專利名稱：一種具有標(biāo)記位點(diǎn)且能顯著提高鯉魚體重的雜交方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有標(biāo)記位點(diǎn)且能顯著提高鯉魚體重的雜交方法。
背景技術(shù)：
2008年，中國淡水魚養(yǎng)殖產(chǎn)量達(dá)到1836.9萬噸，其中，鯉235.1萬噸，占12.8%。鯉魚2010年產(chǎn)量253.85萬噸，可以看出，鯉魚產(chǎn)業(yè)在我國，乃至世界上占有舉足輕重的地位。因此，鯉魚生產(chǎn)性能的提高對產(chǎn)業(yè)的發(fā)展有重要的意義。建鯉和黃河鯉雜交具有雜種優(yōu)勢，并發(fā)現(xiàn)它們的正交后代具有較高的特殊配合力。分子育種，分子設(shè)計(jì)育種已應(yīng)用于良種選育，包括基于分子標(biāo)記的配對繁殖技術(shù)、遺傳參數(shù)評估等。而通過分子標(biāo)記來研究雜種優(yōu)勢，并加以利用成為可行的手段。2012年已成功獲得鯉IGF2a基因序列，并發(fā)現(xiàn)IGF2a3#引物檢測到的多態(tài)性與種質(zhì)特異性有關(guān)(Shengyan Su, Zaijie Dong, Zhengyuan Liang, Junchao Ming, Jiangqi QuPao Xu, Xinhua Yuan.Molecular cloning and single nucleotide polymorphismanalysis of IGF2a genes in the common carp (Cyprinus carpio).Genetic molecularresearch, 2012, 11 (2):1327-1340.)。因此，通過研究IGF2aDNA序列的多態(tài)性來分析建鯉和黃河鯉的雜種優(yōu)勢，由此研究出能顯著提高鯉魚體重的雜交方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種具有標(biāo)記位點(diǎn)且能顯著提高鯉魚體重的雜交方法。具體方案如下:選用黃河鯉父本與建鯉母本進(jìn)行雜交，見專利申請文件(201110285312.8);待后代長至 體重為75g左右時，進(jìn)行PIT標(biāo)記，同時測量每條魚的體重，并剪尾鰭，放置于已裝酒精的離心管中，每個組合30條魚。然后根據(jù)TaKaRa的DNA提取試劑盒3.0提取采集樣本的DNA。通過克隆鯉魚IGF2a9#引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物直接送測序公司進(jìn)行測序，根據(jù)測序結(jié)果，分析每條魚的IGF2a9#引物所擴(kuò)增區(qū)域的單核苷酸多態(tài)性，根據(jù)得到的多態(tài)位點(diǎn)分析其與不同組合體重之間的關(guān)聯(lián)。有益效果根據(jù)分析多態(tài)位點(diǎn)與體重和組合的關(guān)聯(lián)，發(fā)現(xiàn)鯉IGF2R9#126號位點(diǎn)存在G到A的突變，并且這種突變是雜合子，且只在Hj和Jj組合中發(fā)現(xiàn)(n=30/每個組合)，并且這種突變只在Hj組合顯示出體重的提高，由此可知選用黃河鯉父本與建鯉母本進(jìn)行雜交得到的鯉魚新苗體重顯著增加。


圖1 IGF2a9#引物檢測到的建鯉和黃河鯉純繁和雜交組合的126號位點(diǎn)的多態(tài)性A此位點(diǎn)多態(tài)性與體重的關(guān)聯(lián)分析BI此位點(diǎn)的野生型測序圖B2此位點(diǎn)的雜合型測序字母不同表示差異顯著，體重單位為g。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。本發(fā)明中的親本來源為中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心的黃河鯉(Cyprinus carpio haematopterus Temminck et Schlegel)父本與建鯉(C.carpio var.jan)母本。實(shí)施例1 鯉魚雜交優(yōu)勢種群的篩選(I)生產(chǎn)建鯉(J或j)、黃河鯉(H或h)自交和正反交后代(其中大寫字母表示父本，小寫字母表示母本)，共計(jì)4個組合:Jj，Jh，Hh，Hj。通過人工繁殖方式控制繁殖時間在一天之內(nèi)，通過網(wǎng)箱保證·每個家系的隔離。養(yǎng)殖一周后，控制每個網(wǎng)箱的數(shù)量為100條左右，養(yǎng)殖一個月后，換40目的網(wǎng)箱養(yǎng)殖；(2)當(dāng)鯉魚養(yǎng)殖到體重達(dá)75 g左右時，每個組合隨機(jī)選取50條魚，使用丁香油麻醉，然后進(jìn)行PIT標(biāo)記(具體方法同專利文件ZL200710191251)，測量體重，并記錄。同時剪尾鰭放置于已裝入酒精的2mL離心管中進(jìn)行離心去雜，記錄好離心管的標(biāo)號，并與PIT標(biāo)記對應(yīng)；(3)將在酒精中保存的魚尾鰭，采用TaRaKa DNA提取試劑盒3.0抽提DNA，并通過檢測0D260/0D280的方法測定提取濃度和內(nèi)參基因GAPDH擴(kuò)增PCR的方法檢測質(zhì)量。待質(zhì)量合格后，用表I中引物擴(kuò)增PCR，并送到Introgen公司測序。PCR 反應(yīng)體系:cDNA 模板 2 μ L，上下游引物各 2 μ L，dNTP Mixture (IOmMeach) 5 μ L，MgCl2 (25mM) 6 μ L，10 X PCR buffer 8 μ L, rTaq 酶(5U/ μ L) 0.5 μ L，加水至總體積 50yL。PCR 反應(yīng)參數(shù):94°C 5min ；94°C 30S, 56/60° C 30S，72°C 30S，35 個循環(huán)；72°C7min, 4°C保存。PCR產(chǎn)物經(jīng)2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。實(shí)驗(yàn)用到的引物及其相關(guān)信息見表I。表1 PCR引物及其特征
權(quán)利要求
1.一種具有標(biāo)記位點(diǎn)且能顯著提高鯉魚體重的雜交方法，其特征在于:選用黃河鯉父本與建鯉母本進(jìn)行雜交。
2.如權(quán)利要求1所述的具有標(biāo)記位點(diǎn)且能顯著提高鯉魚體重的雜交方法，其特征在于:雜交后代中IGF2f Y2&號位點(diǎn)存在G到A的突變，而突變的外在體現(xiàn)為鯉魚體重的提聞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有標(biāo)記位點(diǎn)且能顯著提高鯉魚體重的雜交方法。本發(fā)明提供一種能顯著提高鯉魚體重的雜交方法，具體方案為選用黃河鯉父本與建鯉母本進(jìn)行雜交。根據(jù)分析多態(tài)位點(diǎn)與體重和組合的關(guān)聯(lián)，發(fā)現(xiàn)鯉IGF2R9#126號位點(diǎn)存在G到A的突變，這種突變是雜合子，且只在Hj和Jj組合中發(fā)現(xiàn)(n=30/每個組合)，并且這種突變只在Hj組合顯示出體重的提高，由此可知選用黃河鯉父本與建鯉母本進(jìn)行雜交得到的鯉魚新苗體重顯著增加。
文檔編號A01K61/00GK103141413SQ20121052544
公開日2013年6月12日 申請日期2012年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月10日
發(fā)明者張成鋒, 蘇勝彥, 董在杰, 朱文彬, 袁新華, 徐跑 申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心