一種禽用復(fù)合￡fL生國制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種禽用復(fù)合益生菌制劑及其制備方法，將枯草芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌菌液、糞腸球菌菌液、嗜酸乳桿菌菌液、酪酸梭菌菌液按體積比20-40:5-20:10-30:12-35:15-30混合，然后加入羧甲基纖維素制成混懸液，再將混懸液加入硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水洗后干燥即得；上述菌種菌液中的活菌數(shù)均不低于109CFU/ml。本發(fā)明通過將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、糞腸球菌、嗜酸乳桿菌、酪酸梭菌等好氧菌和厭氧菌合理搭配，得到具有多種生理功能的復(fù)合益生菌制劑。本發(fā)明的禽用復(fù)合益生菌制劑能夠調(diào)節(jié)腸道的微生態(tài)環(huán)境，抑制腸道病原菌的生長，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，提高飼料利用率。
【專利說明】一種禽用復(fù)合益生菌制劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種禽用復(fù)合益生菌制劑，同時(shí)還涉及該制劑的制備方法，屬于微生 物制劑【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 隨著集約化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，禽類的各種疾病不斷發(fā)生，而且日益嚴(yán)重。目前防治禽 類疾病的主要手段是使用抗生素，但抗生素的使用容易導(dǎo)致細(xì)菌耐藥的產(chǎn)生及禽類產(chǎn)品中 藥物的殘留。因此，預(yù)防禽類的疾病發(fā)生，解決其副產(chǎn)品中藥物的殘留是亟待解決的問題。
[0003] 益生菌是一類對(duì)宿主有益的活性微生物，可以改善宿主體內(nèi)的微生態(tài)平衡，發(fā)揮 有益作用。益生菌的作用特點(diǎn)是形成生物保護(hù)膜防止致病菌入侵；產(chǎn)生乳酸或醋酸、過氧 化氫、細(xì)菌素和類似抗菌素的物質(zhì),并以此來抑制病原菌的生長,調(diào)整宿主免疫反應(yīng),改善 消化道細(xì)菌代謝病降低糞中有害酶的活性；減少細(xì)菌易位的發(fā)生率等，因此益生菌具有加 強(qiáng)腸道微生物區(qū)域的屏障功能或增進(jìn)非特異性免疫功能，調(diào)節(jié)特異性免疫功能，增強(qiáng)抗病 力和體質(zhì)，防治病菌感染，提高飼料利用率和動(dòng)物生長率的功能。因此對(duì)不同益生菌進(jìn)行搭 配，提高它們的作用成為研究熱點(diǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種禽用復(fù)合益生菌制劑，能夠調(diào)節(jié)腸道的微生態(tài)環(huán)境，抑 制腸道病原菌的生長，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，提高飼料利用率。
[0005] 本發(fā)明的目的還在于提供一種禽用復(fù)合益生菌制劑的制備方法。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是提供一種禽用復(fù)合益生菌制劑， 將枯草芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌菌液、糞腸球菌菌液、嗜酸乳桿菌菌液、酪酸梭菌菌液 按體積比20-40:5-20:10-30:12-35:15-30混合，然后加入羧甲基纖維素制成混懸液，再將 混懸液加入硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水洗后干燥即得；上述菌種菌液 中的活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml。
[0007] 所述禽用復(fù)合益生菌制劑中活菌總數(shù)不低于5X 109CFU/g。
[0008] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案還在于提供一種禽用復(fù)合益生菌制劑的制備方法，包括 以下步驟：將枯草芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌菌液、糞腸球菌菌液、嗜酸乳桿菌菌液、酪酸 梭菌菌液按體積比混合，然后加入混合菌液質(zhì)量〇. 5-1%的羧甲基纖維素制成混懸液，再將 混懸液加入混懸液體積1-2倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)3-5%的硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝 聚囊，水洗，干燥得到禽用復(fù)合益生菌制劑；上述菌種菌液中的活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml。
[0009] 所述枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌菌液的制備方法包括以下步驟：
[0010] (1)菌種的活化：將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌分別接種到營養(yǎng)肉湯 培養(yǎng)基中，在37°C、180-200r/min條件下培養(yǎng)12-14h ;
[0011] (2)以3%接種量將活化的枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌分別接入液 體培養(yǎng)基，在37°C條件下通氧發(fā)酵培養(yǎng)36-48h，過濾然后將發(fā)酵液3000-4000r/m離心 5-10min，倒去上清液，加入無菌水制得枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌菌液，所得 菌液中活菌數(shù)均不低于l〇9CFU/ml。
