一種提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法，包括：用PDA培養(yǎng)基活化茭白黑粉菌GZUIFR-DX091菌株，將活化好后菌種用接種環(huán)挑取3環(huán)接入茭白黑粉菌發(fā)酵培養(yǎng)基，置于28℃，160r/min下培養(yǎng)5d后，將培養(yǎng)液于5000r/min離心5min，取上清液，得到茭白黑粉菌UIFR-DX091菌株的發(fā)酵液；高雄山蟲草感染家蠶，待家蠶感染變硬并開始產(chǎn)子實體時備用；將培養(yǎng)容器預先消毒，然后將滅菌處理的吸水紙單層或雙層平鋪在容器底部；將制備好的茭白黑粉菌GZUIFR-DX091菌株的發(fā)酵液緩緩加入容器底部的吸水紙上，將已感染的家蠶，放入已添加了茭白發(fā)酵液的容器中，在20-23℃溫度下進行12h見光培養(yǎng)，在暗培養(yǎng)階段可降低培養(yǎng)溫度5℃培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，若添加的發(fā)酵液變干，需及時補充；在培養(yǎng)3-4周時即可收獲。本發(fā)明能大幅提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量。
【專利說明】一種提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術領域】，具體來說涉及一種提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法。
[0002]
【背景技術】
[0003]Cordyceps takaomon tana Yakush.& Kumaz.1941 (= Isaria tenuipes peck(XKl^=Isaria japonica YasudaC l9lh)=Paecilomyces tenuipes (Peck) Samson(1974)=Paecilomyces japonica )是一種優(yōu)良的蟲草資源,研究發(fā)現(xiàn)它在抗癌、抗抑郁、抗蟲、抗菌、抗病毒及調節(jié)免疫力等方面有明顯作用。特別是近年發(fā)現(xiàn)，它的一種抗癌成分乙酰環(huán)氧單端孢烯二醇(4β - acetoxyscirpene _3 α，15 - diol = AETD)的抗癌活性大約比目前用于臨床癌癥病患者治療用的順鉬強4-6倍。藥理試驗表明高雄山蟲草對小鼠毒性口服劑量LD_(50)為70g/kg ;腹腔注射LD_(50)為17.6±1.78g/kg，毒性較低(陳祝安和徐珊，1989)。另外，該菌的小鼠急性毒性和大鼠亞急性毒性實驗顯示其毒性低，安全范圍大(吳真列等，1995)。因此，高雄山蟲草無論作為藥物開發(fā)還是作為保健品應用都具有廣闊前景。在韓國，高雄山蟲草已經(jīng)應用于食品及保健品中。而利用家蠶培養(yǎng)蟲草是當前規(guī)?；a(chǎn)蟲草子實體，用于功能食品的主要方法之一。提高蟲草子實體產(chǎn)量是人工培養(yǎng)中重點關注的問題，目前利用家蠶培養(yǎng)蟲草子實體時，提高蟲草子實體產(chǎn)量，主要關注的是如何提高對家蠶的感染率進而提高產(chǎn)子實體率(出草率)來達到提高蟲草子實體的產(chǎn)量,而忽視了成功感染家蠶后，在子實體發(fā)育過程中對其增產(chǎn)的方法，這就導致蟲草子實體產(chǎn)量普遍不高。
[0004]

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服上述問題而提供的一種能大幅提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法。
[0006]一種提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法，包括以下步驟:
(1)茭白黑粉菌esculentaHenn GZUIFR-DX091菌株發(fā)酵液的制備
