一種高效的大豆細(xì)胞質(zhì)雄性不育的測(cè)交方法及裝置制造方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種高效的大豆細(xì)胞質(zhì)雄性不育的測(cè)交方法及裝置，涉及大豆細(xì)胞質(zhì)雄性不育保持系的測(cè)定、恢復(fù)系及恢復(fù)能力的測(cè)定，利用這種方法選育不育系及恢復(fù)系，利用可被恢復(fù)系恢復(fù)但恢復(fù)程度不同的三類(lèi)不育系作測(cè)交母本，以待測(cè)材料作父本，在大田分組穴播測(cè)交母本及待測(cè)父本，在測(cè)驗(yàn)材料開(kāi)花前3-5天，每個(gè)測(cè)交小區(qū)用單獨(dú)一個(gè)可拆卸的測(cè)交用網(wǎng)室罩上，在測(cè)交父、母本盛花期每個(gè)測(cè)交用網(wǎng)室內(nèi)投放一定數(shù)量的苜蓿切葉蜂或人工馴化的蜜蜂為大豆傳粉，花期結(jié)束后移去測(cè)交用網(wǎng)室，成熟后按組合收獲F1雜交莢。下一種植季節(jié)鑒定F1植株花粉敗育率，確定恢保關(guān)系，若是恢復(fù)系確定其恢復(fù)類(lèi)型。本發(fā)明適于對(duì)大量種質(zhì)進(jìn)行大規(guī)模測(cè)定，用昆蟲(chóng)傳粉替代人工雜交，省時(shí)、省工、高效。用不同類(lèi)型不育系做測(cè)交母本，一次測(cè)交可測(cè)出待測(cè)材料是保持系還是恢復(fù)系以及恢復(fù)類(lèi)型。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種高效的大豆細(xì)胞質(zhì)雄性不育的測(cè)交方法及裝置
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】:
發(fā)明提供一種高效的大豆細(xì)胞質(zhì)雄性不育的測(cè)交方法及裝置，涉及大豆細(xì)胞質(zhì)雄性不育保持系的測(cè)定、恢復(fù)系及恢復(fù)能力的測(cè)定，利用這種方法選育不育系及恢復(fù)系，屬于作物雜交種選育【技術(shù)領(lǐng)域】。
[0002]【背景技術(shù)】:
“三系”雜交種是由不育系與恢復(fù)系雜交獲得的F1種子?！叭怠卑挥?、保持系和恢復(fù)系，不育系本身雄性不育雌性可育，只能接受外來(lái)的花粉才能結(jié)實(shí)；保持系具有保持不育系不育的特性，給不育系授粉，可以繼續(xù)獲得不育系；恢復(fù)系具有使不育系恢復(fù)正?？捎奶匦裕o不育系授粉后所結(jié)種子在下一代種植時(shí)育性恢復(fù)正常，即為雜交種。在雜交種的選育中，不育系和恢復(fù)系是基礎(chǔ)材料。因此任一種質(zhì)資源首先需要確定其恢保關(guān)系，如果是保持系經(jīng)過(guò)多代回交可轉(zhuǎn)育為不育系，如果是恢復(fù)系，根據(jù)其恢復(fù)程度、配合力等特性可在育種中直接利用或作為育種中間材料間接利用。目前常用的測(cè)交方法主要是利用單一不育系作為測(cè)交母本，待測(cè)材料作為父本人工授粉雜交得到F1雜交莢，并在下一種植季種植F1種子，鑒定F1植株的花粉敗育率確定其恢保關(guān)系。
[0003]常規(guī)的測(cè)交方法的存在以下缺點(diǎn):一是人工雜交成活率不高、效率低，不適合大規(guī)模測(cè)交，特別是育種中對(duì)大量改良后代群體測(cè)交可操作性差；二是有相當(dāng)多的不育系，可被某些不育系恢復(fù)，但不能被另一些恢復(fù)系恢復(fù)，即使可被某些不育系恢復(fù)，但反映不出恢復(fù)系的恢復(fù)能力。利用單一母本測(cè)交，容易漏掉只能恢復(fù)某些特定類(lèi)型不育系的恢復(fù)系，同時(shí)無(wú)法確定其準(zhǔn)確的恢復(fù)能力和程度。因此，常規(guī)測(cè)交方法不能完全滿(mǎn)足大批量種質(zhì)測(cè)交需要。
