專利名稱：一種分枝蟲草菌株及其子實(shí)體和人工栽培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蟲草菌株及其子實(shí)體和人工栽培方法，具體來說是涉及一種分枝蟲草(Cordyceps ramosa Teng)的菌株⑶IM_CR20110521及其子實(shí)體和人工栽培方法。
背景技術(shù)：
分枝蟲草(Cordyceps ramose Teng)也稱分枝團(tuán)囊蟲草、大團(tuán)囊訝，在分類上隸屬于子囊菌門(Ascomycota)、果囊菌亞門(Pezizomycotina)、糞殼菌綱(Sordaricomycetes)、肉座菌亞綱(Hypocreomycetidae)、肉座菌目(Hypocreales)、線蟲草科(Ophiocordycipitaceae)、團(tuán)囊蟲草屬(Elaphocordyceps),主要分布在安徽、福建、甘肅和廣東等省區(qū)，民間常用于治療婦科出血癥包括崩漏、月經(jīng)過多、更年期子宮出血、產(chǎn)后惡露不絕和宮內(nèi)節(jié)育器所致子宮出血等?，F(xiàn)代科學(xué)研究表明，蟲草中的許多種類都含有對(duì)人體有益的營(yíng)養(yǎng)成分及其蟲草素、蟲草酸、腺苷等各種有效成份，具有抗菌、抗腫瘤、抗氧化、滋陰壯陽(yáng)、保肝益肺和提高免疫力等多種功效，尤其以冬蟲夏草、蛹蟲草最為著名。但野生蟲草由于連年采挖，其生態(tài)環(huán)境不斷遭受嚴(yán)重的破壞，野生蟲草資源日愈貧乏。分枝蟲草是中國(guó)特有的具有藥用價(jià)值的真菌資源，目前野生資源十分稀少，因此，對(duì)分枝蟲草的野生馴化與人工栽培技術(shù)研究具有十分重要的意義，但至今仍沒有獲得分枝蟲草菌株和人工栽培成功的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于開發(fā)出一種分枝蟲草菌株，另一目的是提供該分枝蟲草人工栽培子實(shí)體，再一目的是提供該子實(shí)體的人工栽培方法。本發(fā)明以2011年4月從廣東省野外調(diào)查發(fā)現(xiàn)的一種野生蟲草子實(shí)體為材料通過組織分離純化，首次獲得了一種蟲草菌株，將該菌株(編號(hào)為⑶M_CR20110521)接入綜合PDA斜面培養(yǎng)基制備斜面母種， 斜面母種再接至液體培養(yǎng)基中制備一級(jí)菌種，一級(jí)菌種接入液體培養(yǎng)基中制備生產(chǎn)種，生產(chǎn)菌種接種在生產(chǎn)用培養(yǎng)基中經(jīng)過培育獲得了一種含有多種有效成分和營(yíng)養(yǎng)成分的新的人工栽培蟲草子實(shí)體，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。上述野生蟲草的子實(shí)體特征是:子座多分枝，多彎曲，往往基部相互連接，高3 5cm，粗1.5 3mm，常稍扁，銹褐色至橙褐色；頭部與柄無明顯分界，多少呈披針形，向上尖肖1J，形成錐形的不孕尖端，與一種中國(guó)獨(dú)有的蟲草品種一分枝蟲草Cordyceps ramosa Teng的形態(tài)特征相似，故定名為分枝蟲草。本發(fā)明從上述野生蟲草分離獲得的分枝蟲草菌⑶IM_Cr2011521Cordycepsramosa⑶M_Cr2011521已于2013年01月14日保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱為CCTCC，地址是中國(guó)武漢武漢大學(xué))，保藏編號(hào)為CCTCC NO:M2013015。本發(fā)明所述的分枝蟲草的純分離物(菌株)在斜面培養(yǎng)基上，基生菌絲發(fā)達(dá)，氣生菌絲較少，微光光照12小時(shí)/天，3 4天后，菌絲逐漸轉(zhuǎn)為黃色。本發(fā)明所述分枝蟲草菌株經(jīng)分子生物學(xué)技術(shù)鑒定，包括進(jìn)行ITS-PCR、測(cè)序，并與Genbank中所登錄的蟲草序列相比對(duì),與它最接近的蟲草Cordyceps prolifica的相似性為96%。