一種玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法，包括以下步驟：亞洲玉米螟在人工氣候箱用人工飼料飼養(yǎng)，連續(xù)繁殖多代，成蟲羽化當天，將雄雌蟲按不低于2∶1（至少5頭雌蟲）的比例放在養(yǎng)蟲籠中自由交配，并喂以10%的蜂蜜水以補充營養(yǎng)，交配3天后的雌蛾作為實驗的供試蟲源；選取20種玉米揮發(fā)物標準化合物，將每種樣品溶于液體石蠟中，在漩渦混合器中充分混合，其中8種化合物配5×10-3g/ml～5×10-9g/ml濃度系列（濃度以10倍遞減），置于冰箱中保存，以用于產(chǎn)卵選擇行為測定；對供試蟲源進行產(chǎn)卵生測。本發(fā)明測定了8種供試化合物對亞洲玉米螟雌蛾產(chǎn)卵選擇的影響，為研制亞洲玉米螟產(chǎn)卵引誘劑或者驅避劑提供了依據(jù)，探索了新的害蟲防治手段。
【專利說明】一種玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于生物研究領域，尤其涉及一種玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法。
【背景技術】
[0002]亞洲玉米螟是一種重要的農(nóng)業(yè)害蟲，在我國和東南亞各國發(fā)生普遍，其寄主范圍很廣，寄主植物多達69種，大發(fā)生年可使玉米減產(chǎn)30%以上。由于該蟲鉆蛀性危害的特點，運用常規(guī)防治手段，很難達到好的效果。大量研究表明:植食性昆蟲對寄主植物的危害都是以探測和識別的選擇定向過程開始的，定向行為順序包括昆蟲對遠距離植物或者生境的定向、到達植物后對取食或產(chǎn)卵部位的識別和選擇、選定植物后對取食或產(chǎn)卵等活動的調(diào)節(jié)控制。在這一過程中植食性昆蟲利用了嗅覺、味覺、視覺和觸覺等多種行為模式(Millerand Strieker，1984)，而植物釋放的特征性的揮發(fā)物在此過程中發(fā)揮著重要的作用。有研究表明，玉米、胡椒和馬鈴薯葉片的戍燒溶劑提取物對歐洲玉米螟Ostrinia nubilalis的產(chǎn)卵均有引誘作用(Udayagiri and Mason, 1995),蕉藕葉片粗提物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵具有很強的引誘作用(張穎等，2010)。當劑量為80 μ g/cm2時，玉米揮發(fā)物的幾個組分對歐洲玉米螟的產(chǎn)卵具有不同的影響:法尼烯表現(xiàn)出引誘作用，法尼醛、法尼醇則表現(xiàn)出驅避作用，橙花叔醇、β -石竹烯沒有影響(Binder et al., 1995; Binder and Robbins, 1997)。當劑量為Img時，玉米揮發(fā)物苯甲醛、苯乙醛、青葉醇和檸檬烯的氣味對亞洲玉米螟雌蛾產(chǎn)卵表現(xiàn)出驅避作用(何康來等，2005)。在高濃度下，亞洲玉米螟幼蟲危害的玉米植株釋放的揮發(fā)物組分反-2-己烯醛、順-3-己烯-1-醇、壬醛對雌蛾產(chǎn)卵表現(xiàn)出驅避作用，法尼烯、β -石竹烯和α -石竹烯則有影響(Huang et al.，2009)。事實上，即使是在玉米螟為害的狀態(tài)下，玉米釋放的揮發(fā)物濃度遠遠達不到這么高的濃度。因此，有必要研究不同濃度的玉米揮發(fā)物組分對亞洲玉米螟產(chǎn)卵選擇性影響。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法，旨在為研制亞洲玉米螟產(chǎn)卵引誘劑或者驅避劑提供依據(jù)，探索新的害蟲防治手段。
