一種含有纖維素酶的小麥日糧酶及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種小麥日糧酶及其制造方法，屬于酶制劑領(lǐng)域。所述小麥日糧酶由以下重量份數(shù)的組分組成：黃芪粉0.5-2份，木聚糖酶20-40份，纖維素酶5-12份，β-葡聚糖酶10-20份，中溫α-淀粉酶2-8份；所述纖維素酶利用保藏編號為CCTCC?M2013540的里氏木霉菌株，通過紫外誘變、培養(yǎng)、發(fā)酵制得。本發(fā)明產(chǎn)品對小麥及其副產(chǎn)品飼料中的可溶性、非可溶性木聚糖有很強的催化降解作用，快速降解飼料中的抗營養(yǎng)因子-NSP，加速植物飼料內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的釋放溶解；補充和平衡動物體內(nèi)內(nèi)源酶，降低動物腸道內(nèi)容物黏度，防腹瀉；提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收，增強動物免疫力和抗病能力，提高飼養(yǎng)速度及成活率。
【專利說明】一種含有纖維素酶的小麥日糧酶及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于酶制劑領(lǐng)域，具體涉及一種小麥日糧酶及其制造方法。
【背景技術(shù)】 [0002]隨著養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展對玉米需求量加大和國際市場上玉米行情的變化，造成玉米采購難和價格上揚，尤其在非玉米主產(chǎn)區(qū)，玉米的短缺成為限制當?shù)匦竽翗I(yè)發(fā)展的重要因素。而在非玉米主產(chǎn)區(qū)往往小麥的來源較廣，其價格也較為穩(wěn)定，而且在小麥收獲季節(jié)，其價格和玉米相比往往具有一定的優(yōu)勢，特別是隨著我國小麥產(chǎn)量的逐漸增大，以及WTO的加入，進口小麥涌入帶來的沖擊，使得小麥價格呈下降趨勢。同時，畜牧業(yè)發(fā)展迅速，飼料用量不斷增大，制造淀粉和賴氨酸也消耗掉大量的玉米，以前主要用作能量飼料的玉米價格不斷上漲，小麥以其種植面積廣、產(chǎn)量高、價格低等優(yōu)點成為替代玉米的首選。
[0003]飼用酶種類繁多，在畜禽生產(chǎn)中均取得了相當好的效果。前蘇聯(lián)科學家在早期斷奶仔豬日糧中添加淀粉糊精酶，使得日增重提高14.6%，碳水化合物消化率提高77.2%。據(jù)美國有關(guān)資料報道，Collier在早期斷奶仔豬日糧中補充酶制劑(含蛋白酶、淀粉酶、葡聚糖酶)，結(jié)果實驗組比對照組日增重提高了 25%，飼料轉(zhuǎn)化率提高了 15.5%。西德學者曾多次進行育肥豬添加復(fù)合酶制劑的實驗研究，在以大麥為主的日糧中，添加0.1%的復(fù)合酶制劑，結(jié)果為:實驗組比對照組生長速度提高5.1%，飼料利用率提高4.1%。可見，淀粉酶能顯著提高畜禽對飼料的消化吸收，促進生長，降低飼料成本，并且作為一種綠色飼料添加劑，它的使用具有安全性，有利于畜牧業(yè)生產(chǎn)走上經(jīng)濟節(jié)約型的發(fā)展道路。
[0004]目前，糧食的短缺是困擾我國飼料工業(yè)發(fā)展的主要因素。因此，要選擇有利于節(jié)約糧食資源的畜牧業(yè)發(fā)展道路，提高飼料利用率，充分利用有限的糧食資源獲得盡可能多的畜產(chǎn)品。酶制劑的使用能有效的解決這個問題，但目前在生產(chǎn)、實驗中的實際應(yīng)用的纖維素酶酶活力大多較低，因此也成為改善飼用酶應(yīng)用現(xiàn)狀的瓶頸之一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)配的小麥日糧酶及其制備方法。
[0006]本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):
[0007]一種小麥日糧酶，由以下重量份數(shù)的組分組成:黃芪粉0.5-2份，木聚糖酶20-40份，纖維素酶5-12份，β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物10-20份，中溫α -淀粉酶2_8份。
[0008]所述木聚糖酶和中溫α -淀粉酶均為湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司產(chǎn)品；
[0009]所述纖維素酶制備方法如下:
[0010]利用里氏木霉菌株，通過紫外誘變、培養(yǎng)、發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶；
[0011]里氏木霉菌株接種到斜面活化培養(yǎng)基上，逐級擴大培養(yǎng)制備種子液，培養(yǎng)時間為72-96小時；種子液按發(fā)酵液體積5-10%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，20-35°C培養(yǎng)96-144小時，即里氏木霉發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶結(jié)束；將發(fā)酵液在4000-600orpm離心，收集所得液體為粗酶液；得到的粗酶液進行超濃縮過濾，干燥得到。[0012]所述菌株的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)104小時，發(fā)酵液纖維素酶的外切β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物、內(nèi)切β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物、β -葡萄糖苷酶和濾紙酶活力分別達到 680U/mL、1389U/mL、486U/mL 和 792U/mL。
[0013]所述纖維素酶的生產(chǎn)菌種為里氏木霉(Trichodema reesei) 601-17,該菌株于2013年11月3日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M2013540，分類命名為里氏木霉601_17Trichodema reesei601_17,保藏地址:中國.武漢.武漢大學，郵編 430072。
[0014]所述菌株產(chǎn)纖維素酶的最適ρΗ3.0-6.0 ;最適溫度為23~35°C。
[0015]所述菌株生理生化特征:
[0016]該菌株在PDA固體培養(yǎng)基上生長，形成的菌落特征為菌落呈棉絮狀，菌落呈淡綠色，菌落扁平，高0.1-0.75mm,菌落邊緣白色，整齊；生長速度快，48h菌落直徑達1.0-8.5mm, 72h達30-50mm ;菌絲白色，有隔膜，菌絲壁光滑，直徑在2-5?πι。分生孢子梗從菌絲的短側(cè)枝發(fā)生，側(cè)枝上對生。分生孢子梗呈瓶狀，直立，無色，孢子呈球形，綠色，直徑20-100?πι。
[0017]該菌株可在麥麩上生長，主要代謝產(chǎn)物為纖維素酶(內(nèi)切纖維素酶、外切纖維素酶和葡萄糖苷酶)。根據(jù)((An Introduction industrial mycology)) (George Smithl954)、《真菌鑒定手冊》(魏景超1982)、 《常見與常用真菌》(中科院微生物研究所1973)，鑒定該菌株為:里氏木霉。
[0018]所述β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物制備方法如下:
[0019](I)種子培養(yǎng)
[0020]將地衣芽孢桿菌斜面菌種經(jīng)三級搖瓶發(fā)酵劑一級種子罐發(fā)酵；
[0021]所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為:酵母粉0.3-0.5%，葡萄糖1-1.5%，蛋白胨0.3-0.5%，牛肉膏0.5-0.8%，磷酸氫二鉀0.8-1.5%，海藻糖1-3%，硫酸鈣Ig,氯化鎂2g，檸檬酸鈉l_3g，不足部分純凈水補足，pH4.5-7.0,121-123°C滅菌30_40min。
[0022](2)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0023]將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度35-45 °C，攪拌速度200-300r/min，通風量(V/V) 1:1-3，培養(yǎng)時間10_15h ;然后將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)15-20h ;此時，將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)10-15h ;
[0024]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖2g，中草藥劑粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH值4.5-7.0,121°C滅菌20min ；