用PDA培養(yǎng)基活化茭白黑粉菌GZnFR-DX091菌株，將活化好后菌種用接種環(huán)挑取3環(huán)接入茭白黑粉菌發(fā)酵培養(yǎng)基，置于28°C，160r /min下培養(yǎng)5d后，將培養(yǎng)液于5000r/min離心5min，取上清液，即得到茭白黑粉菌GZnFR-DX091菌株的發(fā)酵液；
(2)高雄山蟲草感染家蠶后的增產(chǎn)培養(yǎng)
a、高雄山蟲草感染家蠶:以使用注射法來完成對家蠶的感染為例，具體步驟如下:①菌絲段生產(chǎn)，②將生產(chǎn)獲得的濃度在KTlOVmL的菌絲段，按照50-?00μ L/頭的劑量注射入家幼蟲或蠶蛹的體內，③20-23°C下培養(yǎng)，④待家蠶感染變硬并開始產(chǎn)子實體時備用；
b、將培養(yǎng)容器預先消毒，然后將滅菌處理的吸水紙單層或雙層平鋪在容器底部；將制備好的茭白黑粉菌GZnFR-DX091菌株的發(fā)酵液緩緩加入容器底部的吸水紙上，以吸水紙完全浸濕，但傾斜時沒有明顯的液體流出為宜；
C、將已感染的家蠶，放入已添加了茭白發(fā)酵液的容器中，置于人工氣候箱中，在20-23°C溫度下進行12h見光培養(yǎng)，在暗培養(yǎng)階段可降低培養(yǎng)溫度5°C培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，若添加的發(fā)酵液變干，需及時補充；在培養(yǎng)3-4周時即可收獲。
[0007]上述的提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法，其中:第(I)步中發(fā)酵培養(yǎng)基為馬鈴薯200g煮沸30min濾汁,加入葡萄糖20g,加水至1000ml, 121° C,滅菌25min。
[0008]上述的提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法，其中:茭白黑粉菌GZUIFR-DX091 {Ustilago esculenta Henn.GZUIFR-DX091)菌株(菌株保存號為:CCTCC No:M 2011216 ;于2011年6月26日在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，地址:中國武漢武漢大學)。
[0009]上述的提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法，其中:高雄山蟲草GZWFR-PT211(Cordyceps takaomon tana Yakush.& Kumaz.GZUIFR-PT211)菌株(屬于幾殼菌綱、肉座菌目、麥角菌科、蟲草屬，于2011年6月26日在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏號=CCTCCNo:M 2011217，地址:中國武漢武漢大學)。
[0010]本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，具有明顯的有益效果，從以上技術方案可知:本發(fā)明培養(yǎng)容器預先消毒，且保濕培養(yǎng)時發(fā)酵液不可加入過多，以浸濕傾斜時不成股流水為好，另外培養(yǎng)容器應適當透氣。本發(fā)明著眼于成功感染后子實體的培養(yǎng)階段，在家蠶被蟲草菌感染變硬后，再在子實體培養(yǎng)過程中添加特定真菌發(fā)酵液來提高子實體產(chǎn)量，其效果明顯，在蟲草的人工培養(yǎng)中有良好的 應用前景。
[0011]
【具體實施方式】
[0012]實施例1
一種提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法，包括以下步驟:
(1)茭白黑粉菌GZnFR-DX091發(fā)酵液的制備
用PDA培養(yǎng)基活化茭白黑粉菌GZnFR-DX091菌株，將活化好的菌種用接種環(huán)挑取3環(huán)接入裝有茭白黑粉菌發(fā)酵培養(yǎng)基(馬鈴薯200g煮沸30min濾汁，加入葡萄糖20g，加水至1000ml，121。C，滅菌 25min)的 250ml 三角瓶中，裝液量為 50ml，置于 28°C，160r /min 下培養(yǎng)5d后，將培養(yǎng)液于5000r/min離心5min，取上清液，即得到茭白黑粉菌GZnFR_DX091菌株的發(fā)酵液；
