一種北美楓香優(yōu)選單株葉片離體培養(yǎng)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種北美楓香優(yōu)選單株葉片為外植體的組織培養(yǎng)方法，同時還公開了相應的離體培養(yǎng)的培養(yǎng)基，有益之處在于：采用本發(fā)明的北美楓香優(yōu)選單株葉片的離體培養(yǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法，能夠減少外植體的使用量，同時進行愈傷組織分化方式培養(yǎng)，產(chǎn)生的不定芽更多，繁殖系數(shù)更高，在短期內(nèi)能夠生產(chǎn)出大量的優(yōu)質種苗，大大提高了離體培養(yǎng)的效率，而且12天即可生根成活，生根率達到92%以上，移栽成活率高。
【專利說明】一種北美楓香優(yōu)選單株葉片罔體培養(yǎng)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物培養(yǎng)組織進行快速繁殖的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法，具體涉及一種北美楓香優(yōu)選單株葉片離體培養(yǎng)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。
【背景技術】
[0002]北美楓香(Liquidambar styraciflua)為金縷梅科落葉喬木,原產(chǎn)北美,在美國東南部有大量分布.大型闊葉樹種，樹高可達30m，春夏葉色暗綠，秋季葉色變?yōu)辄S色、紫色或紅色；落葉晚，在部分地區(qū)葉片掛樹直至次年2月，因其生長迅速，花型獨特，秋葉色彩斑斕，是良好的園林綠化和庭園觀賞樹種。領域內(nèi)已經(jīng)開展了大量播種、扦插繁殖和幼嫩枝條的芽為外植體的組培快繁研究，在現(xiàn)有繁殖技術中，組織培養(yǎng)繁殖的方法也已有報道，但報道中研究采用當年生嫩枝的芽為外植體的進行組培繁殖，存在使用外植體多，移栽成活率低，繁殖效率不高等問題，這些問題都是迫切需要解決的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為解決現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種北美楓香優(yōu)選單株葉片為外植體的組織培養(yǎng)方法，同時提供了相應的離體培養(yǎng)基，能夠減少外植體的使用量，同時進行愈傷組織分化方式培養(yǎng)，產(chǎn)生的不定芽更多，繁殖系數(shù)更高，能夠大大提高離體培養(yǎng)的效率，移栽成活率高。
[0004]為了實現(xiàn)上 述目標，本發(fā)明采用如下的技術方案:
[0005]—種北美楓香優(yōu)選單株葉片離體培養(yǎng)的培養(yǎng)基，包括兩種基本培養(yǎng)基，(I)、誘導愈傷組織形成的第一類基本培養(yǎng)基，每升第一類基本培養(yǎng)基中含有:硝酸鉀1500-2000mg，硝酸銨1300-1700mg，磷酸二氫鉀130_180mg，硫酸鎂250_380mg，二水氯化鈣440mg，碘化鉀0.83mg,硼酸6.2mg,四水硫酸錳22.3mg,七水硫酸鋅8.6mg, 二水鑰酸鈉0.25mg,五水硫酸銅0.025mg,氯化鈷0.025mg,七水硫酸亞鐵27.8mg,乙二胺四乙酸鈉37.3mg,維生素 BI0.1mg,維生素 B60.5mg, VB50.5mg,甘氨酸 2.0mg,肌醇 IOOmg,鹿糖 30000mg,卡拉膠6500mg; (2)、用于分化增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的第二類基本培養(yǎng)基，每升第二類基本培養(yǎng)基中含有:四水硝酸鈣375-560mg，硝酸銨270_405mg，硫酸鉀610_920mg，七水硫酸鎂250-380mg，磷酸二氫鉀120_180mg，二水氯化鈣78_99mg，四水硫酸錳22.5mg,七水硫酸鋅8.6mg,硼酸6.2mg,五水硫酸銅0.25mg, 二水鑰酸鈉0.25mg,七水硫酸亞鐵34.1mg,乙二胺四乙酸鈉46.611^,維生素1311.0mg,維生素B60.5mg, VB50.5mg,甘氨酸2.0mg,肌醇IOOmg,鹿糖20000mg,卡拉膠6500mg。
[0006]本發(fā)明還公開了一種北美楓香優(yōu)選單株葉片的離體培養(yǎng)方法，包括如下步驟:
[0007]S1、按照權利要求1的組分和質量配制第一類基本培養(yǎng)基和第二類基本培養(yǎng)基；
