專利名稱：一種快速篩選耐低溫草菇菌種的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于篩選菌種領(lǐng)域，特別涉及一種快速篩選耐低溫草菇菌種的方法。
背景技術(shù)：
草燕(Volvariellavolvacea (Bull ex Fr.) Sing)屬擔(dān)子菌綱，傘菌目，光柄燕科，小包腳菇屬。其味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，是食用菌中的優(yōu)質(zhì)菇種。據(jù)研究報(bào)道，鮮草菇含水92.39%，蛋白質(zhì)2.66%，脂肪2.24%，還原糖1.66%，轉(zhuǎn)化糖0.95%，灰分0.91% ;在草菇蛋白質(zhì)中含有18種氨基酸，包含人體所不能合成的8種必需氨基酸。除食用價(jià)值外，草菇還具有提高人體免疫力、抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)、解毒等功效。因此，草菇深受人們的喜愛(ài)，一直是我國(guó)的出口創(chuàng)匯產(chǎn)品，遠(yuǎn)銷至美國(guó)、加拿大、英國(guó)、日本、新加坡、馬來(lái)西亞等國(guó)家和地區(qū)。草菇原產(chǎn)于熱帶與亞熱帶地區(qū)，菌絲體最適宜的生長(zhǎng)溫度為32 35°C，子實(shí)體分化發(fā)育的最適宜溫度為27 31°C，這種高溫的環(huán)境要求大大限制了草菇的發(fā)展，使得選/培育耐低溫的草菇菌種成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。通常檢驗(yàn)育種材料的耐低溫特性，需要經(jīng)過(guò)多次重復(fù)出菇試驗(yàn)才能確定，而每次出菇試驗(yàn)都要經(jīng)歷母種一原種一栽培種等一系列過(guò)程，才能最終獲得子實(shí)體。如果毫無(wú)預(yù)先篩選的大規(guī)模出菇，存在工作量大，能源消耗高，周期長(zhǎng)，不穩(wěn)定等缺點(diǎn)。因此，本發(fā)明提供一種在出菇試驗(yàn)前先篩選鑒定草菇耐低溫菌種的簡(jiǎn)便方法，可大大提高耐低溫草菇菌種的選育效率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種快速篩選耐低溫草菇菌種的方法，該方法所需時(shí)間短，效率高，只需要1-5天便獲得結(jié)果，適于草菇耐低溫育種中大批量的檢測(cè)鑒定，而常規(guī)的方法檢測(cè)需要40d左右，其操作也較為繁瑣；該方法簡(jiǎn)單易行，所需設(shè)備與藥品常規(guī)，成本低；該鑒定檢測(cè)可靠性高，可操作性強(qiáng)，檢測(cè)技術(shù)經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單培訓(xùn)即可完成整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程。本發(fā)明的一種快速篩選耐低溫草燕菌種的方法，包括:(I)按配比180-220g/L:18-22g/L:15-20g/L，將馬鈴薯(取汁)、葡萄糖以及瓊脂，加入蒸餾水中，混合均勻，在121°C條件下，滅菌20-30min，然后冷卻至45_50°C，倒入已滅
菌的培養(yǎng)皿中，凝固，得固體培養(yǎng)基；(2)在無(wú)菌條件下，將草菇菌種接入上述固體培養(yǎng)基中，在黑暗條件下，溫度為32-350C，培養(yǎng)18-24h后，在0-4°C冷藏處理2_10h，然后在32_35°C，恢復(fù)培養(yǎng)l_5d，恢復(fù)培養(yǎng)期間，每隔6-8h畫(huà)線一次，選擇恢復(fù)速度快、菌絲生長(zhǎng)活力強(qiáng)的菌株，即為耐低溫草菇菌株。所述步驟(I)中培養(yǎng)皿直徑為9_12cm。所述步驟(I)中培養(yǎng)基的倒入量是培養(yǎng)皿容積的30%_50%。所述步驟(2)中草菇菌種的菌絲潔白、健壯。所述步驟(2)中冷藏溫度優(yōu)選為0°C。
