一種生命結(jié)合態(tài)有機(jī)酵母蛋白硒產(chǎn)品生產(chǎn)方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種生命結(jié)合態(tài)的有機(jī)酵母蛋白硒產(chǎn)品的生產(chǎn)方法和應(yīng)用。本發(fā)明在發(fā)酵過程中所使用的硒源是納米硒。納米硒具有毒性低、比表面積大和生物活性高等優(yōu)勢，可提高酵母菌對硒的耐受量和生物利用率；本發(fā)明在酵母發(fā)酵培養(yǎng)基中加入蛋白酶，以提高發(fā)酵原料的利用率，降低成本。相比以往通過酵母菌把無機(jī)硒轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒的方法，本發(fā)明硒源采用納米硒，其具有毒性低、轉(zhuǎn)化率高、吸收率高、產(chǎn)品安全性能好、生物利用率高和便于大規(guī)模生產(chǎn)及收集等優(yōu)點。
【專利說明】一種生命結(jié)合態(tài)有機(jī)酵母蛋白砸產(chǎn)品生產(chǎn)方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種酵母蛋白硒產(chǎn)品的生產(chǎn)方法及應(yīng)用領(lǐng)域，具體為一種生命結(jié)合態(tài)的有機(jī)酵母蛋白硒產(chǎn)品生產(chǎn)方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]硒是人和動物機(jī)體必需的一種微量元素，是機(jī)體內(nèi)多種酶的重要組成成分，具有抗氧化、調(diào)節(jié)機(jī)體代謝、增強(qiáng)免疫力等性能。但硒在最佳濃度和致毒濃度之間的安全限度非常狹窄，因此開發(fā)低毒、高效的硒源一直是硒營養(yǎng)研究的重點。納米硒是一種新型的硒產(chǎn)品，具有毒性低、生物利用率高等特點。中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告(第1226號)，飼料添加劑品種目錄(2008)，礦物元素及其絡(luò)(螯)合物中沒有納米硒，即納米硒不能作為飼料添加劑。酵母菌具有富集硒元素的能力，酵母蛋白硒是通過酵母生長過程中對高濃度納米硒硒的自主吸收和轉(zhuǎn)化，使硒與酵母體內(nèi)的蛋白質(zhì)和多糖結(jié)合，形成蛋白硒、氨基酸硒及多糖硒，即使硒元素以生命結(jié)合態(tài)的形式存在，從而消除硒元素對動物機(jī)體的傷害，并有利于機(jī)體的吸收利用。另外酵母中有豐富的營養(yǎng)成分，可以發(fā)揮協(xié)同作用。
[0003]當(dāng)前，畜產(chǎn)品日趨豐富，市場對畜產(chǎn)品的需求已由以數(shù)量為主轉(zhuǎn)向質(zhì)量和數(shù)量并重的消費(fèi)格局。酵母蛋白硒能促進(jìn)動物機(jī)體的吸收利用率，提高畜禽的抗氧化和免疫性能，改善肉品質(zhì)，又提高畜禽的生產(chǎn)性能，減少畜禽排泄物中氮、磷和硒的排泄量，保護(hù)水體和土壤免受污染，因而酵母硒作為一種高效、無毒副作用和環(huán)保型的“綠色”飼料添加劑，在21世紀(jì)將有十分廣闊的應(yīng)用前景。
[0004]中國專利ZL201210496430.8提供了一種簡單混合方法制備富硒生物菌肥的方法，沒有將無機(jī)硒轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒，而且沒有具體絡(luò)和方法。中國專利ZL01100600.5提供了一種含有高生物量的富硒酵母及其生產(chǎn)方法，其每克富硒酵母細(xì)胞含有機(jī)硒量僅有500~1500微克。中國專利:201010191719.X使用亞硒酸鈉所得產(chǎn)品硒含量5000mg/kg。
[0005]然而，酵母硒產(chǎn)品在應(yīng)用過程中很少能達(dá)到顯著效果；另外酵母硒很少能大生產(chǎn)。主要的問題:(1)酵母硒產(chǎn)品中硒含量較低；(2)酵母菌對無機(jī)硒的耐受量低；(3)酵母硒中有機(jī)硒含量低，一部分只是簡單的酵母和硒吸附；(4)培養(yǎng)基原料利用率低，成本高，且生產(chǎn)工藝復(fù)雜，重復(fù)性很差；(5)酵母硒產(chǎn)品的吸收率低、安全性低及生物利用率低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明目的在于提供一種生命結(jié)合態(tài)的有機(jī)酵母蛋白硒產(chǎn)品、其生產(chǎn)方法和應(yīng)用。所述生產(chǎn)方法是指利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)高硒含量的酵母蛋白硒的方法。