[0008]S2、采用多年生一種北美楓香優(yōu)選單株的當年生嫩葉片為外植體，經(jīng)70%酒精消毒30-45秒，再用0.1%的升汞溶液滅菌6-8分鐘，用無菌水沖洗3-5次；
[0009]S3、在超凈的工作臺上，無菌條件下，將消毒過的外植體接種在經(jīng)消毒的含有誘導愈傷組織培養(yǎng)基的三角瓶中，先將三角瓶置于黑暗條件下15-20天后，再置于普通日光燈為光源、光照強度為20001x的環(huán)境中，每日光照15小時，溫度20-25°C、濕度為50%_60%，培養(yǎng)35天，長成愈傷組織；
[0010]所述的誘導愈傷組織培養(yǎng)基為:每升第一類基本培養(yǎng)基中還含有:玉米素0.1-0.5mg、6_ 芐基嘿呤 0.8-1.2mg、α -蔡乙酸 0.2-0.3mg、2, 4- 二氣苯氧乙酸 0.6-1.0mg ；
[0011]S4、將步驟S3培養(yǎng)得到的愈傷組織，剪切，轉接于經(jīng)消毒的含有分化增殖培養(yǎng)基的三角瓶中，進行增殖培養(yǎng)，分化長成試管芽苗，直至達到所需要的生產(chǎn)規(guī)模；
[0012]所述的分化增殖培養(yǎng)基為:每升第二類基本培養(yǎng)基中還含有:玉米素0.5-1.0mg,6-芐基嘌呤 1.2-1.5mg、α -萘乙酸 0.1-0.15mg ；
[0013]S5、將步驟S4培養(yǎng)得到的試管芽苗，剪切，接種于經(jīng)消毒的含有壯苗培養(yǎng)基的三角瓶中，進行壯苗培養(yǎng)30天，得到試管壯苗；
[0014]所述的壯苗培養(yǎng)基為:每升第二類基本培養(yǎng)基中還含有:玉米素0.3-0.8mg、6_芐基嘿呤 0.5-1.5mg、α -蔡乙酸 0.05-0.15mg ；
[0015]S6、將步驟S5培養(yǎng)得到的試管壯苗，去掉基部愈傷組織和部分葉片，留3片葉片，接種于經(jīng)消毒的含有生根培養(yǎng)培養(yǎng)基的三角瓶中，進行生根培養(yǎng)7-10天，得到生根小苗；
[0016]所述的生根培養(yǎng)基為:每升第二類基本培養(yǎng)基中還含有:α -萘乙酸0.2-0.5mg、吲哚乙酸0.5-0.7mg和檸檬酸50-100mg ；
[0017]S7、將步驟S6中生長的生根小苗，取出清洗，移栽到泥炭、黃心土、礱糠灰體積比為1:2:1的混合 基質中，澆透水，保持溫度28°C左右，相對濕度85%以上，前7天遮光70%，后逐漸見光，12天后生根成活，生根率達92%以上，30天左右，全光照。
[0018]為了提高培養(yǎng)效率和成活率，前述的所有培養(yǎng)基的pH值均調(diào)至5.6，這里所述的所有培養(yǎng)基包括第一類基本培養(yǎng)基、第二類基本培養(yǎng)基、誘導愈傷組織培養(yǎng)基、分化增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基。優(yōu)選地，采用氨水或者稀鹽酸對pH值進行調(diào)節(jié)，以減少對小苗培養(yǎng)的干擾和影響。
[0019]本發(fā)明的有益之處在于:采用本發(fā)明的北美楓香優(yōu)選單株葉片離體培養(yǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法，能夠減少外植體的使用量，同時進行愈傷組織分化方式培養(yǎng)，產(chǎn)生的不定芽更多，繁殖系數(shù)更高，在短期內(nèi)能夠生產(chǎn)出大量的優(yōu)質種苗，大大提高了離體培養(yǎng)的效率，而且12天即可生根成活，生根率達到92%以上，移栽成活率高。
【具體實施方式】
[0020]以下結合附表和具體實施例對本發(fā)明作具體的介紹。
[0021 ] 無特殊說明，本發(fā)明中所采用的原料均為市購。
[0022]實施例1
[0023]首先，按照表1和表2的物質種類和質量，配制第一類基本培養(yǎng)基和第二類基本培養(yǎng)基，配制過程中不斷攪拌確保各組分充分溶解。
[0024]
【權利要求】
1.一種北美楓香優(yōu)選單株葉片離體培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于，包括兩種基本培養(yǎng)基，(I)、誘導愈傷組織形成的第一類基本培養(yǎng)基，每升第一類基本培養(yǎng)基中含有:硝酸鉀1500-2000mg,硝酸銨 1300_1700mg，磷酸二氫鉀 130_180mg，硫酸鎂 250_380mg，二水氯化鈣440mg,碘化鉀0.83mg,硼酸6.2mg,四水硫酸猛22.3mg,七水硫酸鋅8.6mg, 二水鑰酸鈉0.25mg,五水硫酸銅0.025mg,氯化鈷0.025mg,七水硫酸亞鐵27.8 mg,乙二胺四乙酸鈉37.3 mg，維生素 BI 0.1 mg，維生素 B6 0.5 mg, VB5 0.5 mg，甘氨酸 