利用顏色和外來蜂群提取物刺激提高胡蜂毒采集量的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用顏色和外來蜂群提取物刺激提高胡蜂毒采集量的方法。其特征在于將取毒器涂上外來蜂群蜂巢或蜂體等提取物的揮發(fā)性溶液，再以紅色襯墊做底色配合外框涂成紅色的取毒器對胡蜂進(jìn)行雙重刺激，從而惹怒胡蜂群的職蜂加強(qiáng)攻擊力度、增大其排毒量和攻擊次數(shù)。該雙重刺激采毒法比僅用常規(guī)采毒器的蜂毒采集量高出23～35%。本關(guān)鍵技術(shù)可以用于對胡蜂總科（Vespoidea）中的長腹胡蜂科、鈴腹胡蜂科、異腹胡蜂科、狹腹胡蜂科、馬蜂科、胡蜂科等膜翅目昆蟲進(jìn)行毒素采集，具有顯著的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，滿足市場的短缺和采毒創(chuàng)新技術(shù)的不足。
【專利說明】利用顏色和外來蜂群提取物刺激提高胡蜂毒采集量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，本發(fā)明涉及一種利用昆蟲生理特性提高胡蜂毒素釆集量的技術(shù)。其關(guān)鍵技術(shù)特征在于將外框涂成紅色的取毒器上涂上外來蜂群的蜂巢、蜂體、蜂排泄物和/或蜂毒中得到的提取物的揮發(fā)性溶液，再以紅色襯墊做底色對胡蜂進(jìn)行雙重剌激，增大蜂群的排毒量和攻擊次數(shù)。本法的蜂毒釆集量比使用常規(guī)釆毒器的蜂毒釆集量提高了 23~35%。本方法適用于對長腹胡蜂科、鈴腹胡蜂科、異腹胡蜂科、狹腹胡蜂科、馬蜂科、胡蜂科等胡蜂總科的經(jīng)濟(jì)昆蟲進(jìn)行生物毒素釆集，滿足市場的短缺和釆毒創(chuàng)新技術(shù)的不足，增加貧困山區(qū)經(jīng)濟(jì)昆蟲養(yǎng)殖戶收入，具有顯著的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會效益。
【背景技術(shù)】
[0002]蜂毒是具有高度生物學(xué)活性和藥理學(xué)活性的復(fù)雜混合物。胡蜂毒不僅具有過敏性，且可以造成血纖維蛋白溶解作用、對骨骼肌的破壞、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和視覺障礙引發(fā)的過敏性休克等(Lombardini，C 等，Am J Emerg Medj 2009，153:131-135 ;Patriarca，G等，Intl J Immunopathol Pharmacol, 2008,21:669-677 ；SchuItze-Werninghausj C等，PediatrAllergy Immunol，1999，10:133-137 ;Puchalska_Niedbal，L 等，Ann AcadMed Stetin，2007，53Suppll:90-93 ;Rocha，T 等，Toxicon，2007，50:589-599);胡蜂毒還顯示對心血管、降壓、抗菌、抑制乙酰膽堿酯酶等許多有前景的生理活性(Rubin，Y等，Cardiovascular haemodynamics of oriental hornet venom sac extract, PharmacolToxicol， 1993，72:268-272 ;Ho，CL 等，Structures and biological activities of newwasp venom peptides isolated feom the black-bellied hornet(Vespa basalis)venom.Toxicon, 1998,36:609-617 ；Konno,K 等,Molecular determinants of bindingof a wasp toxin (PMTXs) and its analogs in the Na+channels proteins.NeurosciLett，2000，285:29-32 ;Ho，CL 等，Enhancing the hypotensive effect and diminishingthe cytolytic activity of hornet mastoparan B by D—amino acid substitution,Toxicon, 2001, 39:1561-1566 ；Damij MP 等,Antibacterial and proteolyticactivity in venom from the endoparasitic wasp Pimpla hypochondriaca(Hymenoptera:1chneumonidae)，J Insect Physiol，2003，49:945-954 ;Wang，幾等，Isolatedprolongation of activated partial thromboplastin time following wasp sting,ActaPaediatr Taiwan，2005，46:164-165 ;Abt，M 等,Characterization of phenoloxidaseactivity in venom from the ectoparasitoid Nasonia vitripennis (Walker)(Hymenoptera:Pteromalidae)，J Invertebr Pathol, 2007，94:108-118 ;Polsinelli，GA等，Insect-specific irreversible inhibitors of acetylcholineesterase inpests including the bed bug,the eastern yellowjacket, German and Americancockroaches, and the confused flour beetle, Chem Biol Interact，2010，187:142—147 ；Ye，J等，A defensin antimicrobial peptide from the venoms of Nasonia vitripennis,Toxicon,2010，56:101-106)。[0003]胡蜂是膜翅目(Hymenoptera),細(xì)腰亞目(Apocrita),針尾部(Aculeata),胡蜂總科(Vespoidea)昆蟲的總稱，世界上已知有5000多種，中國記載的有200余種，在中國南部分布著大量的胡蜂種群。胡蜂毒在國際市場上的售價(jià)居高不下，國外基本壟斷了其研究和關(guān)鍵技術(shù)。開發(fā)蜂毒系列產(chǎn)品，對于我國戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，以及增進(jìn)山區(qū)養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)收入、脫貧都具有重要意義。廣闊的醫(yī)藥前景也給蜂毒采集工作者帶來了機(jī)遇和挑戰(zhàn)。如何采取得到大量的、質(zhì)量可控的胡蜂蜂毒是擺在我國科研工作者面前的關(guān)鍵技術(shù)之瓶頸。我國目前常見的采取蜂毒的模式是:用捕捉到的職蜂取毒囊分離出蜂毒；或者用電脈沖法刺激職蜂用尾針蟄刺取毒器上的玻璃板，將蜂毒留在取毒器玻璃板上，再予以收集。
[0004]從我國專利技術(shù)發(fā)展的歷史看，李光宏和黃世梅在1986年申請了實(shí)用新型專利《封閉式蜜蜂蜂毒采集器》(CN85203663U) ;1989年李鐵生和郭凡修共同申請了實(shí)用新型專利《電動閃光型胡蜂蜂毒自動采集器》(CN2037925U);其中描述了使用紅白光束誘使胡蜂排毒的一種儀器。1994年徐文龍等申報(bào)的實(shí)用新型專利《繼箱型蜂毒采集器》(CN2168397Y)，其原理也是基于通過電流使蜜蜂進(jìn)入尺寸形狀與蜂箱之繼箱一致的采毒箱進(jìn)行毒液收集。2000年張金華設(shè)計(jì)的實(shí)用新型《速凍式蜂毒原液采集器》(CN2391418Y)，其特色是采用液氮冷凍室避免了采集過程中蜂毒的揮發(fā)。2006年，楊雷等公開了一種《自動采集蜂毒的方法及裝置》(CN1714631A)，描述了由電源、自動控制器、收集器組成的采集蜂毒的裝置；2007年，張文禮等設(shè)計(jì)并申請了實(shí)用新型專利《副蓋式蜜蜂電子取毒器》(CN2927685Y):主要是發(fā)明了將取毒板面向下朝向蜂箱，避免了空氣中塵埃和雜質(zhì)落在采毒的面板上，保證了蜂毒的純度。
[0005]但是，上述方法都無法解決胡蜂蜂毒采毒過程中遭遇到的無法控制胡蜂群攻擊的強(qiáng)烈程度，取毒量小，浪費(fèi)大，毒素采集成本居高不下等問題。再者，已公開的許多方法都是僅適用于蜜蜂(中蜂和意蜂)毒素的采集，而非針對攻擊性較強(qiáng)的胡蜂總科的蜂群采毒而言。如何創(chuàng)建一種有效的采集蜂毒的關(guān)鍵技術(shù)，能夠有效提高解決并提高價(jià)值較高的胡蜂蜂毒采集量，使采集或者養(yǎng)殖一窩胡蜂可以得到更多的蜂毒量，擴(kuò)大農(nóng)村山區(qū)養(yǎng)殖戶的單產(chǎn)量及收入，增加山區(qū)貧困養(yǎng)殖戶的脫貧數(shù)量，已有的報(bào)道及經(jīng)驗(yàn)尚十分缺乏。而市場是急需一批創(chuàng)新性的養(yǎng)殖和采集蜂毒技術(shù)的集成及綜合應(yīng)用的。
`[0006]因此，如何巧妙地應(yīng)用昆蟲生理學(xué)特性，結(jié)合現(xiàn)代視覺刺激技術(shù)、生物信息素技術(shù)、結(jié)合利用常規(guī)的電脈沖取毒器手段，發(fā)掘出更多職蜂攻擊力度增大所帶來的蜂毒量增加，是迫在眉睫的?；诖耍景l(fā)明人經(jīng)過長期艱苦而危險(xiǎn)的多批次實(shí)驗(yàn)，最終設(shè)計(jì)并驗(yàn)證了能夠強(qiáng)效刺激蜂群攻擊和排毒、使單位排毒量迅速有效增加的關(guān)鍵技術(shù)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供了一種從胡蜂巢穴中用顏色刺激和外來蜂群的生物信息素“雙重刺激”獲取超出常規(guī)采集量蜂毒類活性物質(zhì)的方法和關(guān)鍵技術(shù)；此處所述的胡蜂是指膜翅目胡蜂總科(Vespoidea)中的長腹胡蜂科、鈴腹胡蜂科、異腹胡蜂科、狹腹胡蜂科、馬蜂科、胡蜂科昆蟲；外來蜂群指的是在被采毒胡峰蜂巢方圓50公里范圍以內(nèi)的同種或不同種的、能對該窩胡蜂形成生物信息素干擾的胡蜂蜂群，優(yōu)選距離被采毒胡蜂蜂巢5公里范圍內(nèi)的其它胡蜂蜂群。
