專利名稱：一種利用白酒酒糟生產(chǎn)微生物飼料益生菌劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用白酒酒糟生產(chǎn)微生物飼料益生菌劑的方法，屬于生物技術(shù)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
近幾年，我國白酒年產(chǎn)量約為900萬噸，隨之而來的副產(chǎn)品酒糟的年產(chǎn)量約為1500萬噸。白酒酒糟是白酒生產(chǎn)最大的副產(chǎn)品，其中殘存未能完全利用的淀粉、被富集的蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物氨基酸、維生素、礦物元素、微生物菌體等營養(yǎng)物質(zhì)，如表I所示，這些營養(yǎng)成分可進行多方面的綜合利用。
表I白酒酒糟成分
.1 11成分ii+Aj埤 11成分 水份01.U5灰分IHftii 粉7, 總 ft* AfiIH H2.SIHUKilH.m 發(fā)酸 乙in 77WiO, On IHfTffLItL 4 ο.15 HUItilJj2.s;ifta i a
現(xiàn)在全國一年的飼料用糧大概占全國糧食總產(chǎn)量的23%左右，白酒釀造行業(yè)每年耗糧達(dá)2000多萬噸，而酒糟生產(chǎn)干飼料所節(jié)省的飼料用糧，相當(dāng)于釀酒的30%。一個年產(chǎn)萬噸的白酒廠年產(chǎn)酒糟3萬噸，可生產(chǎn)干飼料7000噸，所節(jié)省的飼料用糧，相當(dāng)于釀酒耗糧的30%。
目前，處理酒糟的傳統(tǒng)方法是用做家畜飼料，酒糟中雖然含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素、微量元素、無氮浸出物、糖類、豐富的磷、鉀等營養(yǎng)成分，但是酒糟適口性差、消化率較低、嚴(yán)重地影響了酒糟的飼用價值和飼養(yǎng)效果。
我國養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模世界第一、同時各種抗生藥物大量使用，對人類健康造成的危害日益嚴(yán)重。隨著世界上許多國家對抗生素使用的限制，抗生素在動物養(yǎng)殖飼料中大量使用的行為將被禁止。益生菌具有改善飼養(yǎng)動物消化系統(tǒng)生態(tài)環(huán)境、抵抗病原菌的作用，是目前替代抗生藥物的理想選擇。
中國專利文獻CN102715342A (申請?zhí)?01210178380.9)公開了一種基于白酒糟和雜柏的微生物飼料的加工方法，其以白酒糟為原料經(jīng)過脈孢菌、曲霉一期發(fā)酵預(yù)處理，充分降解白酒糟的木質(zhì)素、纖維素和淀粉，再添加部分棉柏經(jīng)芽孢桿菌和酵母菌二期發(fā)酵，吸收霉菌降解廢棄物產(chǎn)生的營養(yǎng)物質(zhì)及霉菌本身解體的營養(yǎng)物質(zhì)。然后添加豆柏和菜子柏，接種乳酸菌、雙歧桿菌經(jīng)三期厭氧發(fā)酵成成品。該方法需要進行三期發(fā)酵，耗費時間長，并且生產(chǎn)工藝過長，容易沾染雜菌， 從而導(dǎo)致生產(chǎn)成本高。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種利用白酒酒糟生產(chǎn)微生物飼料益生菌劑的方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
一種利用白酒酒糟生產(chǎn)微生物飼料益生菌劑的方法，步驟如下:
(I)向酒糟中加入2 5倍重量的水，在室溫攪拌條件下浸泡15 30min，過20目篩，向濾液中加入濾液重量0.01 0.1%的酸性蛋白酶溶液，酸性蛋白酶溶液酶活為50000U/ml，在40 55°C下水解2 4h，然后調(diào)節(jié)pH至4.0 5.0，加入濾液重量0.1 0.5%的糖化酶溶液，糖化酶溶液酶活為100000U/ml，在60 65°C下水解4 6h，制得水解液，然后將水解液濃縮至原體積的20% 50%，制得酒糟提取液；
(2)取活菌濃度為1.0 1.5X 109CFU/ml的布拉德酵母菌(Saccharomycesboulardii)發(fā)酵液50 60份，活菌濃度為3.0 3.5X109CFU/ml的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)發(fā)酵液 20 30 份，活菌濃度為 1.0 1.2X 109CFU/ml 的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)發(fā)酵液20 30份,混合后,制得混合液,混合液經(jīng)分離菌體，制得混合濕菌體；
(3)配制海藻糖質(zhì)量濃度為5 8%、維生素C質(zhì)量濃度為0.05 1%、乳糖質(zhì)量濃度為I 5%的保護液；
將玉米淀粉和沸石粉按質(zhì)量比(I 2): (I 2)的比例混合均勻，制得復(fù)合載體；
