一種基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，屬于分子育種【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明采用分子輔助選擇的方法鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型，可以快速判定出該位點(diǎn)的基因型，生產(chǎn)基因型為II的青脛顯性白羽優(yōu)質(zhì)肉雞品系，能避免測(cè)交選育的繁瑣，縮短世代間隔，加快育種進(jìn)程，從而降低培育成本。采用本發(fā)明方法培育的青脛顯性白羽肉雞品系其肉質(zhì)細(xì)嫩，肉味鮮美，生產(chǎn)性能高，屠體上不存在有色羽殘跡，使屠體更加美觀。此外，該品系作為父本與高產(chǎn)蛋雞品種或快大肉雞品種雜交配套，可分別生產(chǎn)出高產(chǎn)型或快大型青脛顯性白羽肉雞。
【專利說(shuō)明】—種基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明具體涉及一種基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，屬于分子育種【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]我國(guó)地方雞品種資源豐富，其肉質(zhì)細(xì)嫩、肉味鮮美，但是在外觀上多表現(xiàn)為黃羽、麻羽等有色羽。對(duì)于冷鮮雞市場(chǎng)來(lái)說(shuō)，有色羽肉雞常因屠宰后羽毛不容易脫干凈而影響屠體的美觀。對(duì)于國(guó)外的快大型白羽肉雞生長(zhǎng)速度快，屠體性狀好，但是肉質(zhì)遠(yuǎn)不如我國(guó)的地方雞。因此，顯性白羽優(yōu)質(zhì)肉雞的培育中具有重要意義。
[0003]傳統(tǒng)育種中常常采用測(cè)交的方法，依據(jù)雜交后代雞的表型性狀留種。即通過(guò)測(cè)交、繁殖擴(kuò)群來(lái)淘汰隱性白羽雞群體里的顯性白純合子個(gè)體和顯性白雜合子個(gè)體。而測(cè)交繁瑣、周期長(zhǎng)，且會(huì)受到擴(kuò)群的大小的影響。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
[0006]一種基于分子輔助選 擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，包括以下步驟:
[0007](I)利用青脛肉雞品種作為父本與快大型白羽肉雞品種作為母本進(jìn)行雜交，生產(chǎn)出Fl代，選留Fl代青脛白羽公母雞；
[0008](2) Fl代自交得到F2代，選留F2代青脛白羽公母雞；
[0009](3)利用人工引入PvuII的RFLP-PCR方法測(cè)定F2代青脛白羽公母雞的基因型，選留顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的個(gè)體，淘汰顯性白羽位點(diǎn)為Ii和ii基因型的個(gè)體，得到顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的公母雞；
[0010](4)對(duì)得到的II基因型個(gè)體進(jìn)行橫交和擴(kuò)繁，按照家系選擇和個(gè)體選擇方法，提高生產(chǎn)速度和雞肉品質(zhì)，同時(shí)提純和固定青脛白羽的外觀性狀，經(jīng)過(guò)3個(gè)世代以上的選育后，得到顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的青脛顯性白羽肉雞品系。
[0011]所述步驟(1)中青脛肉雞品種為固始雞、狼山雞、淮北麻雞、淮南麻黃雞、黃山黑雞、五華雞、德化黑雞、崇仁麻雞、壽光雞、盧氏雞、景陽(yáng)雞、鄖陽(yáng)大雞、東安雞、桃源雞、瑤雞、茶花雞、和田黑雞等。
[0012]所述步驟(1)中快大型白羽肉雞品種為羅斯308、科寶、艾維茵、哈巴德、艾拔益加(AA )、海波羅、迪聞等。
[0013]所述步驟(3)中利用人工引入PvuII的RFLP-PCR方法，包括以下步驟:以包含PMEL17基因的待測(cè)雞全基因組DNA為模板，以引物對(duì)P為引物PCR擴(kuò)增PMEL17基因第十外顯子，得到擴(kuò)增片段；對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行Pvu II酶切，對(duì)酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型；
[0014]所述的引物對(duì)P為:
[0015]上游引物P-F:5，-AGTGGCACCACGCTCACCGTGGGGCAGCT-3，(如 SEQ ID N0.1 所示)，
[0016]下游引物P-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’(如 SEQ ID N0.2 所示)。