本發(fā)明的分枝蟲草子實(shí)體，其特征是由分枝蟲草菌⑶IM_Cr2011521Cordyc印sramosa⑶頂_Cr2011521CCTCC NO:M2013015或其新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離后人工栽培獲得的，該子實(shí)體稍扁狀，頂部常見尖狀或圖純，不分枝或頂部有短分枝，淺暗黃褐色。所述的新鮮子實(shí)體可以是野生或栽培成功后獲得的子實(shí)體。本發(fā)明所述的分枝蟲草子實(shí)體的栽培方法，其特征包括以下:(I)將分枝蟲草菌 fflHM_CR2011052lCordyc印S ramosa fflHM_CR201IO52ICCTCCNO:M2013015或其野生或栽培成功后獲得的子實(shí)體進(jìn)行組織分離，取子座按黃豆大小的接種量接入綜合PDA斜面培養(yǎng)基，25 28°C，空氣相對(duì)濕度60% 80%時(shí)，進(jìn)行暗培養(yǎng)7 10天后，光照3 4天，再暗培養(yǎng)15 30天，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，挑取基生菌絲發(fā)達(dá)且轉(zhuǎn)成黃色的斜面作為母種，保藏于4°C作備用或進(jìn)一步培養(yǎng)，所述的綜合PDA斜面培養(yǎng)基pH6.0
6.5，其原料組成為每IOOOmL水中加入馬鈴薯200g，葡萄糖20g，KH2P043g，MgSO4.7Η201.5g，維生素B10.02 0.05g,瓊脂15 20g ；(2)將步驟(I)得到的母種按黃豆大小的菌塊接入黃豆芽汁馬鈴薯斜面培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)或復(fù)壯，于25 28°C，空氣相對(duì)濕度60% 80%時(shí)，進(jìn)行暗培養(yǎng)7 10天、光照3 4天，再暗培養(yǎng)15 30天，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，挑取基生菌絲發(fā)達(dá)且轉(zhuǎn)成黃色的斜面作為二級(jí)母種，所述的黃豆芽汁馬鈴薯斜面培養(yǎng)基PH6.0 6.5，其原料組成為每IOOOmL水中加入黃豆芽汁100g，馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15 20g，其制備方法是按原料組成分別稱量各組分后，把馬鈴薯去皮切小長(zhǎng)條，再放入黃豆芽汁，加水煮沸20 30分鐘左右至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6 8層紗布過濾，余下的濾汁在加熱狀態(tài)下與其余組分混合攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，待冷卻至70 80°C，制成斜面；(3)將步驟(2)得到的二級(jí)母種按每IOOmL培養(yǎng)基接入10_15塊黃豆大小的菌塊的接種量接種至液體培養(yǎng) 基中，于20 25°C，以120 150r/min的轉(zhuǎn)速震蕩培養(yǎng)6 10天，挑取菌絲球大小均勻一致、直徑為2 3mm的菌種作為一級(jí)菌種，所述的液體培養(yǎng)基PH6.0 6.5，其組成是每IOOOmL培養(yǎng)基中含葡萄糖10g，酵母浸膏3g，麥芽浸出粉3g，蛋白胨5g和余量的水；(4)將步驟(3)得到的一級(jí)菌種按液體培養(yǎng)基體積5% 10%的接種量接入液體培養(yǎng)基中，于20 25°C，以140 150r/min的轉(zhuǎn)速震蕩培養(yǎng)7 10天，挑取菌絲球大小均勻一致、直徑為2 3mm的菌種作為生產(chǎn)種，所述的液體培養(yǎng)基與步驟(3)的培養(yǎng)基相同；(5)在無菌的環(huán)境條件下，將步驟(4)得到的生產(chǎn)種用水稀釋，再按每IOOOmL生產(chǎn)種接種到0.5 0.8kg生產(chǎn)用培養(yǎng)基的比例進(jìn)行接種，在20 25°C，空氣相對(duì)濕度50% 75%下，先暗培養(yǎng)7 12天，至菌絲基本長(zhǎng)滿培養(yǎng)基后，進(jìn)行光照培養(yǎng)，光強(qiáng)400 