一種延胡索離體繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種延胡索離體繁殖技術，本發(fā)明的目的是提供一種遺傳穩(wěn)定性好、繁殖占用空間小、保存和運輸方便的延胡索立體繁殖方法。本發(fā)明的技術解決方案要點有一下步驟：1)延胡索原球莖的誘導形成；2)延胡索類原球莖的增殖；3)延胡索類原球莖的分化；4)延胡索類原球莖再生植株的生根；5)延胡索類原球莖再生植株的煉苗移栽。本發(fā)明用于延胡索的繁殖。
【專利說明】一種延胡索離體繁殖方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種繁殖的方法，特別是一種延胡索離體繁殖方法。
【背景技術】
[0002]延胡索既有食用價值，還有藥用價值。然而傳統(tǒng)的塊莖繁殖方法不能適應生產(chǎn)需要。對其離體繁殖進行了廣泛的研究，目前，在延胡索的研究中認為延胡索可以通過腋生枝途徑、多芽體誘導途徑和微型塊莖誘導途徑等方式進行離體繁殖。其中腋生枝是將帶腋芽的莖段扦插在培養(yǎng)基中，其 腋芽分化成苗，基部分化出根而成一完整植株；多芽體誘導型是通過調整培養(yǎng)基中的激素濃度，去除頂端優(yōu)勢的抑制使腋芽發(fā)育出多個小芽；微型塊莖既是延胡索的一種變態(tài)器官，同時也是延胡索的儲藏器官和繁殖器官，而微型塊莖誘導途徑則是誘導試管苗腋芽形成地上變態(tài)塊莖，形成的塊莖可萌發(fā)成苗亦可進行保存。前兩種繁殖方式遺傳穩(wěn)定性較高，但占用空間大，第三種目前僅有微型塊莖的初步誘導，在塊莖萌發(fā)成苗及應用方面未見更深入的研究。本實驗室以帶腋芽的莖段為外植體，首次離體誘導出了延胡索的類原球莖，這些類原球莖占用空間小，且在適宜條件下能夠大量分化為新的植株，可作為延胡索離體繁殖的新途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種遺傳穩(wěn)定性好、繁殖占用空間小、保存和運輸方便的延胡索離體繁殖方法。本發(fā)明的技術解決方案是，其特征在于有以下步驟:(I)延胡索類原球莖的誘導形成，將延胡索試管苗切成帶腋芽莖段接種于MS+TDZl-6mg/L+KTl-4mg/L的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進行培養(yǎng)30-40d，誘導形成類原球莖；(2)延胡索類原球莖的增殖，將上述類原球莖的小塊在無菌條件下接種于MS+TDZ1-4mg/L+KT 1-4mg/L的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進行培養(yǎng)，得到大量增殖的類原球莖；(3)延胡索類原球莖的分化，將誘導形成或增殖的類原球莖轉接于 MS+2，4D0.05-0.lmg/L+6-BA1-2mg/L+KT2-4mg/L+TDZ0-2mg/L+ 活性炭0.1-ο.2g/L的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進行培養(yǎng)，類原球莖分化出大量的芽；
[0004](4)延胡索類原球莖再生植株的生根，挑選頂芽長度為2_3cm的類原球莖再生植株，從其基部分開，轉入液體的MS+PP3330.5-1.0mg/L+NAA0.05-1.0mg/L培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進行培養(yǎng)7d開始有根的形成，15-20d即可形成大量的根。以上各步驟中的工作臺為超凈工作臺，各步驟培養(yǎng)室的培養(yǎng)條件為:溫度20-25°C，光照每天12-16h，光強為20001x ; (5)延胡索類原球莖再生植株的煉苗移栽，將上述生根的延胡索類原球莖的培養(yǎng)瓶蓋打開，將培養(yǎng)瓶移自然光下煉苗3-5d，使其逐漸適應外界自然環(huán)境，移栽時將根部的培養(yǎng)基洗凈，去除褐化的老根，移栽入裝有蛭石的營養(yǎng)缽中，15d后即成活。本發(fā)明與現(xiàn)有技術比較具有遺傳穩(wěn)定性好、繁殖占用空間小且保存及運輸方便的顯著優(yōu)點。
【具體實施方式】
[0005]本發(fā)明有以下實施例:[0006]1、延胡索類原球莖的誘導形成
