一種雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，依次經(jīng)過(guò)芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽的增殖培養(yǎng)、叢生芽的繼代培養(yǎng)、以及生根培養(yǎng)后，得到完整植株，即可出瓶煉苗，并移栽。本發(fā)明的方法操作容易，生產(chǎn)成本低，不污染環(huán)境，可以實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。通過(guò)本發(fā)明培育出的鼓槌石斛種苗，其遺傳性狀穩(wěn)定，保持了親本的特性，具備包括不變性、投入少、產(chǎn)出高、周期短在內(nèi)的諸多優(yōu)勢(shì)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于組織培養(yǎng)快速繁殖【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]雜交蘭是通過(guò)大花蕙蘭與國(guó)蘭人工雜交選育出的一類(lèi)新型蘭花。雜交蘭的花朵大小、株高、株型、葉片大小等性狀介于大花蕙蘭和國(guó)蘭之間，具有很高的觀(guān)賞價(jià)值，市場(chǎng)前景廣闊。從近幾年的年宵花行情看，雜交蘭供不應(yīng)求，一些精品雜交蘭價(jià)格高昂，有的甚至賣(mài)到每盆幾千元，但當(dāng)前雜交蘭的供應(yīng)主要依靠進(jìn)口。因此，進(jìn)行雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖研究，提高種苗繁殖速度，對(duì)雜交蘭的推廣應(yīng)用，以及滿(mǎn)足市場(chǎng)的需求具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]有鑒于此，本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供了一種雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，通過(guò)叢生芽的途徑進(jìn)行鼓槌石斛組織培養(yǎng)能夠獲得大量遺傳性狀穩(wěn)定的試管苗，保持良好的親本特性，并且具備包括不變性、投入少、產(chǎn)出高、周期短在內(nèi)的諸多優(yōu)勢(shì)。
[0004]本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)解決上述技術(shù)問(wèn)題:
一種雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟: 1)外植體的消毒:取當(dāng)年生生長(zhǎng)健壯、高5?15cm的新芽，將新芽由母株最基部的地方切下，去除雜質(zhì)和上端已展開(kāi)的葉，只留下總長(zhǎng)度約4?5cm的芽體，流水沖洗20min，在超凈工作臺(tái)上用酒精和0.1% HgCl2溶液進(jìn)行處理實(shí)現(xiàn)一次消毒，而后再用無(wú)菌水沖洗5?8次，然后用鑷子小心逐片剝?nèi)グ〉耐獗?，直至露出?cè)芽，將有側(cè)芽的莖段截下，再用0.1%HgCl2溶液滅菌6?8min進(jìn)行二次消毒,再用無(wú)菌水沖洗5?8次,無(wú)菌濾紙吸干殘余水分，并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；
2)叢生芽的誘導(dǎo):采用誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)15?20天，側(cè)芽變綠增大；再經(jīng)30?40天，新芽形成并生長(zhǎng)；培養(yǎng)過(guò)程中，光照強(qiáng)度2000?25001x，光照10?12小時(shí)/天，溫度25?28 0C ；
3)叢生芽的增殖:利用側(cè)芽培養(yǎng)得到的叢生芽，剪取部分葉片后轉(zhuǎn)移到叢生芽增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)40?60天，獲得增殖倍數(shù)為4.0?6.0的增殖叢生芽；培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度2000?25001x，光照10?12小時(shí)/天，溫度25?28°C ；
4)繼代培養(yǎng):采用繼代培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每40?60天繼代增殖I次，并將繼代次數(shù)控制在15次以?xún)?nèi)；培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度2000?25001x，光照10?12小時(shí)/天，溫度25 ?28? ；
5)生根培養(yǎng):當(dāng)繼代苗達(dá)到合適數(shù)量后，采用生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)40?60天得到生根苗。培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度2000?25001x，光照10?12小時(shí)/天，溫度25?28? ；6)試管苗移栽:選擇每年3?5月為出瓶移栽的季節(jié)，或者提供類(lèi)似3?5月份自然條件的生長(zhǎng)環(huán)境進(jìn)行出瓶移栽；移栽前，試管苗放置于具自然光散射的溫室中煉苗10-20天，然后從試管中取出小苗，清洗根部的培養(yǎng)基，并放于高錳酸鉀溶液中浸泡3-5分鐘，取出后用進(jìn)口水苔種植于口徑4-6cm的塑料杯盆中；保持溫室通風(fēng)，濕度在70?80%，溫度保持在15°C以上至室溫范圍內(nèi)，高于30°C必須用風(fēng)機(jī)、水簾降溫。
[0005]優(yōu)選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分為1/2MS+6-BA (6_芐氨基腺嘌呤)1.0?3.0 mg /L+NAA(萘乙酸)0.05?0.10 mg /L+10.0?20.0%椰子汁+3.0?5.0g/L活性炭；培養(yǎng)基含糖 30g/L,瓊脂 0.7%，PH 值 5.5-5.8。