[0017]所述的雞全基因組DNA采用苯酚-氯仿粗提法或蛋白酶K法提取。[0018]所述的PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系為:2XTaq PCR MasterMix 6.25 μ L, ddH20 4.25 μ L,P-F 0.5 μ L，P-R 0.5 μ L，DNA 模板 1.0 μ L。
[0019]所述的2XTaq PCR MasterMix含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、氯化鎂和PCR反應(yīng)緩沖液，為市售商品，可購(gòu)自上海生工、大連寶生物、北京百泰克、北京康為等公司。
[0020]所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)?95°C預(yù)變性5min ;95°C變性30s，60°C退火30s，72°C延伸20s，30個(gè)循環(huán)；72°C延伸IOmin ;4°C保存。
[0021]所述的Pvu II酶切反應(yīng)體系為:擴(kuò)增片段10 μ L，Buffer 1.5 μ L，Pvu II
0.3 μ L, ddH20 3.2 μ L0
[0022]所述的Pvu II酶切反應(yīng)條件為:37°C，酶切過(guò)夜。
[0023]所述的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為2%。
[0024]所述的瓊脂糖凝膠電泳的電壓為120V，電泳時(shí)間為60min。
[0025]所述的鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)基因型的方法為:11基因型表現(xiàn)為160bp條帶；Ii基因型表現(xiàn)為124bp和160bp條帶；ii基因型表現(xiàn)為124bp。
[0026]優(yōu)選的，將步驟(4)得到的顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的青脛顯性白羽肉雞品系作為父本與高產(chǎn)蛋雞品種或快大肉雞品種雜交配套，生產(chǎn)出高產(chǎn)型或快大型青脛顯性白羽肉雞。
[0027]本發(fā)明的有益效果:
[0028]本發(fā)明采用分子輔助選擇的方法鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型，可以快速判定出該位點(diǎn)的基因型，生產(chǎn)基因型為II的青脛顯性白羽優(yōu)質(zhì)肉雞品系，能避免測(cè)交選育的繁瑣，縮短世代間隔，加快育種進(jìn)程，從而降低培育成本。
[0029]本發(fā)明針對(duì)顯性白羽野生純合子個(gè)體在PMEL17基因第10外顯子存在的一個(gè)9bp插入這一特征，設(shè)計(jì)上游引物引入Pvu II酶切位點(diǎn)，是否存在插入序列與是否存在酶切位點(diǎn)之間是相互對(duì)應(yīng)的關(guān)系。其中，引物對(duì)P是針對(duì)不含9bp插入的PMEL17基因的核苷酸序列進(jìn)行設(shè)計(jì)的，引入Pvu II酶切位點(diǎn)后，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物能夠被Pvu II切為124bp和27bp(27bp太短電泳時(shí)不顯示)的片段(如SEQ ID N0.3所示);含9bp插入的基因序列在擴(kuò)增后不存在Pvu II這一酶切位點(diǎn)，因此其PCR產(chǎn)物酶切后片段為160bp(如SEQ ID N0.4所示)。
[0030]采用本發(fā)明方法培育的青脛顯性白羽肉雞品系其肉質(zhì)細(xì)嫩，肉味鮮美，生產(chǎn)性能高，屠體上不存在有色羽殘跡，使屠體更加美觀。此外，蛋雞品種或肉雞品種雜交配套，可分別生產(chǎn)出高產(chǎn)型或快大型青脛顯性白羽肉雞。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0031]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中各樣本在雞顯性白羽位點(diǎn)的酶切電泳圖；
[0032]注:編號(hào)說(shuō)明如下:5、8、9為II基因型，3、6、7為Ii基因型；1、2、4為ii基因型，M 為 DNA marker。【具體實(shí)施方式】
[0033]下述實(shí)施例僅對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制。
[0034]實(shí)施例1
[0035]本實(shí)施例中基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，包括以下步驟:
[0036](I)利用固始雞純系公雞作為父本與艾維茵母雞作為母本進(jìn)行雜交，生產(chǎn)出Fl代雞，淘汰雜交出現(xiàn)的少量的有色羽個(gè)體，在Fl白羽群體中選留Fl代青脛白羽公母雞；
[0037](2) Fl代自交得到F2代，選留F2代青脛白羽公母雞；
[0038](3)利用人工引入PvuII的RFLP-PCR方法測(cè)定F2代青脛白羽公母雞的基因型，具體包括以下步驟: [0039]①樣品的采集
[0040]對(duì)F2代選留的青脛白羽雞翅靜脈采血，加1/3抗凝劑，用蛋白酶K法提取血液DNA,將DNA樣品保存于4°C冰箱保存?zhèn)溆茫?br> [0041]②引物設(shè)計(jì)
[0042]以PMELl7 基因序列(GenBank Accession N0.AY636129)為模板設(shè)計(jì)引物對(duì) P，如下所示:
[0043]上游引物P-F: 5 ’ -AGTGGCACCACGCTCACCGTGGGGCAGCT-3，，
[0044]下游引物P-R:5 ’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3，；
[0045]③PCR擴(kuò)增
[0046]以引物對(duì)P為引物，建立12.5μ L擴(kuò)增體系:2XTaq PCR MasterMix (購(gòu)自北京百泰克公司)6.25 μ L, ddH20 4.25 μ L, P-F 0.5 μ L, P-R 0.5 μ L, DNA 模板 1.0 μ L ;
[0047]反應(yīng)程序?yàn)?95°C預(yù)變性5min ;95°C變性30s，60°C退火30s，72°C延伸20s，30個(gè)循環(huán)；72°C延伸IOmin ;4°C保存；
[0048]④PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的酶切
[0049]15yL 的 Pvu II 酶切體系:擴(kuò)增片段 10 μ L，Buffer 1.5 μ L，Pvu II 0.3 μ L,ddH20 3.2 μ L ;酶切反應(yīng)條件:37°C，酶切過(guò)夜；
[0050]⑤PCR擴(kuò)增產(chǎn)物酶切后的檢測(cè)與結(jié)果判定
[0051]取8μ L PCR擴(kuò)增后的酶切產(chǎn)物，2%的瓊脂糖凝膠電泳(電泳電壓:120V ;電泳時(shí)間:60min)點(diǎn)樣，電泳結(jié)束后采用凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)，電泳圖譜參見(jiàn)圖1 ;
[0052]根據(jù)電泳圖譜中出現(xiàn)的條帶的大小判定:當(dāng)出現(xiàn)160bp的片段，則為顯性白羽純合子(II基因型，表型為白羽)；當(dāng)出現(xiàn)124bp的片段，則為野生型純合子(ii基因型，表型為有色羽或隱性白羽);當(dāng)出現(xiàn)160bp、124bp的片段，則為顯性白羽雜合子(Ii基因型，表型為白羽)；
[0053](4)根據(jù)基因型判定結(jié)果，選留顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的個(gè)體，淘汰顯性白羽位點(diǎn)為Ii和ii基因型的個(gè)體，得到顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的公母雞；
[0054](5)對(duì)得到的II基因型個(gè)體進(jìn)行橫交和擴(kuò)繁，按照家系選擇和個(gè)體選擇方法，提高生產(chǎn)速度和雞肉品質(zhì)，同時(shí)提純和固定青脛白羽的外觀性狀，經(jīng)過(guò)3個(gè)世代以上的選育后，得到顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的青脛顯性白羽肉雞品系；[0055](6)對(duì)步驟(5)得到的顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的青脛顯性白羽肉雞品系作為父本與白來(lái)航、固始雞雜交配套，得到高產(chǎn)型或快大型青脛顯性白羽肉雞商品代。
【權(quán)利要求】
1.一種基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)利用青脛肉雞品種作為父本與快大型白羽肉雞品種作為母本進(jìn)行雜交，生產(chǎn)出Fl代，選留Fl代青脛白羽公母雞； (2)Fl代自交得到F2代，選留F2代青脛白羽公母雞； (3)利用人工引入PvuII的RFLP-PCR方法測(cè)定F2代青脛白羽公母雞的基因型，選留顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的個(gè)體，淘汰顯性白羽位點(diǎn)為Ii和ii基因型的個(gè)體，得到顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的公母雞； (4)對(duì)得到的