7001x，8 10h/d，空氣相對(duì)濕度80% 90%，25 28°C，經(jīng)7 10天長(zhǎng)出子實(shí)體原基，再培養(yǎng)50 60天，至部分子實(shí)體頂部出現(xiàn)白點(diǎn)，或出現(xiàn)孢子時(shí)，即可采收，得到分枝蟲草子實(shí)體，所述的生產(chǎn)用培養(yǎng)基是按Ikg大米和I 2L營(yíng)養(yǎng)液的比例組成，其中每升營(yíng)養(yǎng)液由葡萄糖10g，蛋白胨5g，麥芽浸出粉3g，酵母浸膏3g，以及余量的水組成，pH6.0 6.5。步驟(I)所述的綜合PDA斜面培養(yǎng)基的制備可采用通常方法:按原料組成分別稱量各組分后，把馬鈴薯去皮切小長(zhǎng)條，加水煮沸20 30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6 8層紗布過濾，余下的濾汁在加熱狀態(tài)下與其余組分混合攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，待冷卻至70 80°C，制成斜面。步驟(3)所述的一級(jí)菌種還可以用同樣的方法按液體培養(yǎng)基體積5% 10%的接種量接入液體培養(yǎng)基進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)為二級(jí)菌種。步驟(5)所述的分枝蟲草子實(shí)體還可以在60°C下烘4 5小時(shí)得到干品，以便于保存和再利用，所述的大米和營(yíng)養(yǎng)液混合后，封口，121°C滅菌40min，冷卻至室溫備用。本發(fā)明所用大米、馬鈴薯和黃豆芽汁購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，酵母浸膏、麥芽浸出粉、蛋白胨均購(gòu)自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，葡萄糖、KH2PO4、MgSO4.7Η20、維生素B1和瓊脂均由市場(chǎng)購(gòu)得。本發(fā)明的分枝蟲草子實(shí)體的生物轉(zhuǎn)化率達(dá)到10% 20%,即每千克養(yǎng)料能產(chǎn)出IOOg 200g的新鮮子實(shí)體。本發(fā)明的分枝蟲草子實(shí)體含有多種有效成分和營(yíng)養(yǎng)成分，其含量為腺苷0.008% 0.01%，蟲草素0.001% 0.005%，蟲草酸4.0% 4.82%，粗蛋白15.0% 17.9%，粗纖維10.0% 13.3%，粗多糖1.0% 1.1%，可作為食品或原料使用。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，不是對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1:稱取馬鈴薯200g，葡萄糖 20g，KH2P043g, MgSO4.7H201.5g，維生素 B10.02g,瓊脂15g，水1000mL。將馬鈴薯去皮切成小條放入鍋中，加水煮沸20分鐘左右至馬鈴薯軟而不爛，用6層紗布過濾，余下的濾汁于鍋中，加入瓊脂熔化，再加入葡萄糖、KH2P04、MgSO4.7H20和維生素B1攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH至6.0,趁熱按5mL/管的量分裝于18mmX 180mm試管里,塞上棉塞，包上牛皮紙或報(bào)紙，于121°C，15磅蒸汽壓，滅菌20分鐘，冷卻到60°C倒成斜面，得到綜合PDA斜面培養(yǎng)基，備用。將野生的分枝蟲草菌GDIM_CR20110521Cordyceps ramosa GDIM_CR20110521CCTCC NO:M2013015子實(shí)體進(jìn)行組織分離，取子座按黃豆大小的接種量接入無菌的綜合PDA斜面培養(yǎng)基，250C，空氣相對(duì)濕度60%，進(jìn)行暗培養(yǎng)7天后，光照3天，再暗培養(yǎng)15天，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，挑取基生菌絲發(fā)達(dá)且轉(zhuǎn)成黃色的斜面作為母種。