一種紫玉蘭組織培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種紫玉蘭組織培養(yǎng)方法，該紫玉蘭組織培養(yǎng)方法是在開放式條件下進行，該方法其中包括對對紫玉蘭組織培養(yǎng)場地的滅菌抑菌處理、外植體的選擇、外植體的滅菌消毒、外植體的初代培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)等步驟。本發(fā)明中紫玉蘭組織培養(yǎng)方法在開放式條件下進行，可以在開放的條件下進行，節(jié)約了成本；對紫玉蘭的滅菌保證了外植體無菌污染，提高其培養(yǎng)成活率；用2％PVP浸泡外植體以及在培養(yǎng)基中加入2％PVP，減輕了外植體的褐化，提高其成活率。該紫玉蘭組織培養(yǎng)方法是在操作簡單，時間短，成本低廉，成活率高、生根率高，能實現(xiàn)短期內(nèi)的出瓶移栽，并能夠保持原品種的優(yōu)良性狀，為良種繁育和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
【專利說明】—種紫玉蘭組織培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，主要涉及的的是紫玉蘭的組織培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紫玉蘭，又名木蘭、辛夷，為中國特有植物，分布在中國云南，福建，湖北，四川等地，生長于海拔300至1600米的地區(qū)，一般生長于山坡邊緣。紫玉蘭花朵艷麗怡人，芳香淡雅，孤植或叢植都很美觀，是優(yōu)良的庭園、街道綠化植物，又是中國傳統(tǒng)的花卉和中藥，但是紫玉蘭不易移植和養(yǎng)護，已經(jīng)被錄入《世界自然保護聯(lián)盟》植物紅色名錄，是非常珍貴的花木。
[0003]現(xiàn)在隨著技術(shù)的發(fā)展，很多地區(qū)都在開展紫玉蘭培養(yǎng)的方法，想在本地區(qū)培育種植紫玉蘭。傳統(tǒng)的紫玉蘭一般采用播種、扦插、嫁接、壓條和分株繁殖等培養(yǎng)方式。這些培養(yǎng)方式的耗時長，而且繁育不易成活?，F(xiàn)有的一些紫玉蘭組織培養(yǎng)方式是在封閉的無菌條件下進行的，所需成本較大，而且還存在著組織培養(yǎng)中外植體容易褐化，成活率不高的問題，不能用于紫玉蘭的大量繁殖。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明針對現(xiàn)有的技術(shù)問題，提出一種紫玉蘭組織培養(yǎng)方法，該方法在開放式條件下進行，不用置備一個封閉式無菌環(huán)境，節(jié)約了成本；對紫玉蘭滅菌處理，保證了外植體無菌污染，提高其培養(yǎng)成活率高；用2% PVP浸泡外植體以及在培養(yǎng)基中加入2% PVP，減輕了外植體的褐化，提高了外植體的成活率。該紫玉蘭組織培養(yǎng)方法是在操作簡單，時間短，成本低廉，成活率高、生根率高，并能實現(xiàn)短期內(nèi)的出瓶移栽。本發(fā)明的組織培養(yǎng)方法能夠保持原品種的優(yōu)良性狀，為良種繁育和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
[0005]本發(fā)明的紫玉蘭組織培養(yǎng)方法通過如下的操作來實現(xiàn)上述目的:
[0006]1、使用抑菌劑為殺菌保果、代森錳鋅和次氯酸中一種或幾種對進行紫玉蘭組織培養(yǎng)的場地做滅菌抑菌處理；
[0007]2、外植體的選擇:選擇直徑為1~2cm帶有腋芽的紫玉蘭枝條為外植體，剪去枝條的葉片，并將其剪成1~2cm的帶腋芽的莖段；
[0008]3、外植體的消毒滅菌:先用自來水把外植體沖洗6~lOmin，然后把外植體浸沒在濃度為0.1 %的升汞溶液里，并加入2~3ml吐溫溶液，把外植體浸泡在該混合溶液中7~13min,最后用無菌水把外植體沖洗4~6次；
[0009]4、初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將消毒滅菌后的外植體用2% PVP浸泡2~5min，然后將該莖段按末端向上插入WPM基本培養(yǎng)基中，在22~26°C，光強2000~3000Lxt條件下進行初始培養(yǎng)；3~5天后觀察，將未污染的植物莖段轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)10~15天至新芽長出；