[0004]本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法包括以下步驟:
[0005]步驟一、亞洲玉米螟在人工氣候箱用人工飼料飼養(yǎng)，連續(xù)繁殖多代，成蟲羽化當天，將雄雌蟲按不低于2:1 (至少5頭雌蟲)的比例放在養(yǎng)蟲籠中自由交配，并喂以10%的蜂蜜水以補充營養(yǎng)，交配3天后的雌蛾作為實驗的供試蟲源；
[0006]步驟二、選取20種玉米揮發(fā)物標準化合物，將每種樣品溶于液體石蠟中，在漩渦混合器中充分混合，其中8種化合物配5X 10_3g/ml~5X 10_9g/ml濃度系列(濃度以10倍遞減)，置于冰箱 中保存，以用于產(chǎn)卵選擇行為測定；
[0007]步驟三、對供試蟲源進行產(chǎn)卵生測。[0008]進一步，步驟一中人工氣候箱溫度為26°C _28°C、相對濕度大于80%，光周期為16L:8D。
[0009]進一步，步驟三所述的產(chǎn)卵生測所用的產(chǎn)卵籠是由80目的鐵紗網(wǎng)、直徑為0.3cm的鐵絲和兩個直徑13cm、高為1cm、底部鏤空的圓柱形底座制作而成的高為20cm的圓柱形產(chǎn)卵籠，圓柱形底座內(nèi)外兩面用保鮮膜覆蓋，外側保鮮膜內(nèi)壁上分別粘貼一片直徑為5cm的圓形濾紙片，分別滴加待測化合物和對照溶劑，作為氣味室。內(nèi)側保鮮膜上用昆蟲針均勻的扎30個孔，便于揮發(fā)物透過小孔進入，亞洲玉米螟雌蛾喜歡在光滑表面產(chǎn)卵，僅在內(nèi)側保鮮膜上面產(chǎn)卵，作為產(chǎn)卵室。
[0010]進一步，由于亞洲玉米螟不能與氣味室內(nèi)的化合物直接接觸，只能通過嗅覺來感受氣味，以其產(chǎn)卵的多少作為對測試氣味的產(chǎn)卵選擇反應衡量標準。
[0011]進一步，步驟三所述的產(chǎn)卵生測的具體方法為:
[0012]取200 μ l待測化合物滴加在一端氣味室的濾紙上作為處理端，并在另一端氣味室的濾紙片上滴加同樣體積的液體石蠟作為對照端，在每個產(chǎn)卵室放置5頭雌蛾，實驗在22:00之后進行，并于23:00之前將產(chǎn)卵裝置放入暗室中，溫度為24 ±1 °C、相對濕度≥80%，次日7:00之后分別記錄在處理和對照端保鮮膜上所產(chǎn)的卵塊數(shù)和卵粒數(shù)，每個化合物至少重復6次，即至少測定30頭雌蛾的產(chǎn)卵量。
[0013]效果匯總
[0014]本發(fā)明測定了 8種供試化合物對亞洲玉米螟雌蛾產(chǎn)卵選擇的影響，為研制亞洲玉米螟產(chǎn)卵引誘劑或者驅避劑提供了依據(jù)，探索了新的害蟲防治手段。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1是本發(fā)明實施例提供的玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法流程圖；
[0016]圖2是本發(fā)明實施例提供的8中供試樣品的純度和來源表；
[0017]圖3是本發(fā)明實施例提供的產(chǎn)卵生測裝置的結構示意圖。
[0018]圖中:l、Tr濾紙片；2、Ck濾紙片；3、氣味室；4、保鮮膜；5、產(chǎn)卵室。
【具體實施方式】
[0019]為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0020]圖1示出了本發(fā)明的玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法流程，如圖所示，本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法包括以下步驟:
[0021]SlOl:亞洲玉米螟在人工氣候箱用人工飼料飼養(yǎng)，連續(xù)繁殖多代，成蟲羽化當天，將雄雌蟲按不低于2:1 (至少5頭雌蟲)的比例放在養(yǎng)蟲籠中自由交配，并喂以10%的蜂蜜水以補充營養(yǎng)，交配3天后的雌蛾作為實驗的供試蟲源；
[0022]S102:選取20種玉米揮發(fā)物標準化合物，將每種樣品溶于液體石蠟中，在漩渦混合器中充分混合，其中8種化合物配5X 10_3g/ml~5X 10_9g/ml濃度系列(濃度以10倍遞減)，置于冰箱中保存，以用于產(chǎn)卵選擇行為測定；
[0023]S103:對供試蟲源進行產(chǎn)卵生測。
[0024]進一步，步驟SlOl中人工氣候箱溫度為26°C _28°C、相對濕度大于80%，光周期為16L:8D。
[0025]進一步，如圖2所示，步驟S103所述的產(chǎn)卵生測所用的產(chǎn)卵籠是由80目的鐵紗網(wǎng)、直徑為0.3cm的鐵絲和兩個直徑13cm、高為1cm、底部鏤空的圓柱形底座制作而成的高為20cm的圓柱形產(chǎn)卵籠，圓柱形底座內(nèi)外兩面用保鮮膜4覆蓋，外側保鮮膜內(nèi)壁上分別粘貼一片直徑為5cm的圓形濾紙片，分別滴加待測化合物和對照溶劑，作為氣味室3，內(nèi)側保鮮膜上用昆蟲針均勻的扎30個孔，便于揮發(fā)物透過小孔進入，亞洲玉米螟雌蛾喜歡在光滑表面產(chǎn)卵，僅在內(nèi)側保鮮膜上面產(chǎn)卵，作為產(chǎn)卵，5。
[0026]進一步，由于亞洲玉米螟不能與氣味室內(nèi)的化合物直接接觸，只能通過嗅覺來感受氣味，以其產(chǎn)卵的多少作為對測試氣味的產(chǎn)卵選擇反應衡量標準。
[0027]進一步，步驟S103所述的產(chǎn)卵生測的具體方法為:
[0028]取200 μ I待測化合物滴加在一端氣味室的濾紙上作為處理端，并在另一端氣味室的濾紙片上滴加同樣體積的液體石蠟作為對照端，在每個產(chǎn)卵室放置5頭雌蛾，實驗在22:00之后進行，并于23:00之前將產(chǎn)卵裝置放入暗室中，溫度為24 土 I °C、相對濕度≥80%，次日7:00之后分別記錄在處理和對照端保鮮膜上所產(chǎn)的卵塊數(shù)和卵粒數(shù)，每個化合物至少重復6次，即至少測定30頭雌蛾的產(chǎn)卵量。
[0029]下面結合附圖和 具體實施例對本發(fā)明做進一步說明。
[0030]在沒有釋放氣味化合物的條件下，亞洲玉米螟雌蛾在產(chǎn)卵籠兩端的平均產(chǎn)卵量分別為243.8±35.7粒和274.8±52.6粒，兩者差異不顯著(X2=L 74 < χ 2α(ι5，工)，說明在此條件下玉米螟雌蛾產(chǎn)卵選擇是隨機的。
[0031]當在產(chǎn)卵籠一端的濾紙片上滴加200 μ I液體石蠟作為處理，另一端未滴加液體石蠟的濾紙作為空白對照時，兩端平均產(chǎn)卵量分別為190.8±24.3粒和176.2±21.7粒，兩者之間無顯著差異(X2=0.50 < X2ckci5m),說明液體石蠟作為溶劑不會影響雌蛾產(chǎn)卵的隨機選擇性。
[0032]當青葉醇的濃度為5Χ 10_3g/ml，亞洲玉米螟在在處理端的平均產(chǎn)卵量顯著少于對照端，對產(chǎn)卵表現(xiàn)為驅避作用；當濃度為5X10_4g/ml、5X10_5g/ml、5X10_6g/ml時，處理端的平均產(chǎn)卵量顯著多于對照端，表現(xiàn)為引誘作用；當濃度為5X 10_7g/ml、5X 10_8g/ml時，對照端和處理端的平均產(chǎn)卵量沒有顯著差異，表明對產(chǎn)卵的選擇性沒有影響。