2.0 mg，肌醇 100 mg,蔗糖30000 mg，卡拉膠6500 mg ; (2)、用于分化增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的第二類基本培養(yǎng)基，每升第二類基本培養(yǎng)基中含有:四水硝酸鈣375-560mg，硝酸銨270-405 mg，硫酸鉀610-920 mg，七水硫酸鎂250-380 mg，磷酸二氫鉀120_180mg，二水氯化鈣78-99 mg，四水硫酸錳22.5 mg，七水硫酸鋅8.6 mg，硼酸6.2 mg，五水硫酸銅0.25 mg，二水鑰酸鈉0.25mg,七水硫酸亞鐵34.1 mg,乙二胺四乙酸鈉46.6 mg,維生素B1 1.0 mg,維生素B6 0.5 mg,VB5 0.5 mg，甘氨酸 2.0 mg,肌醇 100 mg,鹿糖 20000 mg,卡拉膠 6500 mg。
2.一種北美楓香優(yōu)選單株葉片的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟: 51、按照權利要求1的組分和質量，配制第一類基本培養(yǎng)基和第二類基本培養(yǎng)基； 52、采用多年生一種北美楓香優(yōu)選單株的當年生嫩葉片為外植體，經(jīng)70%酒精消毒30-45秒，再用0.1%的升汞溶液滅菌6-8分鐘，用無菌水沖洗3-5次； 53、在超凈的工作臺上，無菌條件下，將消毒過的外植體接種在經(jīng)消毒的含有誘導愈傷組織培養(yǎng)基的三角瓶中，先將三角瓶置于黑暗條件下15-20天后，再置于普通日光燈為光源、光照強度為20001x的環(huán)境中，每日光照15小時，溫度20-25°C、濕度為50%_60%，培養(yǎng)35天，長成愈傷組織； 所述的誘導愈傷組織培養(yǎng) 基為:每升第一類基本培養(yǎng)基中還含有:玉米素0.1-0.5mg、6-芐基嘌呤 0.8-1.2 mg、α -萘乙酸 0.2-0.3 mg、2，4- 二氯苯氧乙酸 0.6-1.0 mg ； 54、將步驟S3培養(yǎng)得到的愈傷組織，剪切，轉接于經(jīng)消毒的含有分化增殖培養(yǎng)基的三角瓶中，進行增殖培養(yǎng)，分化長成試管芽苗，直至達到所需要的生產(chǎn)規(guī)模； 所述的分化增殖培養(yǎng)基為:每升第二類基本培養(yǎng)基中還含有:玉米素0.5-1.0mg、6-芐基嘿呤 1.2-1.5 mg、α -蔡乙酸 0.1-0.15 mg ； 55、將步驟S4培養(yǎng)得到的試管芽苗，剪切，接種于經(jīng)消毒的含有壯苗培養(yǎng)基的三角瓶中，進行壯苗培養(yǎng)30天，得到試管壯苗； 所述的壯苗培養(yǎng)基為:每升第二類基本培養(yǎng)基中還含有:玉米素0.3-0.8 mg、6-芐基嘿呤 0.5-1.5 mg、α -蔡乙酸 0.05-0.15 mg ； 56、將步驟S5培養(yǎng)得到的試管壯苗，去掉基部愈傷組織和部分葉片，留3片葉片，接種于經(jīng)消毒的含有生根培養(yǎng)培養(yǎng)基的三角瓶中，進行生根培養(yǎng)7-10天，得到生根小苗； 所述的生根培養(yǎng)基為:每升第二類基本培養(yǎng)基中還含有:α -萘乙酸0.2-0.5 mg、吲哚乙酸 0.5-0.7 mg 和朽1 樣酸 50-100 mg ； 57、將步驟S6中生長的生根小苗，取出清洗，移栽到泥炭、黃心土、礱糠灰體積比為1:2:1的混合基質中，澆透水，保持溫度28°C左右，相對濕度85%以上，前7天遮光70%，后逐漸見光，12天后生根成活，生根率達92%以上，30天左右，全光照。
3.根據(jù)權利要求2所述的一種北美楓香優(yōu)選單株葉片的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，所有培養(yǎng)基的PH值均調(diào)至5.6。
4.根據(jù)權利要求3所述 的一種北美楓香優(yōu)選單株葉片的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，采用氨水或稀鹽酸對培養(yǎng)基的PH值進行調(diào)節(jié)。
【文檔編號】A01H4/00GK103858766SQ201410117416
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年3月27日 優(yōu)先權日:2014年3月27日
【發(fā)明者】蔣澤平, 魏峰, 潘林, 胡玲, 董筱昀, 黃利斌, 施燕平, 卞亞文, 是豐, 袁丹, 姜維華, 蔣政陽, 陳小波, 胡萍, 張中偉 申請人:江蘇省林業(yè)科學研究院, 江蘇金鋒農(nóng)業(yè)科技有限公司, 常州市武進區(qū)林業(yè)工作站