一種槲蕨的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種槲蕨的快速繁殖方法，包括槲蕨無菌葉片的獲得，槲蕨愈傷組織誘導(dǎo)，愈傷組織分化，四倍體的誘導(dǎo)，煉苗移栽等步驟，可以在短期內(nèi)提供大量的中藥原料，并能有效降低生產(chǎn)成本，并可人工控制其繁殖數(shù)量和培養(yǎng)周期。
【專利說明】一種槲蕨的快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)的快繁方法，包括外植體的消毒，愈傷組織的誘導(dǎo)，增殖，分化，生根培養(yǎng)等，屬于植物【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]懈厳(Drynarieafortunei (Kunze) J.Sm)是厳類植物懈厳科(Drynariaceae)槲蕨屬(Drynarie)的常緑多年生草本植物，別名骨碎補(bǔ)、石巖姜，分布于中南、西南地區(qū)及臺(tái)灣、福建、浙江等省，常附生在巖壁、石壁、樹干上，喜潮濕、通風(fēng)、稍遮蔽之環(huán)境。在醫(yī)藥上，槲蕨屬植物具有強(qiáng)筋骨、防止鏈霉素、抗卡那霉素的毒副作用、降血脂、強(qiáng)心、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜，抗腫瘤、免疫促進(jìn)、抗凝血、抗補(bǔ)體、抗?jié)?、抗病毒和降血糖等作用。多生長在較光禿的樹干或巖石上，小生境郁閉度較低，且附生的生態(tài)學(xué)意義就在于獲得更多的光線，這些現(xiàn)象似乎說明槲蕨應(yīng)是ー種喜光植物。作為ー種應(yīng)用歷史悠久、療效顯著、藥理研究比較透徹的藥材，槲蕨的市場需求量是可觀的。但對于野生資源保護(hù)方面還未見有系統(tǒng)的報(bào)道。發(fā)展槲蕨的人工栽培和組織培養(yǎng)，是資源保護(hù)與持續(xù)利用的迫切之需。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種槲蕨快速繁殖方法的制備，由該方法可以為大規(guī)模種植槲蕨提供種苗，可以保護(hù)野生種苗的品質(zhì)和遺傳的穩(wěn)定性。
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下方案來實(shí)現(xiàn)的:
一種槲蕨的快速繁殖方法，包括槲蕨無菌葉片的獲得，槲蕨愈傷組織誘導(dǎo)，愈傷組織分化，四倍體的誘導(dǎo)，煉苗移栽等步驟，其技術(shù)方案如下:野外采取槲蕨幼嫩的葉片，流水沖洗30分鐘，0.1%的次氯酸鈉lOmin，流水沖洗4_5次，滅菌后的葉片接種到MS+2ip0.8mg/L+2,4，5-T2mg/l+100mg/l半胱.氨酸，培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，取誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入到MS+IAA0.2mg/L+KTl.0mg/L+YE培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的分化誘導(dǎo)，光照強(qiáng)度20001x，溫度25°C，光期12h，暗期12h，濕度60%-70%，培養(yǎng)數(shù)周后，在培養(yǎng)基中加入秋水仙素進(jìn)行四倍體誘導(dǎo)，四倍體誘導(dǎo)之后加入MS培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度40001x，溫度25°C，光期14h，暗期10h，濕度60%-70%，試管苗長約5cm時(shí)進(jìn)行煉苗移栽，進(jìn)而進(jìn)行大田大規(guī)模栽種。
[0005]采用本發(fā)明調(diào)控出來的槲蕨試管苗長勢好，成活率94%，周期短，操作可控，可進(jìn)行野外大規(guī)模栽種或推廣應(yīng)用。
[0006]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明作進(jìn)ー步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
【具體實(shí)施方式】
[0007]實(shí)施例1
一種槲蕨的快速繁殖方法，包括槲蕨無菌葉片的獲得，槲蕨愈傷組織誘導(dǎo)，愈傷組織分化，四倍體的誘導(dǎo)，煉苗移栽等步驟，其技術(shù)方案如下:野外采取槲蕨幼嫩的葉片，流水沖洗30分鐘，0.1%的次氯酸鈉lOmin，流水沖洗4_5次，滅菌后的葉片接種到MS+2ip0.5mg/L+2,