[0025]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)PH值3-7，加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫15-30min進行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調(diào)初始PH3-7，121_123°C滅菌30_40min備用。[0026]溶解氧控制:通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速及通風量，控制溶解氧15-30% ；
[0027]PH控制:通過補氨水或稀磷酸，控制發(fā)酵過程中pH值保持在3-7 ；
[0028]補料控制:當發(fā)酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時,開始添加補料培養(yǎng)基，補料量以維持發(fā)酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ；
[0029]放罐標準:60-80%菌體衰老自溶，酶活力增長緩慢。
[0030](3)發(fā)酵液經(jīng)離心分離、濃縮、精濾、干燥得β -葡聚糖酶，離心所獲得地衣芽孢桿菌菌體經(jīng)清洗后冷凍干燥獲得地衣芽孢桿菌菌體，將β-葡聚糖酶和地衣芽孢桿菌菌體混合獲得葡聚糖酶及其培養(yǎng)物。
[0031]所述地衣芽孢桿菌具體為地衣芽孢桿菌(B acillus Iicheniformis) β-10-25。該菌株已于2013年11月3日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC，地址為:中國.武漢.武漢大學，郵編430072)，保藏號為CCTCC NO:Μ2013538，分類命名為地衣芽孢桿菌 β-10-25 Bacillus Iicheniformisβ-10-25。
[0032]該菌株由一株本公司實驗室保藏的產(chǎn)葡聚糖酶的地衣芽孢桿菌經(jīng)原始出發(fā)菌種一試管活化一紫外線(UV)-氯化鋰(LiCl)-硫酸二乙酯(DES)復(fù)合誘變一平板初篩(高產(chǎn))一搖瓶復(fù)篩(高產(chǎn))一熱穩(wěn)定性測定一傳代穩(wěn)定性試驗等步驟篩選獲得，特點如下: [0033]所述菌株在固體平板上菌落為白色，邊緣不整齊，表面干燥不透明，鏡檢為革蘭氏陽性細菌，細胞形態(tài)呈短桿狀，芽孢中生，橢圓形，不膨大。
[0034]所述菌株生理生化特征:V-P試驗( + )，淀粉水解( + )，酪素水解( + )，明膠水解( + )，硝酸鹽還原( + )，吲哚試驗(_)，利用檸檬酸鹽( + )，硝酸還原( + )，甘露醇( + )，木糖(+ )。
[0035]優(yōu)選的，一種小麥日糧酶，由以下重量份數(shù)的組分組成:黃芪粉1份，木聚糖酶30份，纖維素酶8份，β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物15份，中溫α -淀粉酶5份。
[0036]所述小麥日糧酶適用于飼料加工廠和養(yǎng)殖場自配飼料，使用時應(yīng)與飼料中的其它原料混合均勻。建議每噸全價料添加量為100g(飼料中小麥用量低于30%，添加量為100g/t，小麥用量超過30%，添加量為120-150g/t)。
[0037]所述小麥日糧酶適用于飼料加工廠和養(yǎng)殖場自配飼料，使用時應(yīng)與飼料中的其它原料混合均勻。建議每噸全價料添加量為80-15g (飼料中小麥用量低于30%，添加量為100g/t，小麥用量超過30%，添加量為120-150g/t)。
[0038]有益效果:
[0039]發(fā)明產(chǎn)品對小麥及其副產(chǎn)品飼料中的可溶性、非可溶性木聚糖有很強的催化降解作用，能有效摧毀植物細胞壁，快速降解飼料中的抗營養(yǎng)因子-NSP，加速植物飼料內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的釋放溶解；補充和平衡動物體內(nèi)內(nèi)源酶，降低動物腸道內(nèi)容物黏度，防腹瀉；提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收；黃芪粉的添加增強動物免疫力和抗病能力，提高飼養(yǎng)速度及成活率。產(chǎn)品中添加的β-葡聚糖酶及其培養(yǎng)物中含有益生菌地衣芽孢桿菌對于維持動物腸道健康具有良好作用。
[0040]相較于添加有普通纖維素酶的小麥日糧酶，在同樣的用量下本發(fā)明對纖維素的酶解率更高，從而提高飼料轉(zhuǎn)化率，降低飼料成本。