(4)將步驟(2)制得的混合濕菌體與步驟(3)制得的保護液按質(zhì)量比(I 2):(I 2)的比例混合均勻，然后分別按步驟(2)制得的混合液重量的40 60%各加入步驟(O制得的酒糟提取液和步驟(3)制得的復(fù)合載體，混合均勻后經(jīng)40 50°C干燥，制得微生物飼料益生菌劑。制得的微生物飼料益生菌劑中活菌總數(shù)> 109eFU/g。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(I)中的酒糟中，總糖8 10wt%，還原糖0.2 0.5wt%,總氮I 1.5wt%,纖維素10 15wt%，含水量60 65wt%，酸度2 2.5wt%,余量為粗脂肪和無機鹽及雜質(zhì)。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(2)中的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)為保藏號ATCC MYA796的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii) Sb48或保藏號CICC31992的博拉迪酵母菌(Saccharomyces boulardii)(注:布拉德酵母與博拉迪酵母均為boulardii的中文音譯，菌株分類名稱以拉丁名稱為準(zhǔn))。
植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，保藏號CICC22696 ；
地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)為保藏號為CFCC2698的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)或保藏號為CFCC2741的地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(2)中的分離為經(jīng)15000rpm連續(xù)離心分離或加入絮凝劑沉淀過夜分離。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的,所述步驟(2)中布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)發(fā)酵液按如下方法制備:
a、取斜面活化的布拉德酵母菌菌種接入種子培養(yǎng)基中，在溫度30°C、搖瓶轉(zhuǎn)速180rpm的條件下,搖瓶培養(yǎng)24 30小時,制得種子液；
b、按重量百分比5%的接種量將種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度30°C、轉(zhuǎn)速200rpm的條件下，培養(yǎng)24 30小時，制得二級種子液；
C、按重量百分比10%的接種量將二級種子液流加接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度30°C、轉(zhuǎn)速200rpm的條件下，培養(yǎng)30 36小時，制得活菌濃度為1.0 1.5 X 109CFU/ml的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)發(fā)酵液。
根據(jù)本發(fā)明進一步優(yōu)選的，所述步驟a中，種子培養(yǎng)基每升含有如下組分:葡萄糖40g，蛋白胨lg，水定容至1L，pH5.5，121°C滅菌20分鐘。
根據(jù)本發(fā)明進一步優(yōu)選的，所述步驟b和c中，發(fā)酵培養(yǎng)基組分如下，均為重量百分比:1 2%的葡萄糖或廢糖蜜，0.5 1%的硫酸銨，0.5 1%的玉米漿，余量為酒糟提取液，調(diào)節(jié)PH為5.5，121°C滅菌20分鐘。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的,所述步驟(2)中植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)發(fā)酵液按如下方法制備:
(i)取半固體穿刺活化的植物乳桿菌菌種接入種子培養(yǎng)基中，在溫度37°C條件下，靜置厭氧培養(yǎng)12 24小時，制得種子液；
(ii)按重量百分比5%的接種量將種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度37°C條件下，靜置厭氧培養(yǎng)12 24小時，制得二級種子液。
(iii)按重量百分比10%的接種量將二級種子液流加接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度37°C條件下，靜置厭氧發(fā)酵培養(yǎng)24 36小時，制得活菌濃度為3.0 3.5X109CFU/ml的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)發(fā)酵液。
