東北紅豆杉已褐化愈傷組織的去褐化方法
【專利摘要】東北紅豆杉已褐化愈傷組織的去褐化方法。即以當(dāng)年生東北紅豆杉的幼嫩莖段或葉片為外植體在發(fā)明人研制的培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，再依據(jù)已發(fā)表文獻(xiàn)進(jìn)行東北紅豆杉愈傷組織的繼代培養(yǎng)，在繼代培養(yǎng)的過程中紅豆杉的愈傷組織極易發(fā)生褐化現(xiàn)象。在發(fā)明人研制的東北紅豆杉愈傷組織繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)可以從已褐化的愈傷組織上重新誘導(dǎo)出狀態(tài)良好的去褐化的東北紅豆杉愈傷組織。本發(fā)明不僅可以使已褐化東北紅豆杉愈傷組織去褐化，而且可以為運(yùn)用東北紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)紫杉醇提供技術(shù)支撐。
【專利說(shuō)明】東北紅豆杉已褐化愈傷組織的去褐化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種將已經(jīng)褐化的東北紅豆杉愈傷組織去褐化方法。
【背景技術(shù)】
[0002]東北紅豆杉，又名紫杉。為紅豆杉科喬木植物，是第三紀(jì)孑遺的珍貴樹種。該種不僅是材用植物，也是重要的藥用植物，其莖、枝、葉、根可入藥，主要成分含紫杉醇、紫杉?jí)A、雙萜類化合物。有抗癌功能，并有抑制糖尿病及治療心臟病的效用。此外種子還可以榨油等。由于紅豆杉屬植物生長(zhǎng)緩慢，紫杉醇含量較低，僅占枝葉干質(zhì)量的十萬(wàn)分之一左右。因此隨著全球?qū)σ吧t豆杉資源保護(hù)措施的不斷加強(qiáng)，利用野生資源生產(chǎn)紫杉醇已無(wú)可能，而現(xiàn)階段人工種植的紅豆杉資源量還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足紫杉醇生產(chǎn)的需求量。
[0003]因此紫杉醇其他途徑的開發(fā)就顯得極為重要，其中利用紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)就是一條重要的途徑，一方面可以加強(qiáng)對(duì)紅豆杉野生種質(zhì)資源及其生態(tài)環(huán)境的保護(hù)，另一方面可以滿足供需間的差距，并且細(xì)胞培養(yǎng)繁殖率高，培養(yǎng)條件易于優(yōu)化和控制，產(chǎn)物較易分離，從長(zhǎng)遠(yuǎn)來(lái)看是解決紫杉醇供需矛盾的最佳途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]在東北紅豆杉組織繼代培養(yǎng)過程中愈傷組織極易發(fā)生褐化而難于進(jìn)行繼代培養(yǎng)，為解決此問題，發(fā)明人提供了東北紅豆杉已褐化愈傷組織的去褐化方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
[0005]東北紅豆杉嫩莖或幼葉愈傷組織誘導(dǎo)、愈傷組織繼代培養(yǎng)及褐化愈傷組織的去褐化培養(yǎng)。即以當(dāng)年生東北紅豆杉的嫩莖或幼葉為外植體在發(fā)明人配制的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)出的愈傷組織在前人報(bào)道過的東北紅豆杉愈傷組織繼代培養(yǎng)集中培養(yǎng)，將繼代培養(yǎng)中褐化的東北紅豆杉愈傷組織再轉(zhuǎn)移到發(fā)明人研制的東北紅豆杉愈傷組織繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。
[0006]所述的東北紅豆杉嫩莖或幼葉愈傷組織誘導(dǎo)、繼代及褐化愈傷組織的去除方法，具體包括以下步驟:
[0007](I)外植體的消毒
[0008]取當(dāng)年生東北紅豆杉的莖段，進(jìn)行無(wú)菌化處理，獲得無(wú)菌的東北紅豆杉莖段外植體備用；
[0009](2)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0010]將步驟(1)所得的消毒的紅豆杉外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，控制溫度為18-22°C條件下暗培養(yǎng)，15天后得到誘導(dǎo)培養(yǎng)后的愈傷組織；
[0011]所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方，按照每升計(jì)算具體為:
【權(quán)利要求】
1.東北紅豆杉已褐化愈傷組織的去褐化方法，以當(dāng)年生東北紅豆杉的莖段為外植體在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，最終得到疏松、淡綠色或白色的東北紅豆杉莖段愈傷組織； 所述的優(yōu)質(zhì)東北紅豆杉莖段愈傷組織一步誘導(dǎo)方法，具體包括以下步驟: (1)外植體的消毒 取當(dāng)年生東北紅豆杉的莖段，進(jìn)行無(wú)菌化處理，獲得無(wú)菌的東北紅豆杉莖段外植體備用； (2)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng) 將步驟(1)所得的消毒的紅豆杉外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，控制溫度為18-22°C條件下暗培養(yǎng)，15天后得到誘導(dǎo)培養(yǎng)后的愈傷組織； 所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方，按照每升計(jì)算具體為:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的優(yōu)質(zhì)東北紅豆杉莖段愈傷組織一步誘導(dǎo)方法，其特征在于:步驟(1)中所述的無(wú)菌化處理具體是取當(dāng)年生東北紅豆杉莖段，流水沖洗24小時(shí)，然后依次用70-75%的酒精消毒80-120s、0.1%氯化汞消毒10_15min，無(wú)菌水沖洗數(shù)次，使用無(wú)菌濾紙將水分吸干。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103563750SQ201310564402
【公開日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2013年11月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月12日
【發(fā)明者】李春斌, 岳玉蓮, 劉寶全, 馬洪豐, 于鶴, 王德萍 申請(qǐng)人:大連民族學(xué)院, 大連市金貴緣科技開發(fā)有限公司