[0041]本發(fā)明中添加了中草藥，其具有天然抗菌和增強免疫力的作用，可以有效的提高畜禽動物的抗應(yīng)激能力、免疫功能以及抗病防御機能。
【具體實施方式】
[0042]實施例1
[0043]一種小麥日糧酶按如下重量份數(shù)組成:黃芪粉1.5份，木聚糖酶30份，纖維素酶10份，β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物16份，中溫α -淀粉酶6份。
[0044]實施例2
[0045]一種小麥日糧酶按如下重量份數(shù)組成:黃芪粉2份，木聚糖酶28份，纖維素酶8份，β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物15份，中溫α -淀粉酶5份。
[0046]實施例3
[0047]一種小麥日糧酶按如下重量份數(shù)組成:黃芪粉0.5份，木聚糖酶40份，纖維素酶5份，β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物20份，中溫α -淀粉酶8份。
[0048]纖維素酶的制備方法
[0049]菌種初篩:原始菌株里氏木霉HYXOl采自津市市保河堤食用菌培植基地中的土樣篩選分離出。里氏木霉菌株接種到斜面活化培養(yǎng)基上，活化菌種；培養(yǎng)活化后的菌種，挑取單菌落制備孢子懸浮液，并用紫外照射孢子`懸浮液，誘變得到孢子菌落；適當稀釋將孢子濃度調(diào)節(jié)為103個/mL，取最后稀釋度的菌液0.2mL，稀釋涂布于纖維素-剛果紅平板篩選培養(yǎng)基上。在30°C培養(yǎng)3天后挑取透明圈/菌落直徑較大的菌株200支。(所述纖維素-剛果紅平板篩選培養(yǎng)基組成如下:纖維素粉10g、剛果紅0.2g、硫酸銨5g、硫酸鎂0.25g、磷酸二氫鉀lg、氯化鈉0.lg、明膠2g、瓊脂20g、自來水定容1000mL，pH值5-6，121°C滅菌20min)。
[0050]復(fù)篩:將獲得的200株菌分別用無菌牙簽接種于斜面培養(yǎng)基，30°C培養(yǎng)至孢子鋪滿斜面。分別將孢子以無菌水洗下接種于裝有50mL復(fù)篩培養(yǎng)基的250mL三角瓶中進行發(fā)酵，接種量10%( v/v)，30°C、100r/min培養(yǎng)96h，分別測定各菌株的纖維素酶活性。(所述復(fù)篩培養(yǎng)基組成如下:纖維素粉50g、硫酸銨5g、硫酸鎂0.25g、磷酸二氫鉀lg、氯化鈉0.lg、自來水定容1000mL，pH值5-6，121°C滅菌20min)。選取纖維素酶酶活力最高的菌株進行放大實驗。
[0051]復(fù)篩選出菌株為里氏木霉(Trichoderma reesei) 601-17,保藏編號為CCTCC NO:M2013540。
[0052]培養(yǎng)特征:該菌株產(chǎn)纖維素酶的最適pH3.0-6.0 ;最適溫度為23~35°C。
[0053]遺傳穩(wěn)定性試驗:將該菌株在斜面上連續(xù)十次傳代，并用搖瓶復(fù)篩的方法檢測每次傳代后的發(fā)酵情況。實驗發(fā)現(xiàn)，在斜面上連續(xù)十次傳代，該菌種性狀沒有明顯變化，各項性能指標都正常，說明該菌種的遺傳穩(wěn)定性較強。
[0054]放大試驗
[0055]種子培養(yǎng):將纖維素酶酶活力最高的菌株接入500mL三角瓶中，種子培養(yǎng)基裝量100 毫升，300C、150rpm 搖床培養(yǎng) 72_96h。
[0056]種子罐培養(yǎng):將種子液以10% (v/v)接種量接入裝有7.5L發(fā)酵培養(yǎng)基的IOL發(fā)酵罐中，控制pH值恒定為5.0±0.2，培養(yǎng)溫度27±0.1°C，攪拌速度300rpm，通風量(v/v)1:0.8-1.2,培養(yǎng)時間104h，溶解氧20-30%。所述發(fā)酵培養(yǎng)基制備方法為:纖維素粉10%、硫酸銨0.5%、硫酸鎂0.025%、磷酸二氫鉀0.1%、氯化鈉0.01%、其余為水，pH值5-6，121°C滅菌20min。發(fā)酵結(jié)束后，取發(fā)酵上清液(粗酶液)進行酶活力檢測，經(jīng)測定，外切葡聚糖酶及其培養(yǎng)物及其培養(yǎng)物、內(nèi)切β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物及其培養(yǎng)物、β -葡萄糖苷酶和濾紙酶活力分別達到 680U/mL、1389U/mL、486U/mL 和 792U/mL。