根據(jù)本發(fā)明進一步優(yōu)選的，所述步驟(i)中，種子培養(yǎng)基每升含有如下組分:葡萄糖20g，蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母提取物5g，檸檬酸二胺2g，磷酸氫二鉀2g,MgSO4.7Η200.58g，MnSO4.H2O0.25g，吐溫 801ml,乙酸鈉 5g，水定容至 1L，ρΗ6.8，121°C滅菌20分鐘。
根據(jù)本發(fā)明進一步優(yōu)選的，所述步驟(i i )和(i i i )中，發(fā)酵培養(yǎng)基組分如下，均為重量百分比:0.5 1%的葡萄糖或廢糖蜜，0.2 0.5%的硫酸銨，I 2%的碳酸鈣，0.5 1%的玉米漿，余量為酒糟提取液，調(diào)節(jié)PH為6.8，121°C滅菌20分鐘。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的,所述步驟(2)中地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)發(fā)酵液按如下方法制備:
(I)取斜面活化的地衣芽孢桿菌菌種I環(huán)接入種子培養(yǎng)基中，在溫度30°C、搖瓶轉(zhuǎn)速160rpm的條件下,搖瓶培養(yǎng)8 12小時,制得種子液；
(II)按重量百分比5%的接種量將種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度37°C、轉(zhuǎn)速180rpm的條件下,培養(yǎng)8 12小時,制得二級種子液；
(III)按重量百分比10%的接種量將二級種子液流加接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度37°C、轉(zhuǎn)速180rpm的條件下，培養(yǎng)12 24小時，制得活菌濃度為1.0 1.2X IO9CFU/ml的地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis)發(fā)酵液。
根據(jù)本發(fā)明進一步優(yōu)選的，所述步驟(I)中，種子培養(yǎng)基每升含有如下組分:蛋白胨10g，氯化鈉IOg,酵母粉5g，葡萄糖10g，水定容至1L，ρΗ7.5，121°C滅菌20分鐘。
根據(jù)本發(fā)明進一步優(yōu)選的，所述步驟(I I)和(I II)中，發(fā)酵培養(yǎng)基組分如下，均為重量百分比:0.2 0.5%的葡萄糖或廢糖蜜，0.2 0.5%的硫酸銨，0.5 1%的玉米漿，余量為酒糟提取液，調(diào)節(jié)PH為7.5，121°C滅菌20分鐘。
上述酸性蛋白酶的添加目的是將酒糟中的蛋白分解為小分子物質(zhì)，從而有利于后續(xù)微生物的利用，因此本領(lǐng)域可以根據(jù)需要選擇相應(yīng)的現(xiàn)有酸性蛋白酶。
糖化酶的添加目的是將酒糟中的淀粉水解為微生物可以利用的葡萄糖，因此本領(lǐng)域可以根據(jù)需要選擇相應(yīng)的現(xiàn)有糖化酶。
有益效果
1、本發(fā)明制得的微生物飼料益生菌劑中含有布拉德酵母菌，從而可以強化腸黏膜組織，吸附病原菌和降解病原菌毒素，平衡菌群，提高動物營養(yǎng)素的吸收和利用，減少營養(yǎng)性腹瀉，提高生長速度，調(diào)節(jié)機體局部免疫功能等；
2、本發(fā)明制得的微生物飼料益生菌劑中含有植物乳桿菌，從而可以拮抗病原微生物，調(diào)節(jié)動物消化道微生物區(qū)系平衡，活化免疫系統(tǒng)，增強免疫力等功能；
3、本發(fā)明制得的微生物飼料益生菌劑中含有地衣芽孢桿菌，從而可以拮抗病源菌，產(chǎn)生豐富酶類，提高飼養(yǎng)動物消化吸收，促進動物免疫功能等。
4、本發(fā)明通過加入保護液，保護液具有益生菌細(xì)胞在脫水及貯藏過程中保護細(xì)胞活性的作用；同樣條件下，使用保護液可以提高細(xì)胞活性8 15%。37°C恒溫貯藏7天，活細(xì)胞損失小于7%。
5、本發(fā)明制得的微生物飼料益生菌劑以酒糟為主要原料，通過添加適量的營養(yǎng)物質(zhì)，以液態(tài)形式培養(yǎng)三種益生菌，制備復(fù)合微生物飼料益生菌劑，提高了酒糟的附加值，利用微生物發(fā)酵的方法處理酒糟，解決了酒糟利用的難題。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明技術(shù)方案做進一步闡述，這些實施例不得用于解釋對本發(fā)明保護范圍的限制。'
實施例1和3中所述布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)為保藏號ATCCMYA796的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii) Sb48 ;實施例2所述布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)為保藏號 CICC31992 的博拉迪酵母菌(Saccharomycesboulardii)；
實施例3中的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)發(fā)酵液按現(xiàn)有常規(guī)技術(shù)制備；實施例1 2中布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)發(fā)酵液按如下方法制備:
a、取斜面活化的布拉德酵母菌菌種I環(huán)接入種子培養(yǎng)基中，在溫度30°C、搖瓶轉(zhuǎn)速180rpm的條件下,搖瓶培養(yǎng)24小時,制得種子液；
b、按重量百分比5%的接種量將種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度30°C、轉(zhuǎn)速200rpm的條件下,培養(yǎng)24小時,制得二級種子液；
C、按重量百分比10%的接種量將二級種子液流加接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度30°C、轉(zhuǎn)速200rpm的條件下，培養(yǎng)34小時，制得1.0 1.5X 109CFU/ml的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)發(fā)酵液。
所述步驟a中，種子培養(yǎng)基每升含有如下組分:葡萄糖40g，蛋白胨lg，水定容至1L, ρΗ5.5，121°C滅菌 20 分鐘。
所述步驟b和c中，發(fā)酵培養(yǎng)基組分如下，均為重量百分比:1%的葡萄糖，0.5%的硫酸銨，0.5%的玉米漿，余量為酒糟提取液，調(diào)節(jié)pH為5.5，121°C滅菌20分鐘。
植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，保藏號CICC22696 ；
實施例3中的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)發(fā)酵液按現(xiàn)有常規(guī)技術(shù)制備；實施例1 2中植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)發(fā)酵液按如下方法制備:
(i)取半固體穿刺活化的植物乳桿菌菌種I環(huán)接入種子培養(yǎng)基中，在溫度37°C條件下，靜置厭氧培養(yǎng)18小時，制得種子液；
(ii)按重量百分比5%的接種量將種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度37°C條件下，靜置厭氧培養(yǎng)18小時，制得二級種子液。
(iii)按重量百分比10%的接種量將二級種子液流加接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度37°C條件下，靜置厭氧發(fā)酵培養(yǎng)24小時，制得活菌濃度為3.0 3.5 X 109CFU/ml的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)發(fā)酵液。
所述步驟(i)中，種子培養(yǎng)基每升含有如下組分:葡萄糖20g，蛋白胨10g，牛肉膏IOg,酵母提取物 5g，檸檬酸二胺 2g，磷酸氫二鉀 2g，MgSO4.7H200.58g，MnSO4.H2O0.25g，吐溫801ml,乙酸鈉5g，水定容至1L，ρΗ6.8，121°C滅菌20分鐘。
所述步驟(ii)和(iii)中，發(fā)酵培養(yǎng)基組分如下，均為重量百分比:0.5%的葡萄糖，0.5%的硫酸銨，2%的碳酸鈣，1%的玉米漿，余量為酒糟提取液，調(diào)節(jié)pH為6.8，121°C滅菌20分鐘。
實施例1 2的地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis)為保藏號CFCC2698的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis);實施例3的地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)為保藏號 CFCC2741 的地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis)；
實施例3中的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)發(fā)酵液按現(xiàn)有常規(guī)技術(shù)制備；實施例1 2中地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)發(fā)酵液按如下方法制備:
(I)取斜面活化的地衣芽孢桿菌菌種I環(huán)接入種子培養(yǎng)基中，在溫度30°C、搖瓶轉(zhuǎn)速160rpm的條件下,搖瓶培養(yǎng)12小時,制得種子液；
(II)按重量百分比5%的接種量將種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度37°C、轉(zhuǎn)速180rpm的條件下,培養(yǎng)12小時,制得二級種子液；
