一種蘋果綿蚜蠟腺孔觀察方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蘋果綿蚜蠟腺孔觀察方法，包括標本采集、蘋果綿蚜初處理、脫脂處理、玻片標本制作、標本觀察、數(shù)據(jù)分析等步驟；研究發(fā)現(xiàn)，蘋果綿蚜各蟲態(tài)體背均具有四列蠟腺孔，除中央兩列每節(jié)各有一個蠟腺孔，兩側列除頭部2、3節(jié)和腹部第8節(jié)無蠟腺孔外，其余每體節(jié)各有一個蠟腺孔，總計50個；每個蠟腺孔由若干蠟腺小孔呈梅花狀排列組成，1、4列小孔數(shù)顯著多于2、3列，腹部蠟腺孔小孔數(shù)目較其他部位蠟腺孔小孔數(shù)多，其中4-7節(jié)最多。本方法通過觀察研究蘋果綿蚜各蟲態(tài)體背蠟腺孔的形態(tài)和排列特征快速鑒定蘋果綿蚜，為蘋果綿蚜的關卡檢疫和防治提供實驗依據(jù)，該方法具有準確性高、操作性強的優(yōu)點，適用于關卡檢疫中的快速檢疫。
【專利說明】一種蘋果綿蚜蠟腺孔觀察方法【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種蘋果綿蚜形態(tài)學鑒定方法，具體涉及一種蘋果綿蚜蠟腺孔觀察方法，屬于植物保護領域。
【背景技術】
[0002]蘋果綿姆(iZrio5Y通alanigerum (Hausmann))隸屬于半翅目(Hemiptera)、綿姆科(Pemphigidae)、綿姆屬(Briosoma Leech),又名血色姆蟲、赤姆、綿姆,是國內外檢疫對象之一，也是蘋果屬的重要檢疫性害蟲。蘋果綿蚜的成蚜和若蚜形態(tài)相似，無翅孤雌蚜的成蚜近橢圓形，赤褐色，體側具有瘤狀突起物，著生短毛，身體被有白色蠟質綿絮物，有翅胎生雌蚜身體暗褐色，頭及胸部黑色，體表覆蓋白色綿絮物，比無翅胎生成蚜少。若蚜共4齡，身體略呈圓筒狀，體色赤褐，喙細長，向后延伸。觸角5節(jié)，身體被有白色綿絮物，有翅若蚜身體兩側有黑色翅芽。
[0003]蘋果綿蚜可周年在蘋果樹體地上、地下部寄生刺吸樹液，同時可以分泌唾液消化酶，刺激寄生組織增生形成腫瘤，影響蘋果樹的營養(yǎng)輸導。并且，蘋果綿蚜分泌白色蠟質綿絮物和排泄物蜜露，其中蜜露的主要成分為氨基酸和糖，是許多致病性及腐生性真菌(如煙霉菌(煤怠菌Gloeoaes Pomigena))的理想培養(yǎng)基,煙霉菌可造成樹體及葉片發(fā)黑,使葉片光合作用降低，并且使果實表面形成果銹、污斑，影響果實的美觀和味感，因此防治蘋果綿蚜成為影響蘋果種植業(yè)的關鍵因素。
[0004]蘋果綿蚜體背的白色蠟質綿絮物是由體內泌蠟腺分泌，通過體壁的蠟腺孔排泄到體外。蘋果綿蚜的背面有4條縱列的蠟腺孔，其有一定排列特征和分布規(guī)律，可以分泌白色蠟質綿絮物，對于蘋果綿蚜的生命活動具有重要的作用:綿絮物可以包裹粘稠的蜜露，使蜜露免受污染，同時避免蘋果綿蚜移動時受蜜露粘縛和覆蓋，保持正常生理活動；減少真菌的污染；綿絮物能夠保護蘋果綿蚜免受雨水沖刷和捕食者、寄生者的傷害；同時，綿絮物可反射紫外線和太陽輻射，減少其對蘋果綿蚜的傷害，并降低水分散失；此外，綿絮物包裹著蘋果綿蚜，易被人、動物、交通工具等攜帶傳播到非疫區(qū)，有利于擴散蔓延。