[0004]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
本發(fā)明提供一種高效的大豆細(xì)胞質(zhì)雄性不育的測(cè)交方法，解決現(xiàn)有測(cè)交方法的諸多缺點(diǎn)，具有省時(shí)、省工、方法簡(jiǎn)單、操作方便、結(jié)果可靠、效率高等優(yōu)點(diǎn)。
[0005]本發(fā)明還提供了適用于上述方法的裝置。
[0006]本發(fā)明提供的一種高效的大豆細(xì)胞質(zhì)雄性不育的測(cè)交方法，其特征在于:
同時(shí)利用一組典型的、不同類(lèi)型的不育系為測(cè)交母本，在隔離條件下，采用一父多母的
配置方法，利用昆蟲(chóng)傳粉，一次測(cè)交可測(cè)出待測(cè)材料是保持系還是恢復(fù)系以及不同的恢復(fù)類(lèi)型。
[0007]本發(fā)明公開(kāi)的一種高效的大豆細(xì)胞質(zhì)雄性不育的測(cè)交方法，包括以下步驟:1)選擇測(cè)交母本不育系:
第一測(cè)交母本，可被所有保持系保持，同時(shí)該類(lèi)不育系可被所有恢復(fù)系恢復(fù)，F(xiàn)1花粉敗育率在0-10%之間，屬于極易被恢復(fù)類(lèi)型，以JLCMS82A和JLCMS101A為代表，還包括在被恢復(fù)程度上與其類(lèi)似的其他不育系；
第二測(cè)交母本，可被所有保持系保持，同時(shí)可被超過(guò)50%的恢復(fù)系恢復(fù)，F(xiàn)1花粉敗育率在11-60%之間，屬于易被恢復(fù)類(lèi)型，以幾CMS9A為代表，還包括在被恢復(fù)程度上與其類(lèi)似的其他不育系。這類(lèi)不育系可被超過(guò)50%的恢復(fù)系恢復(fù)；第三測(cè)交母本，可被所有保持系保持，同時(shí)僅能被小于10%的恢復(fù)系恢復(fù)，F(xiàn)1花粉敗育率大于61%，屬于難被恢復(fù)類(lèi)型，以JLCMS89A和JLCMS31A為代表，還包括在被恢復(fù)程度上與其類(lèi)似的其他不育系；
2)測(cè)交用網(wǎng)室:
測(cè)交用網(wǎng)室是由鋼筋方框骨架及覆蓋其上的紗網(wǎng)罩構(gòu)成封閉空間，測(cè)交用網(wǎng)室的側(cè)面紗網(wǎng)罩設(shè)有拉鏈開(kāi)口；
3)田間播種方式:
播種季節(jié)，在大田按小區(qū)播種，步驟I)的三種測(cè)交母本與I個(gè)待測(cè)父本構(gòu)成一個(gè)測(cè)交小區(qū)，每個(gè)小區(qū)播種1-2穴待測(cè)父本及4-5穴三種測(cè)交母本；小區(qū)大小為垂直壟向長(zhǎng)80-130cm，平行壟向?qū)?0-120cm ;播種方式為穴播，第一壟播種順序?yàn)榈谝粶y(cè)交母本、待測(cè)父本和第三測(cè)交母本，第二壟播種順序?yàn)榈诙y(cè)交母本、待測(cè)父本和第三測(cè)交母本，播種量為每穴4粒，出苗后定苗2株；根據(jù)父、母本的開(kāi)花期適當(dāng)調(diào)整父、母本的播種時(shí)間，以確保父、母本開(kāi)花期一致；測(cè)交恢復(fù)系的恢復(fù)能力時(shí)，可同時(shí)選1-2個(gè)配合力高的不育系播種在小區(qū)內(nèi)與恢復(fù)系雜交配制少量雜交種子；
此種植方式僅代表在一個(gè)測(cè)交用網(wǎng)室內(nèi)分穴播種一份父本材料及多份母本材料，實(shí)際田間操作的播種順序及穴距在滿(mǎn)足材料能正常生長(zhǎng)條件下可適當(dāng)調(diào)整；“壟”在平播區(qū)也代表“行”；