稱取黃豆芽汁100g，馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15g，將馬鈴薯去皮切成小條放入鍋中，再加入黃豆芽汁，加水煮沸20分鐘左右至馬鈴薯軟而不爛，用8層紗布過濾，留濾汁于鍋中，將瓊脂熔化，再加入葡萄糖攪拌均勻，調(diào)節(jié)PH至6.0，趁熱按5mL/管的量分裝于18mmX 180mm試管里，塞上棉塞，包上牛皮紙，于121°C，15磅蒸汽壓，滅菌20分鐘，冷卻到60°C倒成斜面，得到黃豆芽汁馬鈴薯斜面培養(yǎng)基。將母種按黃豆大小的菌塊接入黃豆芽汁馬鈴薯斜面培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)或復(fù)壯，于250C，空氣相對(duì)濕度60%時(shí)，進(jìn)行暗培養(yǎng)7天后，光照3天，再暗培養(yǎng)15天，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，挑取基生菌絲發(fā)達(dá)且轉(zhuǎn)成黃色的斜面作為二級(jí)母種。稱取葡萄糖10g，酵母浸膏3g，麥芽浸出粉3g，蛋白胨5g，將各成分分別用水溶解后混合，調(diào)節(jié)pH至6.0，用水定容至1L，按裝量為50%的比例裝入耐高溫的容器內(nèi)，于121°C下，15分鐘常規(guī)滅菌，冷卻至室溫，得到液體培養(yǎng)基。

將二級(jí)母種按每IOOmL培養(yǎng)基10塊黃豆大小的菌塊的接種量接至無菌液體培養(yǎng)基中，20°C下，120r/min,振蕩培養(yǎng)6天,選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2 3mm的菌種作為一級(jí)菌種。將5mL —級(jí)菌種接種至IOOmL液體培養(yǎng)基中，20°C下，140r/min，振蕩培養(yǎng)7天，選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2 3mm的菌株作為生產(chǎn)種。將葡萄糖10g，蛋白胨5g，麥芽浸出粉3g，酵母浸膏3g混合用水定容到1L，pH調(diào)至6.0，得到營(yíng)養(yǎng)液。將20g大米裝入250mL的玻璃培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在加入營(yíng)養(yǎng)液20mL，混合，用聚乙烯薄膜和橡皮筋封口，121°C滅菌40min，冷卻至室溫，得到生產(chǎn)用培養(yǎng)基。在無菌條件下,將IOOmL的生產(chǎn)菌種用300mL的無菌水稀釋,再接入50g無菌的生產(chǎn)用培養(yǎng)基中，在20°C，空氣相對(duì)濕度50%下，先進(jìn)行暗培養(yǎng)7天，待菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基后，進(jìn)行光照培養(yǎng)，光強(qiáng)4001x，8h/d，空氣相對(duì)濕度80%，250C，經(jīng)7天長(zhǎng)出子實(shí)體原基，再培養(yǎng)50天，待部分子實(shí)體頂部出現(xiàn)白點(diǎn)，即進(jìn)行采收，得到分枝蟲草子實(shí)體，將子實(shí)體在60°C下烘5小時(shí)，獲得干品(水分含量不高于13%)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，本次生物轉(zhuǎn)化率達(dá)到15%，即每千克培養(yǎng)料能產(chǎn)出150g的新鮮子實(shí)體，經(jīng)檢測(cè)，得到的分枝蟲草子實(shí)體含腺苷0.008%，蟲草素0.001%，蟲草酸4.0%，粗蛋白含量為15.0%，粗纖維含量為10.0%，粗多糖含量為1.0%。實(shí)施例2:稱取馬鈴薯400g，葡萄糖 40g，KH2P046g, MgSO4.7H203g,維生素 B10.lg，瓊脂 40g，水2000mL。