專利名稱：防治番茄黃化曲葉病毒病的生防菌株1bqn14 及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于蔬菜病害防控技術(shù)領(lǐng)域，涉及防治番茄黃化曲葉病毒病的生防菌株1BQN14及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
番茄黃化曲葉病毒 病現(xiàn)在已成為限制我國番茄生產(chǎn)的重要病害之一，被稱為植物病害的“癌癥”。該病害是由雙生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花葉病毒屬(Begomovirus)的番茄黃化曲葉病毒(TYLCV)引起的，并通過煙粉虱傳播。與其他病毒病相比,番茄黃化曲葉病毒病具有爆發(fā)突然、發(fā)病兇猛、擴(kuò)展迅速、危害性強(qiáng)、治療難度大的特點(diǎn)，發(fā)病后沒有很好的藥劑防治。番茄是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物，20世紀(jì)90年代，番茄黃化曲葉病毒病在我國廣西、云南、海南和臺(tái)灣等地區(qū)零星發(fā)生。近年來，該病在我國已逐步由南向北急速蔓延?，F(xiàn)在除湖南，青海，黑龍江，甘肅等少數(shù)省份沒有發(fā)現(xiàn)該病毒病外，其余各地均有發(fā)生，給當(dāng)?shù)胤焉a(chǎn)造成了極其嚴(yán)重的損失。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，目前我國番茄黃化曲葉病毒病的年發(fā)生面積超過6. 7萬hm2，經(jīng)濟(jì)損失超過20億元。目前市面上的化學(xué)藥劑對(duì)該病毒病均沒有較好的防治效果，同時(shí)大量使用化學(xué)藥劑往往會(huì)造成環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留等問題。培育抗病品雖然是防治番茄黃化曲葉病毒病的最好途徑，但是由于番茄黃化曲葉病毒病的抗性遺傳較復(fù)雜，抗源材料不同，其抗性遺傳規(guī)律也不同，有的抗源材料的抗性屬于不完全顯性的單基因控制，有的屬于數(shù)量性狀，有的屬于顯性單基因。不同抗性材料之間進(jìn)行組合，其基因互作效應(yīng)不同，有正協(xié)同、負(fù)協(xié)同效應(yīng)或無效應(yīng)。因此鑒于遺傳機(jī)理和背景的復(fù)雜性，很難選育出抗性穩(wěn)定的育種品系。綜上所述，開發(fā)新的、更為高效和安全的微生物制劑控制番茄黃化曲葉病毒病的發(fā)生是提高社會(huì)生產(chǎn)總量的需要，同時(shí)更是農(nóng)業(yè)安全及可持續(xù)發(fā)展的需要，符合社會(huì)發(fā)展需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中沒有對(duì)番茄黃化曲葉病毒病有較高防效的生防制劑的現(xiàn)狀，提供一種防治番茄黃化曲葉病毒病的單一生防菌菌株及其菌劑。本發(fā)明的另一目的是提供該菌株的應(yīng)用。本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種防治番茄黃化曲葉病毒病的生防菌株1BQN14，分類命名為Enterobacterasburiae，于2012年2月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC NO. 5803。生防菌株1BQN14用于制備生防菌劑的方法為將阿氏腸桿菌1BQN14的種子菌液以1: 500體積比接種至LB發(fā)酵培養(yǎng)液中發(fā)酵培養(yǎng)，280C、180rpm培養(yǎng)48h，然后6000rpm離心lOmin，用滅菌水進(jìn)行稀釋制成菌劑，菌劑成品中活菌總濃度為IX IO9-1X 101(lCFU/mL。
所述的保藏號(hào)為CGMCC NO. 5803的阿氏腸桿菌1BQN14種子菌液制備方法為將保藏號(hào)為CGMCC NO. 5803的阿氏腸桿菌1BQN14菌株接種到LB培養(yǎng)液中28°C培養(yǎng)180rpm振蕩培養(yǎng)至600nm處的OD值為0. 8時(shí)結(jié)束培養(yǎng)。所述的保藏號(hào)為CGMCC NO. 5803的生防菌株1BQN14在制備防治番茄黃化曲葉病毒病的藥物中的應(yīng)用。所述的生防菌劑在防治番茄黃化曲葉病毒病中的應(yīng)用。所述的生防菌劑稀釋100-1000倍后在番茄移栽時(shí)進(jìn)行灌根和噴霧處理，15天為一個(gè)間隔周期共處理2次，發(fā)病時(shí)開始統(tǒng)計(jì)病情。阿氏腸桿菌1BQN14對(duì)番茄黃化曲葉病毒病的防效為50. 11-55. 