當反-2-己烯醛濃度為5X l(T4g/ml、5X l(T5g/ml、5X l(T6g/ml、5X l(T7g/ml時，玉米螟在處理時的產(chǎn)卵量多于對照端，對產(chǎn)卵均表現(xiàn)為引誘作用；當濃度為5X10_8g/ml時，處理端和對照端的平均產(chǎn)卵量沒有顯著差異，表明對產(chǎn)卵的選擇性沒有影響。當順-3-己烯基乙酸酯濃度為5X IOVml時，處理端的平均產(chǎn)卵量顯著多于對照端，對產(chǎn)卵表現(xiàn)為引誘作用；當濃度為5X 10_4g/ml、5X 10_6g/ml、5X 10_7g/ml時,處理端和對照端的產(chǎn)卵量沒有顯著差異,表明對產(chǎn)卵的選擇性沒有影響。當壬醛濃度為5X10_3g/ml時，處理端的平均產(chǎn)卵量顯著多于對照端，表現(xiàn)為引誘作用；當濃度為5X 10_4g/ml、5X 10_6g/ml、5X 10_7g/ml時,處理端和對照端的產(chǎn)卵量沒有顯著差異，說明對產(chǎn)卵的選擇性沒有影響。當苯甲醛濃度為5X10_3g/ml、5X 10_4g/ml、5X 10_5g/ml、5X 10_6g/ml時,玉米螟在處理端的平均產(chǎn)卵量顯著少于對照端，表現(xiàn)出驅避作用；當濃度為5X10_7g/ml、5X10_8g/ml時，處理端的產(chǎn)卵量多于對照端，表現(xiàn)出引誘作用；當濃度為5X10_9g/ml時，對照和處理端產(chǎn)卵量沒有顯著差異，表明對產(chǎn)卵沒有任何影響。當苯乙醛濃度為5X10_3g/ml時，處理端的產(chǎn)卵量顯著少于對照端，對產(chǎn)卵表現(xiàn)出驅避作用；當濃度為5X10_7g/ml、5X10_8g/ml時，處理端產(chǎn)卵量多于對照端，表現(xiàn)為引誘作用；當他濃度為5Xl(r4g/ml、5X10-5g/ml、5X10-6g/ml、5X10-9g/ml時，對照端和處理端的產(chǎn)卵量差異不顯著，說明對產(chǎn)卵無影響。當檸檬烯濃度為5X10_4g/ml時，處理端的產(chǎn)卵量顯著少于對照端，對產(chǎn)卵表現(xiàn)為驅避作用；當濃度為5X10_6g/ml時，處理端產(chǎn)卵多于對照端，表現(xiàn)為引誘作用；當濃度為5X l(T5g/ml、5X l(T7g/ml時,處理端和對照端的產(chǎn)卵量沒有顯著差異，說明對產(chǎn)卵沒有影響。當α-萜品烯濃度為5X10_6g/ml、5X10_7g/ml時，處理端的平均產(chǎn)卵量顯著多于對照端，表現(xiàn)出引誘作用；當濃度為5X10_4g/ml、5X10_5g/ml、5XlOVml時，處理端和對照端產(chǎn)卵量均沒有顯著差異，說明對產(chǎn)卵沒有影響。
[0033]總之，不同化合物對于亞洲玉米螟產(chǎn)卵的影響不同。在綠葉氣味物質中，青葉醇、反-2-己烯醛在5X 10_4g/ml-5X 10_7g/ml濃度范圍內(nèi)，對產(chǎn)卵表現(xiàn)為引誘作用，而順_3_己烯基乙酸酯僅當濃度為5X10_5g/ml時對產(chǎn)卵起引誘作用。芳香族化合物中，苯甲醛在5X l(T3g/ml-5X l(T8g/ml濃度范圍內(nèi)，對玉米螟的產(chǎn)卵選擇性均有影響，而苯乙醒僅當濃度為5X 10_3g/ml、5X 10_7g/ml、5X 10_8g/ml時對產(chǎn)卵選擇性有影響。萜類化合物中，當檸檬烯的濃度為5X 10_4g/ml、5X 10_ 6g/ml時對產(chǎn)卵選擇性有影響，而α -萜品烯則是當濃度為5Χ l(T6g/ml、5X l(T7g/ml時對產(chǎn)卵選擇性有影響。
[0034]上述雖然結合附圖對本發(fā)明的【具體實施方式】進行了描述，但并非對本發(fā)明保護范圍的限制，所屬領域技術人員應該明白，在本發(fā)明的技術方案的基礎上，本領域技術人員不需要付出創(chuàng)造性的勞動即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權利要求】