[0008]本發(fā)明的另一目的是提供對胡峰產(chǎn)生“雙重刺激”的紅色襯墊和紅色邊框的取毒器、以及涂抹于取毒器上的外來胡蜂蜂群揮發(fā)性物質(zhì)，用以對待采毒胡蜂群進(jìn)行刺激，惹怒胡蜂群使其加強(qiáng)攻擊意愿，增大了排毒量和攻擊次數(shù)的取毒方法；其中，外來胡蜂蜂群揮發(fā)物質(zhì)是指使用揮發(fā)性溶劑溶解了外來蜂群提取物配置成的溶液；揮發(fā)性溶液是指乙醇、乙醚、氯仿、汽油、醋酸乙酯、苯溶液中的一種或多種；外來蜂群提取物是指從外來蜂群整體或者局部的蜂巢、蜂體、蜂排泄物和/或蜂毒中得到的提取物，用以提取的溶劑是指水或甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、汽油、醋酸乙酯、苯溶液中的一種或多種；外來蜂群是指與待取毒胡蜂同種或不同種的能對被采毒胡蜂形成生物信息素干擾的附近的一群或多群胡蜂蜂群，附近是指距被采毒蜂巢方圓50公里范圍以內(nèi)；優(yōu)選距離被采毒胡蜂蜂巢5公里范圍內(nèi)的其它胡蜂蜂群。
[0009]本發(fā)明的再一目的是提供了一種使用紅色襯墊和紅色邊框的取毒器結(jié)合涂抹外來胡蜂群揮發(fā)性物質(zhì)的一種關(guān)鍵技術(shù)裝置。
[0010]本發(fā)明的又一目的是提供了一種從膜翅目胡蜂總科中的長腹胡蜂科、鈴腹胡蜂科、異腹胡蜂科、狹腹胡蜂科、馬蜂科、胡蜂科昆蟲中得到具有經(jīng)濟(jì)效益的胡蜂蜂毒，作為制藥企業(yè)使用的原料藥物。
[0011]發(fā)明人長期觀察后發(fā)現(xiàn):一般來說，胡蜂蜂群對采毒器進(jìn)行攻擊時(shí)，總有30~50%的職蜂不參與積極進(jìn)攻采毒器的行動，造成蜂群職蜂攻擊次數(shù)不足和排毒總量偏小的事實(shí)。而提高對蜂群的刺激強(qiáng)度后，更多的胡蜂職蜂參與到攻擊和排毒進(jìn)程中來，其總體排毒量就增加。我們?yōu)榱藢ふ覕?shù)量更多的總蜂毒多肽類有效部位，嘗試應(yīng)用各種顏色對蜂群進(jìn)行高強(qiáng)度的刺激，針對蜂群對多種顏色刺激后產(chǎn)毒的量進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)和研究，發(fā)現(xiàn)了在固定其它采毒條件下，使用紅色的墊料和紅色邊框的采毒器最能吸引蜂群的攻擊。
[0012]發(fā)明人還經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)和對比后發(fā)現(xiàn):胡蜂群出于維護(hù)自己領(lǐng)地、水源、果源、食物源的生存需要，對方圓數(shù)十公里范圍內(nèi)有意入侵其領(lǐng)地的其它同種屬或不同種屬的胡蜂群予以攻擊時(shí)排毒量迅速增加，據(jù)此現(xiàn)象，我們嘗試使用了已經(jīng)采集到的附近5公里范圍內(nèi)外來胡蜂群的提取物，在提取物中保留大量外來蜂群的氣味、揮發(fā)性物質(zhì)等生物信息素；對待采毒的胡蜂群進(jìn)行外源性刺激時(shí)，發(fā)現(xiàn)待采毒胡蜂群確能感到威脅，幾乎傾巢出動，參與攻擊；大大提高了每次攻擊的次數(shù)和效率；采毒量大大增加。且所采集的胡蜂毒質(zhì)量不變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí):使用外來蜂群提取物進(jìn)行涂抹誘發(fā)攻擊時(shí)，胡蜂群對外來蜂群提取物揮發(fā)性溶液比較敏感，易被激怒。此處外來蜂群指的是在被采毒蜂巢附近的同種屬或不同種屬的、能對該窩胡蜂形成生物信息素干擾的胡蜂蜂群。
[0013]本發(fā)明人首次創(chuàng)造性地將上述二種刺激胡蜂群的技術(shù)有機(jī)地結(jié)合起來，作為采集胡蜂蜂毒的一種新的關(guān)鍵技術(shù)，從而發(fā)明了創(chuàng)新性的“雙重刺激”采毒技術(shù)。發(fā)明人發(fā)現(xiàn):在使用同一蜂群、同一取毒器、同一取毒電壓、同一采毒操作員的情況下，用紅色墊料和紅色邊框配合涂抹其他外來蜂群的提取物揮發(fā)性溶液的采毒器能使蜂毒采毒量提高20%以上(平行4次試驗(yàn));在物理和生理生化多重刺激因素作用下，行之有效地刺激了更多的職蜂出巢攻擊取毒器，單位時(shí)間內(nèi)蜂群攻擊取毒板的職蜂個(gè)數(shù)和攻擊取毒器次數(shù)也大大增加。顯著提高了職蜂排毒量，每次取毒得到的胡蜂毒素產(chǎn)率得到大大提高，且保證蜂毒質(zhì)量與原先原始取毒器(無刺激源)時(shí)完全一樣。
[0014]使用該“雙重刺激”采毒技術(shù)與僅用常規(guī)采毒器而未采用“雙重刺激”的采毒法相t匕，每次蜂毒采集量可以高出23%~35%。該取毒效果屬于意想不到的發(fā)現(xiàn)，且對蜂群可持續(xù)采毒無影響，蜂群攻擊后調(diào)整10~15天后可以繼續(xù)再次采集蜂毒。該關(guān)鍵技術(shù)對于貧困山區(qū)胡蜂養(yǎng)殖農(nóng)民有著顯著的經(jīng)濟(jì)效益和推廣應(yīng)用前景。本發(fā)明人經(jīng)查新發(fā)現(xiàn)，以往國內(nèi)外專利及文章專著中均無同時(shí)使用紅色墊料和邊框?yàn)榧t色的取毒器作為一種刺激源、用外來蜂群的提取物作為生物信息素的另一種刺激源，對待采毒胡蜂蜂群同時(shí)使用上述兩種刺激源的“雙重刺激”技術(shù)實(shí)施綜合作業(yè)的生物毒素采集方法的相關(guān)報(bào)道。該生理生物采毒技術(shù)具有確切的新穎性和創(chuàng)造性，從而構(gòu)成本發(fā)明。
