專利名稱：一種紅芽芋微型塊莖愈傷組織誘導(dǎo)、分化和植株再生方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物種苗繁育方法，特別是一種紅芽芋微型塊莖愈傷組織誘導(dǎo)、分化和植株再生的方法。
背景技術(shù)：
紅芽芋是芋屬天南星科多年生宿根性草本植物，以地下球莖子芋為主要收獲物的蔬菜，其食用部分球莖富含淀粉、粗纖維、粗脂肪、蛋白質(zhì)、VC、鈣、磷、鐵，是芋中之珍品，可作蔬菜或主食，具有無公害、產(chǎn)量高、商品價(jià)值高、耐貯運(yùn)等優(yōu)點(diǎn)。紅芽芋屬生理堿性食物，被推薦為功能食品。隨著種植業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和人們對(duì)無公害蔬菜及品種多樣化的需求，紅芽芋的身價(jià)也相對(duì)提高，特別是優(yōu)質(zhì)、反季節(jié)的芋頭上市后倍受青睞，一直是國內(nèi)外市場(chǎng)上緊俏的搶手貨。目前，隨著生產(chǎn)不斷發(fā)展，植株無性繁殖積累病毒逐漸增多，紅芽芋品種普遍出現(xiàn)早衰現(xiàn)象，病害嚴(yán)重，產(chǎn)量和品質(zhì)下降。因而，利用試管苗快速繁殖已成為紅芽芋生產(chǎn)急需解決的問題。本研究以紅芽芋微型塊莖為試材，通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)，獲得愈傷組織并再分化出大量叢生芽，對(duì)充分發(fā)揮和利用我國紅芽芋資源優(yōu)勢(shì)，保護(hù)、開發(fā)我國道地蔬菜和豐富特色蔬菜種類有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種紅芽芋微型塊莖愈傷組織誘導(dǎo)、分化和植株再生的方法。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是，(I)愈傷組織誘導(dǎo)選取紅芽芋微型塊莖作為外植體，在無菌條件切成小塊，接種于愈傷組織培養(yǎng)基(MS+2. O 3. Omg/L 6-BA+0.1 O. 5mg/L 2，
4-D+0. 2 O. 3% AC)上進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為7. 5g/L，培養(yǎng)基pH值為5. 8 6. 0，培養(yǎng)條件為黑暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25± 1°C，培養(yǎng)50 60d后，即可得到紅芽芋脫毒苗微型塊莖的愈傷組織塊；(2)叢生芽誘導(dǎo)將誘導(dǎo)的愈傷組織塊接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基(MS+2. O 4. Omg/L ΚΤ+0.1 O. 5mg/L NAA)上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L,瓊脂濃度為7. 5g/L，培養(yǎng)基pH值為5. 8 6. O,培養(yǎng)條件為光照時(shí)間14h/d，光強(qiáng)約1500 20001x，培養(yǎng)溫度25± 1°C，培養(yǎng)40 60d后，即可得到叢生芽組織塊；(3)叢生芽的增殖培養(yǎng)將叢生芽組織塊接種到叢生芽增殖培養(yǎng)基(MS+1. O 2. Omg/L ΚΤ+0.1 O. 2mg/L NAA)上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為7. 5g/L，培養(yǎng)基pH值為5. 8 6. 0，培養(yǎng)條件為光照時(shí)間14h/d，光強(qiáng)約1500 20001x，培養(yǎng)溫度25±1°C，培養(yǎng)30 60d后，即可得到大量的紅芽芋不定芽；；(4)不定芽的生根成苗選取紅芽芋不定芽接到生根培養(yǎng)基(1/2MS+0. 5 1. Omg/L ΝΑΑ+0. 5 1. Omg/L PP333)上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為7. 5g/L，培養(yǎng)基pH值為5. 8 6. 0，培養(yǎng)條件為光照時(shí)間14h/d，光強(qiáng)約1500 20001x，培養(yǎng)溫度25±1°C，培養(yǎng)30 60d后，即可獲得紅芽芋的小苗。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較具有成本低、叢生芽繁殖數(shù)量多等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
結(jié)合下述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明
(I)紅芽芋微型塊莖愈傷組織的誘導(dǎo)
選取紅芽芋微型塊莖作為外植體，在無菌條件切成小塊，接種于愈傷組織培養(yǎng)基 (MS+2. O 3. Omg/L 6-BA+0.1 O. 5mg/L 2,4-D+O. 2 O. 3% AC)上進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為7. 5g/L，培養(yǎng)基pH值為5. 8 6. 0，培養(yǎng)條件為黑暗培養(yǎng)， 培養(yǎng)溫度25± 1°C，培養(yǎng)50 60d后，即可得到紅芽芋微型塊莖的愈傷組織塊。
(2)叢生芽誘導(dǎo)
將誘導(dǎo)的愈傷組織塊接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基(MS+2. O 4. Omg/L ΚΤ+0.1 O. 5mg/L NAA)上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為7. 5g/L，培養(yǎng)基pH值為5. 8 6. 0，培養(yǎng)條件為光照時(shí)間14h/d，光強(qiáng)約1500 20001x，培養(yǎng)溫度25±1°C，培養(yǎng)40 60d后，即可得到叢生芽組織塊。
