專利名稱：山葵種子催芽莖尖滅菌初代培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)領(lǐng)域中的幼苗培育方法，具體是指山葵種子催芽莖尖滅菌初代培
養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
我國(guó)山葵產(chǎn)業(yè)發(fā)展中，墨入病(也稱黑心病)是山葵種植最重要的病害，嚴(yán)重時(shí)可引起山葵種植的完全失敗。已有的研究發(fā)現(xiàn)，墨入病是山葵的專有病害，對(duì)其他作物不產(chǎn)生危害，也不對(duì)人體健康造成不利影響。墨入病是由山葵莖點(diǎn)霉菌(Phoma wasabiae Yokogi)侵入山葵植株體內(nèi)并主要經(jīng)維管束傳導(dǎo)侵染，嚴(yán)重影響山葵品質(zhì)和產(chǎn)量，甚至造成山葵絕收。墨入病可以為害山葵的根莖、須根、葉片、葉柄。經(jīng)日本、臺(tái)灣、大陸多年的研究，至今未找到根治或有效防治山葵墨入病的藥物。所以，對(duì)其防治是以預(yù)防為主要措施，其中，培育和種植不帶墨入病菌的健壯種苗是重中之重。種苗培育已成為山葵大面積發(fā)展的一個(gè)主要制約因素。在傳統(tǒng)生產(chǎn)上山葵多采用種子繁殖和分株繁殖。山葵是異花授粉植物，因受高山寒冷氣候及多雨的影響，媒介昆蟲密度低，種子稔實(shí)率低，采收后儲(chǔ)藏管理及打破休眠處理等技術(shù)繁瑣困難，一般農(nóng)戶掌握難度較大。同時(shí)，山葵種子播種后，發(fā)芽率通常只有30%左右，出苗極不整齊，難以大規(guī)模培育規(guī)格一致的健康壯苗，不能滿足山葵大面積種植的需要。山葵種子中，約30%感染有內(nèi)生性的墨入病病菌，其育成的種苗也帶有致病菌并易造成植株間相互傳染，嚴(yán)重影響山葵根莖質(zhì)量。在實(shí)生健康種苗嚴(yán)重不足的情況下，不少生產(chǎn)者采用分株苗進(jìn)行種植，這帶來了更為嚴(yán)重的問題，往往造成墨入病極其嚴(yán)重，山葵根莖絕收，只能采收少量的葉柄葉片，基本沒有經(jīng)濟(jì)效益。在地種植 一年半至兩年的山葵植株體內(nèi)，80%以上都感染了墨入病菌，只是肉眼不一定能辨認(rèn)。利用成熟植株上的蘗生側(cè)芽分株作為種苗，墨入病極其嚴(yán)重，種植失敗是必然的結(jié)果。目前還沒有針對(duì)性的去除墨入病的種植方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供山葵種子催芽莖尖滅菌初代培養(yǎng)方法，培育出壯實(shí)、無菌的山葵苗，推廣山葵的實(shí)際栽培。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
山葵種子催芽莖尖滅菌初代培養(yǎng)方法，包括以下步驟
(A)催芽選擇需要進(jìn)行培養(yǎng)的山葵品種，將種子保持18°C 22°C，濕度為90%，促其發(fā)
芽；
(B)選材當(dāng)山葵種子發(fā)芽長(zhǎng)度為I 2cm時(shí)，切取莖尖，長(zhǎng)度為O.3 O. 4cm ；
(C)清洗將步驟(B)整理好的芽用洗衣粉液清洗后，用紗布包裹后，利用自來水持續(xù)沖洗2小時(shí)，再用1%濃度的消洗靈溶液浸泡30分鐘，最后用無菌吸潮紙基本吸干水分；(D)滅菌將經(jīng)步驟(C)制得的山葵芽莖尖利用70%體積濃度的酒精浸泡28 32秒，然后利用O. 2%升汞進(jìn)行消毒處理，最后用無菌水清洗5次；
(E)初代培育將滅菌后的莖尖利用培養(yǎng)基培育成無菌的山葵幼苗。本發(fā)明采用山葵的飽滿、健康種子作為培育基礎(chǔ)，在源頭上大大降低了胚芽被污染的可能性，在室內(nèi)的穩(wěn)定培養(yǎng)環(huán)境下，山葵種子的發(fā)芽率極高，而且其發(fā)芽的時(shí)間、生長(zhǎng)的長(zhǎng)度較為均勻，便于選取統(tǒng)一的莖尖，為培育提供了良好的基礎(chǔ)；在選取莖尖時(shí)，將選取的長(zhǎng)度定位O. 3 O. 4cm，而傳統(tǒng)的莖尖培育方法中通常采用的莖尖長(zhǎng)度為O. 5 O. 8cm,在試驗(yàn)中，發(fā)明人做了對(duì)比試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下
權(quán)利要求
1.山葵種子催芽莖尖滅菌初代培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟 (A)催芽選擇需要進(jìn)行培養(yǎng)的山葵品種，將種子保持18°C 22°C，濕度為90%，促其發(fā)芽； (B)選材當(dāng)山葵種子發(fā)芽長(zhǎng)度為I 2cm時(shí)，切取莖尖，長(zhǎng)度為O.3 O. 4cm ； (C)清洗將步驟(B)整理好的芽用洗衣粉液清洗后，用紗布包裹后，利用自來水持續(xù)沖洗2小時(shí)，再用1%濃度的消洗靈溶液浸泡30分鐘，最后用無菌吸潮紙基本吸干水分； (D)滅菌將經(jīng)步驟(C)制得的山葵芽莖尖利用70%體積濃度的酒精浸泡28 32秒，然后利用O. 2%升汞進(jìn)行消毒處理，最后用無菌水清洗5次； (E)初代培育將滅菌后的莖尖利用培養(yǎng)基培育成無菌的山葵幼苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山葵種子催芽莖尖滅菌初代培養(yǎng)方法，其特征在于所述步驟(E)中培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件為1/2MS培養(yǎng)基，蔗糖30克/升，6-BAO. 4mg/L，瓊脂6克/升，PH值為5. 8，培養(yǎng)室溫度18°C，光強(qiáng)度1500-2000LUX。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的山葵種子催芽莖尖滅菌初代培養(yǎng)方法，其特征在于所述步驟(A)中，還包括對(duì)種子消毒處理，采用O. 2%升汞進(jìn)行消毒處理的時(shí)間為8 10分鐘。
全文摘要
本發(fā)明公布了山葵種子催芽莖尖滅菌初代培養(yǎng)方法，包括(A)催芽；(B)選材；(C)清洗將步驟(B)整理好的芽用洗衣粉液清洗后，用紗布包裹后，利用自來水持續(xù)沖洗2小時(shí)，再用1%濃度的消洗靈溶液浸泡30分鐘，最后用無菌吸潮紙基本吸干水分；(D)滅菌將經(jīng)步驟(C)制得的山葵芽莖尖利用70%體積濃度的酒精浸泡28～32秒，然后利用0.2%升汞進(jìn)行消毒處理，最后用無菌水清洗5次；(E)初代培育。本發(fā)明通過山葵種子催芽，切取莖尖培養(yǎng)，獲得了85%的無菌成苗率，并經(jīng)過后續(xù)擴(kuò)大試驗(yàn)的驗(yàn)證，這是山葵外植體初代培養(yǎng)的一個(gè)極大突破。
文檔編號(hào)A01H4/00GK103053427SQ201310041780
公開日2013年4月24日 申請(qǐng)日期2013年2月4日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月4日
發(fā)明者方季虎 申請(qǐng)人:四川藍(lán)公府農(nóng)業(yè)科技有限公司