一種多倍體大花萱草組培方法及培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種多倍體大花萱草組培方法，同時還公開了適用于本發(fā)明組培方法的培養(yǎng)基，本發(fā)明方法提高了多倍體大花萱草的繁殖系數(shù)，彌補了傳統(tǒng)組織培養(yǎng)技術(shù)的一些不足，如降低了外植體的污染率、提高了愈傷組織分化率和移栽成活率等。通過外植體采集、外植體消毒效果、生根效果、移栽苗成活率等方面均優(yōu)于以往萱草品種的組培快繁技術(shù)，所建立的規(guī)?；唐飞a(chǎn)體系穩(wěn)定，生產(chǎn)周期只需2個月左右。加快多倍體大花萱草繁殖速度，打破繁殖的季節(jié)限制，實現(xiàn)育苗工廠化生產(chǎn)。本發(fā)明的組培配方是多倍體大花萱草大量擴繁的最佳組合，可以快速大量的繁殖組培苗，適應(yīng)園林綠化市場需求。
【專利說明】一種多倍體大花萱草組培方法及培養(yǎng)基
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明提供一種多倍體大花萱草組培方法，同時還公開了適用于本發(fā)明組培方法的培養(yǎng)基，屬于花卉培育【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]萱草為多年生宿根花卉，近幾年廣泛用于城市綠化和園林景觀建設(shè)中。在眾多萱草品種中，多倍體大花萱草花色豐富，花姿優(yōu)美，且葉色翠綠，具備栽培簡易，春季萌發(fā)早等栽培優(yōu)勢。近年來市場對多倍體大花萱草的需求量越來越大，單純的分株繁殖速度，遠(yuǎn)不能滿足商品化生產(chǎn)的需要，從而限制了多倍體大花萱草在園林中的大量應(yīng)用。因此，探索出多倍體大花萱草快速繁殖的技術(shù)和方法，開展組織培養(yǎng)的研究及加速其推廣應(yīng)用就顯得至關(guān)重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供一種多倍體大花萱草組培方法，解決多倍體大花萱草外植體選擇、夕卜植體采集時間、外植體消毒方法、培養(yǎng)基配方、煉苗方法等方面的技術(shù)難點。
[0004]本發(fā)明還公開了適用于本發(fā)明組培方法的多種培養(yǎng)基，可以快速大量繁殖的多倍體大花萱草，彌補傳統(tǒng)技術(shù)的外植體污染率高、分化率低、移栽成活率低等問題，移栽成活率可達95%。
[0005]本發(fā)明公開的多倍體大花萱草組培方法，包括以下步驟:
1)在植株抽蕾期，采集健壯的無病蟲害的嫩葉、生長點、腋芽、花蕾、花瓣、花梗，作為組織培養(yǎng)的外植體，將采集 到的外植體用洗衣粉水清洗干凈，再放在流水下沖洗30min，在超凈工作臺上用75%酒精消毒5-30s，再用無菌水沖洗3-5遍，之后用0.1% (質(zhì)量百分比)升萊消毒5-20min ；
2)將消毒后的外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，送入培養(yǎng)室進行無菌培養(yǎng)，培養(yǎng)基為MS1L+NAA 0.2mg/L+6-BA 0.5mg/L+2, 4_D 0.7mg/L+ 鹿糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ;將分化后的外植體轉(zhuǎn)移到繼代增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，得到分化苗，繼代培養(yǎng)基為MS+NAA 0.2mg/L+6-BA 2.0mg/L+ 鹿糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ；
3)將分化苗接種到壯苗培養(yǎng)基上進行壯苗培養(yǎng)，壯苗培養(yǎng)基為MS1L+6-BA 0.2 mg/L+IBA 0.04mg/L+馬鈴薯20g/L+蔗糖3 mg/L、瓊脂9 mg/L ;然后，將健壯的瓶苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為MS 1L+NAA 0.02mg/L+蔗糖3 mg/L、瓊脂9 mg/L；
4)把生根后的組培苗移出培養(yǎng)瓶，借助毛刷洗凈根部的培養(yǎng)基，將根部置于盛滿水的容器中，置于煉苗室鍛煉3-5天，然后移栽到腐殖土:珍珠巖=1:1的基質(zhì)中，得到成品。