(3)叢生芽的增殖培養(yǎng)
將叢生芽組織塊接種到叢生芽增殖培養(yǎng)基(MS+1. O 2. Omg/L ΚΤ+0.1 O. 2mg/ LNAA)上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為7. 5g/L，培養(yǎng)基pH值為5. 8 6. 0，培養(yǎng)條件為光照時(shí)間14h/d，光強(qiáng)約1500 20001x，培養(yǎng)溫度25± 1°C，培養(yǎng)30 60d 后，即可得到大量的紅芽芋不定芽。
(4)不定芽的生根成苗
選取紅芽芋不定芽接到生根培養(yǎng)基(1/2MS+0. 5 1. Omg/L ΝΑΑ+0. 5 1. Omg/ LPP333)上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為7. 5g/L，培養(yǎng)基pH值為5. 8 6. 0，培養(yǎng)條件為光照時(shí)間14h/d，光強(qiáng)約1500 20001x，培養(yǎng)溫度25± 1°C，培養(yǎng)30 60d 后，即可獲得紅芽芋的小苗，可直接馴化移栽，用于大田種植。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明公開了一種紅芽芋微型塊莖愈傷組織誘導(dǎo)、分化和植株再生方法，其特征在于有以下步驟(I)愈傷組織誘導(dǎo)選取紅芽芋脫毒苗微型塊莖作為外植體，在無菌條件切成小塊，接種于愈傷組織培養(yǎng)基(MS+2. O 3. Omg/L 6-BA+0.1 0. 5mg/L 2,4-D+O. 2 ·0.3 % AC)上進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為7. 5g/L，培養(yǎng)基pH值為·5.8 6. 0，培養(yǎng)條件為黑暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25土 1°C，培養(yǎng)50 60d后，即可得到紅芽芋脫毒苗微型塊莖的愈傷組織塊；(2)叢生芽誘導(dǎo)將誘導(dǎo)的愈傷組織塊接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基(MS+2. 0 4. Omg/L KT+0.1 0. 5mg/L NAA)上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為7. 5g/L，培養(yǎng)基pH值為5. 8 6. 0，培養(yǎng)條件為光照時(shí)間14h/d，光強(qiáng)約1500 20001x，培養(yǎng)溫度25 ± I °C，培養(yǎng)40 60d后，即可得到叢生芽組織塊；(3)叢生芽的增殖培養(yǎng)將叢生芽組織塊接種到叢生芽增殖培養(yǎng)基(MS+1. 0 2. Omg/L KT+0.1 ·0.2mg/L NAA)上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為7. 5g/L，培養(yǎng)基pH值為5. 8 6. 0，培養(yǎng)條件為光照時(shí)間14h/d，光強(qiáng)約1500 20001x，培養(yǎng)溫度25±1°C，培養(yǎng)30 60d后，即可得到大量的紅芽芋不定芽；(4)不定芽的生根成苗選取紅芽芋不定芽接到生根培養(yǎng)基(1/2MS+0. 5 1. Omg/L NAA+0. 5 1. Omg/L PP333)上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為7. 5g/L，培養(yǎng)基pH值為5. 8 6. 0，培養(yǎng)條件為光照時(shí)間14h/d，光強(qiáng)約1500 20001x，培養(yǎng)溫度25±1°C，培養(yǎng)30 60d后，即可獲得紅芽芋的小苗。
全文摘要
一種紅芽芋微型塊莖愈傷組織誘導(dǎo)、分化和植株再生方法，(1)愈傷組織誘導(dǎo)選取紅芽芋脫毒苗微型塊莖作為外植體，在無菌條件切成小塊，接種于愈傷組織培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，得到紅芽芋脫毒苗微型塊莖的愈傷組織塊；(2)叢生芽誘導(dǎo)將誘導(dǎo)的愈傷組織塊接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，得到叢生芽組織塊；(3)叢生芽的增殖培養(yǎng)將叢生芽組織塊接種到叢生芽增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，得到大量的紅芽芋不定芽；；(4)不定芽的生根成苗選取紅芽芋不定芽接到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，可獲得紅芽芋的小苗。利用本發(fā)明可在短期內(nèi)形成大量優(yōu)質(zhì)的紅芽芋試管苗，可進(jìn)行規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)，解決紅芽芋農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中所存在的問題。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102986532SQ20121051455
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2012年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月10日
發(fā)明者洪森榮, 肖月土, 尹明華, 王艾平 申請(qǐng)人:上饒師范學(xué)院