專利名稱：維生素a臨界缺乏家禽動物模型的構(gòu)建方法
維生素A臨界缺乏家禽動物模型的構(gòu)建方法
Construction of model poultry with marginal vitamin A deficiency技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于動物營養(yǎng)相關(guān)科研、獸醫(yī)臨床評價和實驗動物學(xué)領(lǐng)域，涉及營養(yǎng)缺乏癥動物模型的構(gòu)建方法，尤其是涉及一種家禽維生素A臨界缺乏動物模型的構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
近年來，隨著家禽營養(yǎng)與免疫學(xué)的發(fā)展，維生素A的營養(yǎng)免疫調(diào)節(jié)作用日益受到人們重視。維生素A通過其在動物體內(nèi)的代謝產(chǎn)物視黃酸，在家禽的呼吸道黏膜、消化道黏膜、體液免疫以及細(xì)胞免疫等方面均有重要的調(diào)節(jié)作用。然而，在研究在維生素A的營養(yǎng)免疫調(diào)節(jié)及其作用機(jī)制方面的研究中，構(gòu)建家禽維生素A臨界缺乏的動物模型成為瓶頸環(huán)節(jié)。目前雖然已有通過飼喂缺乏維生素A的純化日糧構(gòu)建動物模型的報道，但其技術(shù)手段還主要存在以下問題:①由于家禽肝臟儲存有比較多的維生素A，往往需要飼喂很長一段時間的缺乏維生素A的純化日糧，才能表現(xiàn)出維生素A臨界缺乏。②由于構(gòu)建時間較長，而家禽生長周期短(例如商品肉雞僅需40天左右出欄)，進(jìn)行早期的試驗(如1-2周齡)難以實現(xiàn)。③由于雞對普通維生素A的吸收、轉(zhuǎn)運等環(huán)節(jié)變異很大，往往同樣處理的群體內(nèi)不同個體維生素A的營養(yǎng)水平參差不齊。④直接采用缺乏維生素A的純化日糧構(gòu)建模型，容易引起動物維生素A重度缺乏而喪失食欲，進(jìn)而引起蛋白-能量營養(yǎng)失調(diào)導(dǎo)致死亡。發(fā)明內(nèi)容
鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種構(gòu)建維生素A臨界缺乏的I日齡雛禽動物模型。通過本方法構(gòu)建的維生素A臨界缺乏動物模型，具有群體內(nèi)整齊度高，性能穩(wěn)定等特點，可滿足獸醫(yī)臨床維生素A補充劑的療效評價、維生素A營養(yǎng)免疫調(diào)節(jié)及其機(jī)制的科學(xué)研究、實驗動物學(xué)其他相關(guān)研究等的需要。
為了解決背景技術(shù)所存在的問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案: 配制缺乏維生素A的純化日糧，包括以下重量份數(shù)比的原料:酪蛋白15.0-25.0，DL-蛋氨酸1.5-4.5，玉米淀粉10.0-18.0，蔗糖40.0-60.0，纖維素4.0-6.0，玉米油4.0-6.0，微量元素預(yù)混料3.5，維生素 預(yù)混料1.0。其中，微量元素預(yù)混料按美國NRC推薦公布的家禽營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，維生素預(yù)混料除不含維生素A外，其余成分均按美國NRC推薦的家禽營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制。另外配制維生素A微乳溶液，包括以下重量份數(shù)比的原料:維生素A油(含量1000000IU/g) 0.1，丙二醇 10.0-15.0，Span60 10.0-15.0, Tween80 8.0-12.0，BHT 0.3，焦亞硫酸鈉0.3，純化水60-70份。通過維生素A溶液飲水可以靈活調(diào)整家禽維生素A攝入量。選擇18-25周齡的父母代種禽，飼喂缺乏維生素A的純化日糧，每間隔I周翅靜脈采血測定血清維生素A含量。待種禽血清維生素A水平降低至0.60-0.85 μ mol/L后，通過飲水調(diào)整其攝入維生素A水平穩(wěn)定在600IU/kg日糧。在此范圍內(nèi)，不影響其產(chǎn)蛋率和孵化率，種蛋孵出的雛禽即達(dá)到維生素A的臨界缺乏狀態(tài)，而又不至于由于體質(zhì)太弱而發(fā)生早期死亡。出殼雛禽飼喂缺乏維生素A的純化日齡，配合維生素A微乳溶液飲水，調(diào)整其攝入維生素A日糧水平為300IU/kg，即可維持雛禽的維生素A臨界缺乏狀態(tài)。
