專利名稱：一種提高白及組培苗移栽成活率的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于組培育苗技術(shù)領(lǐng)域，具體說(shuō)涉及一種提高白及組培苗移栽成活率的方法。
背景技術(shù)：
mkQBletilla striata (Thunb. )Rchb. f.)為蘭科白及屬多年生草本植物，以干燥假傷出血、瘡瘍腫毒、肺結(jié)核咳血、潰瘍病出血等病癥，在我國(guó)民間作為藥用已有上千年的歷史，為多種中成藥的原料。另外工業(yè)上用作染布的粘合劑、在卷煙生產(chǎn)中用白及作粘合劑卷制煙條，在美容上用作護(hù)膚化妝品的原料，此外，白及花色艷麗，是一種很好的景觀植物。近年來(lái)，由于白及的藥用價(jià)值和觀賞價(jià)值引起人們的關(guān)注，野生白及遭到過(guò)度采挖，導(dǎo)致野生資源越來(lái)越少，目前已被《中國(guó)植物紅皮書一稀有瀕危植物》第I冊(cè)收錄，同時(shí)也被寫入了《瀕危野生動(dòng)植物國(guó)際貿(mào)易公約》保護(hù)種類。白及的種子非常細(xì)小且無(wú)胚乳，自然條件下極難萌發(fā)和生長(zhǎng)，實(shí)生苗的栽培較為困難，傳統(tǒng)栽培主要靠分株繁殖，但分株繁殖周期長(zhǎng)，繁殖效率低，而且耗種量大，很難滿足大量栽培的需要。組織培養(yǎng)技術(shù)可以快速繁殖大量種苗，遠(yuǎn)較分株繁殖快捷高效。近年來(lái)，一些地區(qū)開(kāi)展了白及組培快繁的研究，但實(shí)驗(yàn)證明白及組培苗移栽成活率非常低，未能使組培快繁技術(shù)應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種提高白及組培苗移栽成活率的方法，該方法在生根階段加入自制誘抗劑，使其在生根培養(yǎng)的同時(shí)誘導(dǎo)組培苗的抗逆性，增強(qiáng)苗對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力，以提聞苗的移栽成活率。
本發(fā)明的技術(shù)方案是一種提高白及組培苗移栽成活率的方法，為組織培養(yǎng)方法，所用專用培養(yǎng)基由種子萌發(fā)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基組成，其中
種子萌發(fā)培養(yǎng)基的配方配比為l/2MS+6-BA I. Omg/L+NAA 0. 75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L ；
增殖培養(yǎng)基的配方配比為MS+6-BA I. Omg/L + KT 3. Omg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/
L ；
生根培養(yǎng)基的配方配比為MS+NAA0. 5mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉8g/L ；
一種提高白及組培苗移栽成活率的方法，按以下步驟進(jìn)行
A.白及種子無(wú)菌萌發(fā)將采摘來(lái)的未開(kāi)裂蒴果用自來(lái)水沖洗30min，然后用洗衣粉浸泡20min，再用自來(lái)水沖洗30min，然后在超凈工作臺(tái)上用75%酒精浸泡30秒，無(wú)菌水沖洗2-3次，再置于次氯酸鈉溶液中12分鐘，期間不斷攪拌，無(wú)菌水沖洗3-5次，然后浸泡在無(wú)菌水中待用；用無(wú)菌的解剖刀將已消毒的白及蒴果切開(kāi)，將白及種子接種在上述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)于光照12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3000 lx，溫度21 士 2°C的培養(yǎng)室；接種一星期后，種子萌發(fā)為肉眼可見(jiàn)的白色原球莖，兩星期后白色原球莖膨大變綠，萌發(fā)率可達(dá)到99%以上；B、增殖培養(yǎng)培養(yǎng)45天待種子苗長(zhǎng)到2-3cm左右，在超凈工作臺(tái)上，將種子苗取出，采用直立插入的方法轉(zhuǎn)接到上述的增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)于光照12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3000lx，溫度21 士 2°C的培養(yǎng)室。兩個(gè)月后，增殖倍率達(dá)到5 ；
C、生根培養(yǎng)和抗逆誘導(dǎo)在超凈工作臺(tái)上，將白及無(wú)根苗取出，采用直立插入的方式接種到上述的生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基中同時(shí)加有自制誘抗劑10ml/L，培養(yǎng)于光照12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為30001X，溫度為21 士 2°C的培養(yǎng)室；兩個(gè)月后，平均每株生根數(shù)可達(dá)到2-4條；所述自制誘抗劑的配方配比為SA 0.3 g/L + CTS 2 g/L ；
D、煉苗移栽從培養(yǎng)室取出培養(yǎng)瓶，置于煉苗室常溫適應(yīng)3d，旋松蓋子2d，然后開(kāi)蓋適應(yīng)3d ;煉苗完成后，洗干凈白及根部的瓊脂，移栽到盛有松針土的花盆中；花盆周圍擺上裝滿水的盆或敞口瓶以保持周圍環(huán)境的濕度，移栽后精心管理，每天早晚葉面噴水；2周后可觀察到葉片返青，繼續(xù)培養(yǎng)35天后可見(jiàn)到新葉開(kāi)始生長(zhǎng)，表明移栽的苗已經(jīng)成活。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，常規(guī)培養(yǎng)的白及組培苗移栽成活率非常低，僅為20%，本發(fā)明在生根階段加入自制誘抗劑，使其在生根培養(yǎng)的同時(shí)誘導(dǎo)組培苗的抗逆性，增強(qiáng)苗對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力，以提高苗的移栽成活率，這是本發(fā)明的關(guān)鍵點(diǎn)。通過(guò)本發(fā)明培養(yǎng)的組培苗，其移栽成活率可達(dá)63%，提高了 43個(gè)百分點(diǎn)，是原成活率的3. 15倍，說(shuō)明本發(fā)明的處理確實(shí)有效。


