一種提高類胡蘿卜素含量的蛹蟲草栽培培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蛹蟲草栽培培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。本發(fā)明所提供的蛹蟲草栽培培養(yǎng)基由固體基物和營養(yǎng)液按照質(zhì)量配比為1：（0.5-1.5）的比例混合而成；所述固體基物由質(zhì)量百分含量為95-99%的谷物（如莜麥）和質(zhì)量百分含量為1-5%的蠶蛹粉混合而成。原基分化和子實(shí)體發(fā)育階段在日光燈照射的基礎(chǔ)上，再用藍(lán)光燈帶補(bǔ)充Led藍(lán)光照射，子實(shí)體樣品采用熱風(fēng)低溫烘干或冷凍干燥。本發(fā)明利用莜麥為原料，通過培養(yǎng)條件控制，生產(chǎn)得到的蛹蟲草子實(shí)體產(chǎn)品類胡蘿卜素含量高，呈深黃色或橙色，外觀品相好，產(chǎn)品的商品價(jià)值高，同時(shí)為莜麥開辟了新的利用途徑。
【專利說明】一種提高類胡蘿卜素含量的蛹蟲草栽培培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種蛹蟲草栽培培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，特別涉及一種提高類胡蘿卜素含 量的蛹蟲草栽培培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 蛹蟲草（Cordycepsmilitarist)Link)又名北蟲草，北冬蟲夏草，是一種具有較 高營養(yǎng)價(jià)值和滋補(bǔ)作用的珍稀食藥用菌?！缎氯A本草綱要》稱，蛹蟲草"全草：味甘，性平。 有益肺腎，補(bǔ)精髓，止血化痰的功能"，現(xiàn)代藥理學(xué)研究也證實(shí)了蛹蟲草抗腫瘤、抗病毒、降 血壓等多種功能。因其滋補(bǔ)作用和藥用功效與名貴但難以人工培養(yǎng)的冬蟲夏草相近，正日 漸成為冬蟲夏草的理想替代品。作為食品，蛹蟲草富含高蛋白、氨基酸、S0D、腺苷以及多種 微量元素及維生素、蟲草酸等有效成分，并含有獨(dú)特的蟲草素和類胡蘿卜素，我國衛(wèi)生部于 2009年3月16日正式將其列為了新資源食品（中華人民共和國衛(wèi)生部公告2009年第3號(hào) http: //www.moh.gov.cn/publicfiles/business/htmlfiles/zwgkzt/pgg/200903/39591. htm)，其產(chǎn)品已被越來越多的消費(fèi)者所接受，產(chǎn)品十分暢銷。
[0003] 雖然蛹蟲草目前已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，但是當(dāng)前市場上蛹蟲草的產(chǎn)品參差不 齊，首先表現(xiàn)在其色澤差異較大，有的蛹蟲草子實(shí)體發(fā)白，有的淺黃色，有的橙黃色。蛹蟲草 子實(shí)體的顏色來自于其含有的類胡蘿卜素。類胡蘿卜素除具有著色的功效外，還具有抗氧 化、抗腫瘤、延緩衰老和維生素A源等多種功效。蛹蟲草子實(shí)體類胡蘿卜素含量的高低不僅 影響其產(chǎn)品的外觀色澤，也直接影響其生物學(xué)功效。
[0004]目前蛹蟲草栽培的專利較多，但是目前為止還沒有關(guān)于高類胡蘿卜素含量蛹蟲草 的栽培方面的專利，僅有蛹蟲草類胡蘿卜素提取方面的研究。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種蛹蟲草栽培培養(yǎng)基。
[0006] 本發(fā)明所提供的蛹蟲草栽培培養(yǎng)基，具體由固體基物和營養(yǎng)液按照質(zhì)量配比為1 : (0. 5-1. 5)的比例混合而成；所述固體基物可由質(zhì)量百分含量為95-99%的谷物(谷物顆粒） 和質(zhì)量百分含量為1-5%的蠶蛹粉混合而成。