優(yōu)選地，配制缺乏維生素A的純化日糧，包括以下重量份數(shù)比的原料:酪蛋白18.0-22.0, DL-蛋氨酸 1.7-4.2，玉米淀粉 12.0-16.0，蔗糖 42.0-55.0,纖維素 4.5-5.5，玉米油4.5-5.5，微量元素預(yù)混料3.5，維生素預(yù)混料1.0。其中，微量元素預(yù)混料按美國NRC推薦公布的家禽營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，維生素預(yù)混料除不含維生素A外，其余成分均按美國NRC推薦的家禽營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制。另外配制維生素A微乳溶液，包括以下重量份數(shù)比的原料:維生素A 油(含量 1000000IU/g) 0.1，丙二醇 10.0-12.0, Span60 12.0-15.0, Tween80 8.0-10.0,BHT 0.3，焦亞硫酸鈉0.3，純化水60-65份。選擇19-22周齡的父母代種禽，飼喂缺乏維生素A的純化日糧，每間隔I周翅靜脈采血測定血清維生素A含量。待種禽血清維生素A水平降低至0.60-0.85 μ mol/L后，通過飲水調(diào)整其攝入維生素A水平穩(wěn)定在600IU/kg日糧。在此范圍內(nèi)，不影響其產(chǎn)蛋率和孵化率，種蛋孵出的雛禽即達(dá)到維生素A的臨界缺乏狀態(tài)，而又不至于由于體質(zhì)太弱而發(fā)生早期死亡。出殼雛禽飼喂缺乏維生素A的純化日齡，配合維生素A微乳飲水劑，調(diào)整其攝入維生素A日糧水平為120IU/kg，即可維持雛禽的維生素A臨界缺乏狀態(tài)。
進(jìn)一步優(yōu)選地，配制缺乏維生素A的純化日糧，包括以下重量份數(shù)比的原料:酪蛋白 19.0-20.0，DL-蛋氨酸 1.9-4.0，玉米淀粉 14.0-15.0，蔗糖 44.0-52.0，纖維素 4.7-5.2，玉米油4.7-5.2，微量元素預(yù)混料3.5，維生素預(yù)混料1.0。其中，微量元素預(yù)混料按美國NRC推薦公布的家禽營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，維生素預(yù)混料除不含維生素A外，其余成分均按美國NRC推薦的家禽營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制。另外配制維生素A微乳溶液，包括以下重量份數(shù)比的原料:維生素A 油(含量 1000000IU/g) 0.1，丙二醇 10.0-11.0，Span60 12.0-14.0, Tween80 9.0-10.0，BHT 0.3，焦亞硫酸鈉0.3，純化水62-65份。選擇20-22周齡的父母代種禽，飼喂缺乏維生素A的純化日糧，每間隔I周翅靜脈采血測定血清維生素A含量。待種禽血清維生素A水平降低至0.60-0.85 μ mol/L后，通過飲水調(diào)整其攝入維生素A水平穩(wěn)定在600IU/kg日糧。在此范圍內(nèi)，不影響其產(chǎn)蛋率和孵化率，種蛋孵出的雛禽即達(dá)到維生素A的臨界缺乏狀態(tài)，而又不至于由于體質(zhì)太弱而發(fā)生早期死亡。出殼雛禽飼喂缺乏維生素A的純化日齡，配合維生素A微乳飲水，調(diào)整其攝入維生素A日糧水平為120IU/kg，即可維持雛禽的維生素A臨界缺乏狀態(tài)。
所述的家禽為蛋雞、肉雞、肉鴨、鵝以及鵪鶉等。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明公開的家禽維生素A臨界缺乏動物模型的構(gòu)建方法具有如下優(yōu)點和顯著進(jìn)步:①可以得到I日齡雛禽維生素A臨界缺乏模型，便于進(jìn)行早期的試驗研究。②通過本方法構(gòu)建的動物模型，群體內(nèi)整齊度高。③通過本方法構(gòu)建的動物模型，既具有維生素A臨界缺乏的特點，又具有足夠的抗逆能力。④本方法配制缺乏維生素A的純化日糧，通過飲水調(diào)整維生素A的攝入水平，與直接配制低含量維生素A的純化日糧相比較，更加方便靈活，并且可以避免日糧配制后由于維生素A降解而導(dǎo)致的建模不確定性。