[0010]5、伸長培養(yǎng):將長出新芽的外植體莖段轉(zhuǎn)插入伸長培養(yǎng)基中，即是基本培養(yǎng)基WPM 中加入 6-BA0.2 ~0.6mg/L、NAA0.3 ~0.6mg/L、GA30.2 ~0.4mg/L 以及 ΝΑΑ0.8 ~1.0g/L，在伸長培養(yǎng)基中進行新芽的伸長培養(yǎng)，在22~26°C，光強2000~3000Lxt條件下培養(yǎng)15~20天，至新芽伸長到0.2~0.6cm ；
[0011]6、增殖培養(yǎng):將長出的新芽接入含有生長調(diào)節(jié)物質(zhì)BA0.8~1.2mg/L和ΝΑΑ0.08~0.12mg/L的WPM培養(yǎng)基中，在22~26°C，光強2000~3000Lxt條件下培養(yǎng)23~26天;
[0012]7、生根培養(yǎng):將增殖培養(yǎng)得到的組培苗在4~7°C冷藏10~14天，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基為:WPM基本培養(yǎng)基中加入0.8~1.0mg/LNAA，在生根培養(yǎng)集中繼續(xù)培養(yǎng)15~20天；之后再將該組培苗轉(zhuǎn)接到含有2% PVP的WPM培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)10~15天，生根后進行煉苗；將生根苗移接到室外進行培養(yǎng)。
[0013]本發(fā)明的有益之處:與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明針對現(xiàn)有的技術(shù)問題，提出一種紫玉蘭組織培養(yǎng)方法，該方法在開放式條件下進行，不用置備一個封閉式無菌環(huán)境，節(jié)約了成本；對紫玉蘭的滅菌保證了外植體無菌污染，提高其培養(yǎng)成活率；用2% PVP浸泡外植體以及在培養(yǎng)基中加入2% PVP，減輕了外植體的褐化，提高了外植體的成活率。該紫玉蘭組織培養(yǎng)方法是在操作簡單，時間短，成本低廉，成活率高、生根率高，并能實現(xiàn)短期內(nèi)的出瓶移栽。本發(fā)明的組織培養(yǎng)方法能夠保持原品種的優(yōu)良性狀，為良種繁育和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
【具體實施方式】
[0014]以下對本發(fā)明做進一步的說明。
[0015]實施例1 [0016]使用抑菌劑為殺菌保果、代森錳鋅和次氯酸中一種或幾種對進行紫玉蘭組織培養(yǎng)的場地做滅菌抑菌處理；
[0017]外植體的選擇:選擇直徑為1.5cm帶有腋芽的生長健壯，無病蟲毒害的紫玉蘭枝條為外植體，剪去枝條的葉片，并將其剪成1.5cm的帶腋芽的莖段；
[0018]外植體的消毒滅菌:先用自來水把外植體沖洗6min，然后把外植體浸沒在濃度為
0.1 %的升汞溶液里，并加入2ml吐溫溶液，把外植體浸泡在該混合溶液中7min，最后用無菌水把外植體沖洗4次；
[0019]初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將消毒滅菌后的外植體用2% PVP浸泡2min，然后將該莖段按末端向上插入WPM基本培養(yǎng)基中，在22°C，光強2000Lxt條件下進行初始培養(yǎng)；3天后觀察，將未污染的植物莖段轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)10天至新芽長出；
[0020]伸長培養(yǎng):將長出新芽的外植體莖段轉(zhuǎn)插入伸長培養(yǎng)基中，即是基本培養(yǎng)基WPM中加入6-BA0.2mg/L、NAA0.3mg/L、GA30.2mg/L以及IAA0.8g/L，在伸長培養(yǎng)基中進行新芽的伸長培養(yǎng)，在22°C，光強2000Lxt條件下培養(yǎng)15天，至新芽伸長到0.2cm ；
[0021]增殖培養(yǎng):將長出的新芽接入含有生長調(diào)節(jié)物質(zhì)ΒΑ0.8mg/L和NAA0.08mg/L的WPM培養(yǎng)基中，在22°C，光強2000Lxt條件下培養(yǎng)23天；
[0022]生根培養(yǎng):將增殖培養(yǎng)得到的組培苗在4°C冷藏10天，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基為:WPM基本培養(yǎng)基中加入0.8mg/LNAA，在生根培養(yǎng)集中繼續(xù)培養(yǎng)15天；之后再將該組培苗轉(zhuǎn)接到含有2% PVP的WPM基本培養(yǎng)基培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)10天，生根后進行煉苗；將生根苗移接到室外進行培養(yǎng)。[0023]實施例2
