專利名稱：一種防止牡丹組培苗褐化以及玻璃化的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種防止牡丹組培苗褐化以及玻璃化的方法。
背景技術(shù)：
牡丹suffruticosa Andr.)廣泛分布于我國，作為我國原生的、古老的特有植物是研究栽培植物起源、人工選擇理論，進(jìn)行科學(xué)試驗(yàn)的良好材料。牡丹品種繁多，花色甚豐，至今已有紅、白、粉、黃、紫、藍(lán)、綠、黑及復(fù)色等9大色系1100多個(gè)品種，以及單瓣型、荷花型、菊花型、薔薇型、托桂型、繡球型、皇冠型、金環(huán)型、千層臺閣型、樓子臺閣型等十種花型。因其栽培品種繁多，適宜溫室周年栽培，所以在我國花卉市場占有重要地位。牡丹傳統(tǒng)的繁殖方法有有性繁殖中的種子繁殖，無性繁殖中的分株、壓條、嫁接繁殖等。但是這些繁殖方法受著各種因素的影響，由于多數(shù)品種結(jié)實(shí)率低甚至不結(jié)實(shí)，且種子發(fā)育不良，用種子繁殖難以獲得優(yōu)良植株；而無性繁殖受生長季節(jié)的限制、繁殖系數(shù)小、形不成規(guī)模，無法滿足市場的需求。近年來我國牡丹的栽培面積越來越大，隨之而來的是如何提高牡丹的人工培養(yǎng)成活率。傳統(tǒng)的繁殖方法生產(chǎn)周期長，生產(chǎn)成本高，同時(shí)易導(dǎo)致牡丹感染病毒，種性下降。為了實(shí)現(xiàn)牡丹種植的規(guī)模化、工廠化，降低生產(chǎn)成本，組織培養(yǎng)是一條有效的途徑。作為一種行之有效的方法，組織培養(yǎng)在牡丹繁殖生產(chǎn)中尚未得到應(yīng)用，有許多問題需要進(jìn)一步研究解決，其中褐化以及玻璃化就是其中最主要的問題。褐化是植物材料受傷后，體內(nèi)釋放的多酚類物質(zhì)在多酚氧化酶的作用下被氧化成褐色的醌類物質(zhì)的結(jié)果。而玻璃化是組織培養(yǎng)過程中由于各種因素的影響會導(dǎo)致試管內(nèi)叢生苗生理障礙出現(xiàn)嫩綠透明現(xiàn)象，愈傷組織出現(xiàn)鮮綠水潰狀，玻璃化的牡丹組培苗無法增殖和移栽成活。因此，要使牡丹組培能夠更好地運(yùn)用到我們的實(shí)際生產(chǎn)`中，玻璃化以及褐化也是我們必須要克服的技術(shù)難題。目前，在牡丹組培的過程中通常使用恒溫培養(yǎng)。且在組培的過程中常常使用活性炭、PVP、硝酸銀、維生素C等防褐化劑，來避免組培苗的褐化，但是防褐化劑需要一定的費(fèi)用，且使用防褐化劑會對組培苗造成一定的副作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種防止牡丹組培苗褐化以及玻璃化的方法，能夠良好的解決牡丹苗在組織培養(yǎng)過程中褐化以及玻璃化的問題。本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是:一種防止牡丹組培苗褐化以及玻璃化的方法，包括以下步驟:
A、在每年的11月底到12月初選取長勢良好的牡丹土芽，備用；
B、對牡丹土芽進(jìn)行處理:用手將步驟A中的牡丹土芽及相連枝條的外面一層表皮剝除，在剝除的同時(shí)確保牡丹土芽的生長活力；C、在超凈工作臺內(nèi)對牡丹土芽進(jìn)行消毒:用質(zhì)量濃度為75%的酒精對步驟B中的牡丹土芽消毒2(T30s，然后用質(zhì)量濃度為0.1 %的升汞消毒15 min，用無菌水沖洗5飛次，最后用吸水紙吸干牡丹土芽上的水；
D、在超凈工作臺內(nèi)對牡丹土芽進(jìn)行接種:左手捏住枝條的末端，右手拿鑷子，用鑷子將牡丹土芽外面的鱗片剝除干凈，之后將牡丹土芽內(nèi)的嫩芽用無菌剪刀剪下，再將其接入生長培養(yǎng)基內(nèi)；
E、將接種后的牡丹土芽放于組培架中進(jìn)行培養(yǎng)，白天組培架內(nèi)的光照強(qiáng)度為5000-6000 Lx，夜間關(guān)閉燈光，白天溫度為20-24°C，夜間溫度為14_16°C，日平均溫度為20°C的變溫條件下培養(yǎng)。所述的生長培養(yǎng)基配方為加有MS、0.5 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA的培養(yǎng)基。

本發(fā)明的有益效果包括以下幾個(gè)方面:
1、本發(fā)明通過將溫度控制在白天溫度為20-24°C，夜間溫度為14-16°C，日平均溫度為20°C的變溫條件下培養(yǎng)，與恒溫培養(yǎng)相比，大大降低了牡丹組培過程中玻璃化現(xiàn)象的發(fā)生。2、因?yàn)槭茄魁g早期取樣，所以在一系列的消毒過程中比較便捷，簡化了步驟，從而在處理芽的過程中，芽的受傷程度較小，這樣在培養(yǎng)組培苗的過程中大大的降低了褐化率。3、本發(fā)明對牡丹土芽的取樣時(shí)間進(jìn)行了嚴(yán)格的限制，即在每年的11月底到12月初進(jìn)行取樣，本階段取的土芽是剛剛形成不久的新芽，新生芽被外面的鱗片緊緊包裹，芽內(nèi)部干凈，抗菌能力比芽齡大的強(qiáng)，污染率較低。4、本發(fā)明沒有用任何防褐化劑，因此降低了組培的費(fèi)用；同時(shí)避免了使用活性炭、PVP、硝酸銀、維生素C等防褐化劑對組培苗的不良影響。