圖I是處理A苗和處理B苗在PEG脅迫下的相對(duì)含水量；
圖2是處理A苗和處理B苗在PEG脅迫下的相對(duì)電導(dǎo)率。
具體實(shí)施例方式 下面根據(jù)附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的一種提高白及組培苗移栽成活率的方法作進(jìn)一步的說(shuō)明。一種提高白及組培苗移栽成活率的方法，為組織培養(yǎng)方法，所用專用培養(yǎng)基由種子萌發(fā)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基組成。培養(yǎng)基篩選 首先，種子萌發(fā)培養(yǎng)基的選擇
選擇基本培養(yǎng)基、6-BA、NAA、椰子汁四個(gè)因素，分別設(shè)定3個(gè)水平(見(jiàn)表1)，采用L9(34)正交表(見(jiàn)表2)進(jìn)行正交試驗(yàn)以考察白及種子萌發(fā)的適宜培養(yǎng)基。各組培養(yǎng)基均添加30g/L蔗糖和8g/L瓊脂，pH值為5. 8。表I白及種子萌發(fā)正交試驗(yàn)因素與水平表
權(quán)利要求
1. 一種提高白及組培苗移栽成活率的方法，其特征是為組織培養(yǎng)方法，所用專用培養(yǎng)基由種子萌發(fā)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基組成，其中 種子萌發(fā)培養(yǎng)基的配方配比為1/2MS+6-BA l.Omg/L+NAA O. 75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L ； 增殖培養(yǎng)基的配方配比為MS+6-BA I. Omg/L + KT 3. Omg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L ； 生根培養(yǎng)基的配方配比為MS+NAA O. 5mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉8g/L ； 按以下步驟進(jìn)行 A、白及種子無(wú)菌萌發(fā)將采摘來(lái)的未開(kāi)裂蒴果用自來(lái)水沖洗30min，然后用洗衣粉浸泡20min，再用自來(lái)水沖洗30min，然后在超凈工作臺(tái)上用75%酒精浸泡30秒，無(wú)菌水沖洗2-3次，再置于次氯酸鈉溶液中12分鐘，期間不斷攪拌，無(wú)菌水沖洗3-5次，然后浸泡在無(wú)菌水中待用；用無(wú)菌的解剖刀將已消毒的白及蒴果切開(kāi)，將白及種子接種在所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)于光照12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3000 lx，溫度21 士 2°C的培養(yǎng)室；接種一星期后，種子萌發(fā)為肉眼可見(jiàn)的白色原球莖，兩星期后白色原球莖膨大變綠； B、增殖培養(yǎng)培養(yǎng)45天待種子苗長(zhǎng)到2-3cm左右，在超凈工作臺(tái)上，將種子苗取出，采用直立插入的方法轉(zhuǎn)接到所述的增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)于光照12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3000lx，溫度21 士 2°C的培養(yǎng)室；兩個(gè)月后，增殖倍率達(dá)到5 ； C、生根培養(yǎng)和抗逆誘導(dǎo)在超凈工作臺(tái)上，將白及無(wú)根苗取出，采用直立插入的方式接種到所述的生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基中同時(shí)加有自制誘抗劑10ml/L，培養(yǎng)于光照12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3000 lx，溫度21 士 2°C的培養(yǎng)室；兩個(gè)月后，生根數(shù)可達(dá)2-4條/株； 所述自制誘抗劑的配方配比為SA 0.3 g/L + CTS 2 g/L； D、煉苗移栽從培養(yǎng)室取出培養(yǎng)瓶，置于煉苗室常溫適應(yīng)3d，旋松蓋子2d，然后開(kāi)蓋適應(yīng)3d ;煉苗完成后，洗干凈白及根部的瓊脂，移栽到盛有松針土的花盆中；花盆周圍擺上裝滿水的盆或敞口瓶以保持周圍環(huán)境的濕度，移栽后精心管理，每天早晚葉面噴水；2周后可觀察到葉片返青，繼續(xù)培養(yǎng)35天后可見(jiàn)到新葉開(kāi)始生長(zhǎng)，表明移栽的苗已經(jīng)成活。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種提高白及組培苗移栽成活率的方法，所用專用培養(yǎng)基由種子萌發(fā)培養(yǎng)基1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L、增殖培養(yǎng)基MS+6-BA1.0mg/L+KT3.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉8g/L、生根培養(yǎng)基MS+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉8g/L組成，按以下步驟進(jìn)行A.白及種子無(wú)菌萌發(fā)；B、增殖培養(yǎng)；C、生根培養(yǎng)和抗逆誘導(dǎo)；D、煉苗移栽。本發(fā)明在生根階段加入SA0.3g/L+CTS2g/L的自制誘抗劑10ml/L，使其在生根培養(yǎng)的同時(shí)誘導(dǎo)組培苗的抗逆性，增強(qiáng)苗對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力，以提高苗的移栽成活率。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102972290SQ20121045963
公開(kāi)日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月15日
發(fā)明者龔寧, 王定景, 張明生 申請(qǐng)人:貴州師范大學(xué)