一種應(yīng)用dse真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其先分別培養(yǎng)DSE真菌和藍(lán)莓苗，再分別將DSE真菌與藍(lán)莓扦插苗、藍(lán)莓幼苗和一年生藍(lán)莓苗進(jìn)行共生栽培，本發(fā)明可以促進(jìn)藍(lán)莓扦插苗的生根和藍(lán)莓幼苗根系的發(fā)育，大大縮短育苗的生長(zhǎng)周期；可以加快一年生藍(lán)莓苗的根系發(fā)育，增加藍(lán)莓分支的數(shù)量和苗的生長(zhǎng)量，提高藍(lán)莓苗的抗旱性。本發(fā)明栽培方法操作簡(jiǎn)單、易于大面積推廣，投資少、增產(chǎn)效果顯著。
【專利說(shuō)明】一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】:
本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種應(yīng)用從越橘屬植物藍(lán)莓根內(nèi)分離獲得的DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法。
[0002]【背景技術(shù)】:
藍(lán)莓(Blueberry),學(xué)名越桔,屬于杜醇花科、越橘亞科、越橘屬(spp.)多年生落葉或常綠灌木。原產(chǎn)地和主產(chǎn)區(qū)都在美國(guó)。其果實(shí)中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，具有延緩腦神經(jīng)衰老、解除眼睛疲勞并增加視力、增強(qiáng)心臟功能和抗癌的獨(dú)特功效，聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織將其列為人類五大健康食品之一。
[0003]目前，國(guó)際上栽培的藍(lán)莓品種主要有:適于溫帶栽培的高灌藍(lán)莓，適于高寒地帶栽培的矮灌藍(lán)莓和適于亞熱帶或熱帶栽培的兔眼藍(lán)莓。藍(lán)莓的根系細(xì)，呈纖維狀，沒(méi)有根毛，吸收能力小，適宜在土壤疏松、濕潤(rùn)、有機(jī)質(zhì)含量高的地域栽培，其光合最適溫度范圍相對(duì)較小。由于藍(lán)莓對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求高，自然繁殖率低，生長(zhǎng)緩慢，在加上藍(lán)莓果本身較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，近年來(lái)對(duì)藍(lán)莓的需求量不斷增加，導(dǎo)致藍(lán)莓的價(jià)格昂貴。
[0004]藍(lán)莓的試管苗快速繁殖雖然獲得了成功，但試管苗的培養(yǎng)步驟復(fù)雜且難度高，尤其是幼苗生根方面，一般的培養(yǎng)基生根率不高；試管苗出瓶后生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)周期長(zhǎng)等問(wèn)題成為制約藍(lán)莓大面積栽培的主要障礙。
[0005]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
本發(fā)明的目的在于克服上述已有技術(shù)的不足而提供一種方法簡(jiǎn)單、易于大面積推廣，投資少、不施任何肥料和農(nóng)藥，縮短育苗的生產(chǎn)周期，增加藍(lán)莓苗的分支數(shù)量和苗的生長(zhǎng)量，提高苗的抗旱性，實(shí)現(xiàn)藍(lán)莓綠色優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法。
[0006]本發(fā)明的目的可以通過(guò)如下措施來(lái)達(dá)到:一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于其包括如下步驟:
1)、DSE真菌的培養(yǎng):
將DSE真菌自低溫保藏的斜面試管菌種活化后，轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基的平皿中，于21-25°C恒溫培養(yǎng)11-19天，分別在菌落邊緣打孔成菌餅，并接入液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)或接入固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)；
所述的DSE真菌液體培養(yǎng)基的組成按重量百分計(jì)為:葡萄糖1.5-4.5%，麥芽浸膏
1.5-4.5%，大豆蛋白胨0.3-0.7%，余量水，培養(yǎng)基pH值為50-6.0 ;震蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10-40% ;液體培養(yǎng)基高壓滅菌后接入DSE真菌；種子菌種接種量為培養(yǎng)容器裝量的10-20% ；液體培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:搖床震蕩轉(zhuǎn)速為130-150r/min ;21_25°C培養(yǎng)26-30天；培養(yǎng)結(jié)束后可直接使用或用勻漿機(jī)打碎菌體后備用；
所述的DSE真菌固體培養(yǎng)基由固體基本培養(yǎng)基與液體MEA組成，固體基本培養(yǎng)基的組成按重量計(jì)為:麥麩:麥殼:闊葉樹(shù)鋸末=1-2:1-3:1-3 ;液體MEA量為以上麥麩、麥殼、闊葉樹(shù)鋸末總重量的20-40%，培養(yǎng)基pH為5.0-6.0，靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量30-70% ;固體培養(yǎng)基滅菌后接入DSE真菌，菌種接種量為培養(yǎng)容器裝量的10-20%;固體培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:21-25°C培養(yǎng)26-30天；待菌絲長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)基質(zhì)時(shí)培養(yǎng)結(jié)束，可直接使用或用粉碎機(jī)粉碎后備用;
2)、藍(lán)莓苗的培養(yǎng):
(1)藍(lán)莓芽分化:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g、瓊脂5-15g，添加的植物激素為玉米素1.0-3.0mg，培養(yǎng)基pH5.0-6.0 ;靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10_30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15-25°C，光照強(qiáng)度為1000-30001x，光照時(shí)間8_16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40-120天；
(2)藍(lán)莓叢芽增殖:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g、瓊脂5-15g，添加的植物激素為玉米素0.5-2.5mg,培養(yǎng)基pH5.0-6.0 ;靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10_30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15-25°C，光照強(qiáng)度為1000-30001x，光照時(shí)間8_16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40-120天；
(3))藍(lán)莓苗繼代培養(yǎng):按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g、瓊脂5-15g，添加的植物激素為玉米素0.5-2.5mg,培養(yǎng)基pH5.0-6.0 ;靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10_30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15_25°C，光照強(qiáng)度為1000-30001x，光照時(shí)間8_16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40-120天；