II基因型個(gè)體進(jìn)行橫交和擴(kuò)繁，按照家系選擇和個(gè)體選擇方法，提高生產(chǎn)速度和雞肉品質(zhì)，同時(shí)提純和固定青脛白羽的外觀性狀，經(jīng)過(guò)3個(gè)世代以上的選育后，得到顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的青脛顯性白羽肉雞品系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，其特征在于:所述步驟(1)中青脛肉雞品種為固始雞、狼山雞、淮北麻雞、淮南麻黃雞、黃山黑雞、五華雞、德化黑雞、崇仁麻雞、壽光雞、盧氏雞、景陽(yáng)雞、鄖陽(yáng)大雞、東安雞、桃源雞、瑤雞、茶花雞、和田黑雞中任一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，其特征在于:所述步驟(1)中快大型白羽肉雞品種為羅斯308、科寶、艾維茵、哈巴德、艾拔益加、海波羅、迪高中任一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，其特征在于:所述步驟(3)中利用人工引入PvuII的RFLP-PCR方法，包括以下步驟:以包含PMEL17基因的待測(cè)雞全基因組DNA為模板，以引物對(duì)P為引物PCR擴(kuò)增PMEL17基因第十外顯子，得到擴(kuò)增片段；對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行Pvu II酶切，對(duì)酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型； 所述的引物對(duì)P為:
上游引物 P-F:5’ -AGTGGCACCACGCTCACCGTGGGGCAGCT-3，,
下游引物 P-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，其特征在于:所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系為:2XTaq PCR MasterMix6.25 μ L, ddH20 4.25 μ L,P-F 0.5 μ L，P-R 0.5 μ L，DNA 模板 1.0 μ L。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，其特征在于:所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)?95°C預(yù)變性5min ;95°C變性30s，60°C退火30s，72°C延伸20s，30個(gè)循環(huán)；72°C延伸IOmin ;4°C保存。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，其特征在于:所述的Pvu II酶切反應(yīng)體系為:擴(kuò)增片段10 μ L，Buffer 1.5yL, Pvu II0.3 μ L，ddH20 3.2 μ L ；Pvu II酶切反應(yīng)條件為:37°C，酶切過(guò)夜。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，其特征在于:所述的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為2% ;瓊脂糖凝膠電泳的電壓為120V，電泳時(shí)間為 60mino
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，其特征在于:所述的鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)基因型的方法為:11基因型表現(xiàn)為160bp條帶；Ii基因型表現(xiàn)為124bp和160bp條帶；ii基因型表現(xiàn)為124bp。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于分子輔助選擇的青脛顯性白羽肉雞品系的培育方法，其特征在于:將步驟(4)得到的顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的青脛顯性白羽肉雞品系作為父本與高產(chǎn)蛋雞品種或快大肉雞品種雜交`配套，生產(chǎn)出高產(chǎn)型或快大型青`脛顯性白羽肉雞。
【文檔編號(hào)】A01K67/027GK103563851SQ201310589816
【公開(kāi)日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】康相濤, 李轉(zhuǎn)見(jiàn), 田亞?wèn)|, 韓瑞麗, 楊朋坤, 蔣瑞瑞, 呂世杰, 孫桂榮, 李國(guó)喜, 王丹丹, 王彥彬, 劉小軍, 閆峰賓 申請(qǐng)人:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)