專利名稱：峨眉擬單性木蘭組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)林苗木組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種蛾眉擬單性木蘭組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
蛾眉擬單性木蘭為木蘭科擬單性木蘭屬下的一個(gè)種，四川蛾眉山特有常綠植物。因林木砍伐，植被破壞，在原產(chǎn)地所存植株極少，急待采取嚴(yán)格的保護(hù)措施。蛾眉擬單性木蘭其主要分布于常綠闊葉林中，其聚合果呈倒卵圓形，長(zhǎng)3 4厘米，種子倒卵圓形，徑61毫米，外種皮紅褐色，易吸引鳥(niǎo)類覓食；因此很難得到可繁殖的種子。尋找一種安全的繁殖方法，挽救蛾眉擬單性木蘭這一瀕危植物已迫在眉睫。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種蛾眉擬單性木蘭組織培養(yǎng)的方法。通過(guò)蛾眉擬單性木蘭的莖尖作為外植體進(jìn)行組培，實(shí)現(xiàn)蛾眉擬單性木蘭的人工繁殖。本發(fā)明一種蛾眉擬單性木蘭組織培養(yǎng)的方法，包括下列步驟:。I)外植體處理:取蛾眉擬單性木蘭嫩枝，清洗后，在無(wú)菌條件下，用質(zhì)量濃度70%的酒精消毒30s，質(zhì)量濃度0.01%的H gC12溶液滅毒10-15 min，用無(wú)菌水沖洗5_6次。2)誘導(dǎo)培養(yǎng):將經(jīng)滅毒的嫩枝，取Icm長(zhǎng)莖尖作外植體,接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度27±2° C，光照12h，光照強(qiáng)度2000Lx，培養(yǎng)40-45天即可長(zhǎng)成3 cm左右的嫩梢。所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6-BA 2.0 mg/L, IAA 0.02 mg/L, KT 1.5 mg/L，蔗糖 3%，瓊脂 0.5%, pH 5.8。3)分化培養(yǎng):從誘導(dǎo)培養(yǎng)基上剪切已萌動(dòng)的嫩梢，轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度27±2° C，光照12h，光照強(qiáng)度2000Lx，20天每個(gè)接種的嫩梢可分化出大于0.5 cm的有效不定芽達(dá)4個(gè)左右。培養(yǎng)時(shí)間為45天。所述分化培養(yǎng)基以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6-BA 0.5mg/L, NAA 0.02 mg/L,蔗糖 3%,瓊脂 0.5%, pH 5.8。4)生根培養(yǎng):從分化培養(yǎng)基上剪下長(zhǎng)高至3-4 cm的試管苗嫩梢，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度27±2° C，光照12h，光照強(qiáng)度2000Lx，培養(yǎng)時(shí)間為20天，生根率達(dá)80%以上。所述生根培養(yǎng)基以1/2MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加NAA 0.5 mg/L, IBA 2.5 mg/L，蔗糖1.5%，瓊脂 0.5%, pH 5.8。5)煉苗培養(yǎng):將組培苗瓶移至室外，自然光下封口煉苗10-15天，取出組培苗將根部的瓊脂洗凈，移栽到經(jīng)過(guò)0.2%的高錳酸鉀消毒的蛭石中，澆透水，用塑料膜保濕，置于23-30° C的溫室中生長(zhǎng)。半個(gè)月后將苗栽于營(yíng)養(yǎng)缽中，于遮光50%的陰棚下放置30天，SP可進(jìn)行常規(guī)管理。本發(fā)明是利用植物細(xì)胞全能性的生物技術(shù)，合理采取蛾眉擬單性木蘭嫩枝莖尖作為外植體，在配合比合理的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，可在短期內(nèi)繁殖出大量的蛾眉擬單性木蘭組培苗。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于提供了一條全新的蛾眉擬單性木蘭組培方法，建立無(wú)菌培養(yǎng)體系，提供適宜的溫度、光照，培育成新個(gè)體。
具體實(shí)施例方式取蛾眉擬單性木蘭嫩枝用0.1%洗衣粉水浸洗30min后，用自來(lái)水沖洗Ih備用。無(wú)菌條件下，蛾眉擬單性木蘭嫩枝用70%的酒精消毒30s后，0.1% HgCl2處理10-15 min，無(wú)菌水沖洗5_6次，取Icm長(zhǎng)的普通莖尖做外植體，接種誘導(dǎo)培養(yǎng)基。誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6-BA 2.0 mg/L, IAA 0.02 mg/L, KT 1.5mg/L,蔗糖3%，瓊脂0.5%，pH 5.8，培養(yǎng)溫度27±2。C，光照12h，光照強(qiáng)度2000Lx,培養(yǎng)40-45天即可長(zhǎng)成3 cm左右的嫩梢，剪切已萌動(dòng)的嫩梢，轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基。分化培養(yǎng)基以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6-BA 0.5 mg/L, NAA 0.02 mg/L,蔗糖3%，瓊脂0.5%，pH 5.8，培養(yǎng)溫度27±2° C，光照12h，光照強(qiáng)度2000Lx，20天每個(gè)接種的嫩梢可分化出大于0.5 cm的有效不定芽達(dá)4個(gè)左右。培養(yǎng)時(shí)間為45天,剪下長(zhǎng)高至3-4 cm的試管苗嫩梢，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基。生根培養(yǎng)基以1/2MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加NAA 0.5 mg/L, IBA 2.5 mg/L，蔗糖