具體實(shí)施例方式下面對本發(fā)明的實(shí)施例做詳細(xì)說明:本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。一種防止牡丹組培苗褐化以及玻璃化的方法，包括以下步驟:
A、在12月2號選取長勢良好的225棵牡丹土芽，備用；
B、對牡丹土芽進(jìn)行處理:用手將步驟A中的牡丹土芽及相連枝條的外面一層表皮剝除，在剝除的同時(shí)確保牡丹土芽的生長活力；
C、在超凈工作臺內(nèi)對牡丹土芽進(jìn)行消毒:用質(zhì)量濃度為75%的酒精對步驟B中的牡丹土芽消毒25s，然后用質(zhì)量濃度為0.1 %的升汞消毒15 min，用無菌水沖洗5次,最后用吸水紙吸干牡丹土芽上的水；
D、在超凈工作臺內(nèi)對牡丹土芽進(jìn)行接種:左手捏住枝條的末端，右手拿鑷子，用鑷子將牡丹土芽外面的鱗片剝除干凈，之后將牡丹土芽內(nèi)的嫩芽用無菌剪刀剪下，再將其接入生長培養(yǎng)基內(nèi)；
E、將接種后的牡丹土芽放于組培架中進(jìn)行培養(yǎng)，白天組培架內(nèi)的光照強(qiáng)度為5000-6000 Lx，夜間關(guān)閉燈光，白天溫度為20-24°C，夜間溫度為14_16°C，日平均溫度為20°C的變溫條件下培養(yǎng)。所述的生長培養(yǎng)基配方為加有MS、0.5 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA的培養(yǎng)基。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:芽在培養(yǎng)基中長25天左右后，僅有2株有輕微褐化，其余表現(xiàn)生長正常，長勢快，且無污染，無玻璃化現(xiàn)象，葉色為正常綠色，且株高大約Γ5 cm。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:通過采用本發(fā)明，褐化率為0.89%，與前人牡丹組培褐化率的20%-30%相比，大大降低了褐化率。且無玻璃化現(xiàn)象發(fā)生。此發(fā)明可以運(yùn)用在牡丹土芽組培的過程中，大大提高了接種的成功率，進(jìn)而提高了工作效率，為大批組培工作提供了一個(gè)更好的條 件。
權(quán)利要求
1.一種防止牡丹組培苗褐化以及玻璃化的方法，其特征在于，包括以下步驟: A、在每年的11月底到12月初選取長勢良好的牡丹土芽，備用； B、對牡丹土芽進(jìn)行處理:用手將步驟A中的牡丹土芽及相連枝條的外面一層表皮剝除，在剝除的同時(shí)確保牡丹土芽的生長活力； C、在超凈工作臺內(nèi)對牡丹土芽進(jìn)行消毒:用質(zhì)量濃度為75%的酒精對步驟B中的牡丹土芽消毒2(T30s，然后用質(zhì)量濃度為0.1 %的升汞消毒15 min，用無菌水沖洗5飛次，最后用吸水紙吸干牡丹土芽上的水； D、在超凈工作臺內(nèi)對牡丹土芽進(jìn)行接種:左手捏住枝條的末端，右手拿鑷子，用鑷子將牡丹土芽外面的鱗片剝除干凈，之后將牡丹土芽內(nèi)的嫩芽用無菌剪刀剪下，再將其接入生長培養(yǎng)基內(nèi)； E、將接種后的牡丹土芽放于組培架中進(jìn)行培養(yǎng)，白天組培架內(nèi)的光照強(qiáng)度為5000-6000 Lx，夜間關(guān)閉燈光，白天溫度為20-24°C，夜間溫度為14_16°C，日平均溫度為20°C的變溫條件下培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防止牡丹組培苗褐化以及玻璃化的方法，其特征在于:所述的生長培養(yǎng)基配方為加有MS、 0.5 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA的培養(yǎng)基。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種防止牡丹組培苗褐化以及玻璃化的方法。其步驟包括選材、消毒前處理、在超凈工作臺內(nèi)消毒、在超凈工作臺內(nèi)接種以及組培架內(nèi)培養(yǎng)。本發(fā)明通過將溫度控制在白天溫度為20-24℃，夜間溫度為14-16℃，日平均溫度為20℃的變溫條件下培養(yǎng)，與恒溫培養(yǎng)相比，大大降低了牡丹組培過程中玻璃化現(xiàn)象的發(fā)生。因?yàn)槭茄魁g早期取樣，所以在一系列的消毒過程中比較便捷，簡化了步驟，從而在處理芽的過程中，芽的受傷程度較小，這樣在培養(yǎng)組培苗的過程中大大的降低了褐化率。本發(fā)明沒有用任何防褐化劑，因此降低了組培的費(fèi)用；同時(shí)避免了使用活性炭、PVP、硝酸銀等防褐化劑對組培苗的不良影響。
文檔編號A01H4/00GK103120128SQ20131006356
公開日2013年5月29日 申請日期2013年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月28日
發(fā)明者施江, 郭倩, 辛莉, 郭永新, 王小燕, 史國安 申請人:河南科技大學(xué)