(4)藍(lán)莓壯苗生根:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以1/2WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升1/2WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g，用濾紙球或小棉花團(tuán)鋪滿所用的培養(yǎng)容器的底部，添加的植物激素為吲哚丁酸0.5-2.5mg，培養(yǎng)基pH5.0-6.0 ;靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10-30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15-25°C，光照強(qiáng)度為1000-30001x，光照時(shí)間8-16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40-120天；
(5)藍(lán)莓扦插苗培養(yǎng)或藍(lán)莓幼苗培養(yǎng)或一年生藍(lán)莓苗培養(yǎng):
所述的藍(lán)莓扦插苗培養(yǎng):經(jīng)繼代培`養(yǎng)的藍(lán)莓組培苗經(jīng)低溫馴化后，剪取生長(zhǎng)健壯5-6cm的莖段以苔蘚為栽培基質(zhì)扦插到營(yíng)養(yǎng)穴盤里，扦插后生長(zhǎng)30-50天，然后剪取5-6cm的生長(zhǎng)健壯、長(zhǎng)勢(shì)均一的營(yíng)養(yǎng)穴盤藍(lán)莓苗的無(wú)根莖段作為藍(lán)莓扦插苗；
所述的藍(lán)莓幼苗培養(yǎng):壯苗生根培養(yǎng)后的藍(lán)莓組培苗經(jīng)低溫馴化后移栽到以苔蘚和草炭土為栽培基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽里，生長(zhǎng)20-40天，即為藍(lán)莓幼苗；
所述的一年生藍(lán)莓苗培養(yǎng):上述藍(lán)莓幼苗繼續(xù)生長(zhǎng)11-13月，即為一年生藍(lán)莓苗；
3)、DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培:
藍(lán)莓扦插苗或藍(lán)莓幼苗或一年生藍(lán)莓苗與DSE真菌按以下方法共生栽培:
(1)藍(lán)莓扦插苗與DSE真菌的共生栽培:在具有遮陽(yáng)網(wǎng)的露天大棚，或塑料薄膜溫室，或玻璃溫室中進(jìn)行育苗載培，栽培藍(lán)莓扦插苗的株距為3-lOcm ;培養(yǎng)條件為18-25°C光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間16h/天，環(huán)境濕度為60%-80% ;在上述藍(lán)莓扦插苗的基部放置3/5穴孔容積的栽培基質(zhì)后，采用上述DSE真菌培養(yǎng)物與藍(lán)莓扦插苗共生栽培，最后用栽培基質(zhì)把扦插苗固定好，藍(lán)莓扦插苗在14天左右開(kāi)始生根，6個(gè)月后生長(zhǎng)為根系發(fā)達(dá)的藍(lán)莓幼苗；
(2)藍(lán)莓幼苗與DSE真菌的共生栽培:在具有遮陽(yáng)網(wǎng)的露天大棚，或塑料薄膜溫室，或玻璃溫室中進(jìn)行育苗載培，栽培藍(lán)莓幼苗的株距為10-30cm，培養(yǎng)條件為間歇光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為1000-30001χ，光照時(shí)間8-16h，環(huán)境濕度為60-80% ;放置栽培基質(zhì)后，在上述藍(lán)莓幼苗根部施加備好的DSE真菌液體或固體培養(yǎng)物，DSE真菌液體培養(yǎng)物的添加量為30-100mL，或DSE真菌固體培養(yǎng)物的添加量為20_60g ;藍(lán)莓幼苗與DSE真菌共生60天后均形成菌根結(jié)構(gòu)，繼續(xù)生長(zhǎng)2個(gè)月后可轉(zhuǎn)移至大田進(jìn)行大面積栽培；
(3)一年生藍(lán)莓苗與DSE真菌藍(lán)莓的大田栽培:先在大田中挖出定植穴，株距為20-60cm，再在定植穴內(nèi)鋪放栽培基質(zhì)并施加的DSE真菌液體培養(yǎng)物30_100mL，或DSE真菌固體培養(yǎng)物20-60g，最后把上述一年生藍(lán)莓苗栽培于定植穴中；在藍(lán)莓生長(zhǎng)過(guò)程中每年可以補(bǔ)施DSE真菌液體或固體培養(yǎng)物1-7次。
[0007]為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培中的栽培基質(zhì)為苔蘚。
[0008]為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培中的栽培基質(zhì)為苔蘚和草炭土，這2種材料加入量之間的比例按重量計(jì)為:苔蘚:草炭土 =1-5:1-5。
[0009]為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培中的栽培基質(zhì)為苔蘚、草炭土和蛭石，這3種材料加入量之間的比例按重量計(jì)為:苔蘚:草炭土:蛭石=1-5:1-5:1-2。
[0010]為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培中的栽培基質(zhì)為有機(jī)土和草炭土，這2種材料加入量之間的比例按重量計(jì)為:有機(jī)土:草炭土=1-5:1-5。
[0011]為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培中的栽培基質(zhì)為沙土和草炭土，這2種材料加入量之間的比例按重量計(jì)為:沙土:草炭土 =1-3:1-5。
[0012]為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培中的栽培基質(zhì)為有機(jī)土；
為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，`所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培步驟(1)藍(lán)莓扦插苗與DSE真菌的共生栽培中在藍(lán)莓扦插苗的基部放置3/5穴孔容積的栽培基質(zhì)后，在藍(lán)莓扦插苗基部施加上備好的DSE真菌液體培養(yǎng)物2-10mL或DSE真菌固體培養(yǎng)物2_10g，最后用栽培基質(zhì)把扦插苗固定好。
[0013]為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培步驟(1)藍(lán)莓扦插苗與DSE真菌的共生栽培中在藍(lán)莓扦插苗的基部放置3/5穴孔容積的3/5栽培基質(zhì)后，先用DSE真菌液體培養(yǎng)物浸泡扦插苗，真菌液體培養(yǎng)物的添加標(biāo)準(zhǔn)為完全浸沒(méi)扦插苗，浸泡的時(shí)間為10-30min，再用栽培基質(zhì)把藍(lán)莓扦插苗固定好即可。
[0014]為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的DSE真菌于2013年10月8日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏編號(hào)為=CGMCC N0.8260。
[0015]本發(fā)明同已有技術(shù)相比可產(chǎn)生如下積極效果:DSE真菌能夠侵染藍(lán)莓根系，并且促進(jìn)藍(lán)莓根系的發(fā)育和苗的生長(zhǎng)，提高苗的抗旱性，本發(fā)明利用菌根技術(shù)將藍(lán)莓與DSE真菌共生栽培，解決了藍(lán)莓育苗中幼苗生根率低，生長(zhǎng)緩慢等問(wèn)題，可以促進(jìn)藍(lán)莓扦插苗的生根和藍(lán)莓幼苗根系的發(fā)育，大大縮短育苗的生長(zhǎng)周期；增加藍(lán)莓分支的數(shù)量和苗的生長(zhǎng)量，提高藍(lán)莓苗的抗旱性。將DSE真菌用于藍(lán)莓的育苗和大田栽培，對(duì)于藍(lán)莓的大面積栽培具有重大的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。本發(fā)明栽培方法操作簡(jiǎn)單、易于大面積推廣，投資少、增產(chǎn)效果顯著。