[0006]所述MS培養(yǎng)基的工作液濃度單位為mg/L，含:
大量元素:NH4NO3 1650、KNO3 1900、CaCl2.2H20 440、MgSO4.7H20 370、KH2PO4 170 ；
微量元素:KI 0.83、H3BO3 6.2、MnSO4.4H20 22.3、ZnSO4.7H20 8.6、Na2MnO4.2H20
0.25、CuSO4.5H20 0.0025、CoCl2.6H20 0.0025 ;鐵鹽=FeSO4.7H20 27.8、Na2-EDTA.2H2037.3 ；
肌醇100、鹽酸0.5、鹽酸吡哆醇0.5、鹽酸硫胺素0.1、甘氨酸2.0。
[0007]本發(fā)明公開的多倍體大花萱草組培用誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于是由以下原料制成的:
MS 1L、萘乙酸0.2mg/L、6-節(jié)基嘌呤0.5mg/L、2, 4-二氯苯氧乙酸0.7mg/L、鹿糖3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ;pH 值 5.8-6.0。
[0008]本發(fā)明公開的多倍體大花萱草組培用繼代增殖培養(yǎng)基:其特征在于是由以下原料制成的:
MS 1L、萘乙酸 0.2mg/L、6-節(jié)基嘌呤 2.0mg/L、鹿糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ；pH 值
5.8-6.00
[0009]本發(fā)明公開的多倍體大花萱草組培用壯苗培養(yǎng)基；其特征在于是由以下原料制成的:
MS 11 、6-芐基嘌呤0.2 mg/L、吲哚-3-丁酸 0.04mg/L、馬鈴薯 20g/L、蔗糖 3 mg/L、瓊月旨 9 mg/L 巾!1值5.8-6.0。
[0010]本發(fā)明公開的多倍體大花萱草組培用生根培養(yǎng)基；其特征在于是由以下原料制成的:
MS 1L、萘乙酸 0.02mg/L、蔗糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ;pH 值 5.8-6.0。
[0011 ] 所述MS的工作液濃度單位為mg/L，含:
大量元素:NH4NO3 1650、KNO3 1900、CaCl2.2H20 440、MgSO4.7H20 370、KH2PO4 170 ；
微量元素:KI 0.83、H3BO3 6.2、MnSO4.4H20 22.3、ZnSO4.7H20 8.6、Na2MnO4.2H20
0.25、CuSO4.5H20 0.0025、CoCl2.6H20 0.0025 ;鐵鹽=FeSO4.7H20 27.8、Na2-EDTA.2H2037.3 ；
肌醇100、鹽酸0.5、鹽酸吡哆醇0.5、鹽酸硫胺素0.1、甘氨酸2.0。
[0012]本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有的優(yōu)點和進步在于:
本發(fā)明方法提高了多倍體大花萱草的繁殖系數(shù)，彌補了傳統(tǒng)組織培養(yǎng)技術(shù)的一些不足，如降低了外植體的污染率、提高了愈傷組織分化率和移栽成活率等。通過外植體采集、外植體消毒效果、生根效果、移栽苗成活率等方面均優(yōu)于以往萱草品種的組培快繁技術(shù)，所建立的規(guī)?；唐飞a(chǎn)體系穩(wěn)定，生產(chǎn)周期只需2個月左右。加快多倍體大花萱草繁殖速度，打破繁殖的季節(jié)限制，實現(xiàn)育苗工廠化生產(chǎn)。本發(fā)明的組培配方是多倍體大花萱草大量擴繁的最佳組合，可以快速大量的繁殖組培苗，適應(yīng)園林綠化市場需求。
【具體實施方式】
[0013]通過以下實施例進一步舉例描述本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明，在不背離本發(fā)明的技術(shù)解決方案的前提下，對本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實現(xiàn)的任何改動或改變都將落入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
[0014]實施例1 MS的配制:
工作液濃度單位為mg/L，其中:`