[0015]本發(fā)明的關(guān)鍵技術(shù)及其有益之處在于:本發(fā)明利用昆蟲生理生化特性，在常規(guī)蜂毒取毒器上涂上外來蜂群蜂巢或蜂體提取物揮發(fā)性溶液，再以紅色襯墊做底色配合外框涂成紅色的該取毒器對胡蜂進(jìn)行雙重刺激，從而惹怒胡蜂群的職蜂加強(qiáng)攻擊力度，增大其排毒量和攻擊次數(shù)；該雙重刺激米毒法比僅用常規(guī)米毒器的蜂毒米集量聞出23%~35%。本關(guān)鍵技術(shù)可以用于對胡蜂總科中的多種昆蟲進(jìn)行毒素采集，具有顯著的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，滿足市場的短缺和采毒創(chuàng)新技術(shù)的不足。本發(fā)明中的技術(shù)及方法使用的原料來源方便易得，制備步驟簡便，利于產(chǎn)業(yè)化。對于開發(fā)市場廣大的生物毒素藥物提供了新的物質(zhì)基礎(chǔ)來源，以及獲取胡蜂毒素的普適關(guān)鍵技術(shù)。通過規(guī)范化養(yǎng)殖胡蜂及采毒又能給連片特困地區(qū)的農(nóng)民增加收入、脫貧，具有顯著的巨大社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。
具體實(shí)施方案
[0016]為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面分別用對胡蜂總科Vespoidea中的長腹胡蜂科、鈴腹胡蜂科、異腹胡蜂科、狹腹胡蜂科、馬蜂科、胡蜂科的膜翅目昆蟲進(jìn)行毒素采集的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說明其在昆蟲生物毒素研發(fā)領(lǐng)域中的關(guān)鍵制備技術(shù)和功效。本發(fā)明所有實(shí)施例都是在嚴(yán)格控制變量的基礎(chǔ)上進(jìn)行的。實(shí)施例中各實(shí)驗(yàn)所采取之胡蜂毒均經(jīng)過《藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心》質(zhì)檢室進(jìn)行HPLC (Agilentl200)指紋圖譜檢測，SDS-PAGE電泳檢測。經(jīng) 檢驗(yàn)，同一個(gè)實(shí)施例之不同實(shí)驗(yàn)所獲得之胡蜂毒均屬于品質(zhì)相同的胡蜂毒。
[0017]必須說明，本發(fā)明的實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對本發(fā)明進(jìn)行的簡單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
[0018]實(shí)施例1:胡蜂科金黃虎頭蜂Vespa mandarinia Smith的常規(guī)采毒與“雙重刺激”技術(shù)采毒所得蜂毒量的比較試驗(yàn)
[0019]1.1胡蜂科金黃虎頭蜂Vespa mandarinia Smith的常規(guī)米毒
[0020]1.1.1采集胡蜂毒地點(diǎn):云南德宏州梁河縣境內(nèi)高山，海拔1382米，林中。蜂體標(biāo)本經(jīng)云南省大理學(xué)院藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心毛本勇教授鑒定為Vespa mandarinia Smith (金環(huán)胡蜂，又名金黃虎頭蜂)。
[0021]1.1.2采集胡蜂毒裝置:使用經(jīng)過本工程研究中心改裝的副蓋式蜂毒采集器，木框，長80公分，寬50公分；內(nèi)嵌4片長20公分/寬33公分取毒玻璃；輸入電壓12V,輸出自動間歇脈動電壓。
[0022]1.1.3采集胡蜂毒方法:將未經(jīng)涂裝的采毒器置于蜂巢前，按照常規(guī)采毒規(guī)程，對該巢金黃虎頭蜂蜂群職蜂采毒30分鐘。打開取毒器電源開關(guān)，敲擊地面及蜂巢口，吸引金黃虎頭蜂胡蜂出來攻擊蜂毒米集器。30分鐘后,關(guān)閉電源，掃掉不再排毒的金黃虎頭蜂，收集玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中，梅特勒十萬分之一電子天平稱重。[0023]1.1.4結(jié)果分析:本次采集，經(jīng)高速攝影錄像分析，取毒板共被金黃虎頭蜂攻擊1316次；收集得到的金黃虎頭蜂胡蜂蜂毒為860毫克。
[0024]1.2胡蜂科金黃虎頭蜂Vespa mandarinia Smith的“雙重刺激”技術(shù)采毒