[0016]【具體實(shí)施方式】:
下面結(jié)合附圖和具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明作出進(jìn)一步的說(shuō)明，本發(fā)明的保護(hù)范圍不受實(shí)施例的限制。
[0017]DSE真菌是一種枝孢屬iCladosporiimi)的芽枝狀枝孢菌iCladosporiumcladosporioides),以下采用的DSE真菌于2013年10月8日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏編號(hào)為:CGMCC N0.8260。
[0018]實(shí)施例1:
一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗的方法，其特征在于其包括如下步驟:
UDSE真菌的培養(yǎng):
將DSE真菌自低溫保藏的斜面試管菌種活化后，轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基的平皿中，于23°C恒溫培養(yǎng)15天，用Φ 5mm的打孔器分別在菌落邊緣打孔成菌餅，并接入液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。液體培養(yǎng)基的組成按重量百分計(jì)為:葡萄糖2%，麥芽浸膏3%，大豆蛋白胨0.5%，余量水，培養(yǎng)基PH值為5.5 ;用玻璃三角瓶震蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量25% ；;液體培養(yǎng)基高壓滅菌后接入DSE真菌；種子菌種接種量為培養(yǎng)容器裝量的15% ;搖床震蕩轉(zhuǎn)速為140r/min ;23°C培養(yǎng)28天；培養(yǎng)結(jié)束后用勻漿機(jī)打碎菌體后備用。
[0019]2、藍(lán)莓苗的培養(yǎng):
(1)藍(lán)莓芽分化:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖30g、瓊脂10g、玉米素2.0mg，培養(yǎng)基pH5.5 ;用玻璃三角瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量20%，光照培養(yǎng)的條件為溫度20°C，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間12h/天，培養(yǎng)時(shí)間80天；
(2)藍(lán)莓叢芽增殖:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖30g、瓊脂10g、玉米素1.5mg，培養(yǎng)基pH5.5 ;用玻璃三角瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量`20%，光照培養(yǎng)的條件為溫度20°C，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間12h/天，培養(yǎng)時(shí)間80天；
(3))藍(lán)莓苗繼代培養(yǎng):按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖30g、瓊脂10g、玉米素1.5mg，培養(yǎng)基pH5.5 ;用玻璃三角瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量20%，光照培養(yǎng)的條件為溫度20°C，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間12h/天，培養(yǎng)時(shí)間80天；
(4)藍(lán)莓壯苗生根:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以1/2WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升1/2WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖30g，用濾紙球或小棉花團(tuán)鋪滿所用的培養(yǎng)容器的底部，添加的植物激素為IBA (吲哚丁酸)1.5mg，培養(yǎng)基pH5.5 ;用玻璃三角瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量20%,光照培養(yǎng)的條件為溫度20°C，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間12h/天，培養(yǎng)時(shí)間80天；
(5)藍(lán)莓扦插苗培養(yǎng):
經(jīng)繼代培養(yǎng)的藍(lán)莓組培苗經(jīng)低溫馴化后，剪取生長(zhǎng)健壯5-6cm的莖段以苔蘚為栽培基質(zhì)扦插到5cm高128孔的營(yíng)養(yǎng)穴盤里，扦插后生長(zhǎng)30-50天，即為營(yíng)養(yǎng)穴盤藍(lán)莓苗。然后剪取5-6cm的生長(zhǎng)健壯、長(zhǎng)勢(shì)均一的營(yíng)養(yǎng)穴盤藍(lán)莓苗的無(wú)根莖段作為藍(lán)莓扦插苗；
3、DSE真菌與藍(lán)莓扦插苗的共生栽培:
(I)栽培基質(zhì):苔蘚。
[0020](2)藍(lán)莓扦插苗與DSE真菌按以下方法共生栽培:在具有遮陽(yáng)網(wǎng)的露天大棚，或塑料薄膜溫室，或玻璃溫室中進(jìn)行育苗載培，栽培工具為5 cm高128孔的營(yíng)養(yǎng)穴盤，立體栽培；栽培藍(lán)莓扦插苗的株距為3-lOcm ;在藍(lán)莓扦插苗的基部平鋪一層3/5穴孔容積的苔蘚，用上述備好的DSE真菌液體培養(yǎng)物浸泡扦插苗，真菌液體培養(yǎng)物的添加標(biāo)準(zhǔn)為完全浸沒(méi)扦插苗，浸泡的時(shí)間為10-30min，再用苔蘚把藍(lán)莓扦插苗固定好即可；將穴盤放置在玻璃溫室中，環(huán)境溫度為18~25°C，光照強(qiáng)度為2000Lx，光照時(shí)間為16h，環(huán)境濕度為60%_80%。
[0021](3)藍(lán)莓苗的收獲:
藍(lán)莓扦插苗在14天左右開(kāi)始生根，6個(gè)月后生長(zhǎng)為根系發(fā)達(dá)的藍(lán)莓幼苗，即可為市場(chǎng)提供大面積栽培的藍(lán)莓苗。
[0022]實(shí)施例2:
一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于其包括如下步驟: UDSE真菌的培養(yǎng):
將DSE真菌自低溫保藏的斜面試管菌種活化后，轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基的平皿中，于21°C恒溫培養(yǎng)19天，用Φ 5mm的打孔器分別在菌落邊緣打孔成菌餅，并接入液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。液體培養(yǎng)基的組成按重量百分計(jì)為:葡萄糖1.5%，麥芽浸膏4.5%，大豆蛋白胨0.3%，余量水，培養(yǎng)基PH值為5 ;用玻璃罐頭瓶震蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10% ；;液體培養(yǎng)基高壓滅菌后接入DSE真菌；種子菌種接種量為培養(yǎng)容器裝量的10% ;搖床震蕩轉(zhuǎn)速為130r/min ；21°C培養(yǎng)30天；培養(yǎng)結(jié)束后備用。
[0023]2、藍(lán)莓苗的培養(yǎng):
(1)藍(lán)莓芽分化:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加食用白砂糖20g、瓊脂5g、玉米素1.0mg,培養(yǎng)基pH5 ;用玻璃罐頭瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15°C，光照強(qiáng)度為30001x，光照時(shí)間8h/天，培養(yǎng)時(shí)間120天；` (2)藍(lán)莓叢芽增殖:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加食用白砂糖20g、瓊脂5g、玉米素0.5mg，培養(yǎng)基pH5 ;用玻璃罐頭瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15°C，光照強(qiáng)度為30001x，光照時(shí)間8h/天，培養(yǎng)時(shí)間120天；