具體實施方式
以下是本發(fā)明的具體實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步作描述，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發(fā)明構(gòu)思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
實施例一:肉仔雞維生素A臨界缺乏動物模型的構(gòu)建 配制缺乏維生素A的純化日糧，包括以下重量份數(shù)比的原料:酪蛋白20.0, DL-蛋氨酸3.0，玉米淀粉15.0，蔗糖50.0，纖維素5.0，玉米油5.0，微量元素預(yù)混料3.5，維生素預(yù)混料1.0。其中，微量元素預(yù)混料按美國NRC推薦公布的家禽營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，維生素預(yù)混料除不含維生素A外，其余成分均按美國NRC推薦的家禽營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制。另外配制維生素A微乳溶液，包括以下重量份數(shù)比的原料:維生素A油(含量1000000IU/g)0.1，丙二醇10.0，Span6012.0, Tween80 10.0, BHT 0.3，焦亞硫酸鈉0.3，純化水62份。選擇20周齡的羅斯308父母代種雞，飼喂缺乏維生素A的純化日糧，每間隔I周翅靜脈采血測定血清維生素A含量。經(jīng)過12周的飼喂試驗，種雞血清維生素A水平降低至0.60-0.85 μ mol/L的范圍后，通過維生素A微乳制劑飲水調(diào)整其攝入維生素A水平穩(wěn)定在600IU/kg日糧。在此范圍內(nèi)，不影響其產(chǎn)蛋率和孵化率，種蛋孵出的雛禽即達(dá)到維生素A的臨界缺乏狀態(tài)，而又不至于由于體質(zhì)太弱而發(fā)生早期死亡。
由上述實驗的種雞生產(chǎn)的受精種蛋，按常規(guī)孵化程序孵化，出殼雛雞的血清VA介于0.35-0.70 μ mol/L,符 合VA臨界缺乏動物模型的要求。
實施例二:肉仔雞維生素A臨界缺乏動物模型的驗證與應(yīng)用 為了進(jìn)一步驗證本發(fā)明所構(gòu)建的肉仔雞維生素A臨界缺乏模型，設(shè)計如下實驗。
1.材料與方法 1.1試驗動物選取由實施實例I所得到的I日齡羅斯308出殼雛雞120羽，隨機(jī)分為3組，每組40羽:I組為臨界缺乏組，飼喂純化飼料，并通過維生素A納米微乳飲水調(diào)整日糧VA水平為300IU/kg ；II組為空白組，只飼喂純化日糧組，不補充維生素A ;III組為陽性對照，飼喂純化日糧，并通過維生素A納米微乳飲水調(diào)整日糧VA水平為12000IU/kg ;另取羅斯308普通種蛋孵化的雛雞40羽作為陰性對照(IV組)，只飼喂純化日糧。
1.2試驗方法各組動物單籠飼養(yǎng)，自由采食，自由飲水。通過飲水補充維生素的實驗組，維生素加入到適量飲水中，于2-3小時內(nèi)飲用完畢。飼養(yǎng)過程中各日齡溫濕度控制按羅斯308種禽公司推薦的程序。
1.3樣品采集與指標(biāo)測定分別于I日齡、7日齡每組隨機(jī)取10羽斷頭取血，分別于14日齡、21日齡、28日齡、35日齡、42日齡每組隨機(jī)取10羽翅靜脈采血。采集的血液樣品分離血清，通過高效液相色譜法測定維生素A濃度。
2.試驗結(jié)果 2.1 一般健康狀況 試驗I組的動物至試驗結(jié)束時有2只死亡，剖檢表現(xiàn)出腎臟蒼白，爪、喙無光澤等典型的VA臨界缺乏癥狀。存活的雞只也表現(xiàn)出羽毛松亂、生長遲緩等，符合家禽VA臨界缺乏的癥狀表現(xiàn)。
試驗II組的試驗動物由于飼料中缺乏VA，于第3周開始出現(xiàn)較多死亡，第4周大部分死亡，表現(xiàn)出典型的VA缺乏癥狀。
試驗III組由于通過飲水補充了高水平的VA，健康狀況及生長良好，試驗期內(nèi)僅僅發(fā)生I例死亡。
試驗IV組于第2周開始出現(xiàn)零星死亡，第5周大部分死亡。死亡的動物剖檢表現(xiàn)出典型的VA缺乏癥狀。
2.2血清VA含量 試驗期內(nèi)各試驗組動物血清VA含量的變化如圖1所示。