[0007] 在所述培養(yǎng)基中，所述營養(yǎng)液的溶劑為水，溶質(zhì)及濃度如下：葡萄糖8_12g/L(如 l〇g/L)，蛋白胨 8-12g/L(如 10g/L)，磷酸二氫鉀 1.5-2. 5g/L(如 2g/L)，硫酸鎂 0. 8-lg/L (如18凡），檸檬酸銨0.8-1.28/1(如18/1)，維生素810.02-0.05 8/1(如0.058/1)，？昍.0。
[0008] 在本發(fā)明中，所述谷物為蔽麥(蔽麥顆粒)，具體選用無霉變的蔽麥顆粒。
[0009] 在本發(fā)明中，所述培養(yǎng)基中，所述固體基物和所述營養(yǎng)液的質(zhì)量配比具體為1 : 1. 5。
[0010] 進(jìn)一步，所述固體基物中，所述谷物的質(zhì)量百分含量可為95-96. 7%，所述蠶蛹粉的 質(zhì)量百分含量可為3. 3-5%。
[0011] 更加具體的，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述固體基物中，所述谷物的質(zhì)量百分含 量為96. 7%，相應(yīng)的，所述蠶蛹粉的質(zhì)量百分含量為3. 3%。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中， 所述固體基物中，所述谷物的質(zhì)量百分含量為95%，相應(yīng)的，所述蠶蛹粉的質(zhì)量百分含量為 5%。在本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施例中，所述固體基物中，所述谷物的質(zhì)量百分含量為99%，相應(yīng) 的，所述蠶蛹粉的質(zhì)量百分含量為1%。
[0012] 在所述培養(yǎng)基中，所述蠶蛹粉為蠶蛹經(jīng)過干燥、粉碎后的產(chǎn)品。
[0013] 在本發(fā)明中，所述蠶蛹粉的含水量為1〇-12% (質(zhì)量百分含量)，粗蛋白含量為 45-55% (質(zhì)量百分含量)，粗纖維含量為3-6% (質(zhì)量百分含量)，粗灰分含量為4-5% (質(zhì)量百 分含量)。更加具體的，所述蠶蛹粉為遼寧省丹東市振安區(qū)群長土特產(chǎn)公司產(chǎn)品。
[0014] 所述培養(yǎng)基為經(jīng)過121°C滅菌1小時(shí)后所得的無菌培養(yǎng)基。
[0015] 所述蛹蟲草栽培培養(yǎng)基在培養(yǎng)獲得類胡蘿卜素含量提高的蛹蟲草子實(shí)體中的應(yīng) 用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0016] 本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種生產(chǎn)類胡蘿卜素含量提高的蛹蟲草子實(shí)體的方 法。
[0017] 本發(fā)明所提供的生產(chǎn)類胡蘿卜素含量提高的蛹蟲草子實(shí)體的方法，是將蛹蟲草菌 株接種于以上所述蛹蟲草栽培培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得類胡蘿卜素含量提高的蛹蟲草 子實(shí)體；在所述培養(yǎng)過程中，當(dāng)蛹蟲草菌株處于原基分化和子實(shí)體生長兩個(gè)階段時(shí)，除正常 的自然光和日光燈照射外，每天采用光強(qiáng)為50-100LUX的Led藍(lán)光燈帶額外補(bǔ)充照射1-6 小時(shí)(如1小時(shí)、3小時(shí)或6小時(shí))。
[0018] 具體而言，所述方法可包括如下步驟：將蛹蟲草菌株接種于所述蛹蟲草栽培培養(yǎng) 基中按照如下（1)- (3)的順序進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得類胡蘿卜素含量提高的蛹蟲草子實(shí)體：
[0019] (1)發(fā)菌：于15-22°C(如20°C)避光培養(yǎng)4-8天(如6天或7天)，完成蛹蟲草菌 株發(fā)菌；
[0020] (2)原基分化：于16-23°C變溫條件下，每天光照10-16小時(shí)（如16小時(shí))，培養(yǎng) 6-12天(如8天)，蛹蟲草子座原基形成；所述變溫為24小時(shí)內(nèi)的溫差在5-7°C的范圍；