[0007]本發(fā)明具體技術(shù)方案為:
一種生命結(jié)合態(tài)有機(jī)酵母蛋白硒產(chǎn)品，它由如下方法制備而得:在酵母發(fā)酵培養(yǎng)過程中分批加入納米硒元素，通過酵母生長過程中對高濃度納米硒的自主吸收和轉(zhuǎn)化，使硒與酵母體內(nèi)的蛋白質(zhì)和多糖有機(jī)結(jié)合，形成蛋白硒、氨基酸硒及多糖硒，即得以生命結(jié)合態(tài)存在的有機(jī)酵母蛋白砸廣品。[0008]無機(jī)硒毒性較大，酵母很難在高硒的條件下生長，即使有生長，其生長速率和對硒的利用率也不高。因此本發(fā)明所采用的硒源為納米硒。納米硒具有低毒高效優(yōu)勢，酵母菌對其具有較好耐受性能。
[0009]本發(fā)明所采用的納米硒粒徑主要在在20~IOOnm之間，是單質(zhì)硒，呈紅色。
[0010]所述酵母發(fā)酵培養(yǎng)過程中，酵母菌發(fā)酵培養(yǎng)基組份為豆柏50~80g/L、麩皮20~40g/L、麥芽汁 15 ~40g/L 和 BOSAR 蛋白酶 0.1 ~0.3g/L。
[0011]優(yōu)選地，所述酵母菌發(fā)酵培養(yǎng)基組份為豆柏70g/L、麩皮30g/L、麥芽汁20g/L和BOSAR 蛋白酶 0.2g/L。
[0012]優(yōu)選地，所述酵母菌發(fā)酵培養(yǎng)基使用前進(jìn)行以下預(yù)處理步驟:將培養(yǎng)基中的豆柏、麩皮、麥芽汁與BOSAR蛋白酶混合均勻后，在pH值為5.5~6.0、溫度為50~55°C的條件下，水解5~7小時，將培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)分解為小分子物質(zhì)后，采用濕熱法對液體培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，即在121°C下，滅菌20~30min，然后冷卻到常溫。
[0013]優(yōu)選地，所述酵母發(fā)酵培養(yǎng)過程具體包括如下步驟:
1)將酵母菌通過斜面菌種培養(yǎng)、一級液體種子培養(yǎng)、二級液體種子培養(yǎng)和發(fā)酵罐種子培養(yǎng)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；
2)將擴(kuò)大培養(yǎng)后的酵母菌按5%接種量接種到滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中，并采用分批次的加入納米硒，在發(fā)酵溫度26°C~32°C進(jìn)行發(fā)酵，將酵母發(fā)酵液干燥，即得生命結(jié)合態(tài)的有機(jī)酵母蛋白硒。
[0014]優(yōu)選地,所述步驟2)中加入的納米硒總量為120~150mg/L。
[0015]優(yōu)選地，所述步驟2`)中的發(fā)酵溫度為31°C。
[0016]優(yōu)選地，所述步驟2)中的干燥是噴霧干燥。
[0017]優(yōu)選地，所述步驟2)中的干燥還可以是噴粉干燥、蒸汽壓力滾筒干燥或冷凍干燥。
[0018]本發(fā)明由上述方法制備而得的生命結(jié)合態(tài)的有機(jī)酵母蛋白硒產(chǎn)品，每kg產(chǎn)品中含硒10000~12000mg，其中有機(jī)硒含量占總硒的99.0~99.4%，可以應(yīng)用于制備飼料。
[0019]本發(fā)明的主要特點有:
(O 本發(fā)明使用的納米硒具有粒徑小、比表面積龐大、活性中心多，表面臺階和粗糙度增加的特點，具有較強(qiáng)的低毒高效優(yōu)勢；酵母菌對納米硒的耐受性能穩(wěn)定，吸收利用率聞。所得的酵母蛋白砸廣品中含砸聞，其中有機(jī)砸含量聞達(dá)12000mg/kg。
[0020](2) 本發(fā)明生產(chǎn)高硒含量的酵母蛋白硒中的酵母可以有活性，而以前的技術(shù)生產(chǎn)的酵母硒中的酵母大多是沒有活性的。
