帝王花快速繁殖的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及帝王花快速繁殖的方法，是一種以無(wú)菌播種獲得的實(shí)生苗，取其上胚軸以上部分作為誘導(dǎo)材料，進(jìn)行快速繁育苗木的方法，首先去除帝王花種子表面的黑色絨毛，然后，在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行種子消毒，將包被在種子表面的表皮去除，取出種胚，接種在1/2MS+蔗糖25～35g/L+0.6～0.8%瓊脂粉的培養(yǎng)基中，PH5.8～6.2，進(jìn)行光照培養(yǎng)28～35天，獲得無(wú)菌實(shí)生苗；切取所述的無(wú)菌實(shí)生苗上胚軸以上部分，接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)不定芽；將產(chǎn)生的不定芽分割成2～3個(gè)芽為一叢，進(jìn)行增殖培養(yǎng)獲得生成叢芽，將所述的叢芽中2~3cm高的芽切下，接入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，獲得的組培生根苗進(jìn)行移栽，生根率達(dá)90%。
【專(zhuān)利說(shuō)明】帝王花快速繁殖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及帝王花快速繁殖的方法，是一種以無(wú)菌播種獲得的實(shí)生苗，取其頂芽作為誘導(dǎo)材料，進(jìn)行快速繁育苗木的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]帝王花為山龍眼科(Proteaceae)普洛蒂亞屬(Protea)多年生、多花莖常綠灌木，又名菩提花，俗稱(chēng)木百合花或龍眼花，原產(chǎn)南非，是南非共和國(guó)的國(guó)花。普洛蒂亞屬有大約130多個(gè)種和品種，其中帝王花是其中最知名的一種。因?yàn)槠渚薮蟮幕惓Ｃ利惖纳屎蛢?yōu)雅的造型而成為世界名貴花卉。
[0003]帝王花枝葉茂盛，花朵大，苞葉和花瓣挺拔，色彩異常美麗，觀賞期長(zhǎng)，適合于盆栽觀賞。目前在園林裝飾樹(shù)種方面越來(lái)越受到大家的歡迎。帝王花植株高約I米?；ㄇ蛑睆?2-30厘米，一個(gè)生長(zhǎng)季，一株帝王花能夠開(kāi)6-10個(gè)花球，個(gè)別品種甚至能達(dá)到40個(gè)花球。帝王花既是優(yōu)良的鮮切花，也適合制作干花。作為鮮切花可以擺放很長(zhǎng)時(shí)間，所以受到世界上越來(lái)越多人的歡迎和喜愛(ài)。市場(chǎng)潛力巨大。帝王花喜溫暖，稍干燥和陽(yáng)光充足的環(huán)境，不耐寒，土壤宜爽水，忌積水，適宜疏松和排水良好的酸性土壤。冬季不低于7度，少數(shù)品種可耐O度左右的低溫。幼苗的土壤需排水好。在生長(zhǎng)期中，夏季需涼爽干燥氣候，烈日時(shí)適當(dāng)遮蔭，適宜生長(zhǎng)溫度為27度，冬季需要溫暖、充足的陽(yáng)光及稍高的空氣濕度環(huán)境。
[0004]帝王花適應(yīng)能力相當(dāng)廣泛，在不同的氣候條件和環(huán)境因素下，帝王花的花型、花色等很多性狀發(fā)生巨大變化，所以在世界各地都得到了廣泛的種植。在國(guó)內(nèi)，近年來(lái)帝王花只偶爾在逢年過(guò)節(jié)時(shí)，在一些大城市的鮮花市場(chǎng)有“驚艷一瞥”，而且大多是從國(guó)外進(jìn)口，價(jià)格昂貴。如果能夠使這世界花卉進(jìn)入尋常百姓家庭，潛在的市場(chǎng)非常巨大。此外，南非本身產(chǎn)量也非常有限，國(guó)際市場(chǎng)需求又很大，而中國(guó)和南非氣候又非?；パa(bǔ)，所以中國(guó)若能成功種植，將大大滿(mǎn)足國(guó)際市場(chǎng)需求，同時(shí)也很好的提高了種植戶(hù)的經(jīng)濟(jì)效益。而要成功種植帝王花，首先要有穩(wěn)定的種苗供應(yīng)。
`[0005]帝王花通常采用播種繁殖，種子大多從國(guó)外進(jìn)口，價(jià)格昂貴。種子種植發(fā)芽需要1-3個(gè)月時(shí)間，不通過(guò)處理，需要發(fā)芽的時(shí)間更長(zhǎng)，而且整體出苗率很低，只有40%左右。常規(guī)的組織培養(yǎng)，采用成年帝王花植株莖桿進(jìn)行組培，帝王花屬于灌木類(lèi)，葉芽發(fā)芽困難，很容易褐化，成活率低，導(dǎo)致生產(chǎn)成本較高，也不適合推廣。常規(guī)的扦插繁殖技術(shù)成活率則更低，只有10%左右。所以如何提高帝王花的繁殖率，加快從播種到成株的速度就成為目前亟待解決的問(wèn)題。
[0006]目前常規(guī)繁殖方法主要面臨面臨下述問(wèn)題:
(1)扦插繁殖成活率；
(2)采用播種繁殖，種子價(jià)格昂貴，種子發(fā)芽的時(shí)間長(zhǎng)，而且整體出苗率低；
(3)采用成年帝王花植株嫩枝切段作為外植體進(jìn)行組培，腋芽萌發(fā)困難，誘導(dǎo)材料容易褐化，成活率低。