[0006]優(yōu)選地，所述叢生芽增殖培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA (6_芐氨基腺嘌呤)1.0?3.0 mg/L+AD (腺嘌呤)1.0 ?3.0 mg /L+10.0 ?20.0% 椰子汁 +3.0 ?5.0g/L 活性炭。
[0007]優(yōu)選地，所述繼代培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA (6_芐氨基腺嘌呤)1.0?3.0 mg /L+AD (腺嘌呤)1.0 ?3.0 mg /L+10.0 ?20.0% 椰子汁 +3.0 ?5.0g/L 活性炭。
[0008]優(yōu)選地，所述生根培養(yǎng)基成分中含有1/2MS+NAA(萘乙酸)0.5?1.0 mg /L+10.0?20.0%椰子汁+3.0?5.0g/L活性炭。
[0009]優(yōu)選地，所述外植體的消毒步驟中，在超凈工作臺(tái)上用酒精和0.1% HgCl2溶液進(jìn)行處理實(shí)現(xiàn)一次消毒是指超凈工作臺(tái)上先用酒精清洗表面，并在75%的酒精中浸泡15_45s,用 0.1% HgCl2 溶液滅菌 8 ?IOmin0
[0010]優(yōu)選地，所述試管苗移栽中，用于浸泡小苗根部的高錳酸鉀溶液為0.1%的高錳酸鉀溶液。
[0011]相比于現(xiàn)有技術(shù) ，本發(fā)明的雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法的有益效果在于:該方法操作容易，生產(chǎn)成本低，不污染環(huán)境，能夠?qū)崿F(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。通過(guò)本發(fā)明培育出的雜交蘭種苗，其遺傳性狀穩(wěn)定，保持了親本的特性，具備包括不變性、投入少、產(chǎn)出高、周期短在內(nèi)的諸多優(yōu)勢(shì)。
【具體實(shí)施方式】
[0012]有鑒于此，本發(fā)明【具體實(shí)施方式】中提供的一種雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具體包括以下步驟:
1)外植體的消毒:取當(dāng)年生生長(zhǎng)健壯、高5?15cm的新芽，將新芽由母株最基部的地方切下，去除雜質(zhì)和上端已展開(kāi)的葉，只留下總長(zhǎng)度約4?5cm的芽體，流水沖洗20min，在超凈工作臺(tái)上用酒精和0.1% HgCl2溶液進(jìn)行處理實(shí)現(xiàn)一次消毒，而后再用無(wú)菌水沖洗5?8次，然后用鑷子小心逐片剝?nèi)グ〉耐獗?，直至露出?cè)芽，將有側(cè)芽的莖段截下，再用0.1%HgCl2溶液滅菌6?8min進(jìn)行二次消毒,再用無(wú)菌水沖洗5?8次,無(wú)菌濾紙吸干殘余水分，并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；
2)叢生芽的誘導(dǎo):采用誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)15?20天，側(cè)芽變綠增大；再經(jīng)30?40天，新芽形成并生長(zhǎng)；培養(yǎng)過(guò)程中，光照強(qiáng)度2000?25001x，光照10?12小時(shí)/天，溫度25?28 0C ；
3)叢生芽的增殖:利用側(cè)芽培養(yǎng)得到的叢生芽，剪取部分葉片后轉(zhuǎn)移到叢生芽增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)40?60天，獲得增殖倍數(shù)為4.0?6.0的增殖叢生芽；培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度2000?25001x，光照10?12小時(shí)/天，溫度25?28°C ；4)繼代培養(yǎng):采用繼代培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每40?60天繼代增殖I次，并將繼代次數(shù)控制在15次以?xún)?nèi)；培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度2000?25001x，光照10?12小時(shí)/天，溫度25 ?28? ；
5)生根培養(yǎng):當(dāng)繼代苗達(dá)到合適數(shù)量后，采用生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)40?60天得到生根苗。培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度2000?25001x，光照10?12小時(shí)/天，溫度25?28? ；
6)試管苗移栽:選擇每年3?5月為出瓶移栽的季節(jié)，或者提供類(lèi)似3?5月份自然條件的生長(zhǎng)環(huán)境進(jìn)行出瓶移栽；移栽前，試管苗放置于具自然光散射的溫室中煉苗10-20天，然后從試管中取出小苗，清洗根部的培養(yǎng)基，并放于高錳酸鉀溶液中浸泡3-5分鐘，取出后用進(jìn)口水苔種植于口徑4-6cm的塑料杯盆中；保持溫室通風(fēng)，濕度在70?80%，溫度保持在15°C以上至室溫范圍內(nèi)，高于30°C必須用風(fēng)機(jī)、水簾降溫。
[0013]上述各個(gè)步驟中涉及到的處理方式、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)基的成分都會(huì)根據(jù)具體需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。
[0014]其中，各培養(yǎng)在成分確定的情況下，其中用到的各組分的含量可根據(jù)實(shí)際的培養(yǎng)情況進(jìn)行調(diào)整，上述方法中用到的培養(yǎng)基成分和各成分的含量范圍如下:
叢生芽的誘導(dǎo)步驟中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分中含有l(wèi)/2MS+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)1.0?