[0021] (3)子實(shí)體生長：于20-25°C(如22°C)條件下，每天光照8-12小時(shí)（如8小時(shí))， 空氣相對(duì)濕度75-90%，培養(yǎng)10-40天(如30天)，蛹蟲草子實(shí)體長至8-10厘米長；
[0022] 在步驟（2)和（3)中，所述光照為：白天采用自然光照射(光強(qiáng)50-1000Lux)，若自 然光照時(shí)間不能達(dá)到所需光照時(shí)長，則晚上用光強(qiáng)為300-500Lux的日光燈增加光照時(shí)間 至所需光照時(shí)長；
[0023] 在步驟（2)和（3)中，每天經(jīng)自然光照射、日光燈補(bǔ)照到所需光照時(shí)長后，再用光 強(qiáng)為50-100Lux的Led藍(lán)光燈帶額外補(bǔ)充照射1-6小時(shí)(如1小時(shí)、3小時(shí)或6小時(shí))。
[0024] 在所述方法的步驟（3)之后，還包括如下步驟：采集所述蛹蟲草子實(shí)體，采用熱風(fēng) 30-40°C烘干或冷凍干燥，獲得生產(chǎn)類胡蘿卜素含量提高的蛹蟲草子實(shí)體產(chǎn)品，避光保存。
[0025] 在本發(fā)明中，所述蛹蟲草菌株具體為蛹蟲草（Cordyceps militaris)菌株"東 方9號(hào)"（可購自山東省德州東方生物技術(shù)研究所)、蛹蟲草（Cordyceps militaris)菌株 "大孢子頭北蟲草09-888"（可購自遼寧錦州市亞泰微生物研究所、或蛹蟲草（Cordyceps militaris)菌株"岷源I號(hào)"（可購自四川省岷源高新所菌種生產(chǎn)中心)。
[0026] 本發(fā)明利用莜麥為原料，通過培養(yǎng)條件控制，生產(chǎn)得到的蛹蟲草子實(shí)體產(chǎn)品類胡 蘿卜素含量高，呈深黃色或橙色，外觀品相好，產(chǎn)品的商品價(jià)值高，同時(shí)為莜麥開辟了新的 利用途徑。

【具體實(shí)施方式】
[0027] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0028] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0029] 蠶蛹粉：蠶蛹經(jīng)過干燥、粉碎后的產(chǎn)品。下述實(shí)施例所用的蠶蛹粉購自遼寧省丹 東市振安區(qū)群長土特產(chǎn)公司；無霉變及異味異臭；含水份10-12%，粗蛋白45-55%，粗纖維 3-6%，粗灰分 4-5%。
[0030] 莜麥：無霉變的莜麥顆粒。
[0031] 營養(yǎng)液：葡萄糖l〇g，蛋白胨l〇g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂lg，檸檬酸銨lg，維生素 BIO. 05g，用水定容至1000ml，調(diào)pH值5. 0。
[0032] 馬鈴薯固體培養(yǎng)基：馬鈴薯200g煮汁，葡萄糖20g，瓊脂15g，用水定容至1L。其 中，馬鈴薯煮汁方法如下：取去皮馬鈴薯，切成小塊煮沸半小時(shí)，然后用紗布過濾即可。
[0033] PDA液體培養(yǎng)基：馬鈴薯200g煮汁，葡萄糖20g，用水定容至1L。其中，馬鈴薯煮 汁方法如下：取去皮馬鈴薯，切成小塊煮沸半小時(shí)，然后用紗布過濾即可。
[0034] 實(shí)施例1、類胡蘿卜素含量高的蛹蟲草子實(shí)體的栽培培養(yǎng)
[0035] 本實(shí)施例中，所采用的蛹蟲草（Cordyceps militaris)菌株為蛹蟲草（Cordyceps militaris)菌株"東方9號(hào)":購自山東省德州東方生物技術(shù)研究所。
[0036] -、蛹蟲草栽培培養(yǎng)基的制備
[0037] 將莜麥顆粒297g和蠶蛹粉3g混合均勻，分裝到10只栽培瓶中，30g/瓶，向每瓶中 加入45g營養(yǎng)液，封口，121°C滅菌1小時(shí)，待冷卻至室溫后備用，獲得含蛹蟲草栽培培養(yǎng)基 的培養(yǎng)瓶。
[0038] 二、種子液的制備
[0039] 按照常規(guī)方法制備蛹蟲草菌株的種子液，具體如下：