[0025]1.2.1采集胡蜂毒地點(diǎn):(與本實(shí)施例1.1.1項(xiàng)下的胡蜂巢距離為1.8公里處，大小及生長狀態(tài)環(huán)境相似的一窩金黃虎頭蜂)，蜂體標(biāo)本經(jīng)云南省大理學(xué)院藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心毛本勇教授鑒定為Vespa mandarinia Smith (金環(huán)胡蜂,又名金黃虎頭蜂)。
[0026]1.2.2采集胡蜂毒裝置:基本裝置同本實(shí)施例之1.1.2 ;使用本工程研究中心改裝的同一批次的取毒器，但是木框事先以紅色油漆涂成紅色；再一關(guān)鍵技術(shù)是在木框上預(yù)先涂抹20毫升濃度為15毫克/毫升的1.1.1項(xiàng)下的蜂巢及蜂體提取物揮發(fā)性溶液(制備方法:將100克蜂巢及80只職蜂蜂體勻漿磨碎，加入20毫升蒸餾水，以醋酸乙酯萃取2次、每次20毫升；萃取液減壓蒸干溶劑后，以乙醚溶解，配制成15毫克/毫升的提取物揮發(fā)性溶液)；采集蜂毒前20分鐘涂抹外來蜂群提取物揮發(fā)性溶液。
[0027]1.2.3采集胡蜂毒方法:將該取毒器放置于鋪有大紅色塑料布的地上，略微傾斜15度，形成對蜂巢蜂群的強(qiáng)烈刺激信號。然后打開取毒器電源開關(guān)，敲擊地面及蜂巢口，吸引金黃虎頭蜂出來攻擊蜂毒米集器。30分鐘后,關(guān)閉電源，掃掉不再排毒的金黃虎頭蜂，收集玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中，梅特勒十萬分之一電子天平稱重。
[0028]1.2.4結(jié)果分析:本次采集，經(jīng)高速攝影錄像分析，取毒板共被胡蜂攻擊1645次；收集得到的金黃虎頭蜂蜂毒為1135毫克。 [0029]1.3針對常規(guī)采毒法采毒的金黃虎頭蜂交叉使用“雙重刺激”法采毒驗(yàn)證試驗(yàn)
[0030]1.3.1采集胡蜂毒地點(diǎn):實(shí)施例1.1.1中所述采集地。同一窩胡蜂在經(jīng)1.1所述的釆毒后第15天，再次進(jìn)行采毒，釆毒方法為采“雙重刺激”技術(shù)實(shí)施采毒。
[0031]1.3.2采集胡蜂毒裝置:采集胡蜂毒裝置同本實(shí)施例之1.2.2。嚴(yán)格使用了與本實(shí)施例1.2.2同一裝置、與本實(shí)施例1.1同一操作者及完全相同的米毒時(shí)間；使用本實(shí)施例之1.2.2中所述之“木框事先以紅色油漆涂成紅色；及采集蜂毒前20分鐘在木框上預(yù)先涂抹20毫升濃度為15毫克/毫升的另外一窩金黃虎頭蜂的蜂巢及蜂體提取物揮發(fā)性溶液(制備方法:同本實(shí)施例1.2.1所述)”。
[0032]1.3.3采集胡蜂毒方法:同本實(shí)施例之1.2.3。將同一取毒器放置于鋪有大紅色塑料布的地上，略微傾斜15度，形成對蜂巢蜂群的強(qiáng)烈刺激信號。然后按1.2.3所述之方法，打開取毒器電源開關(guān)，敲擊地面及蜂巢口，吸引胡蜂出來攻擊蜂毒采集器。30分鐘后，關(guān)閉電源，掃掉不再排毒的金黃虎頭蜂，收集玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中，梅特勒十萬分之一電子天平稱重。采毒過程與本實(shí)施例1.1和1.2為同一操作人員執(zhí)行。
[0033]1.3.4結(jié)果分析:本次采集，經(jīng)高速攝影錄像分析，取毒板共被胡蜂攻擊1603次；收集得到的金黃虎頭蜂蜂毒為1098毫克。
[0034]1.3.5結(jié)果說明:在實(shí)施例1.1中采用常規(guī)取毒法取毒后的同一窩胡蜂，在換用“雙重刺激”關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行高強(qiáng)度刺激后，排毒量比前一次(實(shí)施例1.1)取毒高出了 27.7% ；大大提高了金黃虎頭蜂排毒量。
[0035]1.4針對“雙重刺激”法采毒采毒的金黃虎頭蜂交叉使用常規(guī)采毒法驗(yàn)證試驗(yàn)
[0036]1.4.1采集胡蜂毒地點(diǎn):實(shí)施例1.2.1中所述采集地。該窩胡蜂在經(jīng)本實(shí)施例1.2中所述的“雙重刺激”技術(shù)采毒后第15天，再次進(jìn)行按本實(shí)施例1.1所述之常規(guī)釆毒技術(shù)實(shí)施的采毒。
[0037]1.4.2采集胡蜂毒裝置:采集胡蜂毒裝置同本實(shí)施例之1.1.2。使用經(jīng)過本工程研究中心改裝的副蓋式蜂毒采集器，木框，長80cm，寬50cm ;內(nèi)嵌4片長20cm/寬33cm取毒玻璃；輸入電壓12V，輸出自動間歇脈動電壓；本實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格使用了與本實(shí)施例之1.1.2同一裝置、與實(shí)施例1.2同一操作者、完全相同的米毒時(shí)間。
[0038]1.4.3采集蜂毒方法:同本實(shí)施例之1.1.3。將同一取毒器(未經(jīng)涂裝的采毒器)置于蜂巢前，然后用1.2.2所述之同一方法，打開取毒器電源開關(guān)，敲擊地面及蜂巢口，吸引胡蜂出來攻擊蜂毒采集器。30分鐘后，關(guān)閉電源，掃掉不再排毒的胡蜂，收集玻璃板上的金黃虎頭蜂蜂毒，裝入特制冷凍瓶中，梅特勒十萬分之一電子天平稱重。采毒過程與本實(shí)施例1.1和1.2為同一操作人員。
