專利名稱：專性孤雌繁殖的輪蟲(chóng)種群培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種輪蟲(chóng)種群的培育方法，尤其是一種可顯著提高輪蟲(chóng)培養(yǎng)密度、提高輪蟲(chóng)生產(chǎn)效率、縮小養(yǎng)殖水體積、降低生產(chǎn)成本的專性孤雌繁殖的輪蟲(chóng)種群培育方法。
背景技術(shù)：
不論是海水魚(yú)還是淡水魚(yú)，在育苗及幼體培育期間，其開(kāi)口活餌料主要選用輪蟲(chóng)。按照每尾育苗每天攝食20飛0只輪蟲(chóng)來(lái)計(jì)算，I個(gè)生產(chǎn)5000萬(wàn)尾魚(yú)苗的中小型育苗企業(yè)，每天對(duì)輪蟲(chóng)的需求量就需要達(dá)到15 25億只，按照1:1的比例采收輪蟲(chóng)來(lái)計(jì)算，育苗單位每天需要生產(chǎn)25 50億只輪蟲(chóng)。輪蟲(chóng)包括海水的褶皺臂尾輪蟲(chóng)和淡水的萼花臂尾輪蟲(chóng)，是一種周期性孤雌繁殖動(dòng)物，生活史由孤雌繁殖和有性繁殖兩部分構(gòu)成。通常情況下，輪蟲(chóng)通過(guò)高效的孤雌繁殖過(guò)程增加種群數(shù)量，但是在特定環(huán)境(如水體中輪蟲(chóng)密度超過(guò)1(T20只/毫升等不利環(huán)境)條件下，則啟動(dòng)有性繁殖，產(chǎn)生休眠卵來(lái)抵御不良環(huán)境條件。有性繁殖的產(chǎn)生大大限制了種群繁殖的效率，甚至有崩潰的危險(xiǎn)，從而限制了輪蟲(chóng)的產(chǎn)量，所帶來(lái)的是活餌料供應(yīng)不足的問(wèn)題。而為了避免輪蟲(chóng)有性繁殖，就必需將輪蟲(chóng)培育水體的培養(yǎng)密度限制為20只/毫升以下，隨之就需要增加培養(yǎng)輪蟲(chóng)的水體，占用了大量養(yǎng)殖空間，使得育苗成本加大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的上述技術(shù)問(wèn)題，提供一種可顯著提高輪蟲(chóng)培養(yǎng)密度、提高輪蟲(chóng)生產(chǎn)效率、縮小養(yǎng)殖水體積、降低生產(chǎn)成本的專性孤雌繁殖的輪蟲(chóng)種群培育方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種專性孤雌繁殖的輪蟲(chóng)種群培育方法，其特征在于按如下步驟進(jìn)行
a.取輪蟲(chóng)的休眠卵放置于500毫升的培養(yǎng)液中，置于溫度24度，光照30001x，光周期16 8的環(huán)境條件下孵化3-5天；
b.將孵化出來(lái)的輪蟲(chóng)進(jìn)行單個(gè)體擴(kuò)大培養(yǎng)，投喂微綠球藻密度為100萬(wàn)細(xì)胞 200萬(wàn)細(xì)胞/毫升培養(yǎng)液，溫度24度，光照30001x，光周期16 8 ；
c.挑取100只新孵化出的個(gè)體分別進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，形成100個(gè)克隆種群，每個(gè)克隆種群培養(yǎng)液體積為2000毫升，每天更新一次培養(yǎng)液和餌料；
d.當(dāng)克隆種群的輪蟲(chóng)密度達(dá)到I只/毫升時(shí)，向各克隆種群培養(yǎng)液中加入a-生育酚，加入量為20微克/毫升培養(yǎng)液，繼續(xù)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，同時(shí)每天更新一次培養(yǎng)液和餌料，并維持培養(yǎng)液中a -生育酚的濃度；當(dāng)克隆種群的輪蟲(chóng)密度達(dá)到3 10只/毫升，將每個(gè)克隆種群的輪蟲(chóng)密度濃縮至100只/毫升，同時(shí)調(diào)整a -生育酚的濃度為100微克/毫升培養(yǎng)液，培養(yǎng)10 15天；
e.從100個(gè)克隆種群中，篩選出25 35個(gè)有性生殖比率小于1%的克隆種群，用脈沖頻率2450M的微波輻射10秒；12小時(shí)后再用強(qiáng)度為1480 //ffcm^s^1的紫外線，照射60秒；12小時(shí)后，將克隆種群的輪蟲(chóng)群密度調(diào)整到I只/毫升，培養(yǎng)7天，此期間不添加a -生育酚；