大量元素:NH4NO3 1650、KNO3 1900、CaCl2.2H20 440、MgSO4.7H20 370、KH2PO4 170 ；微量元素:KI 0.83、H3BO3 6.2、MnSO4.4H20 22.3、ZnSO4.7H20 8.6、Na2MnO4.2H20 0.25、CuSO4.5Η20 0.0025、CoC12.6Η20 0.0025 ;鐵鹽:FeS04.7Η20 27.8、Na2_EDTA.2Η20 37.3 ；肌醇100、鹽酸0.5、鹽酸吡哆醇0.5、鹽酸硫胺素0.1、甘氨酸2.0。按比例稱取上述原料，混合均勻即得MS。
[0015]實施例2多倍體大花萱草組培用誘導(dǎo)培養(yǎng)基
稱取實施例1制備的MS IL加入萘乙酸0.2mg/L、6-芐基嘌呤0.5mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸0.7mg/L、蔗糖30 g/L、瓊脂9 g/L ；pH值5.8-6.0 ;將上述原料，混合均勻即得。
[0016]實施例3繼代增殖培養(yǎng)基
稱取實施例1制備的MS IL加入萘乙酸0.2mg/L、6-芐基嘌呤2.0mg/L、蔗糖30 g/L、瓊脂9 g/L ；pH值5.8-6.0 ;將上述原料，混合均勻即得。
[0017]實施例4壯苗培養(yǎng)基
稱取實施例1制備的MS IL加入6-芐基嘌呤0.2 mg/L、吲哚-3- 丁酸0.04mg/L、馬鈴薯20g/L、蔗糖30g/L、瓊脂9 g/L ；pH值5.8-6.0 ;將上述原料，混合均勻即得。
[0018]實施例5生根培養(yǎng)基
稱取實施例1制備的MS IL加入萘乙酸0.02mg/L、蔗糖30 g/L、瓊脂9 g/L ;pH值
5.8-6.0 ;將上述原料，混合均勻即得。
[0019]實施例6 1、選擇在I月中旬(植株抽蕾期)連續(xù)3天無雨后對外植體進行采集，可有效降低外植體的污染率。將采集到的外植(花萱草花蕾)體用洗衣粉水清洗干凈，再放在流水下沖洗30min，在超凈工作臺上用75%酒精消毒5_30s，再用無菌水沖洗3_5遍，之后用0.1% (質(zhì)量百分比)升汞消毒5-20min ;其中，最佳的外植體滅菌方法:75%酒精10s+0.1%(質(zhì)量百分比)升萊消毒12min。
[0020]2、將消毒后的外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基(實施例2)上，送入培養(yǎng)室進行無菌培養(yǎng)，培養(yǎng)室的條件為溫度:25土1°C，光照強度:15001x-20001x，光照時間:12h/d。在此過程中根據(jù)外植體誘導(dǎo)和分化情況帥選出最適宜的外植體種類和培養(yǎng)基配方。將芽分化明顯的接種塊轉(zhuǎn)移到繼代增殖培養(yǎng)基(實施例3)上，經(jīng)過30d培養(yǎng)即可增殖1-2倍，得到分化苗。
[0021]3、為了提高了分化苗的質(zhì)量，提高移栽的成活率，將生長較弱的分化苗接種到壯苗培養(yǎng)基(實施例4)上進行壯苗培養(yǎng)，經(jīng)過10-20d的培養(yǎng)即可使瓶苗變粗壯。然后，將健壯的瓶苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基(實施例5)上進行生根培養(yǎng)。
[0022]4、生根培養(yǎng)后要先經(jīng)過煉苗的過程，然后移栽，才能適應(yīng)露地栽培的要求。把生根后的組培苗移出培養(yǎng)瓶，借助毛刷洗凈根部的培養(yǎng)基，放在盛滿水的小盒中，借助橡皮筋固定小苗，水面高度以不超過根部為宜，置于煉苗室鍛煉3-5天，上罩透明塑料布。然后移栽到腐殖土:珍珠巖=1: I的基質(zhì)中。移栽成活率達96%左右。
[0023]移栽過程中要注意幾點，①借助鑷子將小苗根部的土捏實，讓根與基質(zhì)充分接觸；②移栽過程中，最好將2-3棵小苗種植在一個穴洞內(nèi)；③移栽后的小苗要套上帶孔的透明塑料袋，一周后去掉；④移栽后每半個月澆一次稀釋500倍的MS營養(yǎng)液(不含蔗糖和瓊脂的MS培養(yǎng)基)。以上幾點均可提高移栽苗成活率。
[0024]實施例7
1、選擇在I月中旬(植株抽蕾期)連續(xù)3天無雨后對外植體進行采集，可有效降低外植體的污染率。采集健壯的無病蟲害的嫩葉、、腋芽、花蕾、花瓣、花梗，作為組織培養(yǎng)的外植體，將采集到的外植(花萱草生長點)體用洗衣粉水清洗干凈，再放在流水下沖洗30min，在超凈工作臺上用75%酒精消毒5-30s，再用無菌水沖洗3-5遍，之后用0.1% (質(zhì)量百分比)升汞消毒5-20min ;其中，最佳的外植體滅菌方法:75%酒精lOs+0.1% (質(zhì)量百分比)升汞消毒 12min。