[0007]中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)201010608154公開(kāi)了一種王帝王花的扦插繁殖方法。選擇王帝王花母本剪取半木質(zhì)化位置以上的枝條作為插穗，保留葉片4~6枚。基質(zhì)采用泥炭和珍珠巖按體積比為4:6混合，調(diào)整pH值5.5~6.5，EC值小于0.5。用1000ppm的吲哚-3- 丁酸溶液浸插穗基部，浸泡15分鐘后立即風(fēng)干。扦插深度為插穗長(zhǎng)度的1/3~1/4。扦插后按常規(guī)技術(shù)進(jìn)行管理，待出苗后進(jìn)行大田移栽。該技術(shù)使王帝王花扦插繁殖的成活率達(dá)到90%以上，繁殖周期縮短至40~60天。得到的種苗品質(zhì)優(yōu)良，種苗壽命長(zhǎng)，后代表現(xiàn)性狀穩(wěn)定一致。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0008]本發(fā)明目的在于，提供一種成活率高，縮短成長(zhǎng)期的帝王花快速繁殖的方法。
[0009]本發(fā)明目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
一種帝王花快速繁殖的方法，以無(wú)菌播種獲得的實(shí)生苗，，取其上胚軸以上部分作為誘導(dǎo)材料，進(jìn)行快速繁育苗木，依序按下列步驟進(jìn)行操作:
第一步:首先去除帝王花種子表面的黑色絨毛，然后在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行種子消毒。將包被在種子表面的表皮去除。取出種胚，接種在1/2MS+蔗糖25~35g/L+0.6^0.8%瓊脂粉的培養(yǎng)基中，PH5.8~6.2，進(jìn)行光照培養(yǎng)28~35天，獲得無(wú)菌實(shí)生苗；
第二步:切取無(wú)菌實(shí)生苗上胚軸以上部分，接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 MS+TDZ0.1~0.5mg/L+IBA0.01~0.lmg/L+ 蔗糖 25~35g/L+0.6~(λ 8% 瓊脂粉，ΡΗ5.8~6.2，培養(yǎng)30-45天后外植體基部長(zhǎng)出不定芽；
第三步:將產(chǎn)生的不定芽分割成2-3個(gè)芽為一叢，轉(zhuǎn)入芽增殖培養(yǎng)基中，繼續(xù)進(jìn)行增殖培養(yǎng)，所述的增殖培養(yǎng)基為MS+BA0.5~1.0mg/L+IBA0.01~0.lmg/L+蔗糖25~35g/L+0.6~0.8%瓊脂粉，PH5.8~6.2，生成叢芽；
第四步:將叢芽中2~3cm高的芽切下，接入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為1/2MS+IAA0.1~1.0mg/L蔗糖15~25g/L+0.6~0.8%瓊脂粉，經(jīng)15~20天開(kāi)始生根，培養(yǎng)28~35天獲得組培生根苗，進(jìn)行移栽。
[0010]在上述方案基礎(chǔ)上，所述的種子消毒方法為:在清水中加入少量洗衣粉，用洗衣粉水將種子表面的污垢清洗干凈，然后再超凈工作臺(tái)上，將清洗好的種子用70-75%的酒精浸泡20-30秒鐘,然后用濃度為0.05%升汞消毒10-15分鐘,再用無(wú)菌水沖洗5_6次,完畢后用無(wú)菌紗布吸干種子表面多余的水分。
[0011]在上述方案基礎(chǔ)上，所述光照培養(yǎng)的條件為:培養(yǎng)溫度25±2°C、光照強(qiáng)度為150(T20001ux，光照時(shí)間每天10~14小時(shí)。
[0012]所述的瓊脂粉由卡拉膠替代。
[0013]本發(fā)明優(yōu)越性在于:采用帝王花種子無(wú)菌播種獲得的實(shí)生苗，取其子葉以上部分作為誘導(dǎo)不定芽的材料，并經(jīng)過(guò)不斷增殖，最終獲得大量組培苗木?？朔爽F(xiàn)有技術(shù)的一些缺陷，為帝王花繁育提供了一種新途徑。
【具體實(shí)施方式】
[0014]一種帝王花快速繁殖的方法，依序按下列步驟進(jìn)行操作:
第一步:首先去除帝王花種子表面的黑色絨毛，然后在超凈工作臺(tái)上將種子浸泡在75%的酒精中30秒，之后用0.05%升汞消毒12分鐘，再用無(wú)菌水沖洗6遍，最后用無(wú)菌紗布吸干多余的水分；將包被在種子表面的表皮去除。取出種胚，接種在1/2MS+蔗糖30g/L+0.6~0.8%瓊脂粉的培養(yǎng)基中，PH5.8~6.2，進(jìn)行光照培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度25±2°C、光照強(qiáng)度為150(T20001ux，光照時(shí)間每天12小時(shí)，培養(yǎng)I個(gè)月，獲得無(wú)菌實(shí)生苗；