[0012] 所述液體培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：葡萄糖0. 1%、淀粉0. 2%、豆柏水解液 2%、磷酸二氫鉀0. 3%、磷酸氫二鉀0. 2%，硫酸鎂0. 05%、氯化鐵0. 01%、碳酸鈣0. 01%。
[0013] 所述糞腸球菌菌液的制備方法包括以下步驟：
[0014] (1)菌種的活化：將糞腸球菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37°C條件下靜止培養(yǎng) 12-14h ；
[0015] (2)以2%接種量將活化的糞腸球菌接入MRS培養(yǎng)基，在37°C條件下靜置發(fā)酵培養(yǎng) 24-36h，然后將發(fā)酵液3000-4000r/m離心5-10min，倒去上清液，加入無菌水制得糞腸球菌 菌液，所得菌液中活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml。
[0016] 所述MRS培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：胰蛋白胨1%、酵母浸粉0. 5%、葡萄糖 1%、蔗糖0. 5%、醋酸鈉1. 5%、檸檬酸銨0. 2%、磷酸二氫鉀0. 4%、硫酸錳0. 05%、硫酸鎂0. 02%、 硫酸鐵0. 003%、吐溫800. 1%。
[0017] 所述嗜酸乳桿菌菌液的制備方法包括以下步驟：
[0018] (1)菌種的活化：將嗜酸乳桿菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37°C條件下靜止培 養(yǎng) 12-14h ;
[0019] (2)以2%接種量將活化的嗜酸乳桿菌接入發(fā)酵培養(yǎng)基，在37°C條件下靜置發(fā)酵培 養(yǎng)24-36h，然后將發(fā)酵液3000-4000r/m離心5-10min，倒去上清液，加入無菌水制得嗜酸乳 桿菌菌液，所得菌液中活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml。
[0020] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：葡萄糖3%、乳糖1%、脫脂乳粉5%、酵母 浸粉0. 8%、磷酸二氫鉀0. 3%、磷酸氫二鈉0. 4%、硫酸鎂0. 02%、硫酸錳0. 008%。
[0021] 所述營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：蛋白胨1%、牛肉膏0. 3%、氯化鈉 0· 5%。
[0022] 本發(fā)明通過將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、糞腸球菌、嗜酸乳桿菌、酪酸梭菌等 好氧菌和厭氧菌合理搭配，得到具有多種生理功能的復(fù)合益生菌制劑。本發(fā)明的禽用復(fù)合 益生菌制劑能夠調(diào)節(jié)腸道的微生態(tài)環(huán)境，抑制腸道病原菌的生長，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，提高飼 料利用率。
[0023] 本發(fā)明的禽用復(fù)合益生菌制劑可在常溫下保存一年。使用時(shí)，將禽用復(fù)合益生菌 制劑以1%的重量分?jǐn)?shù)添加到飼料或者飲水中即可。

【具體實(shí)施方式】
[0024] 培養(yǎng)基的配制
[0025] 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：蛋白胨1%、牛肉膏0. 3%、氯化鈉0. 5% ; ρΗ7-7· 2。
[0026] 液體培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：葡萄糖0. 1%、淀粉0. 2%、豆柏水解液2%、磷 酸二氫鉀0. 3%、磷酸氫二鉀0. 2%，硫酸鎂0. 05%、氯化鐵0. 01%、碳酸鈣0. 01% ;ρΗ7-7. 2。
[0027] MRS培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：胰蛋白胨1%、酵母浸粉0. 5%、葡萄糖1%、蔗 糖0. 5%、醋酸鈉1. 5%、檸檬酸銨0. 2%、磷酸二氫鉀0. 4%、硫酸錳0. 05%、硫酸鎂0. 02%、硫酸 鐵 0· 003%、吐溫 800. 1% ;ρΗ6· 5-7。
[0028] 發(fā)酵培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：葡萄糖3%、乳糖1%、脫脂乳粉5%、酵母浸粉 0. 8%、磷酸二氫鉀0. 3%、磷酸氫二鈉0. 4%、硫酸鎂0. 02%、硫酸錳0. 008% ;pH5. 7-6。
[0029] 實(shí)施例1
[0030] 本實(shí)施例的禽用復(fù)合益生菌制劑，將枯草芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌菌液、糞腸 球菌菌液、嗜酸乳桿菌菌液、酪酸梭菌菌液按體積比20:10:20:12:30混合，然后加入羧甲 基纖維素制成混懸液，再將混懸液加入硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水洗 后干燥即得；上述菌種菌液中的活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml ;禽用復(fù)合益生菌制劑中活菌總 數(shù)不低于5X109CFU/g。
[0031] 本實(shí)施例的禽用復(fù)合益生菌制劑的制備方法，包括以下步驟：
[0032] 1、菌液的制備
[0033] (1)枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌菌液的制備
