一種彩色棉胚珠離體培養(yǎng)的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種彩色棉胚珠離體培養(yǎng)的方法，其步驟如下：采集綠色棉或棕色棉的當(dāng)天的0-2天幼鈴，將花冠拉去，剝?nèi)セㄝ?，保留花柄；將所取幼鈴用蒸餾水洗滌2次，于無(wú)菌條件下用75％酒精消毒5-15min后用0.1%氯化汞浸泡5-15min，再用無(wú)菌水沖洗5-8次，剝?nèi)∨咧?；將所取胚珠于無(wú)菌條件下接種于含有激素ZR、GA3和IAA的BT培養(yǎng)基中，每瓶接種同一個(gè)子房的胚珠15-25粒，于(31±1)℃進(jìn)行暗培養(yǎng)30-40天。優(yōu)選接種綠色棉胚珠時(shí)其激素配比為GA31.0μmol/L+IAA5.0μmol/L+ZR2.5μmol/L，接種棕色棉胚珠時(shí)其激素配比為GA31.0μmol/L+IAA1.0μmol/L+ZR1.0μmol/L。本發(fā)明方法可以降低污染率，提高存活率，促進(jìn)棉纖維生長(zhǎng)和色素合成。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種彩色棉胚珠罔體培養(yǎng)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，特別涉及一種彩色棉胚珠離體培養(yǎng)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]天然彩色棉是棉纖維中含有天然色素的特殊類(lèi)型的棉花。棉纖維是外珠被的表皮細(xì)胞中生毛細(xì)胞經(jīng)突起、伸長(zhǎng)以及次生壁加厚等過(guò)程形成的厚壁管狀單細(xì)胞毛；以大田植株條件下的棉纖維為研究對(duì)象，其結(jié)果往往因不明因素的影響而難以解釋。Kim和Triplett曾指出，棉纖維的離體培養(yǎng)讓人們能夠進(jìn)行溫室和大田中不能進(jìn)行的生理和生化試驗(yàn)。通過(guò)棉花胚珠離體培養(yǎng)，可以研究營(yíng)養(yǎng)、低溫、光照、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑以及其他化學(xué)物質(zhì)對(duì)棉纖維細(xì)胞起始和伸長(zhǎng)效應(yīng)的影響。雖然白色棉胚珠離體培養(yǎng)體系較成熟，但由于棉花胚珠離體培養(yǎng)體系存在很明顯的品種差異，彩色棉胚珠離體培養(yǎng)體系還鮮見(jiàn)報(bào)道。從而本發(fā)明為彩棉的育種研究提供了穩(wěn)定良好的研究樣本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種彩色棉胚珠離體培養(yǎng)的方法，該方法可以降低污染率，提高存活率，促進(jìn)棉纖維生長(zhǎng)和色素合成。
[0004]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0005]一種彩色棉 胚珠離體培養(yǎng)的方法，包括以下步驟:
[0006](I)取材:采集綠色棉或棕色棉的當(dāng)天的0-2天幼鈴，將花冠拉去，剝?nèi)セㄝ?，保留花柄?br> [0007](2)消毒處理:將所取幼鈴用蒸餾水洗滌2次，于無(wú)菌條件下用75%酒精消毒5-15min后用0.1%氯化汞浸泡5_15min，再用無(wú)菌水沖洗5_8次，剝?nèi)∨咧椋?br> [0008](3)接種和培養(yǎng):將所取胚珠于無(wú)菌條件下接種于含有激素ZR、GA3和IAA的BT培養(yǎng)基中，每瓶接種同一個(gè)子房的胚珠15-25粒，于(31 ± I) °C進(jìn)行暗培養(yǎng)30-40天。
[0009]所述綠色棉胚珠接種的BT培養(yǎng)基的激素配比為GA30.5-3.0 μ mol/L+IAA1.0-10.0 μ mol/L+ZR0.5-3.0 μ mol/L,優(yōu)選為 GA3L O μ mol/L+IAA5.0 μ mol/L+ZR2.5 μ mol/L。
[0010]所述棕色棉胚珠接種的BT培養(yǎng)基的激素配比為GA30.5-3.0 μ mol/L+IAA1.0-10.0 μ mol/L+ZR0.5-3.0 μ mol/L,優(yōu)選為 GA3L O μ mol/L+IAAl.0 μ mol/L+ZR1.0 μ mol/L。
[0011]本發(fā)明與已有技術(shù)相比，其有益效果體現(xiàn)在:
[0012]1、本發(fā)明取材時(shí)保留花柄，保證了短時(shí)間內(nèi)葉柄對(duì)幼鈴的營(yíng)養(yǎng)供給，使得幼胚的活力得以保存、離體培養(yǎng)時(shí)胚珠的存活率大大提高。
[0013]2、本發(fā)明提供一種彩色棉胚珠離體培養(yǎng)的方法，該方法可以降低污染率、死亡率和褐化率，提高成活率，促進(jìn)棉纖維生長(zhǎng)和色素合成。在實(shí)驗(yàn)室能夠?qū)崿F(xiàn)穩(wěn)定良好的批量培養(yǎng)。[0014]3、本發(fā)明提供一種彩色棉胚珠離體培養(yǎng)的方法，避免了在大田條件下不明因素對(duì)纖維生長(zhǎng)發(fā)育和色素合成的影響。便于后續(xù)能夠進(jìn)行溫室和大田中不能進(jìn)行的生理和生化試驗(yàn)，從而本發(fā)明為彩棉的育種研究提供了穩(wěn)定良好的研究樣本。
