一種豬精原干細(xì)胞凍存液及其使用方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種豬精原干細(xì)胞凍存液及其使用方法，屬于干細(xì)胞生物工程領(lǐng)域。本發(fā)明公開的一種豬精原干細(xì)胞凍存液，它由基礎(chǔ)液DMEM/F12、BSA、DMSO組成。一種豬精原干細(xì)胞凍存液的使用方法，將預(yù)冷凍存管和凍存液至4℃。收集豬精原干細(xì)胞，用凍存液稀釋至每毫升含5×104～1×105個(gè)豬精原干細(xì)胞，4℃冷凍10～30min，-80℃凍存24h，投入液氮保存。本發(fā)明配制的凍存液成分簡單，成本低，不含血清，用BSA取代血清，為豬精原干細(xì)胞的無血清培養(yǎng)提供了一個(gè)可靠的保存方法。
【專利說明】一種豬精原干細(xì)胞凍存液及其使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種豬精原干細(xì)胞凍存液及其使用方法，屬于干細(xì)胞生物工程領(lǐng)域?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]精原干細(xì)胞體外長期培養(yǎng)是近幾年才發(fā)展起來的技術(shù)，而對于精原干細(xì)胞，還沒有專用的凍存液和凍存方法。多數(shù)精原干細(xì)胞凍存液是從國外公司購買，如cell freezingmedium, (Cat no: C6295, Sigma),周期長、價(jià)格昂貴,而且在長距離運(yùn)輸過程中容易變質(zhì),產(chǎn)生沉淀，不能有效的凍存精原干細(xì)胞。
[0003]另外，有專利指出用低密度脂蛋白、海藻糖和卵磷脂按一定比例混合，可以用來凍存精原干細(xì)胞(專利號:201110124683.8)。2007年，morteza koruji報(bào)道了以DMEM為基礎(chǔ)液，添加10%FCS、1.4M DMS0、0.07M蔗糖，凍存小鼠精原干細(xì)胞，結(jié)果表明解凍后細(xì)胞成活率為68%。F Izadyar報(bào)道了以MEM為基礎(chǔ)液，添加10%FCS、10%DMS0、0.07M蔗糖，凍存牛的精原干細(xì)胞，冷凍復(fù)蘇后精原干細(xì)胞的存活率達(dá)70%。2013年，Yong Αη-lee報(bào)道以a-MEM為基礎(chǔ)液，添加10%FBS、10%DMS0、2.5%聚乙二醇，凍存小鼠精原干細(xì)胞，解凍后精原干細(xì)胞可正常形成克隆。而上述文章所述的凍存液沒有商品化產(chǎn)品，沒辦法購買，而且沒有針對豬精原干細(xì)胞的凍存液，所以不一定適合豬精原干細(xì)胞的長期凍存，這樣就制約了豬精原干細(xì)胞的研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種豬精原干細(xì)胞凍存液及其使用方法，可以降低實(shí)驗(yàn)成本，提高凍存效率。本凍存液中不含血清，為精原干細(xì)胞的無血清培養(yǎng)提供了一個(gè)可選的凍存液。
[0005]本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0006]一種豬精原干細(xì)胞凍存液，它由基礎(chǔ)液DMEM/F12、BSA (牛血清白蛋白)、DMSO (二甲基亞砜)組成。
[0007]優(yōu)選的是:BSA (牛血清白蛋白)加入量為0.3%~0.6%的DMEM/F12質(zhì)量。
[0008]優(yōu)選的是:DMS0 (二甲基亞砜)加入量為10%的DMEM/F12質(zhì)量。
[0009]一種豬精原干細(xì)胞凍存液的使用方法，包括以下步驟:預(yù)冷凍存管和凍存液至40C，收集豬精原干細(xì)胞，用凍存液稀釋至每毫升含5 X IO4~I X IO5個(gè)豬精原干細(xì)胞，每管分裝lml，4°C冷凍10~30min，_80°C凍存24h，投入液氮保存。
[0010]本發(fā)明配制的凍存液成分簡單，成本低，不含血清，用BSA取代血清，為豬精原干細(xì)胞的無血清培養(yǎng)提供了一個(gè)可靠的保存方法。
[0011]本發(fā)明的凍 存效果好，用此方法凍存的豬精原干細(xì)胞，解凍后細(xì)胞的存活率可達(dá)85%左右，不影響豬精原干細(xì)胞克隆的形成，是一種可靠的凍存方法。
【具體實(shí)施方式】[0012]下面結(jié)合具體實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的闡述，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不局限于實(shí)施例表示的范圍。這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而非用于限制本發(fā)明的范圍。此外，在閱讀本發(fā)明的內(nèi)容后，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種修改，這些等價(jià)變化同樣落于本發(fā)明所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
[0013]實(shí)施例1
[0014]取所需體積的基礎(chǔ)液DMEM/F12，加入BSA、DMS0，其中BSA加入量為0.3%的DMEM/F12質(zhì)量；DMS0加入量為10%的DMEM/F12質(zhì)量。預(yù)冷1.8mL凍存管和配制好的凍存液至4°C，收集豬精原干細(xì)胞，用凍存液稀釋至每毫升含5 X IO4個(gè)豬精原干細(xì)胞。每管加I毫升含豬精原干細(xì)胞的凍存液，4°C冷凍lOmin，_80°C凍存24h，投入液氮保存。
[0015]實(shí)施例2
[0016]取所需體積的基礎(chǔ)液DMEM/F12，加入BSA、DMSO，其中BSA加入量為0.5%的DMEM/F12質(zhì)量；DMSO加入量為10%的DMEM/F12質(zhì)量。預(yù)冷2mL凍存管和配制好的凍存液至4°C，收集豬精原干細(xì)胞，用凍存液稀釋至每毫升含7 X IO4個(gè)豬精原干細(xì)胞。每管加I毫升含豬精原干細(xì)胞的凍存液，4°C冷凍20min，_80°C凍存24h，投入液氮保存。
[0017]實(shí)施例3
[0018]取所需體積的基礎(chǔ)液DMEM/F12，加入BSA、DMSO，其中BSA加入量為0.6%的DMEM/F12質(zhì)量；DMSO加入量為10%的DMEM/F12質(zhì)量。預(yù)冷3mL凍存管和配制好的凍存液至4°C，收集豬精原干細(xì)胞，用凍存液稀釋至每毫升含I X IO5個(gè)豬精原干細(xì)胞。每管加I毫升含豬精原干細(xì)胞的凍存液，4°C冷凍30min，_80°C凍存24h，投入液氮保存。
【權(quán)利要求】
1.一種豬精原干細(xì)胞凍存液，其特征在于:它由基礎(chǔ)液DMEM/F12、BSA、DMS0組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬精原干細(xì)胞凍存液，其特征在于:BSA加入量為0.3%~.0.6% 的 DMEM/F12 質(zhì)量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬精原干細(xì)胞凍存液，其特征在于:DMSO加入量為10%的DMEM/F12 質(zhì)量。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬精原干細(xì)胞凍存液的使用方法，其特征在于:該方法包括以下步驟:預(yù)冷凍存管和凍存液至4°C，收集豬精原干細(xì)胞，用凍存液稀釋至每毫升含.5 X IO4~I X IO5個(gè) 豬精原干細(xì)胞，每管分裝1ml，4°C冷凍10~30min，_80°C凍存24h，投入液氮保存。
【文檔編號】A01N1/02GK103783034SQ201410024720
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年1月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月20日
【發(fā)明者】趙會敏, 盧克煥, 盧盛晟, 陸陽清, 楊小淦, 楊歡, 李敏霞, 張颯 申請人:廣西大學(xué)