(III)按重量百分比10%的接種量將二級種子液流加接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度37°C、轉(zhuǎn)速180rpm的條件下，培養(yǎng)18小時，制得活菌濃度為1.0 1.2X109CFU/ml的地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis)發(fā)酵液。
所述步驟(I)中，種子培養(yǎng)基每升含有如下組分:蛋白胨10g，氯化鈉10g，酵母粉5g，葡萄糖IOg,水定容至1L, pH7.5,121°C滅菌20分鐘。
所述步驟(II)和(III)中，發(fā)酵培養(yǎng)基組分如下，均為重量百分比:0.5%的葡萄糖，0.5%的硫酸銨，1%的玉米漿，余量為酒糟提取液，調(diào)節(jié)pH為7.5，121°C滅菌20分鐘。
酸性蛋白酶購自山東隆大生物工程有限公司，酸性蛋白酶溶液酶活為50000U/ml ；
糖化酶購自山東隆大生物工程有限公司，糖化酶溶液酶活為100000U/ml ；
酒糟購自濟南趵突泉釀酒有限責(zé)任公司，經(jīng)檢測，成分如下:
總糖9.2%，還原糖0.41wt%，總氮1.33t%，纖維素14.6wt%，含水量64wt%，酸度4.5wt%,余量為粗脂肪和無機鹽及雜質(zhì)。
實施例1
一種利用白酒酒糟生產(chǎn)微生物飼料益生菌劑的方法，步驟如下:
(I)向酒糟中加入4倍重量的水，在室溫攪拌條件下浸泡15min，過20目篩，向濾液中加入濾液重量0.05%的酸性蛋白酶溶液，酸性蛋白酶溶液酶活為50000U/ml，在45 °C下水解4h，然后調(diào)節(jié)pH至4.0，加入濾液重量0.5%的糖化酶溶液，糖化酶溶液酶活為100000U/ml，在60°C下水解4h，制得水解液，然后將水解液濃縮至原體積的25%，制得酒糟提取液；
(2)取 1.5X 109CFU/ml 的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)發(fā)酵液 60份，活菌濃度為3.0X 109CFU/ml的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)發(fā)酵液20份，活菌濃度為1.2X109CFU/ml的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)發(fā)酵液20份，混合后，制得混合液，混合液經(jīng)15000rpm的連續(xù)式離心機分離菌體,制得混合濕菌體；
(3)配制海藻糖質(zhì)量濃度為5%、維生素C質(zhì)量濃度為1%、乳糖質(zhì)量濃度為2%的保護液；
將玉米淀粉和沸石粉按質(zhì)量比1:1的比例混合均勻，制得復(fù)合載體；
(4)將步驟(2)制得的混合濕菌體與步驟(3)制得的保護液按質(zhì)量比1:1的比例混合均勻，然后分別按步驟(2)制得的混合液重量的50%加入步驟(I)制得的酒糟提取液和步驟(3)制得的復(fù)合載體，混合均勻后經(jīng)50°C干燥，制得微生物飼料益生菌劑。
經(jīng)檢測，布拉德酵母菌活菌數(shù)〉1.5X 109eFU/g，植物乳桿菌〉1.25X 109eFU/g，地衣芽孢桿菌〉6.0X 108CFU/go
實施例2
如實施例1所述的利用白酒酒糟生產(chǎn)微生物飼料益生菌劑的方法，不同之處在于，
步驟(2)中，布拉德酵母菌發(fā)酵液50份，植物乳桿菌發(fā)酵液30份，地衣芽孢桿菌發(fā)酵液20份。
制得微生物飼料益生菌劑經(jīng)檢測，布拉德酵母菌活菌數(shù)> 1.0X 109CTU/g，植物乳桿菌〉1.6X 109CFU/g，地衣芽孢桿菌〉6.0X 108CFU/g。
實施例3
如實施例1所述的利用白酒酒糟生產(chǎn)微生物飼料益生菌劑的方法，不同之處在于，
步驟(2)中，布拉德酵母菌發(fā)酵液50份，植物乳桿菌發(fā)酵液25份，地衣芽孢桿菌發(fā)酵液25份。
制得微生物飼料益生菌劑經(jīng)檢測，布拉德酵母菌活菌數(shù)> 1.0X 109CTU/g，植物乳桿菌〉1.25X 109CFU/g，地衣芽孢桿菌〉6.0X 108CFU/g。
對比例
如實施例1所述的方法，不同之處在于，不加入步驟(3)制得的保護液。
制得微生物飼料益生菌劑經(jīng)檢測，布拉德酵母菌活菌數(shù)為1.48 X 109CTU/g，植物乳桿菌為1.15X 109CFU/g，地衣芽孢桿菌為5.6X 108CFU/g。
試驗例
如實施例1所述的利用白酒酒糟生產(chǎn)微生物飼料益生菌劑的方法，不同之處在于，
不加入步驟(3)制得的保護液。制得微生物飼料益生菌劑，密封，放置于37°C恒溫箱中7天，經(jīng)檢測，布拉德酵母菌活菌數(shù)為1.45X 109eFU/g，植物乳桿菌為1.0X 109eFU/g，地衣芽孢桿菌數(shù)為5.3X 108eFU/g。活細(xì)胞總量:2.98X 109eFU/g，不加入保護劑活細(xì)胞損失11.04%ο
與實施例1制得微生物飼料益生菌劑，經(jīng)檢測，布拉德酵母菌活菌數(shù):1.52 X 109eFU/g，植物乳桿菌:1.21 X 109CFU/g,地衣芽孢桿菌:6.2 X 108CFU/g.活性細(xì)胞總量:3.35X 109CFU/g。