[0015]4、本發(fā)明BT培養(yǎng)基其激素配比中對(duì)胚珠鮮重和纖維伸長(zhǎng)影響大小的順序?yàn)閆R >IAA > GA3，其中，ZR對(duì)胚珠鮮重的影響達(dá)極顯著水平，對(duì)纖維伸長(zhǎng)的影響達(dá)顯著水平；而IAA和GA3對(duì)兩者的影響不顯著。ZR對(duì)彩色棉胚珠離體培養(yǎng)極其重要。
[0016]5、棕色棉胚珠在激素配比為 GA3L O μ mol/L+IAAl.0 μ mol/L+ZRl.0 μ mol/L 的 BT培養(yǎng)基中其30DAC (離體培養(yǎng)30天)棉纖維長(zhǎng)度經(jīng)多重比較分析均顯著高于其他激素配比。綠色棉胚珠在激素配比為GA3L O μ mol/L+IAA5.0 μ mol/L+ZR2.5 μ mol/L的BT培養(yǎng)基中，其30DAC的棉纖維長(zhǎng)度經(jīng)多重比較分析均顯著高于其他激素配比。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0017]圖1為實(shí)施例1不同培養(yǎng)方式棕色棉胚珠的生長(zhǎng)情況，其中，a、40天暗培養(yǎng)，b、40
天光培養(yǎng)。
[0018]圖2為實(shí)施例 2不同培養(yǎng)方式綠色棉胚珠的生長(zhǎng)情況，其中，a、40天暗培養(yǎng)，b、40
天光培養(yǎng)。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明:
[0020]實(shí)施例1:
[0021]一、棕色棉胚珠的離體培養(yǎng)
[0022]棕色棉(棕彩選I號(hào))大田種植，常規(guī)管理。于早上9點(diǎn)左右對(duì)當(dāng)日花掛牌。將當(dāng)天采集的花后I天的幼鈴花冠拉去，并剝?nèi)セㄝ啵瑑H留適當(dāng)長(zhǎng)度的花柄。并將這些幼鈴用蒸懼水洗漆2次放入超凈工作臺(tái)，用75%酒精消毒IOmin后再用0.1%氯化萊浸泡5min,消毒后用無(wú)菌水沖洗6次，剝?nèi)∨咧?。將胚珠接種于BT培養(yǎng)基上，其激素配比為GA3L O μ mol/L+IAA1.0 μ mol/L+ZRl.0 μ mol/L。每瓶接種同一個(gè)子房的胚珠約20粒，置于(31±1)°C條件下進(jìn)行暗培養(yǎng)并觀察生長(zhǎng)情況。
[0023]二、棕色棉胚珠離體培養(yǎng)的不同取材和消毒處理方法的比較研究
[0024]
【權(quán)利要求】
1.一種彩色棉胚珠離體培養(yǎng)的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)取材:采集綠色棉或棕色棉的當(dāng)天的0-2天幼鈴，將花冠拉去，剝?nèi)セㄝ啵Ａ艋ū? (2)消毒處理:將所取幼鈴用蒸餾水洗滌2次，于無(wú)菌條件下用75%酒精消毒5-15min后用0.1%氯化汞浸泡5-15 min,再用無(wú)菌水沖洗5_8次，剝?nèi)∨咧椋?3)接種和培養(yǎng):將所取胚珠于無(wú)菌條件下接種于含有激素ZR、GA3和IAA的BT培養(yǎng)基中，每瓶接種同一個(gè)子房的胚珠15-25粒，于(31±1)°C進(jìn)行暗培養(yǎng)30-40天。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的彩色棉胚珠離體培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述綠色棉胚珠接種的BT培養(yǎng)基的激素配比為GA3 0.5-3.0ymol/L+ IAA 1.0-10.0 μ mol/L+ZR.0.5-3.0 μ mol/L,優(yōu)選為 GA3 1.0 μ mol/L+ IAA 5.0 μ mol/L+ZR 2.5 μ mol/L0
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的彩色棉胚珠離體培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述棕色棉胚珠接種的BT培養(yǎng)基的激素配比為GA3 0.5-3.0 μ mol/L+ IAA 1.0-10.0 μ mol/L+ZR.0.5-3.0 μ mol/L, 優(yōu)選為 GA3 1.0 μ mol/L+ IAA 1.0 μ mol/L+ZR 1.0 μ mol/L。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103931494SQ201410098171
【公開(kāi)日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2014年3月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月17日
【發(fā)明者】孫旭, 林毅, 蔡永萍, 錢(qián)森和, 郭寧, 徐淼, 張雷, 洪亮 申請(qǐng)人:安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)