所述步驟(2)中冷藏時(shí)間優(yōu)選為6-10h。所述步驟(2)中恢復(fù)培養(yǎng)的溫度優(yōu)選為32°C。所述步驟(2)中恢復(fù)培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選為3d。馬鈴薯取汁的具體操作為:挑選馬鈴薯，將表面清洗干凈，去皮，稱取。將馬鈴薯切塊，加蒸餾水煮爛(一般煮沸20-30min，能被玻璃棒戳破即可)，用四層紗布過(guò)濾。有益.效果(I)本發(fā)明方法所需時(shí)間短，效率高，只需要l-5d便可獲得結(jié)果，適于草菇耐低溫育種中大批量的檢測(cè)鑒定，而常規(guī)的方法檢測(cè)草菇耐低溫性能需要40d左右，其操作也較為繁瑣；(2)本發(fā)明方法簡(jiǎn)單易行，所需設(shè)備與藥品常規(guī)，成本很低；(3)本發(fā)明鑒定檢測(cè)可靠性高，可操作性強(qiáng)，檢測(cè)技術(shù)經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單培訓(xùn)的生手即可完成整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程。


圖1是培養(yǎng)平皿背面畫(huà)“十”字線；圖2是V23與VH3菌絲在(TC下處理IOh后，于32°C下恢復(fù)生長(zhǎng)72h的情況；圖3是菌株V23在30°C下常規(guī)栽培出菇照片；圖4是菌株VH3在28°C下常規(guī)栽培出菇照片。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。本試驗(yàn)中所涉及的草菇菌株有2個(gè)，名稱分別為V23與VH3，保存在上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所食用菌保藏中心；其中V23菌株為常規(guī)生產(chǎn)用菌株，VH3菌株是本發(fā)明人將V23菌株經(jīng)紫外線(UV)、6°Co-Y射線、硫酸二乙酯(DES)對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行復(fù)合誘變而來(lái)，并且已經(jīng)獲得了上海市品種認(rèn)定。實(shí)施例1草菇菌株菌絲耐低溫性能的篩選鑒定(I)培養(yǎng)皿的滅菌:取清洗干凈的玻璃培養(yǎng)皿10只，用報(bào)紙包好，于121 °C下滅菌20min，然后放入60°C烘箱中烘干備用。(2) PDA培養(yǎng)基制備:馬鈴薯(取汁)200g/L，葡萄糖20g/L，瓊脂條20g/L，加入蒸餾水中，混合均勻后裝入三角瓶中，于121°C下滅菌20min ;冷卻至45_50°C，倒入已滅菌的直徑9cm的培養(yǎng)皿中，倒入量為培養(yǎng) 皿容積的35%，凝固備用。其中馬鈴薯取汁的具體操作為:挑選馬鈴薯，將表面清洗干凈，去皮，稱取200g。將馬鈴薯切塊，加蒸餾水煮爛(一般煮沸20-30min，能被玻璃棒戳破即可)，用四層紗布過(guò)濾。(3)接種及培養(yǎng):開(kāi)紫外燈殺菌后，在滅菌好的平皿背面畫(huà)“十”字線(見(jiàn)圖1)，用于后續(xù)的畫(huà)線測(cè)定恢復(fù)生長(zhǎng)情況。取提前滅菌的打孔器先在火焰上灼燒，然后在長(zhǎng)滿草菇菌絲的平板上均勻打孔；分別將草菇菌株V23與VH3在無(wú)菌條件下接種于固體培養(yǎng)基中央，標(biāo)注菌株名稱和日期，置于32°C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h左右。(4)冷藏處理:將(3)的培養(yǎng)皿在0°C、黑暗條件下進(jìn)行冷藏處理10h。(5)恢復(fù)培養(yǎng)及生長(zhǎng)情況測(cè)定:將(4)中經(jīng)過(guò)冷藏處理的培養(yǎng)皿置于32°C、黑暗條件下培養(yǎng)，每隔8h畫(huà)線I次，測(cè)量V23與VH3菌株恢復(fù)生長(zhǎng)的情況(見(jiàn)表I與圖2)，結(jié)果表明VH3菌株耐低溫的能力優(yōu)于V23菌株。表1V23與VH3菌株在(TC下處理IOh后，于32°C下恢復(fù)生長(zhǎng)72h的情況
