竹黃孢子的保藏方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種竹黃孢子的保藏方法，將竹黃孢子刮取至干凈的牛皮紙袋中待處理；將裝有竹黃孢子的牛皮紙袋放入4℃冰箱，保存7天后取出，獲得干燥的孢子塊；用干凈的玻璃瓶裝入菜油，將裝有菜油的玻璃瓶放入蒸鍋蒸1小時(shí)，取出后自然冷卻至室溫備用；將得到的干燥孢子塊放入處理好的菜油中進(jìn)行保存；下一年竹黃接種時(shí)期，將保存竹黃孢子的菜油倒掉，加入涼開水洗滌孢子塊1～2次，然后用涼開水浸泡2小時(shí)便可得到竹黃孢子液。本發(fā)明既可以使竹黃孢子順利度過野外的不良環(huán)境，有效保證竹黃孢子的活力，又能克服常規(guī)菌種保藏方法不適合竹黃孢子保藏的問題，從而為竹黃人工栽培提供種源保障，解決竹黃人工栽培推廣中接種體保藏的關(guān)鍵技術(shù)問題。
【專利說明】竹黃孢子的保藏方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是一種竹黃孢子的保藏方法。 【背景技術(shù)】
[0002]竹黃Aaffi/wsicoJa)又名天竹花、淡竹花、竹花、赤團(tuán)子、竹赤團(tuán)子、竹苗、竹赤斑菌、淡菊花、竹參、竹三七、血三七等，是長在竹子枝條上的一種藥用真菌的子座。其主要成分竹紅菌素是竹黃中紅色色素部分，是多種花醌(Perylenequinones; PQ)類衍生物的混合物，是一種新型的光敏劑，在我國應(yīng)用于臨床治療皮膚病、胃病和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，竹紅菌素的藥用價(jià)值主要體現(xiàn)在抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗腫瘤等方面，尤其是近年來的研究已經(jīng)體現(xiàn)出它在治療腫瘤等方面的優(yōu)良特性。我國已經(jīng)研制的成藥有:真菌竹黃膠囊、竹紅菌素軟膏和竹黃菌顆粒劑，在治療婦科病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和牛皮癬等方面表現(xiàn)出較好的臨床療效。
[0003]竹黃的生長季節(jié)一般為4月下旬到6月。通常情況下，竹黃子座每年4月底開始出現(xiàn)在寄主竹子上，隨后逐漸膨大，在子座膨大過程中，大量的分生孢子產(chǎn)生并被釋放出來。
[0004]由于竹黃孢子只在自然條件下產(chǎn)生，不能通過實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)獲得，且自然存活率低。通過實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的甘油保存法，_20°C保存2月后竹黃孢子的萌發(fā)率為17%，-20°C保存I年后竹黃孢子的萌發(fā)率僅為3%。
[0005]竹黃菌在實(shí)驗(yàn)條件下很容易被分離出來并獲得純培養(yǎng)，但是至今還未發(fā)現(xiàn)該真菌在培養(yǎng)條件下可以產(chǎn)生分生孢子或子囊孢子，甚至在各種誘導(dǎo)條件下也未觀察到孢子產(chǎn)生。近年來，竹黃的人工栽培已獲得成功(專利受理號:201310056130.2)，但是，目前的接種技術(shù)還只限于采用竹黃孢子進(jìn)行接種，人工栽培竹黃的種源只能依靠野外產(chǎn)生的竹黃孢子。因次，竹黃孢子的收集和保藏對于竹黃人工栽培種源生產(chǎn)和擴(kuò)大栽培具有很大的影響。竹黃人工栽培的擴(kuò)大和推廣亟需找到簡單易行、既能保證孢子萌發(fā)率，又能常規(guī)推廣的竹黃孢子保藏方法。
[0006]常見的真菌孢子保藏方法有低溫干燥保存、石蠟油保存、甘油低溫保存等，但這些方法都限于在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。針對竹黃人工栽培所需孢子接種材料的特點(diǎn)及推廣需求，亟需解決竹黃孢子的保藏問題，以確保竹黃人工栽培的種源和擴(kuò)大推廣栽培。
[0007]微生物保藏的最終目的是保持菌株的純度、活性、基因信息的完整性、避免菌株變異和降低退化。適用于真菌的保藏技術(shù)方法主要分為三類:
(I)讓真菌連續(xù)生長的保藏技術(shù)，特點(diǎn)是不斷地將菌株移植在新鮮的培養(yǎng)基上，并在合適的條件下生長，隨后至于一個(gè)低溫的環(huán)境中，一般是4°c~10°C，這類保藏技術(shù)主要包括斜面移植、油管保藏和蒸餾水保藏等方法。
[0008](2)利用干燥環(huán)境保藏菌株的休眠體，如分生孢子、厚垣孢子等，干燥選用的基質(zhì)可以是空氣、硅膠、土壤、沙子等。
[0009](3)利用抑制菌株代謝活性的辦法達(dá)到長期保藏，一般是通過脫水降低細(xì)胞內(nèi)水分或低溫冷凍，此過程關(guān)鍵環(huán)節(jié)是避免和降低冰晶細(xì)胞造成的傷害，這類保藏工藝包括冷凍干燥法、低溫凍結(jié)和液氮保藏法等。