[0034] (a)菌種的活化：將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌分別接種到營養(yǎng)肉湯 培養(yǎng)基中，在37°C、200r/min條件下培養(yǎng)12h ;
[0035] (b)以3%接種量將活化的枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌分別接入液體 培養(yǎng)基，在37°C條件下通氧發(fā)酵培養(yǎng)36h，過濾后然后將發(fā)酵液4000r/m離心5min，倒去上 清液，加入無菌水制得枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌菌液，所得菌液中活菌數(shù)均 不低于 l〇9CFU/ml ;
[0036] (2)糞腸球菌菌液的制備
[0037] (a)菌種的活化：將糞腸球菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37°C條件下靜止培養(yǎng) 12h ；
[0038] (b)以2%接種量將活化的糞腸球菌接入MRS培養(yǎng)基，在37°C條件下靜置發(fā)酵培養(yǎng) 24h，然后將發(fā)酵液4000r/m離心5min，倒去上清液，加入無菌水制得糞腸球菌菌液，所得菌 液中活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml ;
[0039] (3)嗜酸乳桿菌菌液的制備
[0040] (a)菌種的活化：將嗜酸乳桿菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37°C條件下靜止培 養(yǎng) 12h ;
[0041] (b)以2%接種量將活化的嗜酸乳桿菌接入發(fā)酵培養(yǎng)基，在37°C條件下靜置發(fā)酵培 養(yǎng)24h，然后將發(fā)酵液4000r/m離心5min，倒去上清液，加入無菌水制得嗜酸乳桿菌菌液，所 得菌液中活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml ;
[0042] 2、將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、糞腸球菌、嗜酸乳桿菌、酪酸梭菌按比例混合， 然后加入混合菌液質(zhì)量1%的羧甲基纖維素制成混懸液，再將混懸液加入混懸液體積1倍的 質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水洗，42°C干燥得到禽用復(fù)合 益生菌制劑。
[0043] 實(shí)施例2
[0044] 本實(shí)施例的禽用復(fù)合益生菌制劑，將枯草芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌菌液、糞腸 球菌菌液、嗜酸乳桿菌菌液、酪酸梭菌菌液按體積比30:20:10:20:15混合，然后加入羧甲 基纖維素制成混懸液，再將混懸液加入硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水洗 后干燥即得；上述菌種菌液中的活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml ;禽用復(fù)合益生菌制劑中活菌總 數(shù)不低于5X109CFU/g。
[0045] 本實(shí)施例的禽用復(fù)合益生菌制劑的制備方法，包括以下步驟：
[0046] 1、菌液的制備
[0047] (1)枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌菌液的制備
[0048] (a)菌種的活化：將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌分別接種到營養(yǎng)肉湯 培養(yǎng)基中，在37°C、180r/min條件下培養(yǎng)14h ;
[0049] (b)以3%接種量將活化的枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌分別接入液體 培養(yǎng)基，在37°C條件下通氧發(fā)酵培養(yǎng)48h，過濾后然后將發(fā)酵液3000r/m離心lOmin，倒去上 清液，加入無菌水制得枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌菌液，所得菌液中活菌數(shù)均 不低于 l〇9CFU/ml ;
[0050] (2)糞腸球菌菌液的制備
[0051] (a)菌種的活化：將糞腸球菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37°C條件下靜止培養(yǎng) 14h ；
[0052] (b)以2%接種量將活化的糞腸球菌接入MRS培養(yǎng)基，在37°C條件下靜置發(fā)酵培養(yǎng) 36h，然后將發(fā)酵液3000r/m離心lOmin，倒去上清液，加入無菌水制得糞腸球菌菌液，所得 菌液中活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml ;
[0053] (3)嗜酸乳桿菌菌液的制備
[0054] (a)菌種的活化：將嗜酸乳桿菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37°C條件下靜止培 養(yǎng) 14h ;
[0055] (b)以2%接種量將活化的嗜酸乳桿菌接入發(fā)酵培養(yǎng)基，在37°C條件下靜置發(fā)酵培 養(yǎng)36h，然后將發(fā)酵液3000r/m離心lOmin，倒去上清液，加入無菌水制得嗜酸乳桿菌菌液， 所得菌液中活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml ;