(3))藍(lán)莓苗繼代培養(yǎng):按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加食用白砂糖20g、瓊脂5g、玉米素0.5mg,培養(yǎng)基pH5 ；用玻璃罐頭瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10%,光照培養(yǎng)的條件為溫度15°c,光照強(qiáng)度為30001x，光照時(shí)間8h/天，培養(yǎng)時(shí)間120天;
(4)藍(lán)莓壯苗生根:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以1/2WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升1/2WPM培養(yǎng)基中均添加食用白砂糖20g，用濾紙球或小棉花團(tuán)鋪滿所用的培養(yǎng)容器的底部，添加的植物激素為IBA (吲哚丁酸)0.5mg，培養(yǎng)基pH5 ;用玻璃罐頭瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15°C，光照強(qiáng)度為30001x，光照時(shí)間8h/天，培養(yǎng)時(shí)間120天；
(5)藍(lán)莓幼苗培養(yǎng):
壯苗生根培養(yǎng)后的藍(lán)莓組培苗經(jīng)低溫馴化后移栽到以苔蘚和草炭土為栽培基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽里，生長(zhǎng)20-40天，即為藍(lán)莓幼苗；
3、DSE真菌與藍(lán)莓幼苗的共生栽培:
(I)栽培基質(zhì)為苔蘚和草炭土，這2種材料加入量之間的比例按重量計(jì)為:苔蘚:草炭土 =1-5:1-5 ;先將苔蘚用蒸餾水浸泡7-10個(gè)小時(shí)，使其充分吸收水分，在浙干多余水分后與草炭土混合。
[0024](2)藍(lán)莓幼苗與DSE真菌按以下方法共生栽培:
在具有遮陽(yáng)網(wǎng)的露天大棚，或塑料薄膜溫室，或玻璃溫室中進(jìn)行育苗載培，栽培藍(lán)莓幼苗的株距為10-30cm，培養(yǎng)條件為25°C /18°C光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為1000_30001x，光照時(shí)間8-16h，環(huán)境濕度為60-80% ;用IOcmX 20cm (底直徑X高)營(yíng)養(yǎng)缽，將營(yíng)養(yǎng)缽的底部放置3/5的苔蘚和草炭土混合基質(zhì)后，在藍(lán)莓幼苗的根部加入備好的DSE真菌液體培養(yǎng)物30_100mL。
[0025](3 )藍(lán)莓苗的收獲:
藍(lán)莓幼苗與DSE真菌共生60天后均形成菌根結(jié)構(gòu)，藍(lán)莓幼苗根系發(fā)達(dá)且生長(zhǎng)旺盛，植株上有分枝長(zhǎng)成，繼續(xù)生長(zhǎng)2個(gè)月后可轉(zhuǎn)移至大田進(jìn)行大面積栽培。
[0026]實(shí)施例3:
一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于其包括如下步驟: UDSE真菌的培養(yǎng):
將DSE真菌自低溫保藏的斜面試管菌種活化后，轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基的平皿中，于25V恒溫培養(yǎng)11天，用Φ5_的打孔器分別在菌落邊緣打孔成菌餅，并接入液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。液體培養(yǎng)基的組成按重量百分計(jì)為:葡萄糖4.5%，麥芽浸膏1.5%，大豆蛋白胨0.7%，余量水，培養(yǎng)基PH值為6 ;用塑料瓶器皿震蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量40% ；;液體培養(yǎng)基高壓滅菌后接入DSE真菌；種子菌種接種量為培養(yǎng)容器裝量的20% ;搖床震蕩轉(zhuǎn)速為150r/min ；25°C培養(yǎng)26天；培養(yǎng)結(jié)束后用勻漿機(jī)打碎菌體后備用。
[0027]2、藍(lán)莓苗的培養(yǎng):
(1)藍(lán)莓芽分化:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖40g、瓊脂15g、玉米素3.0mg，培養(yǎng)基pH6 ;用塑料瓶器皿靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度25°C，光照強(qiáng)度為ΙΟΟΟΙχ，光照時(shí)間16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40天；
(2)藍(lán)莓叢芽增殖:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖40g、瓊脂15g、玉米素2.5mg，培養(yǎng)基pH6 ;用塑料瓶器皿靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度25°C，光照強(qiáng)度為ΙΟΟΟΙχ，光照時(shí)間16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40天；
(3))藍(lán)莓苗繼代培養(yǎng):按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖40g、瓊脂15g、玉米素2.5mg，培養(yǎng)基pH6 ;用塑料瓶器皿靜置暗培養(yǎng),培養(yǎng)容器裝量30%,光照培養(yǎng)的條件為溫度25°C,光照強(qiáng)度為1000lx,光照時(shí)間16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40天；
(4)藍(lán)莓壯苗生根:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以1/2WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升1/2WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖40g，用濾紙球或小棉花團(tuán)鋪滿所用的培養(yǎng)容器的底部，添加的植物激素為IBA (吲哚丁酸)2.5mg，培養(yǎng)基pH6 ;用塑料瓶器皿靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度25°C，光照強(qiáng)度為ΙΟΟΟΙχ，光照時(shí)間16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40天;
(5)藍(lán)莓幼苗培養(yǎng):壯苗生根培養(yǎng)后的藍(lán)莓組培苗經(jīng)低溫馴化后移栽到以苔蘚和草炭土為栽培基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽里，生長(zhǎng)20-40天，即為藍(lán)莓幼苗；
(6)一年生藍(lán)莓苗培養(yǎng):上述藍(lán)莓幼苗繼續(xù)生長(zhǎng)11-13月，即為一年生藍(lán)莓苗。
[0028]3、DSE真菌與一年生藍(lán)莓苗培養(yǎng)的共生栽培:
(1)栽培基質(zhì)為沙土和草炭土，這2種材料加入量之間的比例按重量計(jì)為:沙土:草炭土 =1-3:1-5 ；
(2)—年生藍(lán)莓苗與DSE真菌按以下方法共生栽培:在土壤有機(jī)質(zhì)含量豐富且土壤pH適宜的大田中進(jìn)行栽培，栽培時(shí)，先在大田中挖出定植穴，株距為20-60cm，再在定植穴內(nèi)鋪放栽培基質(zhì)并施加DSE真菌液體培養(yǎng)物30-100mL，最后把上述一年生藍(lán)莓苗栽培于定植穴中。在藍(lán)莓生長(zhǎng)過(guò)程中每年可以補(bǔ)施DSE真菌液體培養(yǎng)物1-7次。
[0029](3)DSE真菌與一年生藍(lán)莓苗共生栽培的結(jié)果:DSE真菌與一年生藍(lán)莓苗共生60天后可明顯看到藍(lán)莓苗生長(zhǎng)旺盛且分枝增多，抗旱能力明顯增強(qiáng)。