4)架設(shè)測(cè)交用網(wǎng)室:
在測(cè)交父、母本開(kāi)花前3-5天給每個(gè)測(cè)交小區(qū)上架設(shè)一個(gè)步驟2)的測(cè)交用網(wǎng)室，并除去網(wǎng)室內(nèi)野生昆蟲(chóng)；
5)測(cè)交母本花粉敗育率檢查:
扣網(wǎng)前，給各個(gè)測(cè)交父、母本掛牌標(biāo)記，扣網(wǎng)后，用顯微鏡鏡檢測(cè)交母本不育系花粉育性，拔除花粉敗育率低于98%的植株；
6)傳粉昆蟲(chóng)投放:
在測(cè)交父、母本盛花期，每個(gè)測(cè)交用網(wǎng)室投放2-3頭苜蓿切葉蜂給測(cè)交母本傳粉，為保證傳粉質(zhì)量，遇陰雨天氣可重復(fù)投放一次苜蓿切葉蜂；若用蜜蜂傳粉，采用微型小箱蜜蜂群體，蜂群大小100只左右；
7)傳粉昆蟲(chóng)管理:
苜蓿切葉鋒投放后不需要額外人工管理，蜜蜂需要定期飼喂糖漿，供飲清水；
8)雜交莢收獲:
測(cè)交母本植株上雜交莢成熟后，按組合及編號(hào)收獲雜交莢并詳細(xì)記錄種子來(lái)源；
9)雜交F1植株花粉敗育率檢查:下一個(gè)種植季,按組合種植雜交F1種子，通過(guò)觀察F1植株花粉敗育率，確定待測(cè)父本材料的恢保關(guān)系，若是恢復(fù)系，確定恢復(fù)系的類(lèi)型。
[0008]本發(fā)明所述的高效的大豆細(xì)胞質(zhì)雄性不育的測(cè)交方法，其特征在于步驟3)涉及的田間種植方式為:
播種季節(jié)，田間按小區(qū)播種，三種測(cè)交母本與I個(gè)待測(cè)父本構(gòu)成一個(gè)測(cè)交小區(qū)，每個(gè)小區(qū)播種 1-2穴待測(cè)父本及4-5穴三種測(cè)交母本；小區(qū)大小為垂直壟向長(zhǎng)80-130cm，平行壟向?qū)?0-120cm ;播種方式為穴播，第一壟播種順序?yàn)榈谝粶y(cè)交母本、待測(cè)父本和第三測(cè)交母本，第二壟播種順序?yàn)榈诙y(cè)交母本、待測(cè)父本和第三測(cè)交母本，播種量為每穴4粒，出苗后定苗2株；根據(jù)父、母本的開(kāi)花期適當(dāng)調(diào)整父、母本的播種時(shí)間，以確保父、母本開(kāi)花期一致；測(cè)交恢復(fù)系的恢復(fù)能力時(shí)，可同時(shí)選1-2個(gè)配合力高的不育系播種在小區(qū)內(nèi)與其待測(cè)恢復(fù)系雜交配制少量雜交種子。
[0009]此種植方式僅代表在一個(gè)測(cè)交用網(wǎng)室分穴播種一份父本材料及多份母本材料，在田間實(shí)際操作中，播種順序及穴距根據(jù)環(huán)境條件及植株性狀可適當(dāng)調(diào)整。
[0010]本發(fā)明與常規(guī)測(cè)交方法相比具有顯著效果如下:
(1)測(cè)交信息詳實(shí)，通過(guò)一次測(cè)交，可得到待測(cè)材料全面、準(zhǔn)確的相關(guān)遺傳信息。
[0011](2)授粉效率高，用切葉蜂或蜜蜂傳粉，高異交率不育系最高可收獲150粒以上雜交種子，低異交率不育系也可收獲20粒以上雜交種子。
[0012](3)操作方法簡(jiǎn)單，無(wú)需額外的田間管理措施，可直接在田間壟上進(jìn)行，開(kāi)花前及花期結(jié)束后的田間管理與生產(chǎn)田相同。
[0013](4)適用于田間大規(guī)模測(cè)交，本技術(shù)解決了很難用人工雜交方式對(duì)大量種質(zhì)進(jìn)行測(cè)交并獲得足夠雜交莢的技術(shù)問(wèn)題，特別是大量種質(zhì)或雜交后代群體的測(cè)交。
[0014]【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】:
圖1為本發(fā)明測(cè)交用網(wǎng)室結(jié)構(gòu)示意圖；
其中，1、骨架；2、罩網(wǎng)；3 、拉鏈開(kāi)口 ；
圖2為本發(fā)明田間測(cè)交小區(qū)播種示意圖；
其中，早IA:第一測(cè)交母本不育系JLCMS82A或JLCMS101A ；早2A:第二測(cè)交母本不育系JLCMS9A ；早3A:第三測(cè)交母本不育系JLCMS89A或JLCMS31A ； ^:任一待檢測(cè)父本大豆種質(zhì)；
圖3為本發(fā)明開(kāi)花前田間測(cè)交用網(wǎng)室安裝示意圖。
【具體實(shí)施方式】:
實(shí)施例1:
1.選擇測(cè)交親本:
選擇三種類(lèi)型的不育系作為測(cè)交母本:(I)極易被恢復(fù)不育系JLCMS82A ；(2)易被恢復(fù)的不育系:JLCMS9A ；(3)難被恢復(fù)的不育系JLCMS89A。
[0015]選擇任一待測(cè)種質(zhì)作為待測(cè)父本。
[0016]2.準(zhǔn)備測(cè)交用網(wǎng)室:
用直徑為IOmm的鋼筋焊接測(cè)交用網(wǎng)室:為簡(jiǎn)易組裝可拆卸結(jié)構(gòu)，骨架I的長(zhǎng)、寬、高分別為80-130cmX80-120cmX130-160cm，定制紗網(wǎng):紗網(wǎng)罩2規(guī)格為20目，骨架I上紗網(wǎng)罩2大小及形狀與骨架I相匹配，以便于安裝，紗網(wǎng)罩2側(cè)面有高100-150cm的拉鏈開(kāi)口 3，詳見(jiàn)圖1。
[0017]3.田間播種:
播種季節(jié)，按小區(qū)在田間播種，三個(gè)測(cè)交母本與I個(gè)待測(cè)父本構(gòu)成一個(gè)測(cè)交小區(qū)，每個(gè)小區(qū)播種1-2穴待測(cè)父本及4-5穴三種測(cè)交母本；小區(qū)大小為垂直壟向長(zhǎng)80-130cm，平行壟向?qū)?0-120cm ;播種方式為穴播，第一壟播種順序?yàn)镴LCMS82A、待測(cè)父本和JLCMS89A，第二壟播種順序?yàn)镴LCMS9A、待測(cè)父本和JLCMS89A，播種量為每穴4粒，出苗后定苗2株；根據(jù)父、母本的開(kāi)花期適當(dāng)調(diào)整父、母本的播種時(shí)間，以確保父、母本開(kāi)花期一致。
[0018]4.架設(shè)測(cè)交用網(wǎng)室:在測(cè)交父、母本開(kāi)花前3-5天給每個(gè)測(cè)交小區(qū)上架設(shè)一個(gè)步驟2)的測(cè)交用網(wǎng)室，詳見(jiàn)圖3，用廣譜低殘留殺蟲(chóng)劑除去網(wǎng)室內(nèi)所有昆蟲(chóng)。
[0019]5.檢查測(cè)交母本花粉敗育率:
扣網(wǎng)前，對(duì)各個(gè)測(cè)交小區(qū)的父、母本掛牌標(biāo)記；扣網(wǎng)后，在測(cè)交母本開(kāi)花初期，用顯微鏡檢查其花粉敗育率，拔出花粉敗育率低于98%的植株，如測(cè)交母本純度高，也可手檢不育系花粉。
[0020]6.投放苜蓿切葉蜂:
在測(cè)交父、母盛花期的晴朗天氣，每個(gè)網(wǎng)室投放2-3頭苜蓿切葉蜂給測(cè)交母本傳粉，為保證傳粉質(zhì)量，遇陰雨天氣可重復(fù)投放一次苜蓿切葉蜂。
[0021]7.管理苜蓿切葉蜂:
投放苜蓿切葉蜂后，試驗(yàn)區(qū)及其周邊50米內(nèi)禁止使用對(duì)蜂類(lèi)有毒性的農(nóng)藥，直至傳粉結(jié)束，苜蓿切葉鋒投放后不需要額外人工管理。
[0022]8.收獲雜交莢:
當(dāng)測(cè)交母本植株上雜交莢成熟時(shí)，按編號(hào)收獲雜交莢并詳細(xì)記錄雜交種子來(lái)源。