4.5-Tlmg/l+100mg/l半胱氨酸，培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，取誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入到MS+IAA0.lmg/L+KT0.5mg/L+YE培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的分化誘導(dǎo)，光照強(qiáng)度20001x，溫度25°C，光期12h，暗期12h，濕度60%-70%，培養(yǎng)數(shù)周后，在培養(yǎng)基中加入秋水仙素進(jìn)行四倍體誘導(dǎo)，四倍體誘導(dǎo)之后加入MS培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度40001x，溫度25°C，光期14h，暗期10h，濕度60%-70%，試管苗長約5cm時(shí)進(jìn)行煉苗移栽，進(jìn)而進(jìn)行大田大規(guī)模栽種，成活率85%。
[0008]實(shí)施例2
一種槲蕨的快速繁殖方法，包括槲蕨無菌葉片的獲得，槲蕨愈傷組織誘導(dǎo)，愈傷組織分化，四倍體的誘導(dǎo)，煉苗移栽等步驟，其技術(shù)方案如下:野外采取槲蕨幼嫩的葉片，流水沖洗30分鐘，0.1%的次氯酸 鈉lOmin，流水沖洗4_5次，滅菌后的葉片接種到MS+2iplmg/L+2，
4.5-T2mg/l+100mg/l半胱氨酸，培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，取誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入到MS+IAA0.3mg/L+KTlmg/L+YE培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的分化誘導(dǎo)，光照強(qiáng)度20001x，溫度25°C，光期12h，暗期12h，濕度60%-70%，培養(yǎng)數(shù)周后，在培養(yǎng)基中加入秋水仙素進(jìn)行四倍體誘導(dǎo)，四倍體誘導(dǎo)之后加入MS培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度40001x，溫度25°C，光期14h，暗期10h，濕度60%-70%，試管苗長約5cm時(shí)進(jìn)行煉苗移栽，進(jìn)而進(jìn)行大田大規(guī)模栽種，成活率87%。
[0009]實(shí)施例3
一種槲蕨的快速繁殖方法，包括槲蕨無菌葉片的獲得，槲蕨愈傷組織誘導(dǎo)，愈傷組織分化，四倍體的誘導(dǎo)，煉苗移栽等步驟，其技術(shù)方案如下:野外采取槲蕨幼嫩的葉片，流水沖洗30分鐘，0.1%的次氯酸鈉lOmin，流水沖洗4_5次，滅菌后的葉片接種到MS+2ip0.5mg/L+2,
4.5-T2mg/l+100mg/l半胱氨酸，培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，取誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入到MS+IAA0.2mg/L+KT0.5mg/L+YE培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的分化誘導(dǎo)，光照強(qiáng)度20001x，溫度25°C，光期12h，暗期12h，濕度60%-70%，培養(yǎng)數(shù)周后，在培養(yǎng)基中加入秋水仙素進(jìn)行四倍體誘導(dǎo)，四倍體誘導(dǎo)之后加入MS培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度40001x，溫度25°C，光期14h，暗期10h，濕度60%-70%，試管苗長約5cm時(shí)進(jìn)行煉苗移栽，進(jìn)而進(jìn)行大田大規(guī)模栽種，成活率90%。
[0010]實(shí)施例4
一種槲蕨的快速繁殖方法，包括槲蕨無菌葉片的獲得，槲蕨愈傷組織誘導(dǎo)，愈傷組織分化，四倍體的誘導(dǎo)，煉苗移栽等步驟，其技術(shù)方案如下:野外采取槲蕨幼嫩的葉片，流水沖洗30分鐘，0.1%的次氯酸鈉lOmin，流水沖洗4_5次，滅菌后的葉片接種到MS+2iplmg/L+2，4，5-Tlmg/l+100mg/l半胱氨酸，培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，取誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入到MS+IAA0.3mg/L+KT0.8mg/L+YE培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的分化誘導(dǎo)，光照強(qiáng)度20001x，溫度25°C，光期12h，暗期12h，濕度60%-70%，培養(yǎng)數(shù)周后，在培養(yǎng)基中加入秋水仙素進(jìn)行四倍體誘導(dǎo)，四倍體誘導(dǎo)之后加入MS培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度40001x，溫度25°C，光期14h，暗期10h，濕度60%-70%，試管苗長約5cm時(shí)進(jìn)行煉苗移栽，進(jìn)而進(jìn)行大田大規(guī)模栽種，成活率92%。