[0039]1.4.4結(jié)果分析:本次采集，經(jīng)高速攝影錄像分析，取毒板共被金黃虎頭蜂攻擊1298次；收集得到的金黃虎頭蜂蜂毒為845毫克。
[0040]1.4.5結(jié)果說明:在實(shí)施例1.2中采用常規(guī)取毒法取毒后的同一窩金黃虎頭蜂，在換用常規(guī)采毒方法后，排毒量比前一次實(shí)施“雙重刺激”技術(shù)時(shí)(實(shí)施例1.2)獲取蜂毒量降低了 21.1% ;胡蜂攻擊次數(shù)減少了 25.6%。差別顯著。
[0041 ] 1.5重復(fù)試驗(yàn):在接下來的2個(gè)月內(nèi)，每隔15天對上述2窩金黃虎頭蜂各進(jìn)行一次取毒實(shí)驗(yàn)；統(tǒng)計(jì)胡蜂攻擊次數(shù)和采毒量的變化，檢驗(yàn)“雙重刺激”技術(shù)對于金黃虎頭蜂取毒與常規(guī)取毒法的效果之差別。4次取毒比較的結(jié)果是:使用“雙重刺激”技術(shù)作為單一變量，對于金黃虎頭蜂的取毒量比常規(guī)取毒法高出32±9% ;胡蜂攻擊次數(shù)比常規(guī)采毒法高出25 ±8%。具有顯著的差異。
[0042]1.6結(jié)果說明:根據(jù)`常規(guī)采毒與“雙重刺激”技術(shù)采毒對金黃虎頭蜂進(jìn)行的比較試驗(yàn)、交叉驗(yàn)證試驗(yàn)、重復(fù)試驗(yàn)所獲得的胡蜂蜂毒量可知，使用“雙重刺激”技術(shù)采集胡蜂科昆蟲毒素有著較大的先進(jìn)性和實(shí)用性。
[0043]實(shí)施例2:馬蜂科黃裙馬蜂(Polistes sagittarius Saussure)的常規(guī)采毒與“雙重刺激”技術(shù)采毒所得蜂毒量的比較試驗(yàn)
[0044]2.1實(shí)驗(yàn)地點(diǎn):云南文山州富寧縣。2窩黃裙馬蜂相距1.5公里左右。山林中。蜂體標(biāo)本經(jīng)云南省大理學(xué)院藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心楊自忠教授鑒定為馬蜂科黃裙馬蜂(Polistes sagittarius Saussure)。
[0045]2.2常規(guī)采毒裝置及方法:同實(shí)施例1中1.1.2、1.1.3。
[0046]2.3 “雙重刺激”技術(shù)采毒裝置及方法:同實(shí)施例1中1.2.2、1.2.3。其關(guān)鍵技術(shù)是在木框上預(yù)先涂抹20毫升濃度為15毫克/毫升的另外一窩黃裙馬蜂的蜂巢及蜂體提取物揮發(fā)性溶液(制備方法:將80克蜂巢及60只黃裙馬蜂職蜂蜂體勻漿磨碎，加入20毫升蒸餾水，以醋酸乙酯萃取2次、每次20毫升；萃取液減壓蒸干溶劑后，以乙醚溶解，配制成15毫克/毫升的黃裙馬蜂提取物揮發(fā)性溶液)；采集蜂毒前20分鐘涂抹在采毒器上。自然揮干溶劑。
[0047]2.4實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:同實(shí)施例1.1至1.5。具體而言，按照實(shí)施例1.1至1.5的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路，進(jìn)行了黃裙馬蜂常規(guī)采毒、常規(guī)采毒后使用“雙重刺激”技術(shù)采毒，比較二者采毒量之差異；再于另外一窩黃裙馬蜂先用“雙重刺激”技術(shù)采毒，14天后用常規(guī)采毒法再次采毒。比較不同技術(shù)采獲的黃裙馬蜂毒量。2個(gè)月內(nèi)平行進(jìn)行4次試驗(yàn)，進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)與分析。
[0048]2.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果與說明:使用“雙重刺激”技術(shù)采集黃裙馬蜂毒素比常規(guī)采毒法得到的黃裙馬蜂毒素平均重量高出30±6% ;黃裙馬蜂攻擊取毒器次數(shù)增加20±4%。說明使用“雙重刺激”技術(shù)采集馬蜂科昆蟲毒素有著較大的先進(jìn)性和實(shí)用性。
[0049]實(shí)施例3:鈴腹胡蜂科帶鈴腹胡蜂(Popalidia fasciata Fabricius)的常規(guī)采毒與“雙重刺激”技術(shù)采毒所得蜂毒量的比較試驗(yàn)
[0050]3.1實(shí)驗(yàn)地點(diǎn):云南省文山州廣南縣那倫鄉(xiāng)。2窩帶鈴腹胡蜂相距1.3公里左右。海拔890公尺公路邊山林中。蜂體標(biāo)本經(jīng)云南省大理學(xué)院藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心楊自忠教授鑒定為膜翅目鈴腹胡蜂科帶鈴腹胡蜂(Popalidia fasciataFabriciusX [0051]3.2常規(guī)采毒裝置及方法:同實(shí)施例1中1.1.2、1.1.3。
[0052]3.3 “雙重刺激”技術(shù)采毒裝置及方法:同實(shí)施例1中1.2.2、1.2.3。其關(guān)鍵技術(shù)是在木框上預(yù)先涂抹20毫升濃度為15毫克/毫升的另外一窩帶鈴腹胡蜂的蜂巢及蜂體提取物揮發(fā)性溶液(制備方法:將86克蜂巢及63只帶鈴腹胡蜂職蜂蜂體勻漿磨碎，加入20毫升蒸餾水，以醋酸乙酯萃取2次、每次20毫升；萃取液減壓蒸干溶劑后，以乙醚溶解，配制成15毫克/毫升的帶鈴腹胡蜂提取物揮發(fā)性溶液);采集帶鈴腹胡蜂蜂毒前20分鐘涂抹在采毒器上。自然揮干溶劑。