[0023]9.雜交F1植株花粉敗育率檢查:
下一個(gè)種植季，在田間按組合播種雜交F1種子，開(kāi)花期取樣并用顯微鏡觀察F1植株花粉敗育率，確定待測(cè)材料的恢保關(guān)系，如果是保持系，繼續(xù)回交數(shù)代可得到新的不育系；如果是恢復(fù)系，根據(jù)其對(duì)不同類(lèi)型不育系的恢復(fù)表現(xiàn)，確定恢復(fù)系的類(lèi)型。
`[0024]實(shí)施例2
1.測(cè)交親本選擇:
以三種類(lèi)型的不育系作為測(cè)交母本:(I)極易被恢復(fù)不育系JLCMS101A ;(2)易被恢復(fù)的不育系JLCMS9A ；(3)難被恢復(fù)的不育系JLCMS31A。
[0025]選擇任一待測(cè)種質(zhì)作為待測(cè)父本。
[0026]2.準(zhǔn)備測(cè)交專(zhuān)用網(wǎng)室:
用直徑為IOmm的鋼筋焊接測(cè)交用網(wǎng)室:為簡(jiǎn)易組裝可拆卸結(jié)構(gòu)，骨架I的長(zhǎng)、寬、高分別為80-130cmX80-120cmX130-160cm，定制紗網(wǎng):紗網(wǎng)罩2規(guī)格為20目，骨架I上紗網(wǎng)罩2大小及形狀與骨架I相匹配，以便于安裝，紗網(wǎng)罩網(wǎng)2側(cè)面有高100-150cm的拉鏈開(kāi)口 3，詳見(jiàn)圖1。
[0027]3.田間播種:
播種季節(jié)，按小區(qū)在田間播種，3個(gè)測(cè)交母本與I個(gè)待測(cè)父本構(gòu)成一個(gè)測(cè)交小區(qū)，每個(gè)小區(qū)播種1-2穴待測(cè)父本及4-5穴三種測(cè)交母本；小區(qū)大小為垂直壟向長(zhǎng)80-130cm，平行壟向?qū)?0-120cm ;播種方式為穴播，第一壟播種順序?yàn)镴LCMS101A、待測(cè)父本和JLCMS31A，第二壟播種順序?yàn)镴LCMS9A、待測(cè)父本和JLCMS31A，播種量為每穴4粒，出苗后定苗2株；根據(jù)父、母本的開(kāi)花期適當(dāng)調(diào)整父、母本的播種時(shí)間，以確保父、母本開(kāi)花期一致；
4.架設(shè)測(cè)交用網(wǎng)室:
在測(cè)交父、母本開(kāi)花前3-5天給每個(gè)測(cè)交小區(qū)上架設(shè)一個(gè)步驟2)的測(cè)交用網(wǎng)室，詳見(jiàn)圖3，用廣譜低殘留殺蟲(chóng)劑除去網(wǎng)室內(nèi)所有昆蟲(chóng)。
[0028]5.檢查測(cè)交母本花粉敗育率:
扣網(wǎng)前，對(duì)各個(gè)小區(qū)的測(cè)交父、母掛牌標(biāo)記；扣網(wǎng)后，在測(cè)交母本開(kāi)花初期，用顯微鏡檢查其花粉敗育率，拔出花粉敗育率低于98%的植株，如測(cè)交母本純度高，也可手檢不育系花粉。
[0029]6.蜜蜂投放:
在測(cè)交父、母本盛花期的晴朗天氣，每個(gè)網(wǎng)室投放I小箱蜜蜂傳粉，蜂群大小100只左右。
[0030]7.蜜蜂管理:
投放蜜蜂后，試驗(yàn)區(qū)及其周邊50米內(nèi)禁止使用對(duì)蜜蜂有毒性的農(nóng)藥，直至傳粉結(jié)束。蜜蜂需要定期飼喂糖漿，供飲清水。
[0031]8.雜交莢收獲:
當(dāng)測(cè)交母本植株上雜交莢成熟時(shí)，按編號(hào)收獲雜交莢并詳細(xì)記錄雜交種子來(lái)源。
[0032]9.雜交F1植株花粉育性檢查:
下一種植季節(jié)，在田間按組合播種雜交F1種子，開(kāi)花期取樣并用顯微鏡觀察花粉敗育率，確定待測(cè)材料的恢保關(guān)系，如果是保持系，繼續(xù)回交數(shù)代可得到新的不育系；如果是恢復(fù)系，根據(jù)其對(duì)不同類(lèi)型不育系的恢復(fù)表現(xiàn)，確定恢復(fù)系的類(lèi)型。