[0007]在超凈工作臺上將延胡索試管苗切成長度為Icm左右的帶腋芽莖段接種于MS+TDZ0.l-6mg/L+KTl-4mg/L的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室條件下進行培養(yǎng)，30_40d即可誘導形成類原球莖。
[0008]2、延胡索類原球莖的增殖
[0009]在超凈工作臺上，將誘導出的延胡索類原球莖切成直徑0.5cm左右的小塊在無菌條件下接種于MS+TDZl-4mg/L+KTl-4mg/L培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室條件下進行培養(yǎng)，類原球莖
可以大量增殖。
[0010]3、延胡索類原球莖的分化
[0011]在超凈工作臺上，將誘導形成或繼代增殖的類原球莖轉接于MS十2，4D0.05-0.lmg/L+6-BA1-2mg/L+KT1-4mg/L+TDZ0-2mg/L+ 活性炭 0.1-0.2g/L 的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室條件下進行培養(yǎng)，類原球莖可以分化出大量的芽。
[0012]4、延胡索類原球莖再生植株的生根
[0013]挑選頂芽長度為2-3cm的類原球莖再生植株，從基部分開，轉入液體的MS十PP3330.5-1.0mg/L十NAA0.05-1.0mg/L培養(yǎng)基上，在恒溫箱條件下進行培養(yǎng)，7d開始有根的形成，15-20d即可形成大量的根。
[0014]以上各步培養(yǎng)條件均為:溫度20_25°C，每天光照12_16h，光強為20001x。
[0015]5、延胡索類原球莖再生植株的煉苗移栽
[0016]當類原球莖生根后，打開培養(yǎng)瓶蓋，將培養(yǎng)瓶移至自然光下煉苗3-5d。讓類原球莖植株逐漸適應外界自然條件，移栽時將根部的培養(yǎng)基洗凈，去除褐化的老根，移栽入裝有蛭石的營養(yǎng)缽中，15d后即可成活。
【權利要求】
1.一種延胡索離體繁殖技術，其特征在于:包括下列步驟: (1)延胡索原球莖的誘導形成，將延胡索試管苗切成帶腋芽經(jīng)段接種于MS+TDZ1.0~.5.0mg/1+KT1.0~5.0mg/1的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進行培養(yǎng)20-30天，誘導形成類原球莖； (2)延胡索類原球莖的增殖，將上述類原球莖的小塊在無菌條件下接種于MS+TDZ1.0~5.0mg/1+KT1.0~5.0mg/1的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進行培養(yǎng)，得到大量增殖的類原球莖； (3)延胡索類原球莖的分化，將誘導形成或增殖的類原球莖接種于MS+2，4-D0.05-0.lmg/L+6-BA1-2mg/L+KT2-4mg/L 十 TDZl_2mg/L 十活性炭 0.1-0.2g/L 的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進行培養(yǎng)，類原球莖可分化出大量的芽； (4)延胡索類原球莖再生植株的生根，挑選頂芽長度為2-3cm的類原球莖再生植株，從其基部分開，轉入液體的MS+PP3330.5-1.0mg/L+NAA0.1-1.0mg/L培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進行培養(yǎng)，7d開始有根的形成，15-20d即可形成大量的根；以上各步驟中的工作臺為超凈工作臺，各步驟培養(yǎng)室的培養(yǎng)條件為:溫度20-25°C，光照每天12-15h，光強為20001x ； (5)延胡索類原球莖再生植株的煉苗移栽，將上述生根的延胡索類原球莖的培養(yǎng)瓶蓋打開，將培 養(yǎng)瓶移自然光下煉苗3-5d，使其逐漸適應外界自然環(huán)境，移栽時將根部的培養(yǎng)基洗凈，去除褐化的老根，移栽入營養(yǎng)缽中，約15天左右可以成活。
【文檔編號】A01H4/00GK104012399SQ201310061662
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2013年2月28日 優(yōu)先權日:2013年2月28日
【發(fā)明者】毛健, 姬中偉, 張敏, 牟穰, 陽志銳, 郭燕飛, 黎衛(wèi), 馮東陽, 鞏丹, 劉蕓雅 申請人:江南大學