[0056] 2、將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、糞腸球菌、嗜酸乳桿菌、酪酸梭菌按比例混合， 然后加入混合菌液質(zhì)量〇. 5%的羧甲基纖維素制成混懸液，再將混懸液加入混懸液體積1. 5 倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%的硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水洗，60°C干燥得到禽用 復(fù)合益生菌制劑。
[0057] 實(shí)施例3
[0058] 本實(shí)施例的禽用復(fù)合益生菌制劑，將枯草芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌菌液、糞腸 球菌菌液、嗜酸乳桿菌菌液、酪酸梭菌菌液按體積比40:5:30:35:25混合，然后加入羧甲基 纖維素制成混懸液，再將混懸液加入硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水洗后 干燥即得；上述菌種菌液中的活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml ;禽用復(fù)合益生菌制劑中活菌總數(shù) 不低于 5X109CFU/g。
[0059] 本實(shí)施例的禽用復(fù)合益生菌制劑的制備方法，包括以下步驟：
[0060] 1、菌液的制備
[0061] (1)枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌菌液的制備
[0062] (a)菌種的活化：將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌分別接種到營養(yǎng)肉湯 培養(yǎng)基中，在37°C、190r/min條件下培養(yǎng)13h ;
[0063] (b)以3%接種量將活化的枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌分別接入液體 培養(yǎng)基，在37°C條件下通氧發(fā)酵培養(yǎng)42h，過濾后然后將發(fā)酵液3500r/m離心8min，倒去上 清液，加入無菌水制得枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌菌液，所得菌液中活菌數(shù)均 不低于 l〇9CFU/ml ;
[0064] (2)糞腸球菌菌液的制備
[0065] (a)菌種的活化：將糞腸球菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37°C條件下靜止培養(yǎng) 13h ；
[0066] (b)以2%接種量將活化的糞腸球菌接入MRS培養(yǎng)基，在37°C條件下靜置發(fā)酵培養(yǎng) 30h，然后將發(fā)酵液3500r/m離心8min，倒去上清液，加入無菌水制得糞腸球菌菌液，所得菌 液中活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml ;
[0067] (3)嗜酸乳桿菌菌液的制備
[0068] (a)菌種的活化：將嗜酸乳桿菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37°C條件下靜止培 養(yǎng) 13h ;
[0069] (b)以2%接種量將活化的嗜酸乳桿菌接入發(fā)酵培養(yǎng)基，在37°C條件下靜置發(fā)酵培 養(yǎng)30h，然后將發(fā)酵液3500r/m離心8min，倒去上清液，加入無菌水制得嗜酸乳桿菌菌液，所 得菌液中活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml ;
[0070] 2、將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、糞腸球菌、嗜酸乳桿菌、酪酸梭菌按比例混合， 然后加入混合菌液質(zhì)量〇. 8%的羧甲基纖維素制成混懸液，再將混懸液加入混懸液體積2倍 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%的硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水洗，50°C干燥得到禽用復(fù) 合益生菌制劑。
[0071] 對(duì)比例
[0072] 本對(duì)比例的禽用復(fù)合益生菌制劑，將枯草芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌菌液、糞 腸球菌菌液、嗜酸乳桿菌菌液按體積比40:5:30:35混合，然后加入羧甲基纖維素制成混 懸液，再將混懸液加入硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水洗后干燥即得； 上述菌種菌液中的活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml ;禽用復(fù)合益生菌制劑中活菌總數(shù)不低于 5X109CFU/g。
[0073] 實(shí)驗(yàn)例1
[0074] 本發(fā)明禽用復(fù)合益生菌制劑的保存期試驗(yàn)
[0075] 將本發(fā)明的禽用復(fù)合益生菌制劑在25°C條件下放置12個(gè)月，并在0、1、2、4、8、12 個(gè)月時(shí)分別觀察外觀并測定活菌數(shù)，結(jié)果如表1所示。
[0076] 表1本發(fā)明禽用復(fù)合益生菌制劑的保存期試驗(yàn)
[0077]

【權(quán)利要求】
1. 一種禽用復(fù)合益生菌制劑，其特征在于，將枯草芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌菌液、 糞腸球菌菌液、嗜酸乳桿菌菌液、酪酸梭菌菌液按體積比20-40:5-20:10-30:12-35:15-30 混合，然后加入羧甲基纖維素制成混懸液，再將混懸液加入硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過 濾得到凝聚囊，水洗后干燥即得；上述菌種菌液中的活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽用復(fù)合益生菌制劑，其特征在于，所述禽用復(fù)合益生菌制 齊U中活菌總數(shù)不低于5X 109CFU/g。