[0024]使用抑菌劑為殺菌保果、代森錳鋅和次氯酸中一種或幾種對進行紫玉蘭組織培養(yǎng)的場地做滅菌抑菌處理；
[0025]外植體的選擇:選擇直徑為1.5cm帶有腋芽的生長健壯，無病蟲毒害的紫玉蘭枝條為外植體，剪去枝條的葉片，并將其剪成1.5cm的帶腋芽的莖段；
[0026]外植體的消毒滅菌:先用自來水把外植體沖洗8min，然后把外植體浸沒在濃度為
0.1 %的升汞溶液里，并加入2.5ml吐溫溶液，把外植體浸泡在該混合溶液中l(wèi)Omin，最后用無菌水把外植體沖洗5次；
[0027]初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將消毒滅菌后的外植體用2% PVP浸泡4min，然后將該莖段按末端向上WPM基本培養(yǎng)基中，在24°C，光強2500Lxt條件下進行初始培養(yǎng)；4天后觀察，將未污染的植物莖段轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)12天至新芽長出；
[0028]伸長培養(yǎng):將長出新芽的外植體莖段轉(zhuǎn)插入伸長培養(yǎng)基中，即是基本培養(yǎng)基WPM中加入6-BA0.4mg/L、NAA0.4mg/L、GA30.3mg/L以及IAA0.9g/L，在伸長培養(yǎng)基中進行新芽的伸長培養(yǎng)，在24°C，光強2500Lxt條件下培養(yǎng)18天，至新芽伸長到0.4cm ；
[0029]增殖培養(yǎng):將長出的新芽接入含有生長調(diào)節(jié)物質(zhì)BAl.0mg/L和NAA0.lmg/L的WPM培養(yǎng)基中，在24°C，光強2500Lxt條件下培養(yǎng)24天；
[0030]生根培養(yǎng):將增殖培養(yǎng)得到的組培苗在4°C冷藏12天，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基為:WPM基本培養(yǎng)基中加入0.9mg/LNAA，在生根培養(yǎng)集中繼續(xù)培養(yǎng)18天；之后再將該組培苗轉(zhuǎn)接到含有2% PVP的WPM基本培養(yǎng)基培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)13天，生根后進行煉苗；將生根苗移接到室外進行培養(yǎng)。
[0031]實施例3
[0032]使用抑菌劑為殺菌保果、代森錳鋅和次氯酸中一種或幾種對進行紫玉蘭組織培養(yǎng)的場地做滅菌抑菌處理；
[0033]外植體的選擇:選擇直徑為1.5cm帶有腋芽的生長健壯，無病蟲毒害的紫玉蘭枝條為外植體，剪去枝條的葉片，并將其剪成1.5cm的帶腋芽的莖段；
[0034]外植體的消毒滅菌:先用自來水把外植體沖洗lOmin，然后把外植體浸沒在濃度為0.1 %的升汞溶液里，并加入3ml吐溫溶液，把外植體浸泡在該混合溶液中13min，最后用無菌水把外植體沖洗6次；
[0035]初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將消毒滅菌后的外植體用2% PVP浸泡5min,然后將該莖段按末端向上插入WPM基本培養(yǎng)基中，在26°C，光強3000Lxt條件下進行初始培養(yǎng)；5天后觀察，將未污染的植物莖段轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)15天至新芽長出；
[0036]伸長培養(yǎng):將長出新芽的外植體莖段轉(zhuǎn)插入伸長培養(yǎng)基中，即是基本培養(yǎng)基WPM中加入6-BA0.6mg/L、NAA0.6mg/L、GA30.4mg/L以及IAA1.0g/L，在伸長培養(yǎng)基中進行新芽的伸長培養(yǎng)，在26°C，光強3000Lxt條件下培養(yǎng)20天，至新芽伸長到0.6cm ；
[0037]增殖培養(yǎng):將長出的新芽接入含有生長調(diào)節(jié)物質(zhì)BAl.2mg/L和NAA0.12mg/L的WPM培養(yǎng)基中，在26°C，光強3000Lxt條件下培養(yǎng)26天；