f.重復(fù)d步驟的方法培育；
g.從25 35個(gè)輪蟲(chóng)的克隆種群中，繼續(xù)篩選出1(T15個(gè)有性生殖比率小于0.1%的克隆種群，用脈沖頻率2450M的微波輻射10秒；12小時(shí)后再用強(qiáng)度為1480 //ffcm^s^1的紫外線，照射60秒；12小時(shí)后，將克隆種群的輪蟲(chóng)群密度調(diào)整到I只/毫升，培養(yǎng)7天，此期間不添加a-生育酚；
h.重復(fù)d步驟的方法培育； i.從1(T15個(gè)輪蟲(chóng)的克隆種群中，可篩選出種群密度達(dá)到80(T1000只/毫升仍進(jìn)行孤雌繁殖的輪蟲(chóng)克隆種群。本發(fā)明所培育的輪蟲(chóng)種群在繁殖和傳代過(guò)程中，即使在密度為80(T1000只/毫升的培養(yǎng)液中，仍舊進(jìn)行孤雌繁殖而不發(fā)生有性繁殖行為，可顯著提高輪蟲(chóng)培養(yǎng)密度、提高輪蟲(chóng)生產(chǎn)效率、縮小養(yǎng)殖水體積、降低生產(chǎn)成本，可應(yīng)用于室內(nèi)進(jìn)行輪蟲(chóng)高密度培養(yǎng)，同時(shí)也適合在室外進(jìn)行輪蟲(chóng)敞池培育增殖，可為水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖動(dòng)物的苗種和幼體培育，提供充足的活體餌料生物。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 :
a.取f2公斤淡水養(yǎng)魚(yú)池塘底泥，加入1000毫升高滲溶液(飽和食鹽水和飽和蔗糖水混合液)，攪拌均勻后靜置1(T15分鐘，用塑料板輕輕蘸取表面上浮的萼花臂尾輪蟲(chóng)休眠卵若干，放置于500毫升經(jīng)0. 45微米濾膜過(guò)濾的0.1pp湖水(培養(yǎng)液)中，置于溫度24度，光照30001x，光周期16 8的環(huán)境條件下孵化3飛天；
b.將孵化出來(lái)的輪蟲(chóng)進(jìn)行單個(gè)體擴(kuò)大培養(yǎng)，投喂微綠球藻密度為100萬(wàn)細(xì)胞/毫升培養(yǎng)液，溫度24度，光照30001x，光周期16 8 ；
c.挑取100只新孵化出的個(gè)體分別進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，形成100個(gè)克隆種群，每個(gè)克隆種群培養(yǎng)液體積為2000毫升，每天更新一次培養(yǎng)液和餌料；
d.當(dāng)克隆種群的輪蟲(chóng)密度達(dá)到I只/毫升時(shí)，向各克隆種群培養(yǎng)液中加入a-生育酚，加入量為20微克/毫升培養(yǎng)液，繼續(xù)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，同時(shí)每天更新一次培養(yǎng)液和餌料，并維持培養(yǎng)液中a-生育酚的濃度；當(dāng)克隆種群的輪蟲(chóng)密度達(dá)到3飛只/毫升，用孔徑為120微米的篩絹網(wǎng)，將每個(gè)克隆種群的輪蟲(chóng)密度濃縮至100只/毫升，同時(shí)調(diào)整a -生育酚的濃度為100微克/毫升培養(yǎng)液，培養(yǎng)1(T15天，即誘導(dǎo)輪蟲(chóng)進(jìn)行大規(guī)模有性繁殖；
e.從100個(gè)克隆種群中，篩選出25 35個(gè)有性生殖比率小于1%的克隆種群，用脈沖頻率2450M的微波輻射10秒；12小時(shí)后再用強(qiáng)度為1480 //ffcm^s^1的紫外線，照射60秒；12小時(shí)后，加培養(yǎng)液將克隆種群的輪蟲(chóng)群密度調(diào)整到I只/毫升，培養(yǎng)7天，此期間不添加a-生育酚；
f.重復(fù)d步驟的方法培育；
