一步描述，但并不因此而限制本發(fā)明的保護范圍。實施例
一種鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系的建立方法，包括首先，以錦鯉為母本親魚，以紅鯽為父本親魚，對父、母本親魚先進行人工催產(chǎn)，再進行人工干法授精，將受精卵置于培養(yǎng)皿中進行流水孵化，再對孵化出的魚苗進行飼養(yǎng)、檢測，進而選育出鯉鯽雜交F1代；將選育獲得的鯉鯽雜交F1代中的雄性雜交魚和雌性雜交魚進行自交，培育得到鯉鯽雜交F2代。本實施例的上述鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系的建立方法具體包括以下兩大步驟
I.鯉鯽F1代的獲得。I. I父母親本的選擇和培養(yǎng)選取兩齡以上、無病態(tài)、發(fā)育良好、性成熟特征明顯的雌性錦鯉作為母本親魚，再選擇兩齡以上、無病態(tài)、發(fā)育良好、性成熟特征明顯的雄性紅鯽作為父本親魚，將父、母本親魚放入親魚池內(nèi)，人工精養(yǎng)3 4個月。
I. 2人工催產(chǎn)在4月初至5月下旬，水溫維持在20°C 26°C時，將親魚池內(nèi)兩齡以上的雌性親魚注射絨毛膜促性腺激素(HCG)與黃體素釋放激素類似物(LRH-A)的混合液催產(chǎn)，其中絨毛膜促性腺激素的用量為600IU/kg 800IU/kg、黃體素釋放激素類似物的用量為10ug/kg 20ug/kg。再選擇雄性親魚，對其注射絨毛膜促性腺激素與黃體素釋放激素類似物的混合液，相比雌性親魚，其注射劑量減半。注射完畢后按I : (3 5)的數(shù)量比將母、父本親魚放入水面面積為90m2左右的同一產(chǎn)卵池中，然后視水情及時向產(chǎn)卵池中沖水，尤其在產(chǎn)卵前3h 4h，注入一定水量后，停止注水，讓父、母本親魚在靜水中催產(chǎn)，直至其開始順利產(chǎn)卵和產(chǎn)精。I. 3人工授精與孵化當(dāng)人工催產(chǎn)8h 12h后，選取產(chǎn)卵順利的母本與產(chǎn)精順利的父本進行人工干法授精，將受精卵均勻鋪于玻璃培養(yǎng)皿中，20°C左右的流水孵化。I. 4鯉鯽F1的飼養(yǎng)待魚苗全部孵出后，繼續(xù)在玻璃培養(yǎng)皿中培育2天，再將魚苗放入網(wǎng)箱中繼續(xù)飼養(yǎng)，其中清水的高度從30cm高逐漸提升,在一周內(nèi)升高到O. 8m I. 2m,當(dāng)魚苗長到3cm 4cm長時，轉(zhuǎn)入池塘中飼養(yǎng)；1 2天后潑灑豆?jié){，2 3次/天，力求細、勻。魚苗長成后經(jīng)檢測獲得鯉鯽F1雜交二倍體魚(外形照片參見圖I)。待鯉鯽F1雜交二倍體魚苗培育九個月左右后，隨機抽樣，人工測量并分析其生物學(xué)性狀相關(guān)數(shù)據(jù)，如側(cè)線鱗數(shù)、背鰭條數(shù)、體長/體高值等，并分別與其父、母本成體的各項已知數(shù)據(jù)進行比較，比較結(jié)果如下表I、表2所示。表I :錦鯉(早)X紅鯽U ) F1及其父母本可量性狀比值統(tǒng)計
權(quán)利要求
1.一種鯉鯽雜交魚的選育方法，包括以下步驟首先，以錦鯉為母本親魚，以紅鯽為父本親魚，對所述父、母本親魚先進行人工催產(chǎn)，再進行人工干法授精，將受精卵置于培養(yǎng)皿中進行流水孵化，再對孵化出的魚苗進行飼養(yǎng)、檢測，進而選育出雌性或雄性可育的鯉鯽雜交？1代個體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的鯉鯽雜交魚的選育方法，其特征在于所述母本親魚選取兩齡以上、無病態(tài)、發(fā)育良好、性成熟特征明顯的錦鯉，所述父本親魚選取兩齡以上、無病態(tài)、發(fā)育良好、性成熟特征明顯的紅鯽；所述父、母本親魚在進行人工催產(chǎn)前，先放入親魚池內(nèi)人工精養(yǎng)3 4個月。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鯉鯽雜交魚的選育方法，其特征在于，所述人工催產(chǎn)的具體操作步驟包括在4月初至5月下旬，水溫維持在20 V 26°C，對母本親魚先注射絨毛膜促性腺激素與黃體素釋放激素類似物的混合液催產(chǎn)，其中絨毛膜促性腺激素的用量為600IU/kg 800IU/kg，黃體素釋放激素類似物的用量為10ug/kg 20ug/kg ;再對父本親魚注射絨毛膜促性腺激素與黃體素釋放激素類似物的混合液，相比母本親魚，其注射劑量減半；然后按I : (5 10)的數(shù)量比將注射后的母本親魚、父本親魚放入同一產(chǎn)卵池中，然后向產(chǎn)卵池中沖水，之后停止沖水并讓父、母本親魚在靜水中催產(chǎn)，直至其開始順利產(chǎn)卵和產(chǎn)精。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的鯉鯽雜交魚的選育方法，其特征在于，所述檢測過程包括利用流式細胞測定DNA含量以及利用腎細胞染色體制備工藝檢測飼養(yǎng)后鯉鯽雜交魚的染色體倍性。