[0038]生根培養(yǎng):將增殖培養(yǎng)得到的組培苗在7°C冷藏14天，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基為:WPM基本培養(yǎng)基中加入1.0mg/LNAA，在生根培養(yǎng)集中繼續(xù)培養(yǎng)20天；之后再將該組培苗轉(zhuǎn)接到含有2% PVP的WPM基本培養(yǎng)基培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)15天，生根后進行煉苗；將生根苗移接到室外進行培養(yǎng)。
[0039]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明針對現(xiàn)有的技術(shù)問題，提出一種紫玉蘭組織培養(yǎng)方法，該方法在開放式條件下進行，不用置備一個封閉式無菌環(huán)境，節(jié)約了成本；對紫玉蘭的滅菌保證了外植體無菌污染，提高其培養(yǎng)成活率；用2% PVP浸泡外植體以及在培養(yǎng)基中加入2%PVP，減輕了外植體的褐化，提高了外植體的成活率。該紫玉蘭組織培養(yǎng)方法是在操作簡單，時間短，成本低廉，成活率高、生根率高，并能實現(xiàn)短期內(nèi)的出瓶移栽。本發(fā)明的組織培養(yǎng)方法能夠保持原品種的 優(yōu)良性狀，為良種繁育和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
【權(quán)利要求】
1.一種紫玉蘭的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該組織培養(yǎng)方法是在開放式條件下進行，其方法包括以下步驟: (1)對進行紫玉蘭組織培養(yǎng)的場地的消毒滅菌； (2)外植體的選擇:選擇直徑為I~2cm帶有腋芽的紫玉蘭枝條為外植體； (3)外植體的消毒:先用自來水沖洗8~12min，然后用濃度為0.1 %的升汞和吐溫混合物浸泡7~13min,最后用無菌水沖洗4~6次； (4)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后的外植體用2%PVP浸泡2~5min，然后將該莖段按末端向上插入基本培養(yǎng)基WPM中，在22~26°C，光強2000~3000Lxt條件下進行初始培養(yǎng)；3~5天后觀察，將未污染的植物莖段轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)10~15天至新芽長出； (5)伸長培養(yǎng):將長出新芽的外植體莖段轉(zhuǎn)插入伸長培養(yǎng)基中進行新芽的伸長培養(yǎng)，在22~26°C，光強2000~3000Lxt條件下培養(yǎng)15~20天，至新芽伸長到0.2~0.6cm ； (6)增殖培養(yǎng):將長出的新芽接入含有生長調(diào)節(jié)物質(zhì)BAl.0mg/L和NAA0.lmg/L的WPM基本培養(yǎng)基中，在22~26°C，光強2000~3000Lxt條件下培養(yǎng)23~26天； (J)生根培養(yǎng):將增殖培養(yǎng)得到的組培苗在4~7°C冷藏10~14天，轉(zhuǎn)接到加入了NAA1.0mg/L的WPM培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)15~20天；將組培苗轉(zhuǎn)接到加入2% PVP的WPM培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)10~15天，生根后進行煉苗；將生根苗移接到室外進行培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫玉蘭組織培養(yǎng)方法，其特征在于，開放式條件下使用的消毒滅菌劑為殺菌保果、代森錳鋅和次氯酸中一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，新芽伸長培養(yǎng)基為:基本培養(yǎng)基WPM中加入 6-BA0.2 ~0.6mg/L, ΝΑΑ0.3 ~0.6mg/L、GA30.2 ~0.4mg/L 以及 IΑΑ0.8 ~1.0g/L。
【文檔編號】A01H4/00GK103718966SQ201310730707
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年12月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月25日
【發(fā)明者】陳鳳花 申請人:陳鳳花