[0021 ] ( 3 )本發(fā)明中發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)蛋白酶預(yù)處理后，為酵母菌提供了更多的游離氨基酸，提高原料利用率，促進(jìn)酵母菌的生長繁殖、發(fā)酵速率，并減少菌體用于合成氨基酸等造成的底物流失和能耗。
[0022](4)本發(fā)明所述方法制備而得的生命結(jié)合態(tài)有機(jī)酵母蛋白硒產(chǎn)品可以用于動物飼料和植物飼料的制備。
【具體實施方式】
[0023]實施例1:
生產(chǎn)流程如下:斜面菌種培養(yǎng)一一級液體種子培養(yǎng)一二級液體種子培養(yǎng)一發(fā)酵罐種子培養(yǎng)一發(fā)酵罐培養(yǎng)一分離一干燥一包裝。
[0024](I)斜面菌種培養(yǎng):將酵母菌劃線于蛋白胨5g/L、酵母膏15g/L、氯化鈉4g/L、葡萄糖10g/L、納米硒120mg/L、瓊脂20g/L、pH值為4.8~6.0固體平板上活化，31°C恒溫培養(yǎng)48小時，挑取單菌落斜面保存?zhèn)溆谩?br> [0025](2)—級液體種子培養(yǎng):挑取斜面上的酵母菌種I~4環(huán)接種于裝有100~500mL蛋白胨5g/L、酵母膏15g/L、氯化鈉4g/L、葡萄糖10g/L、納米硒120mg/L、pH值為4.8~6.0液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在31 °C恒溫培養(yǎng)48小時。 [0026](3) 二級液體種子培養(yǎng):將一級種子培養(yǎng)液按1%的接種量接種于裝有10~40L的蛋白胨5g/L、酵母膏15g/L、氯化鈉4g/L、葡萄糖10g/L、納米硒120mg/L、pH值為4.8~6.0的卡氏培養(yǎng)瓶中，在26°C~32°C培養(yǎng)18~48小時。
[0027](4)發(fā)酵罐種子培養(yǎng):將二級種子培養(yǎng)液按5%的接種量接種到裝有I~15 m3的已預(yù)處理的發(fā)酵培養(yǎng)基中、納米硒120mg/L的種子發(fā)酵罐中，在26°C~32°C培養(yǎng)18~48小時。
[0028](5)發(fā)酵罐培養(yǎng):將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液按5%的接種量接種到裝有15~180m3的已預(yù)處理的發(fā)酵培養(yǎng)基中、納米硒120mg/L的發(fā)酵罐中(納米硒的加入方式為分批次加入)，在26°C~32°C培養(yǎng)14~36小時。
[0029]發(fā)酵培養(yǎng)基預(yù)處理:將豆柏70g/L、麩皮30g/L、麥芽汁20g/L和BOSAR蛋白酶
0.2g/L，混合均勻，在pH值為5.5~6.0、溫度為50~55°C的條件下水解5~7小時，將培養(yǎng)基中大分子物質(zhì)酶解為小分子物質(zhì)后，加入磷酸氫氨6g/L,調(diào)pH值為4.8~6.0,采用濕熱法對液體培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，即在121°C下，滅菌20~30min，然后冷卻到常溫，接種。
[0030](6)分離:采用疊片式分離機(jī)分離，再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框壓濾。
[0031](7)干燥:采用噴霧干燥法干燥，干燥的產(chǎn)品具有活性；采用噴粉干燥或者蒸汽壓力滾筒干燥，干燥產(chǎn)品沒有活性，是粉狀或小片狀；也可以采用冷凍干燥法干燥。
[0032](8)包裝:可以采用多種形式的包裝成為高硒含量的富硒酵母產(chǎn)品。硒含量達(dá)到10000mg/kg，有機(jī)蛋白硒含量達(dá)到99.4%。
[0033]實施例2:
生產(chǎn)流程如下:斜面菌種培養(yǎng)一一級液體種子培養(yǎng)一二級液體種子培養(yǎng)一發(fā)酵罐種子培養(yǎng)一發(fā)酵罐培養(yǎng)一分離一干燥一包裝。
[0034](I)斜面菌種培養(yǎng):將酵母菌劃線于蛋白胨5g/L、酵母膏15g/L、氯化鈉4g/L、葡萄糖10g/L、納米硒150mg/L、瓊脂20g/L、pH值為4.8~6.0固體平板上活化，31°C恒溫培養(yǎng)48小時，挑取單菌落斜面保存?zhèn)溆谩?br> [0035](2)—級液體種子培養(yǎng):挑取斜面上的酵母菌種I~4環(huán)接種于裝有100~500mL蛋白胨5g/L、酵母膏15g/L、氯化鈉4g/L、葡萄糖10g/L、納米硒150mg/L、pH值為4.8~6.0液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在31 °C恒溫培養(yǎng)48小時。