[0030]實(shí)施例4:
一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗的方法，其特征在于其包括如下步驟:
UDSE真菌的培養(yǎng):
將DSE真菌自低溫保藏的斜面試管菌種活化后，轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基的平皿中，于23°C恒溫培養(yǎng)15天，用Φ 5mm的打孔器分別在菌落邊緣打孔成菌餅，并接入DSE真菌固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。DSE真菌固體培養(yǎng)基由固體基本培養(yǎng)基與液體MEA組成，固體基本培養(yǎng)基的組成按重量計(jì)為:麥麩:麥殼:闊葉樹(shù)鋸末=1:1:1 ;液體MEA量為以上麥麩、麥殼、闊葉樹(shù)鋸末總重量的30%，培養(yǎng)基pH為5.5`，采用玻璃三角瓶5靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量50% ；DSE真菌固體培養(yǎng)基滅菌后接入DSE真菌，菌種接種量為培養(yǎng)容器裝量的15% ;固體培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:23°C培養(yǎng)28天；待菌絲長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)基質(zhì)時(shí)培養(yǎng)結(jié)束，用粉碎機(jī)粉碎后備用。
[0031]2、藍(lán)莓苗的培養(yǎng):
(1)藍(lán)莓芽分化:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖30g、瓊脂10g、玉米素2.0mg,培養(yǎng)基pH5.5 ;用玻璃三角瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量20%，光照培養(yǎng)的條件為溫度20°C，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間12h/天，培養(yǎng)時(shí)間80天；
(2)藍(lán)莓叢芽增殖:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖30g、瓊脂10g、玉米素1.5mg，培養(yǎng)基pH5.5 ;用玻璃三角瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量20%，光照培養(yǎng)的條件為溫度20°C，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間12h/天，培養(yǎng)時(shí)間80天；
(3))藍(lán)莓苗繼代培養(yǎng):按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖30g、瓊脂10g、玉米素1.5mg，培養(yǎng)基pH5.5 ;用玻璃三角瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量20%，光照培養(yǎng)的條件為溫度20°C，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間12h/天，培養(yǎng)時(shí)間80天；
(4)藍(lán)莓壯苗生根:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以1/2WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升1/2WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖30g，用濾紙球或小棉花團(tuán)鋪滿所用的培養(yǎng)容器的底部，添加的植物激素為IBA (吲哚丁酸)1.5mg，培養(yǎng)基pH5.5 ;用玻璃三角瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量20%,光照培養(yǎng)的條件為溫度20°C，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間12h/天，培養(yǎng)時(shí)間80天；
(5)藍(lán)莓扦插苗培養(yǎng):
經(jīng)繼代培養(yǎng)的藍(lán)莓組培苗經(jīng)低溫馴化后，剪取生長(zhǎng)健壯5-6cm的莖段以苔蘚為栽培基質(zhì)扦插到5cm高128孔的營(yíng)養(yǎng)穴盤里，扦插后生長(zhǎng)30-50天，即為營(yíng)養(yǎng)穴盤藍(lán)莓苗。然后剪取5-6cm的生長(zhǎng)健壯、長(zhǎng)勢(shì)均一的營(yíng)養(yǎng)穴盤藍(lán)莓苗的無(wú)根莖段作為藍(lán)莓扦插苗；
3、DSE真菌與藍(lán)莓扦插苗的共生栽培:
(1)栽培基質(zhì):苔蘚、草炭土和蛭石，這3種材料加入量之間的比例按重量計(jì)為:苔蘚:草炭土:蛭石=1_5:1-5:1-2 ；
(2)藍(lán)莓扦插苗與DSE真菌按以下方法共生栽培:在具有遮陽(yáng)網(wǎng)的露天大棚，或塑料薄膜溫室，或玻璃溫室中進(jìn)行育苗載培，栽培工具為5 cm高128孔的營(yíng)養(yǎng)穴盤，立體栽培；栽培藍(lán)莓扦插苗的株距為3-lOcm ;在藍(lán)莓扦插苗的基部平鋪一層3/5穴孔容積的苔蘚、草炭土和蛭石的混合基質(zhì)，在藍(lán)莓扦插苗基部施加上備好的DSE真菌固體培養(yǎng)物2-10g，最后用苔蘚、草炭土和蛭石的混合基質(zhì)把扦插苗固定好即可；將穴盤放置在玻璃溫室中，環(huán)境溫度為18~25°C，光照強(qiáng)度為2000Lx，光照時(shí)間為16h，環(huán)境濕度為60%_80%。
[0032]( 3 )藍(lán)莓苗的收獲:
藍(lán)莓扦插苗在14天左右開(kāi)始生根，6個(gè)月后生長(zhǎng)為根系發(fā)達(dá)的藍(lán)莓幼苗，即可為市場(chǎng)提供大面積栽培的藍(lán)莓苗。
[0033]實(shí)施例5:
一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面`積栽培的方法，其特征在于其包括如下步驟: UDSE真菌的培養(yǎng):
將DSE真菌自低溫保藏的斜面試管菌種活化后，轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基的平皿中，于21°C恒溫培養(yǎng)19天，用Φ 5mm的打孔器分別在菌落邊緣打孔成菌餅，并接入DSE真菌固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。DSE真菌固體培養(yǎng)基由固體基本培養(yǎng)基與液體MEA組成，固體基本培養(yǎng)基的組成按重量計(jì)為:麥麩:麥殼:闊葉樹(shù)鋸末=1.5:2:2 ;液體MEA量為以上麥麩、麥殼、闊葉樹(shù)鋸末總重量的20%，培養(yǎng)基pH為5.0，采用玻璃罐頭瓶靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量30% ；DSE真菌固體培養(yǎng)基滅菌后接入DSE真菌，菌種接種量為培養(yǎng)容器裝量的10% ;固體培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:21°C培養(yǎng)30天；待菌絲長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)基質(zhì)時(shí)培養(yǎng)結(jié)束，可直接使用。
[0034]2、藍(lán)莓苗的培養(yǎng):
(1)藍(lán)莓芽分化:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加食用白砂糖20g、瓊脂5g、玉米素1.0mg,培養(yǎng)基pH5 ;用玻璃罐頭瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15°C，光照強(qiáng)度為30001x，光照時(shí)間6h/天，培養(yǎng)時(shí)間120天；