(2)高雄山蟲草感染家蠶后的增產(chǎn)培養(yǎng)
a、高雄山蟲草GZnFR-PT211菌株感染家蠶:以使用注射法來完成對家蠶的感染為例，具體步驟如下:①菌絲段生產(chǎn)，②將生產(chǎn)獲得的濃度在IO5IOVmL的菌絲段，按照50^100 μ L/頭的劑量注射入家蠶幼蟲或蠶蛹的體內，③20-23°C下培養(yǎng)，④待家蠶感染變硬并開始產(chǎn)子實體時備用；
b、將培養(yǎng)容器預先消毒，然后將滅菌處理的吸水紙單層或雙層平鋪在容器底部；將制備好的茭白黑粉菌GZnFR-DX091菌株的發(fā)酵液緩緩加入容器底部的吸水紙上，以吸水紙完全浸濕，但傾斜時沒有明顯的液體流出為宜；
C、將已感染的家蠶，每組30頭，放入已添加了茭白發(fā)酵液的容器中，置于人工氣候箱中，在20-23°C溫度下進行12h見光培養(yǎng)，在暗培養(yǎng)階段可降低培養(yǎng)溫度5°C培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，若添加的發(fā)酵液變干，需及時補充；在培養(yǎng)3-4周時即可收獲。
[0013]將對照組(用無菌水，不用茭白黑粉菌發(fā)酵液)與實驗組的子實體收集后，分別稱量鮮重和干重，所得數(shù)據(jù)如表1，由表1可知添加茭白發(fā)酵液可以使鮮品產(chǎn)量提高39%，干品產(chǎn)量提高53%。
[0014]表1添加茭白發(fā)酵液培養(yǎng)與對照組子實體產(chǎn)量的比較
【權利要求】
1.一種提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法，包括以下步驟: (1)茭白黑粉菌.GZUIFR-DX091菌株發(fā)酵液的制備 用PDA培養(yǎng)基活化茭白黑粉菌GZnFR-DX091，將活化好后菌種用接種環(huán)挑取3環(huán)接入茭白黑粉菌發(fā)酵培養(yǎng)基，置于28°C，160r /min下培養(yǎng)5d后，將培養(yǎng)液于5000r/min離心5min，取上清液，即得到茭白黑粉菌ZUIFR-DX091菌株的發(fā)酵液； (2)高雄山蟲草感染家蠶后的增產(chǎn)培養(yǎng) a、高雄山蟲草感染家蠶:待家蠶感染變硬并開始產(chǎn)子實體時備用； b、將培養(yǎng)容器預先消毒，然后將滅菌處理的吸水紙單層或雙層平鋪在容器底部；將制備好的茭白黑粉菌GZnFR-DX091菌株的發(fā)酵液緩緩加入容器底部的吸水紙上，以吸水紙完全浸濕，但傾斜時沒有明顯的液體流出為宜； C、將已感染的家蠶，放入已添加了茭白發(fā)酵液的容器中，置于人工氣候箱中，在20-23°C溫度下進行12h見光培養(yǎng)，在暗培養(yǎng)階段可降低培養(yǎng)溫度5°C培養(yǎng)， 培養(yǎng)過程中，若添加的發(fā)酵液變干，需及時補充；在培養(yǎng)3-4周時即可收獲。
2.如權利要求1或2所述的提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法，其中:第(I)步中發(fā)酵培養(yǎng)基為馬鈴薯200g煮沸30min濾汁，加入葡萄糖20g，加水至1000ml，121 ° C，滅菌25min。
3.如權利要求4所述的提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法，其中:茭白黑粉菌GZUIFR-DX091 菌株，保藏號為:CCTCC No:M 2011216。
4.如 權利要求3所述的提高高雄山蟲草子實體產(chǎn)量的方法，其中:高雄山蟲草為高雄山蟲草 GZUIFR-PT211 菌株，保藏號:CCTCC No:M 2011217。
【文檔編號】A01K67/04GK103865802SQ201410037119
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年1月26日 優(yōu)先權日:2014年1月26日
【發(fā)明者】梁建東, 韓燕峰, 梁宗琦, 董旋 申請人:貴州大學