[0040] 1、菌株活化
[0041] 將蛹蟲草（Cordycepsmilitaris)菌株"東方9號(hào)"接種于馬鈴薯固體培養(yǎng)基上活 化，培養(yǎng)溫度20°C，培養(yǎng)時(shí)間10天。
[0042] 2、菌種培養(yǎng)
[0043]將步驟1的的菌絲體，在無菌條件下接種到PDA液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度20°C，培 養(yǎng)方式為旋渦式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期，得到種子液。
[0044] 三、接種、培養(yǎng)得到成熟子實(shí)體
[0045] 將步驟二得到的蛹蟲草（Cordycepsmilitaris)菌株"東方9號(hào)"種子液接種于步 驟一制備的蛹蟲草栽培培養(yǎng)基中按照如下（1)- (3)的順序進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得類胡蘿卜素 含量提高的蛹蟲草成熟子實(shí)體：
[0046] (1)發(fā)菌：于20°C避光培養(yǎng)6天，完成蛹蟲草菌株發(fā)菌；
[0047] (2)原基分化：于16_23°C變溫條件下，每天光照16小時(shí)，培養(yǎng)8天，蛹蟲草子座原 基形成；所述變溫為24小時(shí)內(nèi)的溫差在5-7°C的范圍；
[0048](3)子實(shí)體生長：于22°C條件下，每天光照8小時(shí)，空氣相對(duì)濕度75-90%，培養(yǎng)30 天，蛹蟲草子實(shí)體成熟，長至8-10厘米長。
[0049] 在步驟（2)和（3)中，所述光照為：白天采用自然光照射(光強(qiáng)50-1000Lux)，若自 然光照時(shí)間不能達(dá)到所需光照時(shí)長，則晚上用光強(qiáng)為300-500Lux的日光燈增加光照時(shí)間 至所需光照時(shí)長。
[0050] 在步驟（2)和（3)中，每天經(jīng)自然光照射、日光燈補(bǔ)照到所需光照時(shí)長后，再用光 強(qiáng)為50-100Lux的Led藍(lán)光燈帶額外補(bǔ)充照射1小時(shí)。
[0051] 四、子實(shí)體的采收和干燥
[0052] 將培養(yǎng)瓶中生長到8-10厘米長的成熟蛹蟲草子實(shí)體進(jìn)行采收，熱風(fēng)烘干 (30-40°C)，得到蛹蟲草子實(shí)體產(chǎn)品，產(chǎn)品避光保存。
[0053] 五、蛹蟲草子實(shí)體中類胡蘿卜素含量的測定
[0054] 將步驟四得到的干燥后蛹蟲草子實(shí)體產(chǎn)品打碎成粉，按照如下方法測定蛹蟲草子 實(shí)體中類胡蘿卜素含量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次結(jié)果取平均值。
[0055] (1)稱取0?5g菌粉，放入三角瓶中，加入7. 5mL濃度為lmol/L的HC1，同時(shí)加入 2.6- 二叔丁基-4-甲基苯酚（8?。┦蛊浣K濃度為0.1%(1§/1)，避光放置3〇1^11，沸水浴 4min，冰上冷卻。
[0056] (2) 5000r/min離心lOmin，棄上清，水洗 2 次，最后一次 8000r/min離心lOmin。
[0057] (3)去上清，向沉淀加入12mL的丙酮：石油醚(體積比4 :1)的混合溶劑，再加入 2.6- 二叔丁基-4-甲基苯酚（8肌）使其終濃度為0.1%(4/1)，室溫，15〇1'/1^11避光震蕩 lh，8000r/min離心lOmin，取上清，即為類胡蘿卜素提取液。提取過程注意避光。
[0058] (4)再重復(fù)提取2次，即重復(fù)步驟（3) 2次，將3次提取液合并，于445nm處測定吸 光值。
[0059] (5)按以下公式計(jì)算類胡蘿卜素含量：
[0060]

【權(quán)利要求】