3.0 mg /L+NAA (萘乙酸)0.05 ?0.10 mg /L+10.0 ?20.0% 椰子汁 +3.0 ?5.0g/L 活性炭；培養(yǎng)基含糖30g/L,瓊脂0.7%，PH值5.5-5.8。
[0015]叢生芽的增殖步驟中，叢生芽增殖培養(yǎng)基含有l(wèi)/2MS+6-BA(6_芐氨基腺嘌呤)1.0 ?3.0 mg /L+AD (腺 嘌呤)1.0 ?3.0 mg /L+10.0 ?20.0% 椰子汁 +3.0 ?5.0g/L 活性炭。
[0016]繼代培養(yǎng)步驟中，繼代培養(yǎng)基成分中含有l(wèi)/2MS+6-BA(6_芐氨基腺嘌呤)1.0?
3.0 mg /L+AD (腺嘌呤)1.0 ?3.0 mg /L+10.0 ?20.0% 椰子汁 +3.0 ?5.0g/L 活性炭。
[0017]生根培養(yǎng)步驟中，生根培養(yǎng)基成分中含有1/2MS+NAA(萘乙酸)0.5?1.0 mg /L+10.0?20.0%椰子汁+3.0?5.0g/L活性炭。
[0018]另外，由于培養(yǎng)過(guò)程受諸如溫度、光照、濕度等多種因素的影響，因而，在本發(fā)明的各步驟中，處理方式、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)時(shí)間都會(huì)根據(jù)具體需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。
[0019]其中，外植體的消毒步驟中，在超凈工作臺(tái)上用酒精和0.1% HgCl2溶液進(jìn)行處理實(shí)現(xiàn)一次消毒是指超凈工作臺(tái)上先用酒精清洗表面，并在75%的酒精中浸泡15-45S，用0.1% HgCl2溶液滅菌8?lOmin。另外，所述試管苗移栽中，用于浸泡小苗根部的高錳酸鉀溶液為0.1%的高錳酸鉀溶液。
[0020]為使本發(fā)明更加容易理解，下面將進(jìn)一步闡述本發(fā)明的具體實(shí)施例。
[0021 ] 實(shí)施例1、雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖一:
本實(shí)施例中選擇品種一的雜交蘭進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖，該品種為俗稱(chēng)“韓國(guó)小姐”的雜交蘭。
[0022]取當(dāng)年生生長(zhǎng)健壯、高5-15cm的新芽，將新芽由母株最基部的地方切下，去除雜質(zhì)和上端已展開(kāi)的葉，只留下總長(zhǎng)度約4-5cm的芽體，流水沖洗20min，在超凈工作臺(tái)上先用酒精清洗表面，并在75%的酒精中浸泡30s，用0.1% HgCl2溶液滅菌8min，無(wú)菌水沖洗5次，然后用鑷子小心逐片剝?nèi)グ〉耐獗?，直至露出?cè)芽，將有側(cè)芽的莖段截下，再用0.1% HgCl2溶液滅菌6min,無(wú)菌水沖洗5次,無(wú)菌濾紙吸干殘余水分，并接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)l/2MS+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)1.0 mg/L+NAA (萘乙酸)0.05mg/L+10.0% 椰子汁+3.0g/L活性炭上，光照強(qiáng)度2000?25001x，光照12小時(shí)/天，溫度25?28°C。培養(yǎng)45?60天，新芽形成并生長(zhǎng)。利用側(cè)芽培養(yǎng)得到的叢生芽，剪取部分葉片后轉(zhuǎn)移到叢生芽增殖培養(yǎng)基1/2MS+6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)1.0 mg /L+AD (腺嘌呤)1.0 mg /L+10.0% 椰子汁 +3.0g/L活性炭，在光照強(qiáng)度2000?25001x，光照12小時(shí)/天，溫度25?28°C條件下，培養(yǎng)40?60天，獲得叢生芽，增殖倍數(shù)可達(dá)4.0。每40?60天繼代增殖I次，一般繼代次數(shù)不超過(guò)15次，繼代培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)1.0 mg /L+AD (腺嘌呤)1.0 mg /L+10.0%椰子汁+3.0g/L活性炭，在光照強(qiáng)度2000?25001x，光照12小時(shí)/天，溫度25?28°C條件下培養(yǎng)。當(dāng)繼代苗達(dá)到一定數(shù)量后，可以進(jìn)行生根壯苗培養(yǎng)，生根壯苗培養(yǎng)基為1/2MS+NAA (萘乙酸)0.5mg/L+10.0%椰子汁+3.0g/L活性炭，在光照強(qiáng)度2000?25001x，光照12小時(shí)/天，溫度25?28°C的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)40?60天，得到生根苗。春季為出瓶移栽的季節(jié)，移栽前，試管苗放置于具自然光散射的溫室中煉苗15天，然后從試管中取出小苗，清洗根部的培養(yǎng)基，并放于0.1%的高錳酸鉀溶液中浸泡5分鐘，取出后用進(jìn)口水苔種植于口徑4.8cm的塑料杯盆中，并保持溫室通風(fēng)，濕度在70?80%，溫度保持在15°C以上，高于30°C必須用風(fēng)機(jī)、水簾降溫，移栽成活率高達(dá)90%以上。
