一種馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液，其中，保存液包括乳酸鈉混合液、青霉素、鏈霉素，以及牛血清白蛋白、犢牛血清和滅活馬血清中的一種、兩種或三種；其配制方法包括：將乳酸鈉混合液置于37℃的恒溫箱中0.5-6小時(shí)后，備用，按照組分含量向乳酸鈉混合液中加入青霉素、鏈霉素、以及牛血清白蛋白、犢牛血清和滅活馬血清中的一種或兩種或三種，即得到保存液。適用于馬、牛、驢的卵母細(xì)胞的低溫保存。本發(fā)明的有益效果是：具有取材方便、價(jià)格低廉、配制簡(jiǎn)單、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，非常適用于低溫保存馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞，以用于保鮮胚胚胎移植技術(shù)，有利于保鮮胚胚胎移植技術(shù)的推廣應(yīng)用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】—種馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于動(dòng)物胚胎移植領(lǐng)域，特別是涉及一種馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]胚胎移植又稱(chēng)受精卵移植，俗稱(chēng)人工授胎或借腹懷胎，是指將雌性動(dòng)物的早期胚胎移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動(dòng)物體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。胚胎移植的基本程序包括供體超排與授精、受體同期發(fā)情處理、采卵、檢卵和移植。
[0003]卵母細(xì)胞低溫保存技術(shù)主要用于保鮮胚胚胎移植技術(shù)。保存液多數(shù)為組織培養(yǎng)液，目前國(guó)內(nèi)常用的保存液主要有杜氏磷酸鹽緩沖液(D-PBS)、布林斯特氏液、合成輸卵管液(S0F)、惠屯氏液、Ham’s F-110以及TCM-199。上述幾種液體均存在藥品來(lái)源困難，價(jià)格昂貴，配制步驟繁瑣且需現(xiàn)用現(xiàn)配等問(wèn)題，為胚胎移植的規(guī)模化生產(chǎn)帶來(lái)極大的不便。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決傳統(tǒng)的保存液藥品來(lái)源困難、價(jià)格昂貴、配制步驟繁瑣且需現(xiàn)用現(xiàn)配等問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種適用于規(guī)?；a(chǎn)的一種馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液，低溫保存卵母細(xì)胞用于非手術(shù)法胚胎移植。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液，所述保存液包括乳酸鈉混合液、青霉素、鏈霉素，以及牛血清白蛋白或犢牛血清或滅活馬血清中的一種、兩種或三種。
[0006]所述乳酸鈉混合液包括乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂和黃芪多糖中的一種或多種。
[0007]所述保存液中各組``分的含量為:每1000ml乳酸鈉混合液中含有青霉素30-180萬(wàn)單位、鏈霉素20-200萬(wàn)單位，以及牛血清白蛋白0.05%-1.5%、犢牛血清0.5%-15%和/或滅活馬血清0.5%-14%。其中，所述血清白蛋白、所述犢牛血清以及所述滅活馬血清的百分比為體積百分比。
[0008]所述保存液中各組分的含量為:每1000ml乳酸鈉混合液中含有青霉素50-150萬(wàn)單位、鏈霉素50-150萬(wàn)單位，以及牛血清白蛋白0.1%-0.9%、犢牛血清1%_10%和/或滅活馬血清1%-10%。其中，所述血清白蛋白、所述犢牛血清以及所述滅活馬血清的百分比為體積百分比。
[0009]所述乳酸鈉混合液中各組分的含量為 每1000ml混合液中含有乳酸鈉l_7g、氯化鈉l_5g、氯化鉀2-7g、氯化鈣0.5-2g、氯化鎂0.05-0.5g和黃芪多糖0.01-0.3g。
[0010]所述乳酸鈉混合液中各組分的含量?jī)?yōu)選為 每1000ml混合液中含有乳酸鈉3_7g、氯化鈉2-5g、氯化鉀3-7g、氯化鈣0.5-1.5g、氯化鎂0.1-0.4g和黃芪多糖0.01-0.lg。
[0011]所述乳酸鈉混合液中各組分的含量還可以優(yōu)選為:每1000ml混合液中含有乳酸鈉5.4g、氯化鈉3.2g、氯化鉀4.6g、氯化鈣1.lg、氯化鎂0.32g和黃芪多糖0.08g。
[0012]為了更好的實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明還提供了一種馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液的配制方法，包括:
(1)按照各組分的含量稱(chēng)取乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣和氯化鎂，并加入蒸餾水混合，置于37°C的恒溫箱中0.5-6小時(shí)后,備用；