將實施例1制得微生物飼料益生菌劑，密封，放置于37°C恒溫箱中7天(注:該方法為本領(lǐng)域檢驗活細(xì)胞貯藏期的常規(guī)的強化方法)，經(jīng)檢測，布拉德酵母菌活菌數(shù)為1.46X 109eFU/g，植物乳桿菌為1.12X 109eFU/g，地衣芽孢桿菌為5.5X108CFU/g.細(xì)胞總量為:3.13X109CFU/go活細(xì)胞損失率為6.6%。不加入保護劑的對比例為11.04%。
權(quán)利要求
1.一種利用白酒酒糟生產(chǎn)微生物飼料益生菌劑的方法，其特征在于，步驟如下: (1)向酒糟中加入2 5倍重量的水，在室溫攪拌條件下浸泡15 30min，過20目篩，向濾液中加入濾液重量0.01 0.1%的酸性蛋白酶溶液，酸性蛋白酶溶液酶活為50000U/ml，在40 55°C下水解2 4h，然后調(diào)節(jié)pH至4.0 5.0，加入濾液重量0.1 0.5%的糖化酶溶液，糖化酶溶液酶活為100000U/ml，在60 65°C下水解4 6h，制得水解液，然后將水解液濃縮至原體積的20% 50%，制得酒糟提取液； (2)取活菌濃度為1.0 1.5X109CFU/ml的布拉德酵母菌(Saccharomycesboulardii)發(fā)酵液50 60份，活菌濃度為3.0 3.5X109CFU/ml的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)發(fā)酵液 20 30 份，活菌濃度為 1.0 1.2X 109CFU/ml 的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)發(fā)酵液20 30份,混合后,制得混合液,混合液經(jīng)分離菌體，制得混合濕菌體； (3)配制海藻糖質(zhì)量濃度為5 8%、維生素C質(zhì)量濃度為0.05 1%、乳糖質(zhì)量濃度為I 5%的保護液； 將玉米淀粉和沸石粉 按質(zhì)量比(I 2): (I 2)的比例混合均勻，制得復(fù)合載體； (4)將步驟(2)制得的混合濕菌體與步驟(3)制得的保護液按質(zhì)量比(I 2): (I 2)的比例混合均勻，然后分別按步驟(2)制得的混合液重量的40 60%各加入步驟(I)制得的酒糟提取液和步驟(3)制得的復(fù)合載體，混合均勻后經(jīng)40 50°C干燥，制得微生物飼料益生菌劑。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中的酒糟中，總糖8 10wt%，還原糖0.2 0.5wt%,總氮I 1.5wt%,纖維素10 15wt%，含水量60 65wt%，酸度2 2.5wt%,余量為粗脂肪和無機鹽及雜質(zhì)。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)為保藏號 ATCC MYA796 的布拉德酵母菌(Saccharomycesboulardii) Sb48 或保藏號 CICC31992 的博拉迪酵母菌(Saccharomyces boulardii)； 植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)為保藏號CICC22696的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)； 地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)為保藏號為CFCC2698的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)或保藏號為CFCC2741的地衣芽抱桿菌(Bacilluslicheniformis)。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的分離為經(jīng)15000rpm連續(xù)離心分離或加入絮凝劑沉淀過夜分離。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)發(fā)酵液按如下方法制備: a、取斜面活化的布拉德酵母菌菌種接入種子培養(yǎng)基中，在溫度30°C、搖瓶轉(zhuǎn)速180rpm的條件下，搖瓶培養(yǎng)24 30小時，制得種子液； b、按重量百分比5%的接種量將種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度30°C、轉(zhuǎn)速200rpm的條件下，培養(yǎng)24 30小時，制得二級種子液； C、按重量百分比10%的接種量將二級種子液流加接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度30°C、轉(zhuǎn)速200rpm的條件下，培養(yǎng)30 36小時，制得活菌濃度為1.0 1.5X109CFU/ml的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)發(fā)酵液。