[0036](3) 二級液體種子培養(yǎng):將一級種子培養(yǎng)液按1%的接種量接種于裝有10~40L的蛋白胨5g/L、酵母膏15g/L、氯化鈉4g/L、葡萄糖10g/L、納米硒150mg/L、pH值為4.8~
6.0的卡氏培養(yǎng)瓶中，在26°C~32°C培養(yǎng)18~48小時。
[0037](4)發(fā)酵罐種子培養(yǎng):將二級種子培養(yǎng)液按5%的接種量接種到裝有I~15 m3的已預(yù)處理的發(fā)酵培養(yǎng)基中、納米硒150mg/L的種子發(fā)酵罐中，在26°C~32°C培養(yǎng)18~48小時。
[0038](5)發(fā)酵罐培養(yǎng):將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液按5%的接種量接種到裝有15~180m3的已預(yù)處理的發(fā)酵培養(yǎng)基中、納米硒150mg/L的發(fā)酵罐中(納米硒的加入方式為分批次加入)，在26°C~32°C培養(yǎng)14~36小時。
[0039]發(fā)酵培養(yǎng)基預(yù)處理:將豆柏70g/L、麩皮30g/L、麥芽汁20g/L和BOSAR蛋白酶
0.2g/L，混合均勻，在pH值為5.5~6.0、溫度為50~55°C的條件下水解5~7小時，將培養(yǎng)基中大分子物質(zhì)酶解為小分子物質(zhì)后，加入磷酸氫氨6g/L,調(diào)pH值為4.8~6.0,采用濕熱法對液體培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，即在121°C下，滅菌20~30min，然后冷卻到常溫，接種。
[0040](6)分離:采用疊片式分離機(jī)分離，再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框壓濾。
[0041](7)干燥:采用噴霧干燥法干燥，干燥的產(chǎn)品具有活性；采用噴粉干燥或者蒸汽壓力滾筒干燥，干燥產(chǎn)品沒有活性，是粉狀或小片狀；也可以采用冷凍干燥法干燥。
[0042](8)包裝:可以采用多種形式的包裝成為高硒含量的富硒酵母產(chǎn)品。硒含量達(dá)到12000mg/kg，有機(jī)蛋白硒含量達(dá)到99.0%。
[0043]對比例I
生產(chǎn)流程如下:斜面菌種培養(yǎng)一一級液體種子培養(yǎng)一二級液體種子培養(yǎng)一發(fā)酵罐種子培養(yǎng)一發(fā)酵罐培養(yǎng)一分離一干燥一包裝。
[0044]I)斜面菌種培養(yǎng):將耐高 硒的富硒酵母菌種接種到含糖量為5~25重量％、硒(硒酸鹽或亞硒酸鹽)濃度為300 μ g/mL、pH值為4~6.5的麥芽汁固體斜面上，在26~35°C培養(yǎng)24~48小時。
[0045]2)—級液體種子培養(yǎng):將斜面的酵母菌種接種I~4環(huán)到裝有100~500mL的含糖量為5~25重量％、硒(硒酸鹽或亞硒酸鹽)濃度為300 μ g/mL、pH值為4~6.5的麥芽汁專用培養(yǎng)瓶中，在26~35°C培養(yǎng)24~48小時。
[0046]3) 二級液體種子培養(yǎng):將一級液體種子培養(yǎng)液接種到裝有10~40L的含糖(麥芽汁或糖蜜或麥芽汁和糖蜜的混合物)量為5~25重量％、硒(硒酸鹽或亞硒酸鹽)濃度為300 μ g/mL、pH值為4~6.5的卡氏培養(yǎng)瓶中，在26~35°C培養(yǎng)15~48小時。
[0047]4)發(fā)酵罐種子培養(yǎng):將二級種子培養(yǎng)液接種到裝有I~15m3的含糖(麥芽汁或糖蜜或麥芽汁和糖蜜的混合物)量為5~25重量％、硒(硒酸鹽或亞硒酸鹽)濃度為300 μ g/mL、加I~5重量％磷酸氫氨、pH值為4~6.5的種子發(fā)酵罐中，在26~35°C培養(yǎng)18~48小時。
