專利名稱：一種半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器的制作方法
技術領域：
本實用新型屬于一種農(nóng)業(yè)技術所用的器械，涉及煙草病毒病的接種用具，具體涉及一種半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器，該接種器適用于準確、快速對煙草花葉病毒病(TMV)的針刺接種。
背景技術：
接種試驗是植物病害研究中重要的工作，在研究植物對病原物抗性、病害循環(huán)、病害流行、病害控制、侵染過程和病害防治等各個方面，接種是試驗的前提。煙草花葉病毒病(Tobacco Mosaic Virus, TMV)、煙草黃瓜花葉病毒病(Cucumber Mosaic Virus, CMV)和煙草馬鈴薯Y病毒病(Potato Virus Y，PVY)是煙草上最主要的病毒病。特別是煙草花葉病毒，它是世界范圍內普遍發(fā)生的一種可侵染22科198種植物的病毒病，煙草感染后造成品 質和產(chǎn)量下降，甚至絕收，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶了嚴重的經(jīng)濟損失，研究該病害的侵染性具有重要意義。由于植物病毒是絕對內寄生病原，只能在活體植物細胞內繁殖，而在研究一些抗病毒物質時候則需要利用植物葉片的半葉做相互對照，因此半葉法接種是植物病毒病研究中非常重要的研究方法。現(xiàn)有的機械摩擦傳染的煙草病毒病接種材料及方法，主要有病株汁液摩擦接種法、噴槍接種法、病組織直接接種法等三種。就目前的煙草病毒病多種接種方法而言，上述每種接種方法存在一定的問題，共同的缺點是接種程序繁雜，接種效率低，接種速度慢，植株間接種病毒量誤差大，不能滿足短時間內病毒大量接種的要求。如病株汁液摩擦接種法是最常用的接種法，其步驟是取病葉組織加少量的pH = 7. 0的磷酸緩沖液在研缽中研碎，紗布過濾并擠出汁液，最后磷酸緩沖液稀釋至I : 100質量體積比備用。接種時，待用病毒接種液中加入少量細金剛砂或在接種的葉面上撒上少量金剛砂作為磨料，然后用手指、紗布、毛筆或小的扁刷等，蘸取待用病毒接種液在葉片上來回輕輕摩擦，再用清水將葉面多余的病毒接種液和磨料輕輕洗去。其缺點是程序繁瑣，費時費力，植株間接種病毒量誤差大，特別是在大面積接種和材料多的時候尤為明顯。而噴槍接種法是在待用病毒接種液中加金剛砂，在相同的時間內，用相同的噴射壓力，將含有少量金剛砂的待用病毒接種液打在被接種的病株上，實現(xiàn)接種，其缺點是操作難度較大，相同時間和相同壓力的控制缺乏一定的可操作性；噴槍設備昂貴，增加了試驗成本。病組織直接在葉面上接種，又稱“干接法”，適用于少量接種或病組織材料較少和病毒不穩(wěn)定的情況，其缺點是無法進行大量接種試驗、傳染率較低和植株間接種病毒量誤差大。目前針刺接種法尚缺乏高效簡便的針刺接毒工具，因此設計一種方便快捷、準確一致、高效的接種工具對病毒接種、病毒侵染研究、抗病毒藥物篩選及后續(xù)研究具有重要意義。
發(fā)明內容針對目前病毒接種方法及工具中存在的接種效率低，不同葉片間誤差大、接種效果不穩(wěn)定，接種工具使用不方便等問題，本實用新型的目的在于，提供一種半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器。為了實現(xiàn)上述任務，本實用新型采用如下的技術解決方案予以實現(xiàn)—種半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器，包括由A片和B片以及彈簧所構成的塑料夾，其特征在于，在塑料夾的A片上有半葉型接種板和病毒接種液固定件，其中，半葉型接種板上均勻分布有接種針；在塑料夾的B片上有和半葉型接種板相匹配的接種墊，在接種墊上均勻分布有和接種針相對應的針刺穿孔。本實用新型的其它一些特點是所述的病毒接種液固定件為覆有病毒接種液的海綿或棉紗。所述的接種針為昆蟲解剖針。所述的接種墊中的針刺穿孔的直徑為0. 3mm。所述的接種板中的接種針之間的間距為3mm。所述的接種墊和半葉型接種板均選用橡膠板制作。采用本實用新型的半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器，按以下步驟進行操作a)將煙草花葉病毒病病葉和pH =7.0的磷酸緩沖液按I : 100的質量體積比配