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟a中，種子培養(yǎng)基每升含有如下組分:葡萄糖40g，蛋白胨lg，水定容至lL，pH5.5，121°C滅菌20分鐘； 所述步驟b和c中，發(fā)酵培養(yǎng)基組分如下，均為重量百分比:I 2%的葡萄糖或廢糖蜜，0.5 1%的硫酸銨，0.5 1%的玉米漿，余量為酒糟提取液，調(diào)節(jié)pH為5.5，121°C滅菌20分鐘。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)發(fā)酵液按如下方法制備: (i)取半固體穿刺活化的植物乳桿菌菌種接入種子培養(yǎng)基中，在溫度37°C條件下，靜置厭氧培養(yǎng)12 24小時，制得種子液； (ii)按重量百分比5%的接種量將種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度37°C條件下，靜置厭氧培養(yǎng)12 24小時，制得二級種子液。
(iii)按重量百分比10%的接種量將二級種子液流加接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度37°C條件下，靜置厭氧發(fā)酵培養(yǎng)24 36小時，制得活菌濃度為3.0 3.5X109CFU/ml的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)發(fā)酵液。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟(i)中，種子培養(yǎng)基每升含有如下組分:葡萄糖20g，蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母提取物5g，檸檬酸二胺2g，磷酸氫二鉀2g,MgSO4.7Η200.58g，MnSO4.H2O0.25g，吐溫 801ml,乙酸鈉 5g，水定容至 1L，ρΗ6.8，121°C滅菌20分鐘； 所述步驟(ii)和(iii)中，發(fā)酵培養(yǎng)基組分如下，均為重量百分比:0.5 1%的葡萄糖或廢糖蜜，0.2 0.5%的硫酸銨，I 2%的碳酸鈣，0.5 1%的玉米漿，余量為酒糟提取液，調(diào)節(jié)pH為6.8，121°C滅菌20分鐘。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)發(fā)酵液按如下方法制備: (I)取斜面活化的地衣芽孢桿菌菌種I環(huán)接入種子培養(yǎng)基中，在溫度30°C、搖瓶轉(zhuǎn)速160rpm的條件下,搖瓶培養(yǎng)8 12小時,制得種子液； (II)按重量百分比5%的接種量將種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度37°C、轉(zhuǎn)速180rpm的條件下,培養(yǎng)8 12小時,制得二級種子液； (III)按重量百分比10%的接種量將二級種子液流加接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度37°C、轉(zhuǎn)速180rpm的條件下，培養(yǎng)12 24小時，制得活菌濃度為1.0 1.2 X 109CFU/ml的地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis)發(fā)酵液。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中，種子培養(yǎng)基每升含有如下組分:蛋白胨10g，氯化鈉10g，酵母粉5g，葡萄糖10g，水定容至lL，pH7.5，121 °C滅菌20分鐘。
所述步驟(II)和(III)中，發(fā)酵培養(yǎng)基組分如下，均為重量百分比:0.2 0.5%的葡萄糖或廢糖蜜，0.2 0.5%的硫酸銨， 0.5 1%的玉米漿，余量為酒糟提取液，調(diào)節(jié)pH為7.5，121°C滅菌20分鐘。
全文摘要
一種利用白酒酒糟生產(chǎn)微生物飼料益生菌劑的方法，步驟如下(1)向酒糟中加入水，過篩，加入酸性蛋白酶溶液，水解，調(diào)節(jié)pH，再加入糖化酶溶液，水解，經(jīng)濃縮，制得酒糟提取液；(2)取布拉德酵母菌發(fā)酵液，植物乳桿菌，地衣芽孢桿菌發(fā)酵液，混合后，制得混合液，混合液經(jīng)分離菌體，制得混合濕菌體；(3)配制保護液和復(fù)合載體；(4)將混合濕菌體與保護液混合均勻，然后分別加入酒糟提取液和復(fù)合載體，混合均勻后干燥，制得微生物飼料益生菌劑。本發(fā)明以酒糟為主要原料，通過添加適量的營養(yǎng)物質(zhì)，以液態(tài)形式培養(yǎng)三種益生菌，制備復(fù)合微生物飼料益生菌劑，提高了酒糟的附加值，利用微生物發(fā)酵的方法處理酒糟，解決了酒糟利用的難題。
文檔編號A23K1/06GK103141666SQ201310104568
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月28日
發(fā)明者王瑞明, 趙殿臣, 杜新勇, 王騰飛, 李丕武, 范志勇 申請人:山東輕工業(yè)學(xué)院, 古貝春集團有限公司