[0023]實(shí)施例2、雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖二:
本實(shí)施例中選擇品種二的雜交蘭進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖，該品種為俗稱(chēng)“韓國(guó)美人”的雜交蘭。
[0024]取當(dāng)年生生長(zhǎng)健壯、高5-15cm的新芽，將新芽由母株最基部的地方切下，去除雜質(zhì)和上端已展開(kāi)的葉，只留下總長(zhǎng)度約4-5cm的芽體，流水沖洗20min，在超凈工作臺(tái)上先用酒精清洗表面，并在 75%的酒精中浸泡30s，用0.1% HgCl2溶液滅菌9min，無(wú)菌水沖洗6次，然后用鑷子小心逐片剝?nèi)グ〉耐獗唬敝谅冻鰝?cè)芽，將有側(cè)芽的莖段截下，再用0.1% HgCl2溶液滅菌7min,無(wú)菌水沖洗6次,無(wú)菌濾紙吸干殘余水分，并接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)l/2MS+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)2.0 mg/L+NAA (萘乙酸)0.075mg/L+15.0% 椰子汁+4.0g/L活性炭上，光照強(qiáng)度2000?25001x，光照12小時(shí)/天，溫度25?28V。培養(yǎng)45?60天，新芽形成并生長(zhǎng)。利用側(cè)芽培養(yǎng)得到的叢生芽，剪取部分葉片后轉(zhuǎn)移到叢生芽增殖培養(yǎng)基l/2MS+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)2.0 mg /L+AD(腺嘌呤)2.0 mg /L+15.0%椰子汁+4.0g/L活性炭，在光照強(qiáng)度2000?25001x，光照12小時(shí)/天，溫度25?28°C條件下，培養(yǎng)40?60天，獲得叢生芽，增殖倍數(shù)可達(dá)5.0。每40?60天繼代增殖I次，一般繼代次數(shù)不超過(guò)15次，繼代培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)2.0 mg /L+AD (腺嘌呤)2.0mg /L+15.0%椰子汁+4.0g/L活性炭，在光照強(qiáng)度2000?25001x，光照12小時(shí)/天，溫度25?28°C條件下培養(yǎng)。當(dāng)繼代苗達(dá)到一定數(shù)量后，可以進(jìn)行生根壯苗培養(yǎng)，生根壯苗培養(yǎng)基為1/2MS+NAA(萘乙酸)0.75 mg /L+15.0%椰子汁+4.0g/L活性炭，在光照強(qiáng)度2000?25001x,光照12小時(shí)/天，溫度25?28°C的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)40?60天，得到生根苗。春季為出瓶移栽的季節(jié)，移栽前，試管苗放置于具自然光散射的溫室中煉苗15天，然后從試管中取出小苗，清洗根部的培養(yǎng)基，并放于0.1%的高錳酸鉀溶液中浸泡5分鐘，取出后用進(jìn)口水苔種植于口徑4.8cm的塑料杯盆中，并保持溫室通風(fēng)，濕度在70?80%，溫度保持在15°C以上，高于30°C必須用風(fēng)機(jī)、水簾降溫，移栽成活率高達(dá)90%以上。[0025]實(shí)施例2、雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖三:
本實(shí)施例中選擇品種三的雜交蘭進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖，該品種為俗稱(chēng)“東方紅”的雜交蘭。