置，研磨過濾后獲得病毒接種液；b)將病毒接種液固定件浸泡病毒接種液后覆蓋在接種板上,接種針的針尖穿過病毒接種液固定件外露；c)將煙草葉片置于接種帶的A片接種板和B片的接種墊中間，使接種針穿過葉片進入B片接種墊的針刺穿孔中，將稍加擠壓，將病毒接種液固定件中的煙草花葉病毒接種液接種于葉片中。在具體應用過程中浸沾一次病毒接種液的病毒接種液固定件可以接種5 7張煙草葉片。本實用新型的半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器，結構簡單，性能好，輕便易攜，同時具有準確、一致、高效和快速接種特性。

圖I為本實用新型的半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器器結構示意以下結合附圖和實施例對本實用新型作進一步的詳細說明。
具體實施方式
參見圖1，本實施例給出一種半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器，包括由A片和B片以及彈黃6所構成的塑料夾I，在塑料夾I的A片上有半葉型接種板2和病毒接種液固定件3，其中，半葉型接種板2上均勻分布有接種針；在塑料夾I的B片上有和半葉型接種板2相匹配的接種墊4，在接種墊4上分布有和接種針相對應的針刺穿孔5。本實施例中，半葉型接種板2和接種墊4均采用橡膠板制作。接種板2中的接種針之間的間距為3mm，接種墊4中的針刺穿孔5直徑為0. 3mm且均勻分布，接種針選擇昆蟲解剖針；病毒接種液固定件3為覆有病毒接種液的海綿或棉紗。[0024]本實施例的半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器工作原理是先用病毒接種液固定件3浸取一定量的按比例配好的病毒接種液，浸泡后病毒接種液固定件3覆蓋在半葉型接種板2上，使接種針的針尖穿過病毒接種液固定件3并外露；再將煙草葉片置于塑料夾I的A片上的半葉型接種板2上和B片上的接種墊4的中間，塑料夾I由彈簧6固定，使接種針穿過煙草葉片進入B片上接種墊的針刺穿孔中，稍加擠壓，將病毒接種液固定件3中的煙草花葉病毒接種液接種于煙草葉片中。本實用新型的半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器，可用于抗病毒藥物篩選、植物抗病性、寄主與病原的相互作用、藥劑對病害的預防效果測定以及病原物的致病機制等方面的研究?！?br> 權利要求1.一種半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器，包括由A片和B片以及彈簧(6)所構成的塑料夾(I)，其特征在于，在塑料夾(I)的A片上有半葉型接種板(2)和病毒接種液固定件(3)，其中，半葉型接種板(2)上均勻分布有接種針；在塑料夾(I)的B片上有和半葉型接種板(2)相匹配的接種墊(4)，在接種墊(4)上分布有和接種針相對應的針刺穿孔(5)。
2.如權利要求I所述的半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器，其特征在于，所述的病毒接種液固定件(3)為覆有病毒接種液的海綿或棉紗。
3.如權利要求I所述的半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器，其特征在于，所述的接種針為昆蟲解剖針。
4.如權利要求I所述的半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器，其特征在于，所述的接種墊⑷中的針刺穿孔(5)的直徑為0.3mm。
5.如權利要求I所述的半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器，其特征在于，所述的接種板(2)中的接種針之間的間距為3mm。
6.如權利要求I所述的半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器，其特征在于，所述的接種墊(4)和半葉型接種板(2)均選用橡膠板制作。
專利摘要本實用新型公開了一種半葉法測定煙草花葉病毒侵染性的接種器，包括由A片和B片以及彈簧所構成的塑料夾，在塑料夾的A片上有半葉型接種板和病毒接種液固定件，其中，半葉型接種板上均勻分布有接種針；在塑料夾的B片上有和半葉型接種板相匹配的接種墊，在接種墊上均勻分布有和接種針相對應的針刺穿孔。接種時將病毒接種液固定件浸取一定量配好的病毒接種液，置于接種板上，依靠塑料夾固定在煙草葉片的半葉位置，通過針刺造成的傷口即可完成病毒接種，其結構簡單，性能好，輕便易攜，同時具有準確、一致、高效和快速接種特性。
文檔編號A01G7/06GK202524805SQ20122018448
公開日2012年11月14日 申請日期2012年4月27日 優(yōu)先權日2012年4月27日
發(fā)明者安德榮, 成巨龍, 沈小英 申請人:陜西省煙草研究所