[0025]2、將消毒后的外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基(實施例2)上，送入培養(yǎng)室進行無菌培養(yǎng)，培養(yǎng)室的條件為溫度:25土1°C，光照強度:15001x-20001x，光照時間:12h/d。在此過程中根據(jù)外植體誘導(dǎo)和分化情況帥選出最適宜的外植體種類和培養(yǎng)基配方。將芽分化明顯的接種塊轉(zhuǎn)移到繼代增殖培養(yǎng)基(實施例3)上，經(jīng)過30d培養(yǎng)即可增殖1-2倍，得到分化苗。
[0026]3、為了提高了分化苗的質(zhì)量，提高移栽的成活率，將生長較弱的分化苗接種到壯苗培養(yǎng)基(實施例4)上進行壯苗培養(yǎng)，經(jīng)過10-20d的培養(yǎng)即可使瓶苗變粗壯。然后，將健壯的瓶苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基(實施例5)上進行生根培養(yǎng)。
[0027]4、生根培養(yǎng)后要先經(jīng)過煉苗的過程，然后移栽，才能適應(yīng)露地栽培的要求。把生根后的組培苗移出培養(yǎng)瓶，借助毛刷洗凈根部的培養(yǎng)基，放在盛滿水的小盒中，借助橡皮筋固定小苗，水面高度以不超過根部為宜，置于煉苗室鍛煉3-5天，上罩透明塑料布。然后移栽到腐殖土:珍珠巖=1: I的基質(zhì)中。移栽成活率達96%左右。
[0028]移栽過程中要注意幾點，①借助鑷子將小苗根部的土捏實，讓根與基質(zhì)充分接觸；②移栽過程中，最好將2-3棵小苗種植在一個穴洞內(nèi)；③移栽后的小苗要套上帶孔的透明塑料袋，一周后去掉；④移栽后每半個月澆一次稀釋500倍的MS營養(yǎng)液(不含蔗糖和瓊脂的MS培養(yǎng)基)。以上幾點均可提高移栽苗成活率。
[0029]實施例8
1、選擇在7月中旬(植株抽蕾期)連續(xù)3天無雨后對外植體進行采集，可有效降低外植體的污染率。將采集到的.外植(花萱草腋芽)體用洗衣粉水清洗干凈，再放在流水下沖洗30min，在超凈工作臺上用75%酒精消毒5_30s，再用無菌水沖洗3_5遍，之后用0.1% (質(zhì)量百分比)升汞消毒5-20min ;其中，最佳的外植體滅菌方法:75%酒精10s+0.1%(質(zhì)量百分比)升萊消毒12min。
[0030]2、將消毒后的外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基(實施例2)上，送入培養(yǎng)室進行無菌培養(yǎng)，培養(yǎng)室的條件為溫度:25土1°C，光照強度:15001x-20001x，光照時間:12h/d。在此過程中根據(jù)外植體誘導(dǎo)和分化情況帥選出最適宜的外植體種類和培養(yǎng)基配方。將芽分化明顯的接種塊轉(zhuǎn)移到繼代增殖培養(yǎng)基(實施例3)上，經(jīng)過30d培養(yǎng)即可增殖1-2倍，得到分化苗。
[0031]3、為了提高了分化苗的質(zhì)量，提高移栽的成活率，將生長較弱的分化苗接種到壯苗培養(yǎng)基(實施例4)上進行壯苗培養(yǎng)，經(jīng)過10-20d的培養(yǎng)即可使瓶苗變粗壯。然后，將健壯的瓶苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基(實施例5)上進行生根培養(yǎng)。
[0032]4、生根培養(yǎng)后要先經(jīng)過煉苗的過程，然后移栽，才能適應(yīng)露地栽培的要求。把生根后的組培苗移出培養(yǎng)瓶，借助毛刷洗凈根部的培養(yǎng)基，放在盛滿水的小盒中，借助橡皮筋固定小苗，水面高度以不超過根部為宜，置于煉苗室鍛煉3-5天，上罩透明塑料布。然后移栽到腐殖土:珍珠巖=1: I的基質(zhì)中。移栽成活率達96%左右。
[0033]移栽過程中要注意幾點，①借助鑷子將小苗根部的土捏實，讓根與基質(zhì)充分接觸；②移栽過程中，最好將2-3棵小苗種植在一個穴洞內(nèi)；③移栽后的小苗要套上帶孔的透明塑料袋，一周后去掉；④移栽后每半個月澆一次稀釋500倍的MS營養(yǎng)液(不含蔗糖和瓊脂的MS培養(yǎng)基)。以上幾點均 可提高移栽苗成活率。
【權(quán)利要求】