[0053]3.4實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:同實(shí)施例1.1至1.5。具體而言，按照實(shí)施例1.1至1.5的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路，進(jìn)行了帶鈴腹胡蜂常規(guī)采毒、常規(guī)采毒后使用“雙重刺激”技術(shù)采毒，比較二者采毒量之差異；再于另外一窩帶鈴腹胡蜂先用“雙重刺激”技術(shù)采毒，14天后用常規(guī)采毒法再次采毒。比較不同技術(shù)采獲的帶鈴腹胡蜂毒量。2個(gè)月內(nèi)平行進(jìn)行4次試驗(yàn)，進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。
[0054]3.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果與說明:使用“雙重刺激”技術(shù)采集帶鈴腹胡蜂毒素比常規(guī)采毒法得到的帶鈴腹胡蜂毒素平均重量高出24±5% ;帶鈴腹胡蜂攻擊取毒器次數(shù)增加23±7%。說明使用“雙重刺激”技術(shù)采集鈴腹胡蜂科昆蟲毒素有著較大的先進(jìn)性和實(shí)用性。
[0055]實(shí)施例4:異腹胡蜂科變側(cè)異腹胡蜂(ParapoIybia varia varia Fabricius)的常規(guī)采毒與“雙重刺激”技術(shù)采毒所得蜂毒量的比較試驗(yàn)
[0056]4.1實(shí)驗(yàn)地點(diǎn):云南省文山州麻栗坡縣。2窩變側(cè)異腹胡蜂相距1.8公里左右。海拔672公尺公路邊山林中。蜂體標(biāo)本經(jīng)云南省大理學(xué)院藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心楊自忠教授鑒定為膜翅目異腹胡蜂科變側(cè)異腹胡蜂(Parapolybia varia variaFabricius)。
[0057]4.2常規(guī)采毒裝置及方法:同實(shí)施例1中1.1.2、1.1.3部分。
[0058]4.3 “雙重刺激”技術(shù)采毒裝置及方法:同實(shí)施例1中1.2.2、1.2.3部分。其關(guān)鍵技術(shù)是在木框上預(yù)先涂抹20毫升濃度為15毫克/毫升的另外一窩變側(cè)異腹胡蜂的蜂巢及蜂體提取物揮發(fā)性溶液(制備方法:將90克蜂巢及68只變側(cè)異腹胡蜂職蜂蜂體勻漿磨碎，加入20毫升蒸餾水，以醋酸乙酯萃取2次、每次20毫升；萃取液減壓蒸干溶劑后，以乙醚溶解，配制成15毫克/毫升的變側(cè)異腹胡蜂提取物揮發(fā)性溶液);采集變側(cè)異腹胡蜂蜂毒前20分鐘涂抹在采毒器上。自然揮干溶劑。
[0059]4.4實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:同實(shí)施例1.1至1.5。具體而言，按照實(shí)施例1.1至1.5的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路，進(jìn)行了變側(cè)異腹胡蜂常規(guī)采毒、常規(guī)采毒后使用“雙重刺激”技術(shù)采毒，比較二者采毒量之差異；再于另外一窩變側(cè)異腹胡蜂先用“雙重刺激”技術(shù)采毒，14天后用常規(guī)采毒法再次采毒。比較不同技術(shù)采獲的變側(cè)異腹胡蜂毒量。2個(gè)月內(nèi)平行進(jìn)行4次試驗(yàn)，進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)與分析。
[0060]4.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果與說明:使用“雙重刺激”技術(shù)采集變側(cè)異腹胡蜂毒素比常規(guī)采毒法得到的變側(cè)異腹胡蜂毒素平均重量高出27±5% ;帶鈴腹胡蜂攻擊取毒器次數(shù)增加32±8%。說明使用“雙重刺激”技術(shù)采集膜翅目異腹胡蜂科昆蟲毒素有著較大的先進(jìn)性和實(shí)用性。
[0061]實(shí)施例5:狹腹胡蜂科光全狹腹胡蜂(Holischnogaster micans Saussure)的常規(guī)采毒與“雙重刺激”技術(shù)采毒所得蜂毒量的比較試驗(yàn)
[0062]5.1實(shí)驗(yàn)地點(diǎn):云南省孟連縣勐馬鎮(zhèn)。2窩光全狹腹胡蜂相距1.6公里左右。海拔972公尺鄉(xiāng)村道路路邊山林中。蜂體標(biāo)本經(jīng)云南省大理學(xué)院藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心郭云膠教授鑒定為膜翅目狹腹胡蜂科光全狹腹胡蜂(Holischnogastermicans Saussure)。