(2)藍(lán)莓叢芽增殖:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加食用白砂糖20g、瓊脂5g、玉米素0.5mg，培養(yǎng)基pH5 ;用玻璃罐頭瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15°C，光照強(qiáng)度為30001x，光照時(shí)間6h/天，培養(yǎng)時(shí)間120天；
(3))藍(lán)莓苗繼代培養(yǎng):按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加食用白砂糖20g、瓊脂5g、玉米素0.5mg,培養(yǎng)基pH5 ；用玻璃罐頭瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10%,光照培養(yǎng)的條件為溫度15°c,光照強(qiáng)度為30001x，光照時(shí)間6h/天，培養(yǎng)時(shí)間120天；
(4)藍(lán)莓壯苗生根:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以1/2WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升1/2WPM培養(yǎng)基中均添加食用白砂糖20g，用濾紙球或小棉花團(tuán)鋪滿所用的培養(yǎng)容器的底部，添加的植物激素為IBA (吲哚丁酸)0.5mg，培養(yǎng)基pH5 ;用玻璃罐頭瓶靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15°C，光照強(qiáng)度為30001x，光照時(shí)間8h/天，培養(yǎng)時(shí)間120天；
(5)藍(lán)莓幼苗培養(yǎng):
壯苗生根培養(yǎng)后的藍(lán)莓組培苗經(jīng)低溫馴化后移栽到以苔蘚和草炭土為栽培基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽里，生長(zhǎng)20-40天，即為藍(lán)莓幼苗；
3、DSE真菌與藍(lán)莓幼苗的共生栽培:
(1)栽培基質(zhì)為有機(jī)土和草炭土，這2種材料加入量之間的比例按重量計(jì)為:有機(jī)土:草炭土 =1-5:1-5 ；
(2)藍(lán)莓幼苗與DSE真菌按以下方法共生栽培:
在具有遮陽(yáng)網(wǎng)的露天大棚，或塑料薄膜溫室，或玻璃溫室中進(jìn)行育苗載培，栽培藍(lán)莓幼苗的株距為10-30cm，培養(yǎng)條件為25°C /18°C光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為1000_30001x，光照時(shí)間8-16h，環(huán)境濕度為60-80%;用IOcmX 20cm(底直徑X高)營(yíng)養(yǎng)缽，將營(yíng)養(yǎng)缽的底部放置3/5的有機(jī)土和草炭土混合基質(zhì)后，加入DSE真菌固體培養(yǎng)物20-60g。
[0035]( 3 )藍(lán)莓苗的收獲:
藍(lán)莓幼苗與DSE真菌共生60天后均形成菌根結(jié)構(gòu)，藍(lán)莓幼苗根系發(fā)達(dá)且生長(zhǎng)旺盛，植株上有分枝長(zhǎng)成，繼續(xù)生長(zhǎng)2個(gè)月后可轉(zhuǎn)移至大田進(jìn)行大面積栽培。
[0036]實(shí)施例6:
一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于其包括如下步驟: UDSE真菌的培養(yǎng):
將DSE真菌自低溫保藏的斜面試管菌種活化后，轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基的平皿中，于25°C恒溫培養(yǎng)11天，用Φ5_的打孔器分別在菌落邊緣打孔成菌餅，并接入DSE真菌固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。DSE真菌固體培養(yǎng)基由固體基本培養(yǎng)基與液體MEA組成，固體基本培養(yǎng)基的組成按重量計(jì)為:麥麩:麥殼:闊葉樹(shù)鋸末=2: 3: 3 ;液體MEA量為以上麥麩、麥殼、闊葉樹(shù)鋸末總重量的40%，培養(yǎng)基pH為6.0,采用塑料袋容器靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量70% ；DSE真菌固體培養(yǎng)基滅菌后接入DSE真菌，菌種接種量為培養(yǎng)容器裝量的120% ;固體培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:25°C培養(yǎng)26天；待菌絲長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)基質(zhì)時(shí)培養(yǎng)結(jié)束，用粉碎機(jī)粉碎后備用。
[0037]2、藍(lán)莓苗的培養(yǎng):
(1)藍(lán)莓芽分化:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖40g、瓊脂15g、玉米素3.0mg，培養(yǎng)基pH6 ;用塑料瓶器皿靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度25°C，光照強(qiáng)度為ΙΟΟΟΙχ，光照時(shí)間16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40天；
(2)藍(lán)莓叢芽增殖:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖40g、瓊脂15g、玉米素2.5mg，培養(yǎng)基pH6 ;用塑料瓶器皿靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度25°C，光照強(qiáng)度為ΙΟΟΟΙχ，光照時(shí)間16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40天；(3))藍(lán)莓苗繼代培養(yǎng):按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖40g、瓊脂15g、玉米素2.5mg，培養(yǎng)基pH6 ;用塑料瓶器皿靜置暗培養(yǎng),培養(yǎng)容器裝量30%,光照培養(yǎng)的條件為溫度25°C,光照強(qiáng)度為1000lx,光照時(shí)間16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40天；
(4)藍(lán)莓壯苗生根:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以1/2WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升1/2WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖40g，用濾紙球或小棉花團(tuán)鋪滿所用的培養(yǎng)容器的底部，添加的植物激素為IBA (吲哚丁酸)2.5mg，培養(yǎng)基pH6 ;用塑料瓶器皿靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度25°C，光照強(qiáng)度為ΙΟΟΟΙχ，光照時(shí)間16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40天；
(5)藍(lán)莓幼苗培養(yǎng):
壯苗生根培養(yǎng)后的藍(lán)莓組培苗經(jīng)低溫馴化后移栽到以苔蘚和草炭土為栽培基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽里，生長(zhǎng)20-40天，即為藍(lán)莓幼苗；
(6)一年生藍(lán)莓苗培養(yǎng):上述藍(lán)莓幼苗繼續(xù)生長(zhǎng)11-13月，即為一年生藍(lán)莓苗。
[0038]3、DSE真菌與一年生藍(lán)莓苗培養(yǎng)的共生栽培:
(1)栽培基質(zhì)為有機(jī)土；
(2)—年生藍(lán)莓苗與DSE真菌按以下方法共生栽培:在土壤有機(jī)質(zhì)含量豐富且土壤pH適宜的大田中進(jìn)行栽培，栽培時(shí)，先在大田中挖出定植穴，株距為20-60cm，再在定植穴內(nèi)鋪放栽培基質(zhì)并施加上述DSE真菌固體培養(yǎng)物20-60g，最后把上述一年生藍(lán)莓苗栽培于定植穴中。在藍(lán)莓生長(zhǎng)過(guò)程中每年可以補(bǔ)施DSE真菌固體培養(yǎng)物1-7次。