將馬鈴薯去皮切成小條放入鍋中，加水，煮沸30分鐘左右至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用8層紗布過濾，留濾汁于鍋中，將剩余水加入，將瓊脂熔化，再加入葡萄糖、KH2PO4,MgSO4.7Η20和維生素B1攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH至6.5，趁熱按IOmL/管的量分裝于20mmX 200mm試管里，塞上棉塞，包上牛皮紙，于121 °C，15磅蒸汽壓，滅菌30分鐘，冷卻到70°C倒成斜面，得到綜合PDA斜面培養(yǎng)基 ，備用。將分枝蟲草菌fflHM_CR201 IO52ICordyc 印 s ramosa fflHM_CR201IO52 ICCTCC NO:M2013015從5°C保存下取出，按黃豆大小的接種量接入無菌的綜合PDA斜面培養(yǎng)基中，280C，空氣相對(duì)濕度80%，進(jìn)行暗培養(yǎng)10天后，光照4天，再暗培養(yǎng)30天，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，挑取基生菌絲發(fā)達(dá)且轉(zhuǎn)成黃色的斜面作為母種。稱取黃豆芽汁200g，馬鈴薯400g，葡萄糖40g，瓊脂40g，將馬鈴薯去皮切成小條放入鍋中，再加入黃豆芽汁，加水煮沸30分鐘左右至馬鈴薯軟而不爛，用6層紗布過濾，留濾汁于鍋中，將剩余的水加入，將瓊脂熔化，再加入葡萄糖攪拌均勻，調(diào)節(jié)PH至6.5，趁熱按5mL/管的量分裝于18mmX 180mm試管里,塞上棉塞,包上牛皮紙,于121°C, 15磅蒸汽壓,滅菌20分鐘，冷卻到60°C倒成斜面，得到黃豆芽汁馬鈴薯斜面培養(yǎng)基。將母種按黃豆大小的菌塊接入黃豆芽汁馬鈴薯斜面培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)或復(fù)壯，于28 V，空氣相對(duì)濕度80%時(shí)，進(jìn)行暗培養(yǎng)10天后，光照4天，再暗培養(yǎng)30天，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，挑取基生菌絲發(fā)達(dá)且轉(zhuǎn)成黃色的斜面作為二級(jí)母種。稱取葡萄糖10g，酵母浸膏3g，麥芽浸出粉3g，蛋白胨5g，將各成分分別用水溶解后混合，調(diào)節(jié)pH至6.5，用水定容至1L，按裝量為50%的比例裝入耐高溫的容器內(nèi)，于121°C下，15分鐘常規(guī)滅菌，冷卻至室溫，得到液體培養(yǎng)基。將二級(jí)母種按每IOOmL培養(yǎng)基7塊黃豆大小的菌塊的接種量接至無菌的液體培養(yǎng)基中，25°C，150r/min，振蕩培養(yǎng)10天，選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2 3mm的菌種作為一級(jí)菌種。
將IOmL —級(jí)菌種接種至IOOmL液體培養(yǎng)基中，于25°C，150r/min，振蕩培養(yǎng)10天，挑取菌絲球大小均勻一致、直徑為2 3mm的菌株作為生產(chǎn)種。將葡萄糖IOg,蛋白胨5g,麥芽浸出粉3g,酵母浸膏3g,混合用水定容到1L, pH調(diào)至6.5，得到營(yíng)養(yǎng)液。將20g大米裝入250mL的玻璃培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在加入營(yíng)養(yǎng)液40mL，混合，用聚乙烯薄膜和橡皮筋封口，121 °C滅菌40min，冷卻至室溫，得到生產(chǎn)用培養(yǎng)基。