1.一種玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法，其特征在于，所述的玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法包括以下步驟: 步驟一、亞洲玉米螟在人工氣候箱用人工飼料飼養(yǎng)，連續(xù)繁殖多代，成蟲羽化當天，將雄雌蟲按不低于2:1的比例放在養(yǎng)蟲籠中自由交配，并喂以10%的蜂蜜水以補充營養(yǎng)，交配3天后的雌蛾作為實驗的供試蟲源； 步驟二、選取20種玉米揮發(fā)物標準化合物，將每種樣品溶于液體石蠟中，在漩渦混合器中充分混合，其中8種化合物配5X 10_3g/ml~5X 10_9g/ml濃度系列，置于冰箱中保存，以用于產(chǎn)卵選擇行為測定； 步驟三、對供試蟲源進行產(chǎn)卵生測。
2.如權利要求1所述的玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法，其特征在于，步驟一中人工氣候箱溫度為26°C _28°C、相對濕度大于80%，光周期為16L:8D。
3.如權利要求1所述的玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法，其特征在于，步驟三所述的產(chǎn)卵生測所用的產(chǎn)卵籠是由80目的鐵紗網(wǎng)、直徑為0.3cm的鐵絲和兩個直徑13cm、高為1cm、底部鏤空的圓柱形底座制作而成的高為20cm的圓柱形產(chǎn)卵籠,圓柱形底座內(nèi)外兩面用保鮮膜覆蓋，外側保鮮膜內(nèi)壁上分別粘貼一片直徑為5cm的圓形濾紙片，分別滴加待測化合物和對照溶劑，作為氣味室，內(nèi)側保鮮膜上用昆蟲針均勻的扎30個孔，便于揮發(fā)物透過小孔進入，亞洲玉米螟雌蛾喜歡在光滑表面產(chǎn)卵，僅在內(nèi)側保鮮膜上面產(chǎn)卵，作為產(chǎn)卵室。
4.如權利要求1所 述的玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法，其特征在于，由于亞洲玉米螟不能與氣味室內(nèi)的化合物直接接觸，只能通過嗅覺來感受氣味，以其產(chǎn)卵的多少作為對測試氣味的產(chǎn)卵選擇反應衡量標準。
5.如權利要求1所述的玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法，其特征在于，步驟三所述的產(chǎn)卵生測的具體方法為: 取200 μ I待測化合物滴加在一端氣味室的濾紙上作為處理端，并在另一端氣味室的濾紙片上滴加同樣體積的液體石蠟作為對照端，在每個產(chǎn)卵室放置5頭雌蛾，實驗在22:00之后進行，并于23:00之前將產(chǎn)卵裝置放入暗室中，溫度為24±1°C、相對濕度≥80%，次日7:00之后分別記錄在處理和對照端保鮮膜上所產(chǎn)的卵塊數(shù)和卵粒數(shù)，每個化合物至少重復6次，即至少測定30頭雌蛾的產(chǎn)卵量。
6.如權利要求1所述的玉米揮發(fā)物對亞洲玉米螟產(chǎn)卵行為影響的試驗方法，其特征在于，將雄雌蟲按不低于2:1，至少5頭雌蟲的比例放在養(yǎng)蟲籠中自由交配。
【文檔編號】A01K67/033GK103782965SQ201410045581
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年2月8日 優(yōu)先權日:2014年2月8日
【發(fā)明者】董文霞, 肖春 申請人:云南農(nóng)業(yè)大學