[0048]5)發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng):將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到15~180m3的含糖(淀粉水解糖或糖蜜或淀粉水解糖和糖蜜的混合物)量為5~25重量％、硒(硒酸鹽或亞硒酸鹽)濃度為300 μ g/mL、加I~5重量％磷酸氫氨、pH值為4~6.5的發(fā)酵罐中,所用的營養(yǎng)源采用流加方式，硒分批次加入，在26~35°C培養(yǎng)14~36小時。
[0049]6)分離:采用疊片式分離機(jī)分離，再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框壓濾。
[0050]7)干燥:采用60~140°C沸騰式干燥，干燥的產(chǎn)品具有活性；采用100~180°C噴粉干燥或者用3~6Kpa的蒸汽壓力滾筒干燥，干燥產(chǎn)品沒有活性是粉狀或小片狀；也可以采用冷凍干燥法干燥。
[0051]8)包裝:可以采用多種形式的包裝成為高硒含量的富硒酵母產(chǎn)品。硒含量達(dá)到7900mg/kg，其中有機(jī)硒含量占總硒的90.1重量％。[0052]對比例2
1、培養(yǎng)基
麥芽汁為培養(yǎng)基中的主要碳源，添加的糖度為90g/L~110g/L，蛋白胨和酵母膏為培養(yǎng)基中的氮源；亞硒酸鈉為培養(yǎng)基中的無機(jī)硒，種子培養(yǎng)基的初始添加量為50mg/L，發(fā)酵培養(yǎng)基的初始添加量為100mg/L，流加補(bǔ)硒的亞硒酸鈉濃度為10g/L。
[0053]種子培養(yǎng)基按照如下方法制備:將含糖量90g/L的麥芽汁、蛋白胨、酵母膏和無水亞硒酸鈉混合得到種子培養(yǎng)基，蛋白胨在種子培養(yǎng)基中的濃度為15g/L，酵母膏在種子培養(yǎng)基中的濃度為8g/L，亞硒酸鈉在種子培養(yǎng)基中的初始添加濃度為50mg/L，該種子培養(yǎng)基初始PH值為5.5。
[0054]發(fā)酵培養(yǎng)基按照如下方法制備:將含糖量110g/L的麥芽汁、蛋白胨、酵母膏和無水亞硒酸鈉混合得到種子培養(yǎng)基，蛋白胨在發(fā)酵培養(yǎng)基中的濃度為15g/L，酵母膏在發(fā)酵培養(yǎng)基中的濃度為8g/L，亞硒酸鈉在發(fā)酵培養(yǎng)基中的初始添加濃度為100mg/L，該發(fā)酵培養(yǎng)基初始PH值為6。
[0055]2、富硒酵母產(chǎn)品
(I)斜面菌株培養(yǎng)
將富硒酵母S1204 CCTCC N0:M2012216接種于含葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，瓊脂20g/L，亞硒酸鈉30ug/mL的斜面培養(yǎng)基(18*180mm試管)。28°C培養(yǎng)16h。
[0056](2)搖瓶一級 種子培養(yǎng)
吸取6mL無菌水至18*180mm的試管斜面，洗脫斜面菌株制成菌懸液(3X IO7個/mL)，然后再按2%的接種量接種至含有80mL的種子培養(yǎng)基的500mL搖瓶中，8層紗布封口，28°C振蕩培養(yǎng)(220r/min) 16h，得到一級種子培養(yǎng)液(種子液的0D600nm=50)。
[0057](3) 二級種子培養(yǎng)
將一級種子培養(yǎng)液按1% (體積百分含量)的接種量移種至含20L種子培養(yǎng)基的50L全自動發(fā)酵罐，28°C，pH5.5培養(yǎng)16h，得到搖瓶二級種子培養(yǎng)液(種子液的0D600nm=70)。
[0058](4)三級種子培養(yǎng)
將二級種子培養(yǎng)液按5% (體積百分含量)的接種量移種至含250L種子培養(yǎng)基的500L全自動發(fā)酵罐，培養(yǎng)溫度28°C，pH6.0，培養(yǎng)16h，得到搖瓶三級種子培養(yǎng)液(種子液的0D600nm=75)。
[0059](5)發(fā)酵培養(yǎng)
將三級種子培養(yǎng)液按12% (體積百分含量)的接種量移種至5m3發(fā)酵罐(裝液量為45%) 28 V，溶氧控制50~70%,含糖量控制1.0~2.0g/100mL, pH維持5.5~6.0，發(fā)酵12h后在發(fā)酵產(chǎn)物中補(bǔ)加終濃度為200mg/L的亞硒酸鈉，再發(fā)酵培養(yǎng)22h，發(fā)酵菌濃達(dá)到0D600nm=135,收集發(fā)酵產(chǎn)物。富硒酵母產(chǎn)品中的有機(jī)硒濃度(有機(jī)硒含量)達(dá)8899mg/kg。