38%。有益效果 本發(fā)明是專門針對(duì)番茄黃化曲葉病毒病開發(fā)的生防制劑。由于是生物制劑，完全沒有因化學(xué)農(nóng)藥的使用所帶來的一系列問題，因而有利于蔬菜的無公害生產(chǎn)，農(nóng)民可以不用或減少其他化學(xué)農(nóng)藥的用量，這不僅可為農(nóng)民節(jié)省開支，而且減少化學(xué)藥劑的殘留，有利于蔬菜的出口。溫室實(shí)驗(yàn)表明該阿氏腸桿菌1BQN14 (CGMCC NO. 5803)能顯著降低番茄黃化曲葉病毒病的發(fā)生。利用該菌制備的生防菌劑稀釋100倍在移栽時(shí)進(jìn)行灌根和噴霧處理，在溫室條件下對(duì)番茄黃化曲葉病毒病的生防效果可以達(dá)55. 38%。生物樣品保藏信息一種阿氏腸桿菌1BQN14,分類命名為Enterobacter asburiae,于2012年2月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，菌種保藏號(hào)為CGMCC NO. 5803。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1篩選方法阿氏腸桿菌1BQN14 (CGMCC NO. 5803)由江蘇省連云港市沙河鎮(zhèn)番茄大棚內(nèi)的番茄根圍分離到的。將番茄根組織切成Icm的小片，用1%的次氯酸鈉浸泡5min，70%酒精浸泡l_2min，無菌水清洗3次(取最后一次清洗的溶液100 U I涂于R2A固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若48h后無菌生長則認(rèn)為表面消毒干凈，無菌)。取3g消毒好的樣品置于菌研缽中，加入27ml無菌的0. 85%NaCl，浸軟組織，研磨，用無菌的0. 85%NaCl梯度稀釋。取lO'lO—2、10_3三個(gè)梯度的稀釋液各IOOiU涂于R2A上，28° C培養(yǎng)48h。挑取最大的單菌落接種到新鮮R2A固體培養(yǎng)基，經(jīng)反復(fù)轉(zhuǎn)接得到純化菌株。將純化后的菌株用40%甘油保存于-70° C超低溫冰箱中。鑒定方法通過形態(tài)特征，生理生化實(shí)驗(yàn)和16S rDNA序列分析對(duì)該菌株進(jìn)行鑒定。形態(tài)學(xué)特征桿狀，周鞭毛，菌落光滑，成淡黃色。生理生化特征1BQN14菌株生理生化特征
權(quán)利要求
1.一種防治番茄黃化曲葉病毒病生防菌株1BQN14，分類命名為Enterobacterasburiae, 2012年2月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心,菌種保藏號(hào)為 CGMCCN0. 5803。
2.用權(quán)利要求1所述的保藏號(hào)為CGMCCNO. 5803的生防菌株1BQN14制備的生防菌劑。
3.用權(quán)利要求1所述的保藏號(hào)為CGMCCNO. 5803的生防菌株1BQN14制備生防菌劑的方法，其特征在于將權(quán)利要求1所述的保藏號(hào)為CGMCC NO. 5803的生防菌株1BQN14在LB培養(yǎng)液28°C 180rpm振蕩培養(yǎng)48h,然后6000rpm離心IOmin,用滅菌水進(jìn)行稀釋制成菌劑，成品菌劑中活菌總濃度為I X IO9-1 X 101QCFU/mL。
4.權(quán)利要求1所述的保藏號(hào)為CGMCCNO. 5803的生防菌株1BQN14在制備防治番茄黃化曲葉病毒病的藥物中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求2所述的生防菌劑在防治番茄黃化曲葉病毒病中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于蔬菜病害防控技術(shù)領(lǐng)域，涉及防治番茄黃化曲葉病毒病的生防菌株1BQN14及其應(yīng)用。一種防治番茄黃化曲葉病毒病的生防菌株1BQN14，于2012年2月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC NO.5803。該菌株可在制備防治番茄黃化曲葉病毒病的藥物中應(yīng)用。該菌株的生防菌劑稀釋至1×107-1×108CFU/ml濃度時(shí)使用，對(duì)番茄黃化曲葉病毒病的防效為50.11-55.38％，病田增產(chǎn)效果為14.56％-19.26％。
文檔編號(hào)A01N63/02GK103013878SQ20121054929
公開日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月17日
發(fā)明者劉紅霞, 郭堅(jiān)華, 丁雪玲 申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)