[0057]本發(fā)明中使用的里氏木霉(Trichoderma reesei)誘變后的菌株在4°C環(huán)境中可保存2個月，在10-20%的山梨醇溶液中，于零下80°C下可長期保存。
[0058]斜面培養(yǎng)基:馬鈴薯20%、葡萄糖1%、瓊脂2%，其余為水，pH自然，溫度28°C。
[0059]所述β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物制備方法如下:
[0060](I)種子培養(yǎng)
[0061]將地衣芽孢桿菌斜面菌種經(jīng)三級搖瓶發(fā)酵劑一級種子罐發(fā)酵；
[0062]所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為:酵母粉0.4%，葡萄糖1.3%，蛋白胨0.5%，牛肉膏0.8%，磷酸氫二鉀0.8%，海藻糖2%，硫酸鈣lg，氯化鎂2g，檸檬酸鈉2g，不足部分純凈水補足，ρΗ6.0,121°C滅菌 30min。
[0063](2)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0064]將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度35°C，攪拌速度200r/min，通風量(V/V) 1:1,培養(yǎng)時間12h ;然后將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35°C時恒溫培養(yǎng)16h ;此時，將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)12h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35°C時恒溫培養(yǎng)12h ；
[0065]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖2g，中草藥劑粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH值6，121。。滅菌20min ；
[0066]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)PH值3-7，加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫15-30min進行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調(diào)初始PH5，121_123°C滅菌30min備用。
[0067]溶解氧控制:通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速及通風量，控制溶解氧30% ；
[0068]PH控制:通過補氨水或稀磷酸，控制發(fā)酵過程中pH值保持在6 ；
[0069]補料控制:當發(fā)酵液中的還原糖含量降至8mg/ml時,開始添加補料培養(yǎng)基,補料量以維持發(fā)酵液還原糖含量為4mg/ml-5mg/ml ；
[0070]放罐標準:80%菌體衰老自溶，酶活力增長緩慢。
[0071](3)發(fā)酵液經(jīng)離心分離、濃縮、精濾、干燥得葡聚糖酶及其培養(yǎng)物，離心所獲得地衣芽孢桿菌菌體經(jīng)清洗后冷凍干燥獲得地衣芽孢桿菌菌體，將β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物和地衣芽孢桿菌菌體混合獲得葡聚糖酶及其培養(yǎng)物。
[0072]所述地衣芽孢桿菌具體為地衣芽孢桿菌(B acillus Iicheniformis) β-10-25。該菌株已于2013年10月28日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC，地址為:武漢市武昌區(qū)珞珈山武漢大學生命科學學院)，保藏號為CCTCC NO:Μ2013538ο
[0073]該菌株由一株本公司實驗室保藏的產(chǎn)葡聚糖酶的地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis) β -10原始出發(fā)菌種一試管活化一紫外線(UV)-氯化鋰(LiCl)-硫酸二乙酯(DES)復(fù)合誘變一平板初篩(聞廣)一搖瓶復(fù)篩(聞廣)一熱穩(wěn)定性測定一傳代穩(wěn)定性試驗等步驟篩選獲得，特點如下:
[0074]所述菌株在固體平板上菌落為白色，邊緣不整齊，表面干燥不透明，鏡檢為革蘭氏陽性細菌，細胞形態(tài)呈短桿狀，芽孢中生，橢圓形，不膨大。