1.一種多倍體大花萱草組培方法，其特征在于包括以下步驟: 1)在植株抽蕾期，采集健壯的無病蟲害的嫩葉、生長點、腋芽、花蕾、花瓣、花梗，作為組織培養(yǎng)的外植體，將采集到的外植體用洗衣粉水清洗干凈，再放在流水下沖洗30min，在超凈工作臺上用75%酒精消毒5-30s，再用無菌水沖洗3-5遍，之后用0.1% (質(zhì)量百分比)升萊消毒5-20min ； 2)將消毒后的外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，送入培養(yǎng)室進行無菌培養(yǎng)，培養(yǎng)基為MS1L+NAA 0.2mg/L+6-BA 0.5mg/L+2, 4_D 0.7mg/L+ 鹿糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ;將分化后的外植體轉(zhuǎn)移到繼代增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，得到分化苗，繼代培養(yǎng)基為MS+NAA 0.2mg/L+6-BA 2.0mg/L+ 鹿糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ； 3)將分化苗接種到壯苗培養(yǎng)基上進行壯苗培養(yǎng)，壯苗培養(yǎng)基為MS1L+6-BA 0.2 mg/L+IBA 0.04mg/L+馬鈴薯20g/L+蔗糖3 mg/L、瓊脂9 mg/L ;然后，將健壯的瓶苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為MS 1L+NAA 0.02mg/L+蔗糖3 mg/L、瓊脂9 mg/L ； 4)把生根后的組培苗移出培養(yǎng)瓶，借助毛刷洗凈根部的培養(yǎng)基，將根部置于盛滿水的容器中，置于煉苗室鍛煉3-5天，然后移栽到腐殖土:珍珠巖=1:1的基質(zhì)中，得到成品； 所述MS培養(yǎng)基的工作液濃度單位為mg/L，含:
大量元素:NH4NO3 1650、KNO3 1900、CaCl2.2H20 440、MgSO4.7H20 370、KH2PO4 170 ；
微量元素:KI 0.83、H3BO3 6.2、MnSO4.4H20 22.3、ZnSO4.7H20 8.6、Na2MnO4.2H200.25、CuSO4.5H20 0.0025、CoCl2.6H20 0.0025 ;鐵鹽=FeSO4.7H20 27.8、Na2-EDTA.2H2037.3 ； 肌醇100、鹽酸0.5、鹽酸吡哆醇0.5、鹽酸硫胺素0.1、甘氨酸2.0。
2.一種多倍體大花萱草組培用誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于是由以下原料制成的: MS 1L、萘乙酸0.2mg/L、6-節(jié)基嘌呤0.5mg/L、2, 4-二氯苯氧乙酸0.7mg/L、鹿糖3 mg/L、瓊脂 9 mg/L 巾!1值5.8-6.0。
3.一種多倍體大花萱草組培用繼代增殖培養(yǎng)基:其特征在于是由以下原料制成的: MS 1L、萘乙酸 0.2mg/L、6-節(jié)基嘌呤 2.0mg/L、鹿糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ；pH 值5.8-6.00
4.一種多倍體大花萱草組培用壯苗培養(yǎng)基；其特征在于是由以下原料制成的: MS 11 、6-芐基嘌呤0.2 mg/L、吲哚-3-丁酸 0.04mg/L、馬鈴薯 20g/L、蔗糖 3 mg/L、瓊月旨 9 mg/L 巾!1值5.8-6.0。
5.一種多倍體大花萱草組培用生根培養(yǎng)基；其特征在于是由以下原料制成的:
MS 1L、萘乙酸 0.02mg/L、蔗糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ；pH 值 5.8-6.0。
【文檔編號】A01H4/00GK103430850SQ201310405775
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年9月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月9日
【發(fā)明者】溫娜, 武術(shù)杰, 王麗蘭, 高志新, 劉亞亮, 尹立輝, 席應(yīng)琪, 孟慶明, 譚首創(chuàng) 申請人:中邦園林股份有限公司, 長春大學(xué)