[0060]應(yīng)用實驗 實施例3
在飼料廠生產(chǎn)肥育豬飼料25噸，飼糧中添加的酵母硒產(chǎn)品的量為40mg/kg，180頭體重65kg左右的杜長大肥育豬按飼養(yǎng)要求分為6組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)10頭，進(jìn)行了為期45天的養(yǎng)殖試驗。
[0061]表1肥育豬肉品質(zhì)表
【權(quán)利要求】
1.一種生命結(jié)合態(tài)的有機(jī)酵母蛋白硒產(chǎn)品生產(chǎn)方法，其特征在于，包括如下步驟:在酵母發(fā)酵培養(yǎng)過程中分批加入納米硒元素，通過酵母生長過程中對硒的自主吸收和轉(zhuǎn)化，使硒與酵母體內(nèi)的蛋白質(zhì)和多糖有機(jī)結(jié)合，形成蛋白硒、氨基酸硒及多糖硒，即得以生命結(jié)合態(tài)存在的有機(jī)酵母蛋白砸廣品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述納米硒是粒徑在20~IOOnm之間的紅色單質(zhì)硒。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述納米硒添加量是120~150mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述酵母發(fā)酵培養(yǎng)過程中，發(fā)酵培養(yǎng)基組份為豆柏50~80g/L、麩皮20~40g/L、麥芽汁15~40g/L和BOSAR蛋白酶0.1~0.3g/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，其特征在于，所述酵母菌發(fā)酵培養(yǎng)基組份為豆柏70g/L、麩皮30g/L、麥芽汁20g/L和 BOSAR蛋白酶0.2g/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，其特征在于，所述酵母菌發(fā)酵培養(yǎng)基使用前進(jìn)行以下預(yù)處理步驟:混合均勻后，在pH值為5.5~6.0、溫度為50~55°C的條件下，水解5~7小時后，采用濕熱法對液體培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，即在121°C下，滅菌20~30min，然后冷卻到常溫。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述酵母發(fā)酵培養(yǎng)過程具體包括如下步驟: 1)將酵母菌通過斜面菌種培養(yǎng)、一級液體種子培養(yǎng)、二級液體種子培養(yǎng)和發(fā)酵罐種子培養(yǎng)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)； 2)將擴(kuò)大培養(yǎng)后的酵母菌按5%接種量接種到滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中，并采用分批次的加入納米硒，在發(fā)酵溫度26°C~32°C進(jìn)行發(fā)酵，將酵母發(fā)酵液噴霧干燥，即得生命結(jié)合態(tài)的有機(jī)硒，發(fā)酵溫度優(yōu)選為31°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述方法，其特征在于，所述步驟2)中納米硒添加量是120~150mg/Lo
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法制備而得的生命結(jié)合態(tài)有機(jī)酵母蛋白硒產(chǎn)品。
10.根據(jù)權(quán)利要求12所述有機(jī)酵母蛋白硒產(chǎn)品，其特征在于，每kg產(chǎn)品中含硒10000~12000mg，其中有機(jī)硒含量占總硒的99.0~99.4%。
【文檔編號】A23K1/16GK103756922SQ201310747684
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年12月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月31日
【發(fā)明者】劉東霞, 杜景德 申請人:廣州市博仕奧生物科技有限公司