【權(quán)利要求】
1.一種槲蕨的快速繁殖方法，其步驟如下: (1)外植體的處理:采用常規(guī)的組織培養(yǎng)方法對槲蕨葉片進(jìn)行消毒處理； (2)誘導(dǎo)培養(yǎng):取步驟(I)獲得的無菌葉片接種到MS+2ip0.8mg/L+2，4，5-T2mg/l+100mg/l半胱氨酸，培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)； (3)分化培養(yǎng):取步驟(2)誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入到MS+IAA0.lmg/L+KT0.5mg/L+YE培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的分化誘導(dǎo)； (4)四倍體的誘導(dǎo):取步驟(3)分化的愈傷組織，在培養(yǎng)基中加入秋水仙素進(jìn)行四倍體誘導(dǎo)，四倍體誘導(dǎo)之后加入MS培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)； (5)煉苗移栽到大田進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于:槲蕨愈傷組織的培養(yǎng)，采用MS培養(yǎng)基，附加激素2ip0.5-lmg/L+2,4, 5-T1-2mg/1+1OOmg/1半胱氨酸,半胱氨酸使用過濾滅菌后加入培養(yǎng)基中，可以抗氧化，抑制外植體的褐變。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于:槲蕨愈傷組織誘導(dǎo)中采用的是黑暗誘導(dǎo)，溫度25°C，濕度60%-70%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于:槲蕨愈傷組織的分化采用的配方為 MS+IAA0.1-0.3mg/L+KT0.5-1.0mg/L+YE，光照強(qiáng)度 20001x，溫度 25°C，光期 12h，暗期 12h，濕度 60%-70%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于:槲蕨愈傷組織的分化過程中使用YE也可以促進(jìn)愈傷組織的増殖。.
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于:槲蕨四倍體的誘導(dǎo)過程中，在培養(yǎng)基中加入秋水仙素，可以獲得生長粗壯的槲蕨品種。
7.一種槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于:四倍體誘導(dǎo)之后加入MS培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度40001x，溫度25°C，光期14h，暗期10h，濕度60%_70%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于:煉苗移栽過程中，去掉封ロ膜，敞ロ放置在培養(yǎng)室培養(yǎng)一周，然后使用無菌沙質(zhì)黃土在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩周，光照強(qiáng)度40001x，溫度28°C，光期14h，暗期10h，濕度60%_70%。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于:從光照培養(yǎng)基中取出的小苗，洗取根部的培養(yǎng)基，定植于鋪好的苗床上，移栽苗床的鋪設(shè):40%黃土 +60%蛭石，厚度為25cm，栽種約1.5cm深，蓋上薄膜和陰網(wǎng)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于:在苗床上培養(yǎng)一周后去掉薄膜，兩周后去掉陰網(wǎng)，組培苗移栽30天以上就可以移栽大田或推廣應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103430853SQ201310423480
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年9月17日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月17日
【發(fā)明者】楊存 申請人:南京通澤農(nóng)業(yè)科技有限公司