1.5%，瓊脂0.5%，pH 5.8，培養(yǎng)溫度27±2。C，光照12h，光照強(qiáng)度2000Lx，培養(yǎng)時(shí)間為20天，生根率達(dá)80%以上。將組培苗瓶移至室外，自然光下封口煉苗10-15天，取出組培苗將根部的瓊脂洗凈，移栽到經(jīng)過(guò)0.2%的高錳酸鉀消毒的蛭石中，澆透水，用塑料膜保濕，置于23-30° C的溫室中生長(zhǎng)。半個(gè)月后將苗栽于營(yíng)養(yǎng)缽中，于遮光50%的陰棚下放置30天，即可進(jìn)行常規(guī)管理。
權(quán)利要求
1.一種蛾眉擬單性木蘭組織培養(yǎng)方法，其特征在于該方法包括下列步驟: 1)外植體處理:取蛾 眉擬單性木蘭嫩枝，清洗后，在無(wú)菌條件下，用質(zhì)量濃度70%的酒精消毒30s，質(zhì)量濃度0.01%的HgCl2溶液滅毒10-15 min，用無(wú)菌水沖洗5_6次； 2)誘導(dǎo)培養(yǎng):將經(jīng)滅毒的嫩枝，取Icm長(zhǎng)莖尖作外植體，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度27±2° C，光照12h，光照強(qiáng)度2000Lx，培養(yǎng)40-45天即可長(zhǎng)成3 cm左右的嫩梢； 3)分化培養(yǎng):從誘導(dǎo)培養(yǎng)基上剪切已萌動(dòng)的嫩梢，轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度27±2° C，光照12h，光照強(qiáng)度2000Lx，20天每個(gè)接種的嫩梢可分化出大于0.5 cm的有效不定芽達(dá)4個(gè)左右，培養(yǎng)時(shí)間為45天； 4)生根培養(yǎng):從分化培養(yǎng)基上剪下長(zhǎng)高至3-4cm的試管苗嫩梢，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度27±2° C，光照12h，光照強(qiáng)度2000Lx，培養(yǎng)時(shí)間為20天，生根率達(dá)80%以上； 5)煉苗培養(yǎng):將組培苗瓶移至室外，自然光下封口煉苗10-15天，取出組培苗將根部的瓊脂洗凈，移栽到經(jīng)過(guò)0.2%的高錳酸鉀消毒的蛭石中，澆透水，用塑料膜保濕，置于23-30° C的溫室中生長(zhǎng)，半個(gè)月后將苗栽于營(yíng)養(yǎng)缽中，于遮光50%的陰棚下放置30天，即可進(jìn)行常規(guī)管理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛾眉擬單性木蘭組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6-BA 2.0 mg/L, IAA 0.02 mg/L, KT 1.5 mg/L，蔗糖3%，瓊脂 0.5%, pH 5.8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛾眉擬單性木蘭組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述分化培養(yǎng)基以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6-BA 0.5 mg/L, NAA 0.02 mg/L，蔗糖3%，瓊脂0.5%，pH 5.8。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛾眉擬單性木蘭組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述生根培養(yǎng)基以1/2MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加NAA 0.5 mg/L, IBA 2.5 mg/L，蔗糖1.5%，瓊脂0.5%，pH·5.8。
全文摘要
本發(fā)明屬于農(nóng)林苗木組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種峨眉擬單性木蘭組織培養(yǎng)方法。該方法是將峨眉擬單性木嫩枝經(jīng)消毒，以普通莖尖進(jìn)行誘導(dǎo)、增殖和生根培養(yǎng)，得到再生苗。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于以取材方便的植株為母本，普通莖尖為外植體材料；完善了滅毒處理方法；解決了目前有性繁殖中存在的種子難以有效獲取的問(wèn)題，成功建立了峨眉擬單性木蘭的組織培養(yǎng)體系，挽救了我國(guó)瀕危植物峨眉擬單性木蘭。
文檔編號(hào)A01H4/00GK103168695SQ201310128499
公開(kāi)日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2013年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月15日
發(fā)明者秦小波 申請(qǐng)人:四川省自然資源科學(xué)研究院, 秦小波