第二步:切取無(wú)菌實(shí)生苗上胚軸以上部分，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+TDZ0.1-0.5mg/L+IBA0.θ1-θ.lmg/L+ 蔗糖 25~35g/L+0.6~0.8% 卡拉膠，pΗ5.8~6.2，進(jìn)行光照培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度25±2°C、光照強(qiáng)度為150(T20001ux，光照時(shí)間每天12小時(shí)，培養(yǎng)40天產(chǎn)生不定芽；
第三步:將不定芽分割成2-3個(gè)芽為一叢，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基進(jìn)行續(xù)代增殖培養(yǎng)，所述的增殖培養(yǎng)基為 MS+BA0.5~1.0mg/L+IBA0.θ1-θ.lmg/L+ 蔗糖 25~35g/L+0.6~0.8% 卡拉膠，PH5.8~6.2，生成組培叢芽，繼代I次，增殖比例為1:3.5 ；
第四步:將繼代增殖培養(yǎng)過(guò)程獲得的組培叢芽中2~3cm的芽切下，接入發(fā)根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，所述的培養(yǎng)基為1/2MS+IAA0.1-1.0mg/L蔗糖15~25g/L+0.6^0.8%卡拉膠，PH5.8~6.2，經(jīng)15~20天生根，生根率90%，一個(gè)月后獲得組培生根苗，即可移栽。
【權(quán)利要求】
1.一種帝王花快速繁殖的方法，以無(wú)菌播種獲得的實(shí)生苗，取其上胚軸以上部分作為誘導(dǎo)材料，進(jìn)行快速繁育苗木，其特征在于:依序按下列步驟進(jìn)行操作: 第一步:首先去除帝王花種子表面的黑色絨毛，然后，在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行種子消毒，將包被在種子表面的表皮去除，取出種胚，接種在1/2MS+蔗糖25~35g/L+0.6~0.8%瓊脂粉的培養(yǎng)基中，PH5.8~6.2，進(jìn)行光照培養(yǎng)28~35天，獲得無(wú)菌實(shí)生苗； 第二步:切取所述的無(wú)菌實(shí)生苗上胚軸以上部分，接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+TDZ0.1~0.5mg/L+IBA0.01~0.lmg/L+蔗糖25~35g/L+0.6~0.8%瓊脂粉，PH5.8~6.2，培養(yǎng)30~45天后外植體基部長(zhǎng)出不定芽； 第三步:將產(chǎn)生的不定芽分割成2~3個(gè)芽為一叢，轉(zhuǎn)入芽增殖培養(yǎng)基中，繼續(xù)進(jìn)行增殖培養(yǎng)，所述的增殖培養(yǎng)基為MS+BA0.5~1.0mg/L+IBA0.01~0.lmg/L+蔗糖25~35g/L+0.6~0.8%瓊脂粉，PH5.8~6.2，生成叢芽； 第四步:將所述的叢芽中2~3cm高的芽切下，接入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為1/2MS+IAA0.1~1.0mg/L蔗糖15~25g/L+0.6~0.8%瓊脂粉，經(jīng)15~20天開(kāi)始生根，培養(yǎng)28~35天獲得組培生根苗，進(jìn)行移栽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的帝王花快速繁殖的方法，其特征在于:所述的種子消毒方法為:在清水中加入少量洗衣粉，用洗衣粉水將種子表面的污垢清洗干凈，在超凈工作臺(tái)上將清洗好的種子用70~75%的酒精浸泡20~30秒鐘，然后用濃度為0.05%升汞消毒10~15分鐘，再用無(wú)菌水沖洗5~6 次，完畢后用無(wú)菌紗布吸干種子表面多余的水分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的帝王花快速繁殖的方法，其特征在于:所述光照培養(yǎng)的條件為:培養(yǎng)溫度25±2°C、光照強(qiáng)度為1500~20001ux，光照時(shí)間每天10~14小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的帝王花快速繁殖的方法，其特征在于:所述的叢芽是由所述第三步生成組培叢芽，繼代I次，增殖比例為1:3.5。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的帝王花快速繁殖的方法，其特征在于:所述的瓊脂粉由卡拉膠替代。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103548698SQ201310548686
【公開(kāi)日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月8日
【發(fā)明者】劉敏德, 陳權(quán), 王秀玲 申請(qǐng)人:上海孫橋農(nóng)業(yè)科技股份有限公司, 上海孫橋現(xiàn)代農(nóng)業(yè)聯(lián)合發(fā)展有限公司, 上海孫橋農(nóng)業(yè)技術(shù)有限公司