5.一種鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系的建立方法，其特征在于，將權(quán)利要求I 4中任一項所述選育方法獲得的鯉鯽雜交F1代中的雄性雜交魚和雌性雜交魚進行自交，培育得到鯉鯽雜交F2代。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系的建立方法，其特征在于，所述自交的具體方法為將兩齡以上的所述雄性雜交魚和雌性雜交魚放入親魚池內(nèi)，先進行人工催產(chǎn)，再進行人工干法授精和流水孵化，最后進行飼養(yǎng)，直至魚苗長成后經(jīng)檢測獲得鯉鯽雜交F2代二倍體魚。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系的建立方法，其特征在于，所述雜交魚的人工催產(chǎn)過程包括當(dāng)繁殖季節(jié)水溫穩(wěn)定在20°C 26°C時，選擇腹部膨大、輕壓腹部能擠出墨綠色卵子的雌性雜交魚個體作為母本親魚，選擇擠出水樣精液的雄性雜交魚個體，利用普通光學(xué)顯微鏡對精液進行鏡檢，選擇精液中有活精子的雄性雜交魚個體作為父本親魚，然后先對母本注射黃體素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素及地歐酮的混合催產(chǎn)劑進行催產(chǎn)，所述黃體素釋放激素類似物的用量為10ug/kg 15ug/kg，所述絨毛膜促性腺激素的用量為500IU/kg 1000IU/kg，所述地歐酮的用量為lmg/kg ;母本親魚注射完成后4h 5h再注射父本親魚，父本親魚的黃體素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素的注射劑量相比母本親魚減半，且父本親魚不注射地歐酮；注射完畢后按I : (5 10)的數(shù)量比將母、父本親魚放入同一產(chǎn)卵池中，然后在產(chǎn)卵前3h 4h向池中沖水，此后停止注水，讓魚在靜水中催產(chǎn)，直至其開始順利產(chǎn)卵和產(chǎn)精。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系的建立方法，其特征在于，在所述自交的人工干法授精過程中，選取不帶粘稠物質(zhì)、游離自如的卵子進行干法人工授精。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系的建立方法，其特征在于，所述自交的檢測過程包括利用流式細胞測定DNA含量以及利用腎 細胞染色體制備工藝檢測飼養(yǎng)后鯉鯽雜交魚的染色體倍性。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鯉鯽雜交魚的選育方法，包括以下步驟首先，以錦鯉為母本親魚，以紅鯽為父本親魚，對父、母本親魚先進行人工催產(chǎn)，再進行人工干法授精，將受精卵置于培養(yǎng)皿中進行流水孵化，再對孵化出的魚苗進行飼養(yǎng)、檢測，進而選育出雌性或雄性可育的鯉鯽雜交F1代個體。本發(fā)明還公開了一種鯉鯽雜交魚遠緣雜交品系的建立方法，將前述選育方法獲得的鯉鯽雜交F1代中的雄性雜交魚和雌性雜交魚進行自交，培育得到鯉鯽雜交F2代。本發(fā)明不僅為優(yōu)良品種的選育奠定了良好基礎(chǔ)，而且為后續(xù)的新型多倍體魚的選育提供了寶貴的資源，對今后的遺傳育種及生物進化學(xué)的研究具有重要意義。
文檔編號A01K61/00GK102919174SQ20121044958
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月12日
發(fā)明者劉少軍, 肖軍, 謝翔, 陶敏, 張純, 羅凱坤, 劉筠 申請人:湖南師范大學(xué)