g.從25 35個(gè)輪蟲(chóng)的克隆種群中，繼續(xù)篩選出1(T15個(gè)有性生殖比率小于0.1%的克隆種群，用脈沖頻率2450M的微波輻射10秒；12小時(shí)后再用強(qiáng)度為1480 //ffcm^s^1的紫外線，照射60秒；12小時(shí)后，加培養(yǎng)液將克隆種群的輪蟲(chóng)群密度調(diào)整到I只/毫升，培養(yǎng)7天，此期間不添加a-生育酚；h.重復(fù)d步驟的方法培育；1.從1(T15個(gè)輪蟲(chóng)的克隆種群中，篩選出了 3個(gè)種群密度達(dá)到80(T1000只/毫升仍舊進(jìn)行孤雌繁殖的輪蟲(chóng)克隆種群。所述(Th步驟中的培養(yǎng)液均為經(jīng)0.45微米濾膜過(guò)濾的0.1pp湖水；所述培養(yǎng)條件均為溫度24度，光照30001x，光周期16 8 ;所述餌料為微綠球藻，投喂密度為100萬(wàn)細(xì)胞/暈升。本發(fā)明實(shí)施例1所篩選出的專性孤雌萼花臂尾輪蟲(chóng)克隆種群，在步驟b的條件下穩(wěn)定培養(yǎng)、接種傳代即可，可連續(xù)專性孤雌培養(yǎng)傳代1. (Tl. 5年。
實(shí)施例2
a.取f2公斤海水河蟹育苗池塘底泥，加入1000毫升高滲溶液(飽和食鹽水和飽和蔗糖水混合液)，攪拌均勻后靜置1(T15分鐘，用塑料板輕輕蘸取表面上浮的褶皺臂尾輪蟲(chóng)休眠卵若干，放置于500毫升經(jīng)0. 45微米濾膜過(guò)濾的15ppt的海水(培養(yǎng)液)中，置于溫度24度，光照30001x，光周期16 8的環(huán)境條件下孵化3飛天；
b.將孵化出來(lái)的輪蟲(chóng)進(jìn)行單個(gè)體擴(kuò)大培養(yǎng)，投喂微綠球藻密度為200萬(wàn)細(xì)胞/毫升培養(yǎng)液，溫度24度，光照30001x，光周期16 8 ；
c.挑取100只新孵化出的個(gè)體分別進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，形成100個(gè)克隆種群，每個(gè)克隆種群培養(yǎng)液體積為2000毫升，每天更新一次培養(yǎng)液和餌料；
d.當(dāng)克隆種群的輪蟲(chóng)密度達(dá)到I只/毫升時(shí)，向各克隆種群培養(yǎng)液中加入a-生育酚，加入量為20微克/毫升培養(yǎng)液，繼續(xù)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，同時(shí)每天更新一次培養(yǎng)液和餌料，并維持培養(yǎng)液中a -生育酚的濃度；當(dāng)克隆種群的輪蟲(chóng)密度達(dá)到5 10只/毫升，用孔徑為120微米的篩絹網(wǎng)，將每個(gè) 克隆種群的輪蟲(chóng)密度濃縮至100只/毫升，同時(shí)調(diào)整a -生育酚的濃度為100微克/毫升培養(yǎng)液，培養(yǎng)1(T15天，即誘導(dǎo)輪蟲(chóng)進(jìn)行大規(guī)模有性繁殖；
e.從100個(gè)克隆種群中，篩選出25 35個(gè)有性生殖比率小于1%的克隆種群，用脈沖頻率2450M的微波輻射10秒；12小時(shí)后再用強(qiáng)度為1480 //Wcn^s—1的紫外線，照射60秒；12小時(shí)后，加培養(yǎng)液將克隆種群的輪蟲(chóng)群密度調(diào)整到I只/毫升，培養(yǎng)7天，此期間不添加a-生育酚；
f.重復(fù)d步驟的方法培育；
g.從25 35個(gè)輪蟲(chóng)的克隆種群中，繼續(xù)篩選出1(T15個(gè)有性生殖比率小于0.1%的克隆種群，用脈沖頻率2450M的微波輻射10秒；12小時(shí)后再用強(qiáng)度為1480 //ffcm^s^1的紫外線，照射60秒；12小時(shí)后，加培養(yǎng)液將克隆種群的輪蟲(chóng)群密度調(diào)整到I只/毫升，培養(yǎng)7天，此期間不添加a-生育酚；
h.重復(fù)d步驟的方法培育；1.從1(T15個(gè)輪蟲(chóng)的克隆種群中，篩選出了 5個(gè)種群密度達(dá)到80(T1000只/毫升仍舊進(jìn)行孤雌繁殖的輪蟲(chóng)克隆種群。所述(Th步驟中的培養(yǎng)液均為經(jīng)0. 45微米濾膜過(guò)濾的15ppt的海水；所述培養(yǎng)條件均為溫度24度，光照30001x，光周期16 8 ;所述餌料為微綠球藻，投喂密度為200萬(wàn)細(xì)胞