:圖1是試驗期內(nèi)各實驗組動物血清VA含量變化趨勢圖。
由圖1可見，I組動物血清VA含量介于0.50 μ mol/L-0.68 μ mol/L之間，一直保持在相對穩(wěn)定的水平，并且群體內(nèi)VA含量水平變異很小，符合家禽VA臨界缺乏動物模型的有關(guān)要求。
II組動物血清VA含量下降很快，第2周即降至臨界缺乏水平(0.35 μ mol/L)之下，群體內(nèi)不同動物個體間血清VA水平變異較小。說明本方法建立的動物模型可用于VA缺乏癥的相關(guān)研究。
III組動物血清VA水平逐漸升高，群體內(nèi)不同動物個體間血清VA水平變異較小，說明本方法建立的動物模型可以對飲食補充的VA做出良好的響應(yīng)。
IV組動物血清VA含量I日齡時處于較高水平，之后迅速降低，群體內(nèi)不同個體血清VA水平變異較大，建立模型過程中伴隨大量死亡。
3.實驗結(jié)論 通過本方法建立的家禽VA臨界缺乏動物模型，血清VA水平穩(wěn)定，含量范圍符合VA臨界缺乏的有關(guān)指標(biāo)要求。模型動物健康狀況可滿足一般試驗的要求，建立的動物模型對補充的VA具有良好的響應(yīng)，有效解決 的目前動物模型構(gòu)建中所存在的問題。
權(quán)利要求
1.一種維生素A臨界缺乏家禽動物模型的構(gòu)建方法，其特征在于:以缺乏維生素A的純化日糧飼喂產(chǎn)蛋期的種禽降低其血清VA水平至0.60-0.85ymol/L，并通過維生素A溶液飲水使其保持在此水平，所生產(chǎn)的種蛋經(jīng)孵化得到I日齡的VA臨界缺乏家禽動物模型。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述缺乏維生素A的純化日糧包括以下重量份數(shù)比的原料:酪蛋白15.0-25.0, DL-蛋氨酸1.5-4.5，玉米淀粉10.0-18.0,蔗糖40.0-60.0,纖維素4.0-6.0,玉米油4.0-6.0,微量元素預(yù)混料3.5，維生素預(yù)混料1.0 ;所述維生素A溶液包括以下重量份數(shù)比的原料:維生素A油(含量1000000IU/g)0.1，丙二醇 10.0-15.0, Span60 10.0-15.0, Tween80 8.0-12.0, BHT 0.3，焦亞硫酸鈉 0.3，純化水60-70 份。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，配制純化日糧所用的微量元素預(yù)混料按美國NRC推薦的家禽營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，維生素預(yù)混料除不含維生素A外，其余成分均按美國NRC推薦的家禽營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，為保持種禽血清維生素A的水平穩(wěn)定以及動物模型具有足夠健康的體質(zhì)，通過飲水補充維生素A溶液的劑量，以日糧濃度重量比例計算分別為600IU/kg (種禽)和 300IU/kg (雛雞)。
5.如權(quán)利要求1所述家禽動物模型，其特征在于，所述的家禽為蛋雞、肉雞、肉鴨、鵝以及鵪鶉等。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種維生素A臨界缺乏家禽動物模型的構(gòu)建方法，以缺乏維生素A的純化日糧飼喂產(chǎn)蛋期的種禽，降低其血清VA水平至0.60-0.85μmol/L，并通過維生素A溶液飲水使其保持在此水平，所生產(chǎn)的種蛋經(jīng)孵化得到1日齡的維生素A臨界缺乏的家禽動物模型。應(yīng)用本方法所建立的動物模型既具有維生素A臨界缺乏的特征，又具有足夠強(qiáng)壯的體質(zhì)存活至5周齡以上，并且具有群體內(nèi)整齊度高、性能穩(wěn)定，方便于商業(yè)化制備的特點。
文檔編號A23K1/16GK103141433SQ20131007319
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月7日
發(fā)明者劉宗柱, 劉文華, 李學(xué)民, 張金玲 申請人:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)