[0033]實(shí)施例3
1.選擇三種類(lèi)型的不育系作為測(cè)交母本:
(O極易被恢復(fù)不育系:JLCMS82A ；(2`)易被恢復(fù)的不育系:JLCMS9A ；(3)難被恢復(fù)的不育系JLCMS31A。
[0034]選擇任一待測(cè)種質(zhì)作為待測(cè)父本。
[0035]2.準(zhǔn)備測(cè)交專(zhuān)用網(wǎng)室:
用直徑為IOmm的鋼筋焊接測(cè)交用網(wǎng)室:為簡(jiǎn)易組裝可拆卸結(jié)構(gòu)，骨架I的長(zhǎng)、寬、高分別為80-130cmX80-120cmX130-160cm，定制紗網(wǎng):紗網(wǎng)罩2規(guī)格為20目，骨架I上紗網(wǎng)罩2大小及形狀與骨架I相匹配，以便于安裝，紗網(wǎng)罩2側(cè)面有高100-150cm的拉鏈3，詳見(jiàn)圖1o
[0036]3.田間播種:
播種季節(jié)，按小區(qū)在田間播種，三種測(cè)交母本與I個(gè)待測(cè)父本構(gòu)成一個(gè)測(cè)交小區(qū)，每個(gè)小區(qū)播種1-2穴待測(cè)父本及4-5穴三種測(cè)交母本；小區(qū)大小為垂直壟向長(zhǎng)80-130cm，平行壟向?qū)?0-120cm ;播種方式為穴播，第一壟播種順序?yàn)镴LCMS82A、待測(cè)父本和JLCMS31A，第二壟播種順序?yàn)镴LCMS9A、待測(cè)父本和JLCMS31A，播種量為每穴4粒，出苗后定苗2株；根據(jù)父、母本的開(kāi)花期適當(dāng)調(diào)整父、母本的播種時(shí)間，以確保父、母本開(kāi)花期一致。
[0037]4.架設(shè)測(cè)交用網(wǎng)室:
在測(cè)交父、母本開(kāi)花前3-5天給每個(gè)測(cè)交小區(qū)上架設(shè)一個(gè)步驟2)的測(cè)交用網(wǎng)室，詳見(jiàn)圖3，用廣譜低殘留殺蟲(chóng)劑除去網(wǎng)室內(nèi)所有昆蟲(chóng)。
[0038]5.檢查測(cè)交母本花粉敗育率:
扣網(wǎng)前，對(duì)各個(gè)測(cè)交小區(qū)的父、母本掛牌標(biāo)記；扣網(wǎng)后，在測(cè)交母本開(kāi)花初期，用顯微鏡鏡檢其花粉敗育率，拔出花粉敗育率低于98%的植株，如測(cè)交母本純度高，也可手檢不育系花粉。
[0039]6.投放苜蓿切葉蜂:
在測(cè)交父、母本盛花期的晴朗天氣，每個(gè)網(wǎng)室投放2-3頭苜蓿切葉蜂給測(cè)交母本傳粉，為保證傳粉質(zhì)量，遇陰雨天氣可重復(fù)投放一次苜蓿切葉蜂。
[0040]7.管理苜蓿切葉蜂:
投放苜蓿切葉蜂后試驗(yàn)區(qū)及其周邊50米內(nèi)禁止使用對(duì)蜂類(lèi)有毒性的農(nóng)藥，直至傳粉結(jié)束，苜蓿切葉鋒投放后不需要額外人工管理。
[0041]8.雜交莢收獲:
當(dāng)測(cè)交母本植株上雜交莢成熟時(shí)，按編號(hào)收獲雜交莢并詳細(xì)記錄雜交種子來(lái)源。
[0042]9.雜交F1植株花粉育性檢查:
下一年春季，在田間按組合播種雜交F1種子，開(kāi)花期取樣并用顯微鏡觀察花粉敗育率，確定待測(cè)材料的恢保關(guān)系，如果是保持系，繼續(xù)回交數(shù)代可得到新的不育系；如果是恢復(fù)系，根據(jù)其對(duì)不同類(lèi)型不育系的恢復(fù)表現(xiàn)，確定恢復(fù)系的類(lèi)型。
[0043]通過(guò)以下試驗(yàn)表明本發(fā)明專(zhuān)利的積極效果:
試驗(yàn)例1:
驗(yàn)證實(shí)施例1測(cè)定大豆RN型不育細(xì)胞質(zhì)保持系和恢復(fù)系的恢復(fù)類(lèi)型。
[0044](I)任選3份大豆材料進(jìn)行測(cè)交，分別為JLCMS8B、JLCMSR4和S37。
[0045](2)田間種植及開(kāi) 花前田間管理，田間分3個(gè)小區(qū)播種，小區(qū)一播種順序:第一壟分別為 JLCMS82A、JLCMS8B 和 JLCMS89A，平行第二壟分別為 JLCMS89A、JLCMS8B 和JLCMS9A,穴距40cm ;垂直壟向播種第二、三個(gè)小區(qū)，相鄰兩小區(qū)間隔I壟，父本分別為JLCMSR4和S37，測(cè)交父、母本種植方式同第一個(gè)小區(qū)；開(kāi)花前田間管理方式同大豆生產(chǎn)田。
[0046](3)在開(kāi)花前對(duì)所有測(cè)交父、母本掛牌標(biāo)記，同時(shí)在測(cè)交小區(qū)上組裝架設(shè)測(cè)交用網(wǎng)室，把所有測(cè)交父、母本罩在網(wǎng)室內(nèi)。參照?qǐng)D3。
[0047](4)測(cè)交母本花粉敗育率檢查，在測(cè)交母本初花期選取即將開(kāi)放的花蕾，每株取3朵花，用70%乙醇固定備用；在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用I2-KI染色法觀察花粉敗育率，拔除花粉敗育率低于98%的植株。
[0048](5)苜蓿切葉蜂投放、管理:在測(cè)交父、母本盛花期的晴朗天氣，每個(gè)網(wǎng)室投放2-3頭苜蓿切葉蜂給測(cè)交母本傳粉。投放苜蓿切葉蜂后，試驗(yàn)區(qū)及其周邊50米內(nèi)禁止使用對(duì)苜蓿切葉蜂有毒性的農(nóng)藥，直至傳粉結(jié)束。苜蓿切葉鋒投放后不需要額外人工管理。
[0049](6)雜交莢收獲:當(dāng)測(cè)交母本植株上雜交莢成熟時(shí)，按組合及編號(hào)收獲雜交莢，JLCMS8B作為側(cè)交父本的小區(qū)一，在JLCMS82A、JLCMS9A和JLCMS89A上分別收獲151粒、59粒和32粒雜交種子；JLCMSR4作為側(cè)交父本的小區(qū)二，在JLCMS82A、JLCMS9A和JLCMS89A上分別收獲種子128粒、47粒和22粒；S37作為側(cè)交父本的小區(qū)三，在JLCMS82A、JLCMS9A和JLCMS89A上分別收獲種子118粒、41粒和20粒。
[0050](7)第二年春季按組合種植三個(gè)小區(qū)的雜交F1種子，每個(gè)組合播種15粒種子，開(kāi)花期對(duì)每個(gè)組合的10個(gè)單株即將開(kāi)放的花蕾取樣，用75%的酒精固定，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用I2-KI染色法觀察花粉敗育率，將花粉平均敗育率結(jié)果列于表1。
[0051 ] 表1 3份測(cè)交父本F1花粉敗育率統(tǒng)計(jì)(％)
【權(quán)利要求】
1.一種高效的大豆細(xì)胞質(zhì)雄性不育的測(cè)交方法，其特征在于: 同時(shí)利用一組典型的、不同類(lèi)型的不育系為測(cè)交母本，在隔離條件下，采用一父多母的配置方法，利用昆蟲(chóng)傳粉，一次測(cè)交可測(cè)出待測(cè)材料是保持系還是恢復(fù)系以及不同的恢復(fù)類(lèi)型。