在無菌室內(nèi)，將IOOmL的生產(chǎn)菌種用800mL的無菌水稀釋,再接入80g無菌的生產(chǎn)用培養(yǎng)基中，于25°C，空氣相對(duì)濕度75%下，先進(jìn)行暗培養(yǎng)12天，待菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基后，進(jìn)行光照培養(yǎng)，光強(qiáng)7001x，10h/d，空氣相對(duì)濕度90%，28°C，經(jīng)10天長(zhǎng)出子實(shí)體原基，再培養(yǎng)60天，待部分子實(shí)體頂部出現(xiàn)孢子，即進(jìn)行采收，得到分枝蟲草子實(shí)體，將子實(shí)體在60°C下烘5小時(shí)，獲得干品(水分含量不高于13%)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，本次生物轉(zhuǎn)化率達(dá)到20%,即每千克培養(yǎng)料能產(chǎn)出200g的新鮮子實(shí)體，經(jīng)檢測(cè)，得到的分枝蟲草子實(shí)體含腺苷0.01%，蟲草素0.005%，蟲草酸4.82%，粗蛋白含量為17.9%，粗纖維含量為13. 3%，粗多糖含量為1.1%。
權(quán)利要求
1.分枝蟲草菌⑶M_CR2011052ICordyc印Sramosa fflHM_CR2011052ICCTCC NO:M2013015。
2.一種分枝蟲草子實(shí)體，其特征是由權(quán)利要求1所述的分枝蟲草菌或其新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離后人工栽培獲得的，該子實(shí)體稍扁狀，頂部常見尖狀或圖純，不分枝或頂部有短分枝，淺暗黃褐色。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的分枝蟲草子實(shí)體，其特征是所述的新鮮子實(shí)體是野生或栽培成功后獲得的子實(shí)體。
4.權(quán)利要求2或3所述的分枝蟲草子實(shí)體的人工栽培方法，其特征包括以下的步驟: (1)將權(quán)利要求1所述的分枝蟲草菌或其野生或栽培成功后獲得的子實(shí)體進(jìn)行組織分離，取子座按黃豆大小的接種量接入綜合PDA斜面培養(yǎng)基，25 28°C，空氣相對(duì)濕度60% 80%時(shí)，先暗培養(yǎng)7 10天后，光照3 4天，再暗培養(yǎng)15 30天，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，挑取基生菌絲發(fā)達(dá)且轉(zhuǎn)成黃色的斜面作為母種，所述的綜合PDA斜面培養(yǎng)基pH6.0 6.5，其原料組成為每IOOOmL水中加入馬鈴薯200g，葡萄糖20g，KH2P043g, MgSO4.7H201.5g，維生素B10.02 0.05g,瓊脂 15 20g ； (2)將步驟(I)得到的母種按黃豆大小的菌塊接入黃豆芽汁馬鈴薯斜面培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)或復(fù)壯，于25 28°C，空氣相對(duì)濕度60% 80%時(shí)，先暗培養(yǎng)7 10天后，光照3 4天，再暗培養(yǎng)15 30天，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，挑取基生菌絲發(fā)達(dá)且轉(zhuǎn)成黃色的斜面作為二級(jí)母種，所述的黃豆芽汁馬鈴薯斜面培養(yǎng)基PH6.0 6.5，其原料組成為每IOOOmL水中加入黃豆芽汁100g，馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15 20g，其制備方法是按原料組成分別稱量各組分后，把馬鈴薯去皮切小長(zhǎng)條，再放入黃豆芽汁，加水煮沸20 30分鐘左右至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6 8層紗布過濾，余下的濾汁在加熱狀態(tài)下與其余組分混合攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，待冷卻至70 80°C，制成斜面； (3)將步驟(2)得到的二級(jí)母種按每IOOmL培養(yǎng)基接入10-15塊黃豆大小的菌塊的接種量接種至液體培養(yǎng)基中，于20 25°C，以120 150r/min的轉(zhuǎn)速震蕩培養(yǎng)6 10天，挑取菌絲球大小均勻一致、直徑為2 3mm的菌種作為一級(jí)菌種，所述的液體培養(yǎng)基pH6.0 