[0010]以上方法的保藏效果不僅存在菌株水平上的差異性，同時(shí)只適合于實(shí)驗(yàn)室菌種保存，尚不能針對竹黃這一真菌種類作為栽培推廣過程的接種體保藏工藝技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明的目的是:提供一種竹黃孢子的保藏方法，它能有效縮短輸電線路的等效長度，實(shí)現(xiàn)在相同融冰電壓下對更長距離的輸電線路進(jìn)行融冰操作，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0012]本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的:竹黃孢子的保藏方法，包括以下步驟:
(1)竹黃孢子的收集:在竹黃生長中期，用經(jīng)過消毒處理的工具將竹黃孢子刮取至干凈的牛皮紙袋中待處理；
(2)孢子預(yù)處理:將裝有竹黃孢子的牛皮紙袋放入4°C冰箱，保存7天后取出，獲得干燥的孢子塊；
(3)菜油預(yù)處理:用干凈的玻璃瓶裝入菜油，將裝有菜油的玻璃瓶放入蒸鍋蒸I小時(shí)，取出后自然冷卻至室溫備用；
(4)竹黃孢子保存:將步驟(2)所得到的干燥孢子塊放入步驟(3)處理好的菜油中進(jìn)行保存；菜油體積為孢子塊體積的5~10倍，存放竹黃孢子塊的容器放到避光處常溫保存；
(5)取用竹黃孢子:下一年竹黃接種時(shí)期，將保存竹黃孢子的菜油倒掉，加入涼開水洗滌孢子塊I~2次，然后用涼開水浸泡2小時(shí)便可得到竹黃孢子液。
[0013]步驟(I)中所述的經(jīng)過消毒處理的工具是，用質(zhì)量百分比濃度為75%醫(yī)用酒精浸泡消毒的鑷子或竹簽。
[0014]由于采用了上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明將收集的竹黃孢子經(jīng)過簡單干燥處理后采用菜油進(jìn)行保存，I年后孢子萌發(fā)率大于40%，結(jié)果既可以使竹黃孢子順利度過野外的不良環(huán)境，有效保證竹黃孢子的活力，又能克服常規(guī)菌種保藏方法不適合竹黃孢子保藏的問題，從而為竹黃人工栽培提供種源保障，解決竹黃人工栽培推廣中接種體保藏的關(guān)鍵技術(shù)問題。通過對2012年收集的竹黃孢子進(jìn)行該方法保存，并于2013年在貴州赤水實(shí)施接種實(shí)驗(yàn)，已獲得竹黃子座，證明了本發(fā)明的有效性。
【具體實(shí)施方式】
[0015]本發(fā)明的實(shí)施例:竹黃孢子的保藏方法，包括以下步驟:
(1)竹黃孢子的收集:在竹黃生長中期，用質(zhì)量百分比濃度為75%醫(yī)用酒精浸泡消毒的鑷子將竹黃孢子刮取至干凈的牛皮紙袋中待處理；
(2)孢子預(yù)處理:將裝有竹黃孢子的牛皮紙袋放入4°C冰箱，保存7天后取出，獲得干燥的孢子塊；
(3)菜油預(yù)處理:用干凈的玻璃瓶裝入菜油，將裝有菜油的玻璃瓶放入蒸鍋蒸I小時(shí)，取出后自然冷卻至室溫備用；
(4)竹黃孢子保存:將步驟(2)所得到的干燥孢子塊放入步驟(3)處理好的菜油中進(jìn)行保存；菜油體積為孢子塊體積的5~10倍，存放竹黃孢子塊的容器放到避光處常溫保存；
(5)取用竹黃孢子:下一年竹黃接種時(shí)期，將保存竹黃孢子的菜油倒掉，加入涼開水洗滌孢子塊1~2次，然后用涼開水浸泡2小時(shí)便可得到竹黃孢子液。
【權(quán)利要求】
1.一種竹黃孢子的保藏方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)竹黃孢子的收集:在竹黃生長中期，用經(jīng)過消毒處理的工具將竹黃孢子刮取至干凈的牛皮紙袋中待處理； (2)孢子預(yù)處理:將裝有竹黃孢子的牛皮紙袋放入4°C冰箱，保存7天后取出，獲得干燥的孢子塊； (3)菜油預(yù)處理:用干凈的玻璃瓶裝入菜油，將裝有菜油的玻璃瓶放入蒸鍋蒸I小時(shí)，取出后自然冷卻至室溫備用； (4)竹黃孢子保存:將步驟(2)所得到的干燥孢子塊放入步驟(3)處理好的菜油中進(jìn)行保存；菜油體積為孢子塊體積的5~10倍，存放竹黃孢子塊的容器放到避光處常溫保存； (5)取用竹黃孢子:下一年竹黃接種時(shí)期，將保存竹黃孢子的菜油倒掉，加入涼開水洗滌孢子塊I~2次，然后用涼開水浸泡2小時(shí)便可得到竹黃孢子液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的竹黃孢子的保藏方法，其特征在于:步驟(I)中所述的經(jīng)過消毒處理的工具是，用質(zhì)量 百分比濃度為75%醫(yī)用酒精浸泡消毒的鑷子或竹簽。
【文檔編號】A01G1/04GK103461007SQ201310467772
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年10月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月10日
【發(fā)明者】劉永翔, 劉作易, 周德群, 陳藝萌, 朱英, 黃永會(huì) 申請人:貴州省生物技術(shù)研究所