[0039](3)DSE真菌與一年生藍(lán)莓苗共生栽培的結(jié)果:DSE真菌與一年生藍(lán)莓苗共生60天后可明顯看到藍(lán)莓苗生長(zhǎng)旺盛且分枝增多，抗旱能力明顯增強(qiáng)，為藍(lán)莓的大面積栽培提供了保障。
[0040]比較例一:DSE真菌對(duì)藍(lán)莓扦插苗的育苗效應(yīng)
栽培時(shí)以添加已滅菌液體培養(yǎng)基的藍(lán)莓扦插苗的生長(zhǎng)情況作為對(duì)照。剪取的藍(lán)莓扦插苗用已滅菌液體培養(yǎng)基浸泡10-30min，再用苔蘚把藍(lán)莓扦插苗固定好。玻璃溫室的培養(yǎng)條件為18-25°C光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間16h/天，環(huán)境濕度為60%_80%。
[0041]藍(lán)莓扦插苗在溫室栽培I個(gè)月后收獲部分藍(lán)莓苗(包括對(duì)照和實(shí)施例1的藍(lán)莓苗)，連同栽培基質(zhì)一起帶回實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)分析地上部分的鮮重、苗高、根系總長(zhǎng)和根表面積，將收獲的藍(lán)莓苗于60°C烘箱烘干至恒重，測(cè)量重量。
[0042]統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，與未接種的對(duì)照藍(lán)莓扦插苗相比，與DSE真菌共生栽培的藍(lán)莓扦插苗的地上部分高度增加了 29%-43%，鮮重增加了 50%-80%，干重增加了 14%_221%。
[0043]比較例二:DSE真菌對(duì)藍(lán)莓幼苗的生長(zhǎng)效應(yīng)
栽培時(shí)以添加已滅菌液體培養(yǎng)基的藍(lán)莓幼苗的生長(zhǎng)情況作為對(duì)照。共生栽培基質(zhì)處理方法，先將苔蘚用蒸餾水浸泡7-10個(gè)小時(shí)，使其充分吸收水分，在浙干多余水分，和草炭土按1:1的比例混合。將營(yíng)養(yǎng)缽底部放置3/5的基質(zhì)，再在藍(lán)莓幼苗的根部放置制備好的已滅菌液體培養(yǎng)基3 0mL，使藍(lán)莓幼苗的根部與其充分接觸，最后用苔蘚和草炭土混合基質(zhì)把藍(lán)莓幼苗固定好。所有藍(lán)莓幼苗均在玻璃溫室中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為18-25°C光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間16h/天，環(huán)境濕度為60%-80%。
[0044]藍(lán)莓幼苗栽培2個(gè)月后收獲部分藍(lán)莓苗(包括對(duì)照和實(shí)施例2的藍(lán)莓苗)，連同基質(zhì)一起帶回實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)分析地上部分的鮮重、苗高、根系總長(zhǎng)和根表面積，將收獲的藍(lán)莓苗于60°C烘箱烘干至恒重并測(cè)量重量。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，與未接種的對(duì)照藍(lán)莓幼苗相比，與DSE真菌共生栽培的藍(lán)莓幼苗的地上部分高度增加了 40%-65%，鮮重增加了 60%-70%，干重增加了 50%-60%。
[0045]從上述比較例可以看出，DSE真菌顯著促進(jìn)藍(lán)莓扦插苗的生根和藍(lán)莓幼苗的生長(zhǎng)，接菌栽培的藍(lán)莓苗與對(duì)照藍(lán)莓苗相比，接菌的藍(lán)莓苗的生根率、鮮重和干重的含量較不接菌的均有很大提高。另一方面，本發(fā)明可顯著縮短藍(lán)莓的育苗周期，同時(shí)菌根化后的藍(lán)莓苗的各種抗性較對(duì)照藍(lán)莓苗有很大增強(qiáng)，尤其是抗旱能力，降低對(duì)栽培環(huán)境的要求，保證藍(lán)莓的綠色優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，該發(fā)明適用于藍(lán)莓從育苗到大田栽培的整個(gè)過(guò)程。
[0046]以上的實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入`本發(fā)明的權(quán)利要求書確定的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于其包括如下步驟: 1)、DSE真菌的培養(yǎng): 將DSE真菌自低溫保藏的斜面試管菌種活化后，轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基的平皿中，于21-25°C恒溫培養(yǎng)11-19天，分別在菌落邊緣打孔成菌餅，并接入液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)或接入固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)； 所述的DSE真菌液體培養(yǎng)基的組成按重量百分計(jì)為:葡萄糖1.5-4.5%，麥芽浸膏1.5-4.5%，大豆蛋白胨0.3-0.7%，余量水，培養(yǎng)基pH值為50-6.0 ;震蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10-40% ;液體培養(yǎng)基高壓滅菌后接入DSE真菌；種子菌種接種量為培養(yǎng)容器裝量的10-20% ；液體培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:搖床震蕩轉(zhuǎn)速為130-150r/min ;21_25°C培養(yǎng)26-30天；培養(yǎng)結(jié)束后可直接使用或用勻漿機(jī)打碎菌體后備用； 所述的DSE真菌固體培養(yǎng)基由固體基本培養(yǎng)基與液體MEA組成，固體基本培養(yǎng)基的組成按重量計(jì)為:麥麩:麥殼:闊葉樹(shù)鋸末=1-2:1-3:1-3 ;液體MEA量為以上麥麩、麥殼、闊葉樹(shù)鋸末總重量的20-40%，培養(yǎng)基pH為5.0-6.0，靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量30-70% ;固體培養(yǎng)基滅菌后接入DSE真菌，菌種接種量為培養(yǎng)容器裝量的10-20% ;固體培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:21-25°C培養(yǎng)26-30天；待菌絲長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)基質(zhì)時(shí)培養(yǎng)結(jié)束，可直接使用或用粉碎機(jī)粉碎后備用; 2)、藍(lán)莓苗的培養(yǎng): (1)藍(lán)莓芽分化:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g、瓊脂5-15g，添加的植物激素為玉米素1.0-3.0mg，培養(yǎng)基pH5.0-6.0 ;靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10_30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15-25°C，光照強(qiáng)度為1000-30001x，光照時(shí)間8_16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40-120天； (2)藍(lán)莓叢芽增殖:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g、瓊脂5-15g，添加的植物激素為玉米素0.5-2.5mg,培養(yǎng)基pH5.0-6.0 ;靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10_30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15-25°C，光照強(qiáng)度為1000-30001x，光照時(shí)間8_16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40-120天； (3))藍(lán)莓苗繼代培養(yǎng):按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g、瓊脂5-15g，添加的植物激素為玉米素0.5-2.5mg,培養(yǎng)基pH5.0-6.0 ;靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10_30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15_25°C，光照強(qiáng)度為1000-30001x，光照時(shí)間8_16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40-120天； (4)藍(lán)莓壯苗生根:按常規(guī)組培技術(shù)培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基是以1/2WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在每升1/2WPM培養(yǎng)基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g，用濾紙球或小棉花團(tuán)鋪滿所用的培養(yǎng)容器的底部，添加的植物激素為吲哚丁酸0.5-2.5mg，培養(yǎng)基pH5.0-6.0 ;靜置暗培養(yǎng)，培養(yǎng)容器裝量10-30%，光照培養(yǎng)的條件為溫度15-25°C，光照強(qiáng)度為1000-30001x，光照時(shí)間8-16h/天，培養(yǎng)時(shí)間40-120天； (5)藍(lán)莓扦插苗培養(yǎng)或藍(lán)莓幼苗培養(yǎng)或一年生藍(lán)莓苗培養(yǎng): 所述的藍(lán)莓扦插苗培養(yǎng):經(jīng)繼代培養(yǎng)的藍(lán)莓組培苗經(jīng)低溫馴化后，剪取生長(zhǎng)健壯5-6cm的莖段以苔蘚為栽培基質(zhì)扦插到營(yíng)養(yǎng)穴盤里，扦插后生長(zhǎng)30-50天，然后剪取5-6cm的生長(zhǎng)健壯、長(zhǎng)勢(shì)均一的營(yíng)養(yǎng)穴盤藍(lán)莓苗的無(wú)根莖段作為藍(lán)莓扦插苗；所述的藍(lán)莓幼苗培養(yǎng):壯苗生根培養(yǎng)后的藍(lán)莓組培苗經(jīng)低溫馴化后移栽到以苔蘚和草炭土為栽培基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽里，生長(zhǎng)20-40天，即為藍(lán)莓幼苗； 所述的一年生藍(lán)莓苗培養(yǎng):上述藍(lán)莓幼苗繼續(xù)生長(zhǎng)11-13月，即為一年生藍(lán)莓苗； 3)、DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培: 藍(lán)莓扦插苗或藍(lán)莓幼苗或一年生藍(lán)莓苗與DSE真菌按以下方法共生栽培: (1)藍(lán)莓扦插苗與DSE真菌的共生栽培:在具有遮陽(yáng)網(wǎng)的露天大棚，或塑料薄膜溫室，或玻璃溫室中進(jìn)行育苗載培，栽培藍(lán)莓扦插苗的株距為3-lOcm ;培養(yǎng)條件為18-25°C光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為20001x，光照時(shí)間16h/天，環(huán)境濕度為60%-80% ;在上述藍(lán)莓扦插苗的基部放置3/5穴孔容積的栽培基質(zhì)后，采用上述DSE真菌培養(yǎng)物與藍(lán)莓扦插苗共生栽培，最后用栽培基質(zhì)把扦插苗固定好，藍(lán)莓扦插苗在14天左右開(kāi)始生根，6個(gè)月后生長(zhǎng)為根系發(fā)達(dá)的藍(lán)莓幼苗； (2)藍(lán)莓幼苗與DSE真菌的共生栽培:在具有遮陽(yáng)網(wǎng)的露天大棚，或塑料薄膜溫室，或玻璃溫室中進(jìn)行育苗載培，栽培藍(lán)莓幼苗的株距為10-30cm，培養(yǎng)條件為間歇光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為1000-30001χ，光照時(shí)間8-16h，環(huán)境濕度為60-80% ;放置栽培基質(zhì)后，在上述藍(lán)莓幼苗根部施加備 好的DSE真菌液體或固體培養(yǎng)物，DSE真菌液體培養(yǎng)物的添加量為30-100mL，或DSE真菌固體培養(yǎng)物的添加量為20-60g ;藍(lán)莓幼苗與DSE真菌共生60天后均形成菌根結(jié)構(gòu)，繼續(xù)生長(zhǎng)2個(gè)月后可轉(zhuǎn)移至大田進(jìn)行大面積栽培； (3)一年生藍(lán)莓苗與DSE真菌藍(lán)莓的大田栽培:先在大田中挖出定植穴，株距為20-60cm,再在定植穴內(nèi)鋪放栽培基質(zhì)并施加的DSE真菌液體培養(yǎng)物30_100mL，或DSE真菌固體培養(yǎng)物20-60g，最后把上述一年生藍(lán)莓苗栽培于定植穴中； 在藍(lán)莓生長(zhǎng)過(guò)程中每年可以補(bǔ)施DSE真菌液體或固體培養(yǎng)物1-7次。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培中的栽培基質(zhì)為苔蘚。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培中的栽培基質(zhì)為苔蘚和草炭土，這2種材料加入量之間的比例按重量計(jì)為:苔蘚:草炭土 =1-5:1-5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培中的栽培基質(zhì)為苔蘚、草炭土和蛭石，這3種材料加入量之間的比例按重量計(jì)為:苔蘚:草炭土:蛭石=1-5:1-5:1-2。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培中的栽培基質(zhì)為有機(jī)土和草炭土，這2種材料加入量之間的比例按重量計(jì)為:有機(jī)土:草炭土 =1-5:1-5。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培中的栽培基質(zhì)為沙土和草炭土，這2種材料加入量之間的比例按重量計(jì)為:沙土:草炭土 =1-3:1-5。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培中的栽培基質(zhì)為有機(jī)土。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培步驟(1)藍(lán)莓扦插苗與DSE真菌的共生栽培中在藍(lán)莓扦插苗的基部放置3/5穴孔容積的栽培基質(zhì)后，在藍(lán)莓扦插苗基部施加上備好的DSE真菌液體培養(yǎng)物2-10mL或DSE真菌固體培養(yǎng)物2_10g，最后用栽培基質(zhì)把扦插苗固定好。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于所述的3)中DSE真菌與藍(lán)莓的共生栽培步驟(1)藍(lán)莓扦插苗與DSE真菌的共生栽培中在藍(lán)莓扦插苗的基部放置3/5穴孔容積的3/5栽培基質(zhì)后，先用DSE真菌液體培養(yǎng)物浸泡扦插苗，真菌液體培養(yǎng)物的添加標(biāo)準(zhǔn)為完全浸沒(méi)扦插苗，浸泡的時(shí)間為10-30min，再用栽培基質(zhì)把藍(lán)莓扦插苗固定好即可。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用DSE真菌進(jìn)行藍(lán)莓育苗及大面積栽培的方法，其特征在于所述的DSE真菌于2013年10月8日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏編號(hào)為:CGMCC N0.8260。
【文檔編號(hào)】A01G31/00GK103828722SQ201410110187
【公開(kāi)日】2014年6月4日 申請(qǐng)日期:2014年3月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月24日
【發(fā)明者】程顯好, 劉鳳紅, 劉靜, 李維煥, 趙建萍 申請(qǐng)人:魯東大學(xué)