權(quán)利要求
1.一種快速篩選耐低溫草燕菌種的方法,包括: (1)按配比180-220g/L:18-22g/L:15-20g/L，將馬鈴薯(取汁)、葡萄糖以及瓊脂加入蒸餾水中，混合均勻，在121°C條件下，滅菌20-30min，然后冷卻至45_50°C，倒入已滅菌的培養(yǎng)皿中，凝固，得固體培養(yǎng)基； (2)在無(wú)菌條件下，將草菇菌種接入上述固體培養(yǎng)基中，在黑暗條件下，溫度為32-350C，培養(yǎng)18-24h后，在0-4°C冷藏處理2_10h，然后在32_35°C，恢復(fù)培養(yǎng)l_5d，恢復(fù)培養(yǎng)期間，每隔6-8h畫(huà)線一次，選擇恢復(fù)速度快、菌絲生長(zhǎng)活力強(qiáng)的菌株，即為耐低溫草菇菌株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速篩選耐低溫草菇菌種的方法，其特征在于:所述步驟(I)中培養(yǎng)皿直徑為 9-12cm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速篩選耐低溫草菇菌種的方法，其特征在于:所述步驟(I)中培養(yǎng)基的倒入量是培養(yǎng)皿容積的30%-50%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速篩選耐低溫草菇菌種的方法，其特征在于:所述步驟(2)中草菇菌種的菌絲潔白、健壯。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速篩選耐低溫草菇菌種的方法，其特征在于:所述步驟(2)中冷藏溫度為0°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速篩選耐低溫草菇菌種的方法，其特征在于:所述步驟(2)中冷藏時(shí)間為6-10h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速篩選耐低溫草菇菌種的方法，其特征在于:所述步驟(2)中恢復(fù)培養(yǎng)的溫度為32°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速篩選耐低溫草菇菌種的方法，其特征在于:所述步驟(2)中恢復(fù)培養(yǎng)時(shí)間為3d。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種快速篩選耐低溫草菇菌種的方法，包括(1)按配比180-220g/L:18-22g/L:15-20g/L，將馬鈴薯(取汁)、葡萄糖以及瓊脂加入蒸餾水中，混合均勻，在121℃條件下，滅菌20-30min，然后冷卻至45-50℃，倒入已滅菌的培養(yǎng)皿中，凝固，得固體培養(yǎng)基；(2)在無(wú)菌條件下，將草菇菌種接入上述固體培養(yǎng)基中，在黑暗條件下，溫度為32-35℃，培養(yǎng)18-24h后，在0-4℃冷藏處理2-10h，然后在32-35℃，恢復(fù)培養(yǎng)1-5d，恢復(fù)培養(yǎng)期間，每隔6-8h畫(huà)線一次，選恢復(fù)速度快、生長(zhǎng)活力強(qiáng)的菌株，即得。該方法所需時(shí)間短，效率高，適于草菇耐低溫引種或育種中大批量的檢測(cè)鑒定；該方法簡(jiǎn)單易行，成本很低。
文檔編號(hào)A01G1/04GK103081721SQ20131002806
公開(kāi)日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2013年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月25日
發(fā)明者陳明杰, 趙妍, 姜威, 鮑大鵬, 汪虹, 周慧敏, 李亞鵬 申請(qǐng)人:上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院