(2)稱(chēng)取黃芪多糖放入無(wú)菌燒杯中，向無(wú)菌燒杯中加入步驟(1)中得到的混合液，攪拌使黃芪多糖充分溶解，得到乳酸鈉混合液；
(3)低溫保存卵母細(xì)胞前，按照組分含量向乳酸鈉混合液中加入青霉素、鏈霉素以及、牛血清白蛋白、犢牛血清和滅活馬血清中的一種或兩種或三種，即可得到?jīng)_卵液。
[0013]本發(fā)明的馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液適用于馬、牛、驢的卵母細(xì)胞低溫保存及非手術(shù)法胚胎移植技術(shù)。
[0014]本發(fā)明實(shí)施例提供的技術(shù)方案帶來(lái)的有益效果是:本發(fā)明以乳酸鈉混合液作為主液，可提前配制待用，使用前只需向主液中加入適量抗生素、及牛血清白蛋白或犢牛血清或滅活馬血清即可。具有取材方便、價(jià)格低廉、配制簡(jiǎn)單、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，非常適用于馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存，有利于胚胎移植技`術(shù)的推廣應(yīng)用。
【權(quán)利要求】
1.馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液，其特征在于，所述保存液包括乳酸鈉混合液、青霉素、鏈霉素，以及牛血清白蛋白、犢牛血清和滅活馬血清中的一種、兩種或三種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液，其特征在于，所述乳酸鈉混合液包括乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂和黃芪多糖中的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液，其特征在于，所述保存液中各組分的含量為:每1000ml乳酸鈉混合液中含有青霉素30-180萬(wàn)單位、鏈霉素20-200萬(wàn)單位，以及牛血清白蛋白0.05%-1.5%、犢牛血清0.5%-15%和/或滅活馬血清0.5%_14%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液，其特征在于，所述保存液中各組分的含量為:每1000ml乳酸鈉混合液中含有青霉素50-150萬(wàn)單位、鏈霉素50-150萬(wàn)單位，以及3%-5%、牛血清白蛋白0.1%-0.9%、犢牛血清1%-10%和/或滅活馬血清1%_10%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液，其特征在于，所述乳酸鈉混合液中各組分的含量為:每1000ml混合液中含有乳酸鈉l_7g、氯化鈉l_5g、氯化鉀2-7g、氯化鈣0.5-2g、氯化鎂0.05-0.5g和黃芪多糖0.01-0.3g。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液，其特征在于，所述乳酸鈉混合液中各組分的含量為:每1000ml混合液中含有乳酸鈉3-7g、氯化鈉2_5g、氯化鉀3-7g、氯化鈣0.5-1.5g、氯化鎂0.1-0.4g和黃芪多糖0.01-0.lg。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液，其特征在于，所述乳酸鈉混合液中各組分的含量為:每1000ml混合液中含有乳酸鈉5.4g、氯化鈉3.2g、氯化鉀4.6g、氯化鈣1.lg、氯化鎂0.32g和黃芪多糖0.08g。
8.—種如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液的配制方法，其特征在于，所述配制方法包括: (1)按照各組分的含量稱(chēng)取乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣和氯化鎂，并加入蒸餾水混合，置于37°C的恒溫箱中0.5-6小時(shí)后,備用； (2)稱(chēng)取黃芪多糖放入無(wú)菌燒杯中，向無(wú)菌燒杯中加入步驟(1)中得到的混合液，攪拌使黃芪多糖充分溶解，得到乳酸鈉混合液； (3)準(zhǔn)備低溫保存卵母細(xì)胞，按照組分含量向乳酸鈉混合液中加入青霉素、鏈霉素，以及牛血清白蛋白、犢牛血清和滅活馬血清中的一種或兩種或三種，即可得到低溫保存液。
9.一種如權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的馬屬動(dòng)物卵母細(xì)胞低溫保存液的應(yīng)用，其特征在于，所述保存液適用于低溫保存卵母細(xì)胞及馬、牛、驢的非手術(shù)法胚胎移植技術(shù)。
【文檔編號(hào)】A01N1/02GK103798225SQ201310644968
【公開(kāi)日】2014年5月21日 申請(qǐng)日期:2013年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月5日
【發(fā)明者】孫吉?jiǎng)? 王衛(wèi)雄, 郭海鵬 申請(qǐng)人:青島德瑞駿發(fā)生物科技有限公司, 伊犁德瑞駿發(fā)生物科技有限公司, 青島德瑞鰲藍(lán)馬術(shù)有限公司