1. 一種蛹蟲草栽培培養(yǎng)基，其特征在于：所述培養(yǎng)基由固體基物和營養(yǎng)液按照質(zhì)量配 比為1 : (0. 5-1. 5)的比例混合而成；所述固體基物由質(zhì)量百分含量為95-99%的谷物和質(zhì) 量百分含量為1-5%的蠶蛹粉混合而成。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于：所述谷物為莜麥。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)基，其特征在于：所述培養(yǎng)基中，所述固體基物和所 述營養(yǎng)液的質(zhì)量配比為1 :1. 5。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的培養(yǎng)基，其特征在于：所述固體基物中，所述谷物的 質(zhì)量百分含量為95-96. 7%，所述蠶蛹粉的質(zhì)量百分含量為3. 3-5%。
5. 權(quán)利要求1-4中任一所述的培養(yǎng)基在培養(yǎng)獲得類胡蘿卜素含量提高的蛹蟲草子實(shí) 體中的應(yīng)用。
6. 生產(chǎn)類胡蘿卜素含量提高的蛹蟲草子實(shí)體的方法，是將蛹蟲草菌株接種于權(quán)利要求 1-4中任一所述的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得類胡蘿卜素含量提高的蛹蟲草子實(shí)體；在 所述培養(yǎng)過程中，當(dāng)蛹蟲草菌株處于原基分化和子實(shí)體生長兩個(gè)階段時(shí)，每天采用光強(qiáng)為 50-100Lux的Led藍(lán)光燈帶照射1-6小時(shí)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述包括如下步驟：將蛹蟲草菌株接種于 權(quán)利要求1-4中任一所述的培養(yǎng)基中按照如下（1)- (3)的順序進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得類胡蘿 卜素含量提1?的蛹蟲草子實(shí)體： (1) 發(fā)菌：于15_22°C避光培養(yǎng)4-8天，完成蛹蟲草菌株發(fā)菌； (2) 原基分化：于16-23°C變溫條件下，每天光照10-16小時(shí)，培養(yǎng)6-12天，蛹蟲草子座 原基形成；所述變溫為24小時(shí)內(nèi)的溫差在5-7°C的范圍； (3) 子實(shí)體生長：于20-25°C條件下，每天光照8-12小時(shí)，空氣相對(duì)濕度75-90%，培養(yǎng) 10-40天，蛹蟲草子實(shí)體長至8-10厘米長； 在步驟（2)和（3)中，所述光照為：白天采用自然光照射，若自然光照時(shí)間不能達(dá)到所 需光照時(shí)長，則晚上用光強(qiáng)為300-500Lux的日光燈增加光照時(shí)間至所需光照時(shí)長； 在步驟（2)和（3)中，每天經(jīng)自然光照射、日光燈補(bǔ)照到所需光照時(shí)長后，再用光強(qiáng)為 50-100Lux的Led藍(lán)光燈帶額外補(bǔ)充照射1-6小時(shí)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：在步驟（3)之后，還包括如下步驟：采集 所述蛹蟲草子實(shí)體，采用熱風(fēng)30-40°C烘干或冷凍干燥。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6-8中任一所述的方法，其特征在于：所述蛹蟲草菌株為如下（a)-(c) 中任一種： (a) 蛹蟲草菌株東方9號(hào)； (b) 蛹蟲草菌株大孢子頭北蟲草09-888 ; (c) 蛹蟲草菌株岷源I號(hào)。
【文檔編號(hào)】C05G3/00GK104370620SQ201310355926
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2013年8月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月15日
【發(fā)明者】溫建橋 申請人:河北嘉真農(nóng)業(yè)科技有限公司