6.5，其組成是每IOOOmL培養(yǎng)基中含葡萄糖10g，酵母浸膏3g，麥芽浸出粉3g，蛋白胨5g和余量的水； (4)將步驟(3)得到的一級(jí)菌種按液體培養(yǎng)基體積5% 10%的接種量接入液體培養(yǎng)基中，于20 25°C，以140 150r/min的轉(zhuǎn)速震蕩培養(yǎng)7 10天，挑取菌絲球大小均勻一致、直徑為2 3mm的菌種作為生產(chǎn)種，所述的液體培養(yǎng)基與步驟(3)的培養(yǎng)基相同； (5)在無菌的環(huán)境條件下，將步驟(4)得到的生產(chǎn)種用水稀釋，再按每IOOOmL生產(chǎn)種接種到0.5 0.8kg生產(chǎn)用培養(yǎng)基的比例進(jìn)行接種，在20 25°C，空氣相對(duì)濕度50% 75%下，先暗培養(yǎng)7 12天，至菌絲基本長(zhǎng)滿培養(yǎng)基后，進(jìn)行光照培養(yǎng)，光強(qiáng)400 7001x，8 10h/d，空氣相對(duì)濕度80% 90%，25 28°C，經(jīng)7 10天長(zhǎng)出子實(shí)體原基，再培養(yǎng)50 60天，至部分子實(shí)體頂部出現(xiàn)白點(diǎn)，或出現(xiàn)孢子時(shí)，即可采收，得到分枝蟲草子實(shí)體，所述的生產(chǎn)用培養(yǎng)基是按Ikg大米和I 2L營(yíng)養(yǎng)液的比例組成，其中每升營(yíng)養(yǎng)液由葡萄糖10g，蛋白胨5g，麥芽浸出粉3g，酵母浸膏3g， 以及余量的水組成，pH6.0 6.5。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的分枝蟲草子實(shí)體的人工栽培方法，其特征是步驟(I)所述的綜合PDA斜面培養(yǎng)基的制備方法是按原料組成分別確定各組分的重量后，把馬鈴薯去皮切小長(zhǎng)條，煮沸20 30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6 8層紗布過濾，余下的濾汁在加熱狀態(tài)下與其余組分混合攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，待冷卻至70 80°C，制成斜面；步驟(3)所述的一級(jí)菌種用同樣的方法按液體培養(yǎng)基體積5% 10%的接種量接入液體培養(yǎng)基進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)為二級(jí)菌種；步驟(5)所述的分枝蟲草子實(shí)體還在60°C下烘4 5小時(shí)得到干品。`
全文摘要
本發(fā)明涉及一種分枝蟲草菌GDIM_CR20110521(Cordyceps ramosa GDIM_CR20110521)CCTCC NOM2013015及其子實(shí)體和人工栽培方法，其特征是通過將該菌株或其野生或栽培成功后獲得的子實(shí)體進(jìn)行組織分離，接入綜合PDA斜面培養(yǎng)基制備斜面母種，斜面母種再接至液體培養(yǎng)基中制備一級(jí)菌種，一級(jí)菌種接入液體培養(yǎng)基中制備生產(chǎn)種，生產(chǎn)菌種在生產(chǎn)用培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得一種人工栽培的分枝蟲草子實(shí)體。本發(fā)明分枝蟲草子實(shí)體生物轉(zhuǎn)化率達(dá)到10%～20%，含有多種有效成分和營(yíng)養(yǎng)成分，其含量為:腺苷0.008%～0.01%，蟲草素0.001%～0.005%，蟲草酸4.0%～4.82%，粗蛋白15.0%～17.9%，粗纖維10.0%～13.3%，粗多糖1.0%～1.1%，可作為食品或原料使用。
文檔編號(hào)A01G1/04GK103098648SQ20131003758
公開日2013年5月15日 申請(qǐng)日期2013年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月30日
發(fā)明者宋斌, 林群英, 李泰輝, 林敏 , 李挺, 鄧旺秋, 沈亞恒 申請(qǐng)人:廣東省微生物研究所