2.一種高效的大豆細(xì)胞質(zhì)雄性不育的測(cè)交方法，包括以下步驟: 1)選擇測(cè)交母本: 第一測(cè)交母本:該類(lèi)不育系可被所有保持系保持，同時(shí)可被所有恢復(fù)系恢復(fù)，F(xiàn)1花粉敗育率在0-10%之間； 第二測(cè)交母本:該類(lèi)不育系可被所有保持系保持，同時(shí)可被超過(guò)50%的恢復(fù)系恢復(fù)，F(xiàn)1花粉敗育率在11-60%之間； 第三測(cè)交母本:可被所有保持系保持，同時(shí)僅能被小于10%的恢復(fù)系恢復(fù),F1花粉敗育率大于61% ； 2)測(cè)交用網(wǎng)室: 測(cè)交用網(wǎng)室是由鋼筋方框骨架及覆蓋其上的紗網(wǎng)罩構(gòu)成封閉空間，測(cè)交用網(wǎng)室的側(cè)面紗網(wǎng)設(shè)有拉鏈開(kāi)口； 3)田間播種方式: 播種季節(jié)，在大田按小區(qū)播種，步驟I)的三種測(cè)交母本與I個(gè)待測(cè)父本構(gòu)成一個(gè)測(cè)交小區(qū)，每個(gè)小區(qū)播種1-2穴待測(cè)父本及4-5穴三種測(cè)交母本；小區(qū)大小為垂直壟向長(zhǎng)80-130cm，平行壟向?qū)?0-120cm ;播種方式為穴播，第一壟播種順序?yàn)榈谝粶y(cè)交母本、待測(cè)父本和第三測(cè)交母本，第二壟播種順序?yàn)榈诙y(cè)交母本、待測(cè)父本和第三測(cè)交母本，播種量為每穴4粒，出苗后定苗2株；根據(jù)父、母本的開(kāi)花期適當(dāng)調(diào)整父、母本的播種時(shí)間，以確保父、母本開(kāi)花期一致；測(cè)交恢復(fù)系的恢復(fù)能力時(shí)，可同時(shí)選1-2個(gè)配合力高的不育系播種在小區(qū)內(nèi)與其雜交配制少量雜交種子； 4)架設(shè)測(cè)交用網(wǎng)室: 在測(cè)交父、母本開(kāi)花前3-5天給每個(gè)測(cè)交小區(qū)上架設(shè)一個(gè)步驟2)的測(cè)交用網(wǎng)室，并除去網(wǎng)室內(nèi)野生昆蟲(chóng)； 5)不育系花粉敗育率檢查: 扣測(cè)交用網(wǎng)室前 ，給各個(gè)測(cè)交父、母本掛牌標(biāo)記，扣測(cè)交用網(wǎng)室后，用顯微鏡檢查測(cè)交母本不育系花粉敗育率，拔除花粉敗育率低于98%的植株； 6)傳粉昆蟲(chóng)投放: 在測(cè)交父、母本盛花期，每個(gè)測(cè)交用網(wǎng)室投放2-3頭苜蓿切葉蜂給測(cè)交母本傳粉，為保證傳粉質(zhì)量，遇陰雨天氣可重復(fù)投放一次苜蓿切葉蜂；或用蜜蜂傳粉，蜂群大小100只左右； 7)傳粉昆蟲(chóng)管理: 苜蓿切葉鋒投放后不需要額外人工管理；蜜蜂需要定期飼喂糖漿，供飲清水； 8)雜交莢收獲: 測(cè)交母本植株上雜交莢成熟后，按組合及編號(hào)收獲雜交莢并詳細(xì)記錄種子來(lái)源； 9)雜交F1植株花粉敗育率檢查:在下一個(gè)種植季,按組合種植雜交F1種子，通過(guò)觀察F1植株花粉敗育率，確定待測(cè)父本材料的恢保關(guān)系，若是恢復(fù)系，確定恢復(fù)系的類(lèi)型。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高效的大豆細(xì)胞質(zhì)雄性不育的測(cè)交方法，其特征在于: 第一測(cè)交母本以JLCMS82A或JLCMS101A為代表的不育系；第二測(cè)交母本以JLCMS9A為代表的不育系；第三測(cè) 交母本以JLCMS89A或JLCMS31A為代表的不育系。
【文檔編號(hào)】A01H1/02GK103828708SQ201410097321
【公開(kāi)日】2014年6月4日 申請(qǐng)日期:2014年3月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月18日
【發(fā)明者】張井勇, 趙麗梅, 孫寰, 彭寶, 張偉, 張春寶, 張偉龍, 閆昊, 李慧 申請(qǐng)人:吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院