[0026]取當(dāng)年生生長(zhǎng)健壯、高5-15cm的新芽，將新芽由母株最基部的地方切下，去除雜質(zhì)和上端已展開(kāi)的葉，只留下總長(zhǎng)度約4-5cm的芽體，流水沖洗20min，在超凈工作臺(tái)上先用酒精清洗表面，并在75%的酒精中浸泡30s，用0.1% HgCl2溶液滅菌lOmin，無(wú)菌水沖洗8次，然后用鑷子小心逐片剝?nèi)グ〉耐獗唬敝谅冻鰝?cè)芽，將有側(cè)芽的莖段截下，再用0.1% HgCl2溶液滅菌8min，無(wú)菌水沖洗8次，無(wú)菌濾紙吸干殘余水分，并接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)1/2MS+6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)3.0 mg /L+NAA (萘乙酸)0.1mg /L+20.0% 椰子汁 +5.0g/L活性炭上，光照強(qiáng)度2000?25001x，光照12小時(shí)/天，溫度25?28°C。培養(yǎng)45?60天，新芽形成并生長(zhǎng)。利用側(cè)芽培養(yǎng)得到的叢生芽，剪取部分葉片后轉(zhuǎn)移到叢生芽增殖培養(yǎng)基1/2MS+6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)3.0 mg /L+AD (腺嘌呤)3.0 mg /L+20.0% 椰子汁 +5.0g/L活性炭，在光照強(qiáng)度2000?25001x，光照12小時(shí)/天，溫度25?28°C條件下，培養(yǎng)40?60天，獲得叢生芽，增殖倍數(shù)可達(dá)6.0。每40?60天繼代增殖I次，一般繼代次數(shù)不超過(guò)15次，繼代培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)3.0 mg /L+AD (腺嘌呤)3.0 mg /L+20.0%椰子汁+5.0g/L活性炭，在光照強(qiáng)度2000?25001x，光照12小時(shí)/天，溫度25?28°C條件下培養(yǎng)。當(dāng)繼代苗達(dá)到一定數(shù)量后，可以進(jìn)行生根壯苗培養(yǎng)，生根壯苗培養(yǎng)基為1/2MS+NAA (萘乙酸)0.1 mg /L+20.0%椰子汁+5.0g/L活性炭，在光照強(qiáng)度2000?25001x，光照12小時(shí)/天，溫度25?28°C的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)40?60天，得到生根苗。春季為出瓶移栽的季節(jié)，移栽前，試管苗放置于具自然光散射的溫室中煉苗15天，然后從試管中取出小苗，清洗根部的培養(yǎng)基，并放于0.1%的高錳酸鉀溶液中浸泡5分鐘，取出后用進(jìn)口水苔種植于口徑4.8cm的塑料杯盆中，并保持溫室通風(fēng)，濕度在70?80%，溫度保持在15°C以上，高于30°C必須用風(fēng)機(jī)、水簾降溫，移栽成活率高達(dá)90%以上。
[0027]相比于現(xiàn)有技術(shù)，上述方式中揭示的雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，操作容易，生產(chǎn)成本低，不污染環(huán)境，能夠?qū)崿F(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)。通過(guò)本發(fā)明培育出的鼓槌石斛種苗，其遺傳性狀穩(wěn)定，保持了親本的特性，具備包括不變性、投入少、產(chǎn)出高、周期短在內(nèi)的諸多優(yōu)勢(shì)。
[0028]最后所應(yīng)當(dāng)說(shuō)明的是，以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于該方法包括以下步驟: 1)外植體的消毒:取當(dāng)年生生長(zhǎng)健壯、高5?15cm的新芽，將新芽由母株最基部的地方切下，去除雜質(zhì)和上端已展開(kāi)的葉，只留下總長(zhǎng)度約4?5cm的芽體，流水沖洗20min，在超凈工作臺(tái)上用酒精和0.1% HgCl2溶液進(jìn)行處理實(shí)現(xiàn)一次消毒，而后再用無(wú)菌水沖洗5?8次，然后用鑷子小心逐片剝?nèi)グ〉耐獗?，直至露出?cè)芽，將有側(cè)芽的莖段截下，再用0.1%HgCl2溶液滅菌6?8min進(jìn)行二次消毒,再用無(wú)菌水沖洗5?8次,無(wú)菌濾紙吸干殘余水分，并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上； 2)叢生芽的誘導(dǎo):采用誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)15?20天，側(cè)芽變綠增大；再經(jīng)30?40天，新芽形成并生長(zhǎng)；培養(yǎng)過(guò)程中，光照強(qiáng)度2000?25001x，光照10?12小時(shí)/天，溫度25?28 0C ； 3)叢生芽的增殖:利用側(cè)芽培養(yǎng)得到的叢生芽，剪取部分葉片后轉(zhuǎn)移到叢生芽增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)40?60天，獲得增殖倍數(shù)為4.0?6.0的增殖叢生芽；培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度2000?25001x，光照10?12小時(shí)/天，溫度25?28°C ； 4)繼代培養(yǎng):采用繼代培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每40?60天繼代增殖I次，并將繼代次數(shù)控制在15次以?xún)?nèi)；培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度2000?25001x，光照10?12小時(shí)/天，溫度25 ?28? ； 5)生根培養(yǎng):當(dāng)繼代苗達(dá)到合適數(shù)量后，采用生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)40?60天得到生根苗；培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度2000?25001x，光照10?12小時(shí)/天，溫度25?28? ； 6)試管苗移栽:選擇每年3?5月為出瓶移栽的季節(jié)，或者提供類(lèi)似3?5月份自然條件的生長(zhǎng)環(huán)境進(jìn)行出瓶移栽；移栽前，試管苗放置于具自然光散射的溫室中煉苗10-20天，然后從試管中取出小苗，清洗根部的培養(yǎng)基，并放于高錳酸鉀溶液中浸泡3-5分鐘，取出后用進(jìn)口水苔種植于口徑4-6cm的塑料杯盆中；保持溫室通風(fēng)，濕度在70?80%，溫度保持在15°C以上至室溫范圍內(nèi)，高于30°C必須用風(fēng)機(jī)、水簾降溫。
2.如權(quán)利要求1所述的雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分中含有l(wèi)/2MS+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)1.0?3.0 mg /L+NAA(萘乙酸)0.05?0.10mg /L+10.0?20.0%椰子汁+3.0?5.0g/L活性炭；培養(yǎng)基含糖30g/L,瓊脂0.7%，PH值5.5-5.8。
3.如權(quán)利要求1所述的雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述叢生芽增殖培養(yǎng)基含有1/2MS+6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)1.0?3.0 mg /L+AD (腺嘌呤)1.0?3.0 mg/L+10.0?20.0%椰子汁+3.0?5.0g/L活性炭。
4.如權(quán)利要求1所述的雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述繼代培養(yǎng)基成分中含有1/2MS+6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)1.0?3.0 mg /L+AD (腺嘌呤)1.0?3.0 mg/L+10.0?20.0%椰子汁+3.0?5.0g/L活性炭。
5.如權(quán)利要求1所述的雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述生根培養(yǎng)基成分中含有1/2MS+NAA(萘乙酸)0.5?1.0 mg /L+10.0?20.0%椰子汁+3.0?5.0g/L活性炭。
6.如權(quán)利要求1所述的雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述外植體的消毒步驟中，在超凈工作臺(tái)上用酒精和0.1% HgCl2溶液進(jìn)行處理實(shí)現(xiàn)一次消毒是指超凈工作臺(tái)上先用酒精清洗表面，并在75%的酒精中浸泡15-45s，用0.1%取(:12溶液滅菌8?lOmin。
7.如權(quán)利要求1所述的雜交蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述試管苗移栽中，用于浸泡小苗根部 的高錳酸鉀溶液為0.1%的高錳酸鉀溶液。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103430842SQ201310339643
【公開(kāi)日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2013年8月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月7日
【發(fā)明者】陳和明, 呂復(fù)兵, 朱根發(fā), 操君喜 申請(qǐng)人:廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境園藝研究所