[0063]5.2常規(guī)采毒裝置及方法:同實(shí)施例1中1.1.2、1.1.3部分。
[0064]5.3 “雙重刺激”技術(shù)采毒裝置及方法:同實(shí)施例1中1.2.2、1.2.3部分。其關(guān)鍵技術(shù)是在木框上預(yù)先涂抹20毫升濃度為15毫克/毫升的另外一窩光全狹腹胡蜂的蜂巢及蜂體提取物揮發(fā)性溶液(制備方法:將103克蜂巢及90只光全狹腹胡蜂職蜂蜂體勻漿磨碎，加入20毫升蒸餾水，以醋酸乙酯萃取2次、每次20毫升；萃取液減壓蒸干溶劑后，以乙醚溶解，配制成15毫克/毫升的光全狹腹胡蜂提取物揮發(fā)性溶液);采集光全狹腹胡蜂蜂毒前20分鐘涂抹在采毒器上。自然揮干溶劑。
[0065]5.4實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:同實(shí)施例1.1至1.5相似內(nèi)容。具體而言，按照實(shí)施例1.1至1.5的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路，進(jìn)行了光全狹腹胡蜂常規(guī)采毒、常規(guī)采毒后使用“雙重刺激”技術(shù)采毒，t匕較二者采毒量之差異；再于另外一窩光全狹腹胡蜂先用“雙重刺激”技術(shù)采毒，14天后用常規(guī)采毒法再次采毒。比較不同技術(shù)采獲的光全狹腹胡蜂毒量。2個(gè)月內(nèi)平行進(jìn)行4次試驗(yàn)，進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。
[0066]5.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果與說明:使用“雙重刺激”技術(shù)采集光全狹腹胡蜂蜂毒素比常規(guī)采毒法得到的光全狹腹胡蜂蜂毒素平均重量高出27±5% ;光全狹腹胡蜂攻擊取毒器次數(shù)增加32±8%。說明使用“雙重刺激”技術(shù)采集膜翅目狹腹胡蜂科昆蟲毒素有著較大的先進(jìn)性和頭用性。
[0067]在上述說明書闡述本發(fā)明時(shí)，同時(shí)提供了實(shí)施例的目的是舉例說明本發(fā)明的實(shí)際操作過程和本發(fā)明的意義。在進(jìn)入本發(fā)明權(quán)利要求和其等同物范圍內(nèi)時(shí)，本發(fā)明的實(shí)際應(yīng)用包括所有一般變化、配合，或改進(jìn)。
【權(quán)利要求】
1.一種獲取胡蜂蜂毒類活性物質(zhì)的方法，其特征是:從胡蜂巢穴中用顏色和外來蜂群提取物雙重刺激獲取大量蜂毒類活性物質(zhì)；其中，外來蜂群提取物是指從外來蜂群整體或者局部的蜂巢、蜂體得到的提取物，用以提取的溶劑是指水或甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、汽油、醋酸乙酯、苯溶液中的一種或多種；外來蜂群是指與待取毒胡蜂同種或不同種的能對被采毒胡蜂形成生物信息素干擾的附近的胡蜂蜂群，附近是指距被采毒蜂巢方圓50公里范圍以內(nèi)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:該方法是在白天對野生或養(yǎng)殖的胡蜂取毒時(shí)，使用紅色襯墊鋪在地上，再將涂有外來蜂群提取物揮發(fā)性溶液的取毒器通電，打開胡蜂巢，引誘胡蜂的職蜂進(jìn)行排毒，從而惹怒蜂體使其加強(qiáng)攻擊意愿，增大了排毒量和攻擊次數(shù)而得以實(shí)現(xiàn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是:采用的紅色襯墊是指采用紅色塑料布、紅色油氈布、紅色棉布、紅色玻璃板、紅色鋁板材質(zhì)制成的襯墊。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征為所述的取毒器外框?yàn)榧t色，用以增加對胡蜂職蜂的刺激性，增大其排毒量和攻擊次數(shù)。
5.根據(jù)權(quán)利要求2~4任一的方法，其特征為所述外來蜂群提取物揮發(fā)性溶液是指使用揮發(fā)性溶劑溶解了外來蜂群提取物配置成的溶液；其中，揮發(fā)性溶液是指乙醇、乙醚、氯仿、汽油、醋酸乙酯、苯溶液中的一種或多種；外來蜂群提取物是指從外來蜂群整體或者局部的蜂巢、蜂體、蜂排泄物和/或蜂毒中得到的提取物，用以提取的溶劑是指水或甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、汽油、醋酸乙酯、苯溶液中的一種或多種；外來蜂群是指與待取毒胡蜂同種或不同種的能對被采毒胡蜂形成生物信息素干擾的附近的一群或多群胡蜂蜂群，附近是指距被米毒蜂巢方圓50公里范圍以內(nèi)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1~5任一的方法，其特征為所述的胡蜂是指胡蜂總科Vespoidea中的長腹胡蜂科、鈴腹胡蜂科 、異腹胡蜂科、狹腹胡蜂科、馬蜂科、胡蜂科的膜翅目昆蟲。
【文檔編號】A01K59/00GK103636528SQ201310624815
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月28日
【發(fā)明者】焦春香, 劉衡, 趙海榮, 巫秀美, 趙昱 申請人:大理學(xué)院