[0075]所述菌株生理生化特征:V-P試驗( + )，淀粉水解( + )，酪素水解( + )，明膠水解( + )，硝酸鹽還原( + )，吲哚試驗(_)，利用檸檬酸鹽( + )，硝酸還原( + )，甘露醇( + )，木糖(+ )。實施例4效果對比實驗
[0076]選取120頭育肥前期豬，按體重、血統(tǒng)及性別無差異分為四組，三個對照組和一個實驗組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)10頭豬。試驗豬平均初始體重33.8KG，實驗期為28天，對照組一飼喂普通玉米型飼糧，對照組二飼喂普通小麥型飼糧，對照組三飼喂的普通小麥型飼糧中每噸加入含普通纖維素酶的小麥日糧酶120g，試驗組飼喂的普通小麥型飼糧中每噸加入本實施例1所述小麥日糧酶120g。于試驗期的始末日早晨空腹稱重，計算日增重和料肉比。實驗結(jié)果如下表所示:
[0077]
【權(quán)利要求】
1.一種小麥日糧酶，其特征在于，所述小麥日糧酶由以下重量份數(shù)的組分組成:黃芪粉0.5-2份，木聚糖酶20-40份，纖維素酶5-12份，β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物10_20份，中溫α_淀粉酶2-8份；所述纖維素酶的生產(chǎn)菌種為里氏木霉(Trichoderma reesei) 601-17,該菌種保藏編號為CCTCC NO:M2013540o
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥日糧酶，其特征在于，所述纖維素酶制備方法如下:將里氏木霉菌株接種到斜面活化培養(yǎng)基上逐級擴大培養(yǎng)制備種子液，培養(yǎng)時間為72-96小時；種子液按發(fā)酵液體積5-10%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，20-35°C培養(yǎng)96-144小時，即里氏木霉發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶結(jié)束；將發(fā)酵液在4000-600Orpm離心，收集所得液體為粗酶液；得到的粗酶液進行超濃縮過濾，干燥得到。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥日糧酶，其特征在于，所述里氏木霉菌株的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)104小時，發(fā)酵液纖維素酶的外切β-葡聚糖酶、內(nèi)切β -葡聚糖酶、β -葡萄糖苷酶和濾紙酶活力分別達到680U/mL、1389U/mL、486U/mL和792U/mLo
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的一種小麥日糧酶，其特征在于，由以下重量份數(shù)的組分組成:黃芪粉1.5份，木聚糖酶30份，纖維素酶10份，β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物16份，中溫α-淀粉酶6份。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥日糧酶，其特征在于，由以下重量份數(shù)的組分組成:黃芪粉1份，木聚糖酶28份，纖維素酶8份，β -葡聚糖酶及其培養(yǎng)物15份，中溫α -淀粉酶5份。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥日糧酶，其特征在于，所述葡聚糖酶及其培養(yǎng)物制備方法如下:將地衣芽孢桿菌斜面菌種經(jīng)逐級培養(yǎng)到發(fā)酵罐，發(fā)酵液經(jīng)離心分離、濃縮、精濾、干燥得β -葡聚糖酶，離心所獲得地衣芽孢桿菌菌體經(jīng)清洗后冷凍干燥獲得地衣芽孢桿菌菌體，將β-葡聚 糖酶和地衣芽孢桿菌菌體混合獲得β-葡聚糖酶及其培養(yǎng)物；所述地衣芽孢桿菌具體為地衣芽孢桿菌(Bacillus Iicheniformis)^ -10-25，保藏號為CCTCCNO:M2013538o
【文檔編號】A23K1/14GK103740679SQ201310716850
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年12月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月23日
【發(fā)明者】李洪兵, 李海清, 張錦杰, 胡永明, 易繼云 申請人:湖南鴻鷹生物科技有限公司