/暈升°本發(fā)明實(shí)施例1所篩選出的專性孤雌褶皺臂尾輪蟲(chóng)克隆種群，在步驟b的條件下穩(wěn)定培養(yǎng)、接種傳代即可，可連續(xù)專性孤雌培養(yǎng)傳代4年。
權(quán)利要求
1. 一種專性孤雌繁殖的輪蟲(chóng)種群培育方法，其特征在于按如下步驟進(jìn)行 a.取輪蟲(chóng)的休眠卵放置于500毫升的培養(yǎng)液中，置于溫度24度，光照30001x，光周期.16 8的環(huán)境條件下孵化3~5天； b.將孵化出來(lái)的輪蟲(chóng)進(jìn)行單個(gè)體擴(kuò)大培養(yǎng)，投喂微綠球藻，投喂密度為100萬(wàn)細(xì)胞 200萬(wàn)細(xì)胞/毫升培養(yǎng)液，溫度24度，光照30001x，光周期16 8 ； c.挑取100只新孵化出的個(gè)體分別進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，形成100個(gè)克隆種群，每個(gè)克隆種群培養(yǎng)液體積為2000毫升，每天更新一次培養(yǎng)液及餌料； d.當(dāng)克隆種群的輪蟲(chóng)密度達(dá)到1只/毫升時(shí)，向各克隆種群培養(yǎng)液中加入a-生育酚，加入量為20微克/毫升培養(yǎng)液，繼續(xù)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，同時(shí)每天更新一次培養(yǎng)液及餌料，并維持培養(yǎng)液中a -生育酚的濃度；當(dāng)克隆種群的輪蟲(chóng)密度達(dá)到3 10只/毫升，將每個(gè)克隆種群的輪蟲(chóng)密度濃縮至100只/毫升，同時(shí)調(diào)整a -生育酚的濃度為100微克/毫升培養(yǎng)液，培養(yǎng)10 15天； e.從100個(gè)克隆種群中，篩選出25 35個(gè)有性生殖比率小于1%的克隆種群，用脈沖頻率2450M的微波輻射10秒；12小時(shí)后再用強(qiáng)度為1480 μWcm-2s—1的紫外線照射60秒；12小時(shí)后，將克隆種群的輪蟲(chóng)群密度調(diào)整到1只/毫升，培養(yǎng)7天，此期間不添加a -生育酚； f.重復(fù)d步驟的方法培育； g.從25 35個(gè)輪蟲(chóng)的克隆種群中，繼續(xù)篩選出10~15個(gè)有性生殖比率小于0.1%的克隆種群，用脈沖頻率2450M的微波輻射10秒；12小時(shí)后再用強(qiáng)度為1480 μWcm-2s-1的紫外線照射60秒；12小時(shí)后，將克隆種群的輪蟲(chóng)群密度調(diào)整到1只/毫升，培養(yǎng)7天，此期間不添加a-生育酚； h.重復(fù)d步驟的方法培育；1.從10~15個(gè)輪蟲(chóng)的克隆種群中，篩選出種群密度達(dá)到800~1000只/毫升仍進(jìn)行孤雌繁殖的輪蟲(chóng)克隆種群。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種采用化學(xué)藥物誘導(dǎo)、微波輻射誘變、紫外照射突變及人工選育專性孤雌繁殖的輪蟲(chóng)種群培育方法，所培育的輪蟲(chóng)種群在繁殖和傳代過(guò)程中，即使在密度為800~1000只/毫升的培養(yǎng)液中，仍舊進(jìn)行孤雌繁殖而不發(fā)生有性繁殖行為，可顯著提高輪蟲(chóng)培養(yǎng)密度、提高輪蟲(chóng)生產(chǎn)效率、縮小養(yǎng)殖水體積、降低生產(chǎn)成本，可應(yīng)用于室內(nèi)進(jìn)行輪蟲(chóng)高密度培養(yǎng)，同時(shí)也適合在室外進(jìn)行輪蟲(chóng)敞池培育增殖，可為水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖動(dòng)物的苗種和幼體培育，提供充足的活體餌料生物。
文檔編號(hào)A01K67/033GK103053476SQ20121051519
公開(kāi)日2013年4月24日 申請(qǐng)日期2012年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月5日
發(fā)明者殷旭旺, 趙乃錫, 譚冰冰, 朱美樺, 周艷春 申請(qǐng)人:大連海洋大學(xué)