3. -種如權(quán)利要求1所述的禽用復(fù)合益生菌制劑的制備方法，其特征在于，包括以下 步驟：將枯草芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌菌液、糞腸球菌菌液、嗜酸乳桿菌菌液、酪酸梭菌 菌液按體積比混合，然后加入混合菌液質(zhì)量〇. 5-1%的羧甲基纖維素制成混懸液，再將混懸 液加入混懸液體積1-2倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)3-5%的硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊， 水洗，干燥得到禽用復(fù)合益生菌制劑；上述菌種菌液中的活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的禽用復(fù)合益生菌制劑的制備方法，其特征在于，所述枯草芽 孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌菌液的制備方法包括以下步驟 ： (1) 菌種的活化：將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌分別接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng) 基中，在 37°C、180-200r/min 條件下培養(yǎng) 12-14h ; (2) 以3%接種量將活化的枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌分別接入液體培養(yǎng) 基，在37°C條件下通氧發(fā)酵培養(yǎng)36-48h，過濾然后將發(fā)酵液3000-4000r/m離心5-10min，倒 去上清液，加入無菌水制得枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酪酸梭菌菌液，所得菌液中活菌 數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的禽用復(fù)合益生菌制劑的制備方法，其特征在于，所述液體培 養(yǎng)基包括以下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：葡萄糖0. 1%、淀粉0. 2%、豆柏水解液2%、磷酸二氫鉀0. 3%、 磷酸氫二鉀〇. 2%，硫酸鎂0. 05%、氯化鐵0. 01%、碳酸鈣0. 01%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的禽用復(fù)合益生菌制劑的制備方法，其特征在于，所述糞腸球 菌菌液的制備方法包括以下步驟： (1) 菌種的活化：將糞腸球菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37 °C條件下靜止培養(yǎng) 12-14h ； (2) 以2%接種量將活化的糞腸球菌接入MRS培養(yǎng)基，在37°C條件下靜置發(fā)酵培養(yǎng) 24-36h，然后將發(fā)酵液3000-4000r/m離心5-10min，倒去上清液，加入無菌水制得糞腸球菌 菌液，所得菌液中活菌數(shù)均不低于l〇 9CFU/ml。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的禽用復(fù)合益生菌制劑的制備方法，其特征在于，所述MRS培 養(yǎng)基包括以下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：胰蛋白胨1%、酵母浸粉0. 5%、葡萄糖1%、蔗糖0. 5%、醋酸鈉 1. 5%、檸檬酸銨0. 2%、磷酸二氫鉀0. 4%、硫酸錳0. 05%、硫酸鎂0. 02%、硫酸鐵0. 003%、吐溫 800. 1%。
8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的禽用復(fù)合益生菌制劑的制備方法，其特征在于，所述嗜酸乳 桿菌菌液的制備方法包括以下步驟： (1) 菌種的活化：將嗜酸乳桿菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37°C條件下靜止培養(yǎng) 12-14h ； (2) 以2%接種量將活化的嗜酸乳桿菌接入發(fā)酵培養(yǎng)基，在37°C條件下靜置發(fā)酵培養(yǎng) 24-36h，然后將發(fā)酵液3000-4000r/m離心5-10min，倒去上清液，加入無菌水制得嗜酸乳桿 菌菌液，所得菌液中活菌數(shù)均不低于l〇9CFU/ml。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的禽用復(fù)合益生菌制劑的制備方法，其特征在于，所述發(fā)酵培 養(yǎng)基包括以下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：葡萄糖3%、乳糖1%、脫脂乳粉5%、酵母浸粉0. 8%、磷酸二氫 鉀0. 3%、磷酸氫二鈉0. 4%、硫酸鎂0. 02%、硫酸錳0. 008%。
10. 根據(jù)權(quán)利要求4、6或8所述的禽用復(fù)合益生菌制劑的制備方法，其特征在于，所述 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：蛋白胨1%、牛肉膏〇. 3%、氯化鈉0. 5%。
【文檔編號(hào)】A23K1/18GK104212735SQ201310405591
【公開日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2013年9月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月6日
【發(fā)明者】朱麗平, 陳建暉, 李鳳娟 申請(qǐng)人:鄭州后羿制藥有限公司