[0005]從1914年蘋果綿蚜傳入我國威海后，一個世紀以來，已傳入到我國的大部分蘋果產區(qū)，對蘋果的產量和品質影響嚴重。而關卡檢疫中對蘋果綿蚜的鑒別主要依據(jù)外部形態(tài)學方法，而僅僅依據(jù)外部形態(tài)學方法，往往錯檢或漏檢，造成蘋果綿蚜進一步擴大蔓延。

【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術問題是針對目前僅依靠外部形態(tài)特征鑒定蘋果綿蚜的不足，提供一種蘋果綿蚜蠟腺孔觀察方法，通過研究蘋果綿蚜蠟腺孔數(shù)目、排列特征和分布規(guī)律，了解蘋果綿蚜分泌綿絮的生理過程和功能，準確鑒定蘋果綿蚜、控制其傳播蔓延，為關卡檢疫中正確識別蘋果綿蚜以及防止擴散蔓延提供依據(jù)；該方法具有準確性高、操作性強的優(yōu)點，適用于關卡檢疫中的快速檢疫。
[0007]為了達到上述目的，本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的:一種蘋果綿蚜蠟腺孔觀察方法，包括以下步驟:
(1)樣本采集:5~6月份蘋果綿蚜危害期，選擇受藥劑影響小的蘋果樹，用剪刀剪下帶有蘋果綿蚜的枝條，輕拿輕放蘋果枝，防止蟲體從枝條上掉落；用剪刀將蘋果葉剪下，僅留有葉柄，防止蘋果枝蒸騰過大影響蘋果綿蚜生存；將處理好的蘋果枝插入裝有三分之二水的1000mL大燒杯中,用紗布把燒杯口封住,放于陰涼通風處備用；
(2)蘋果綿蚜初處理:選取一個蘋果綿蚜蟲落，用鑷子把覆蓋在蘋果綿蚜蟲落上的綿絮去掉，用毛筆輕輕把蟲落掃至培養(yǎng)皿中，于雙目實體解剖鏡下分齡期，在此過程中，要輕柔地掃落或挑取蘋果綿蚜，防止肢體損傷；將蘋果綿蚜掃落到培養(yǎng)皿中后，用體積濃度為70-90%酒精反復清洗蘋果綿蚜3次，使其身上的蠟質和綿絮同蚜體分離；最后將各齡期蘋果綿蚜分別放入指形管中，用體積濃度為70-80%酒精浸潰24小時以上待用；
(3)蘋果綿蚜脫脂處理:將步驟2中不同齡的蘋果綿蚜從指形管中取出，用昆蟲針在其腹部扎一小孔，然后放到盛有體積濃度為70-80%酒精的指形管中靜置浸泡24-48h ;然后將蘋果綿蚜從酒精溶液中取出，并用蒸餾水在培養(yǎng)皿中沖洗2-3次，不同齡期的蘋果綿蚜分別浸泡于質量濃度為8-15%的氫氧化鈉溶液中，并置于37°C的恒溫箱中放置36-48h，至蟲體發(fā)白透明后，從氫氧化鈉溶液中取出，用蒸餾水清洗3次，并再次用昆蟲針在其腹部扎另一小孔，然后將蘋果綿蚜按齡期轉移到裝有體積濃度為70-80%酒精溶液的指形管中，再次靜置至蟲體透明為止；
(4)蘋果綿蚜玻片標本的制作:從指形管中取出已脫脂較好即蟲體透明的蘋果綿蚜，放于凹玻片上，用蒸餾水沖洗3-5次將酒精溶液漂洗干凈；然后將其放到凹載玻片上，用吸水紙將水吸凈，染色劑染色5-15分鐘后，用蒸餾水將染色劑沖洗干凈；用吸管吸取一頭已染色的蘋果綿蚜，將其放置到載玻片上，并加一滴蒸餾水，然后將玻片放到雙目實體解剖鏡下，用昆蟲針對蟲體整姿；用吸水紙沿蟲體整姿方向將水吸干，再將蟲體靜置5min后用霍氏封固劑制作壓片，滴加霍氏封固劑和蓋玻片時要注意防止氣泡產生；將制好的玻片至于酒精燈外焰處，加熱30-50秒，烘干至霍氏封固劑凝固并將玻片中的氣泡趕走；將玻片平放于標本盒內，待封固劑完全干了之后再插入標本盒中；
(5)標本觀察及數(shù)據(jù)處理:挑選制作較好、蠟腺孔較清楚的1-4齡若蚜、成蚜玻片標本各5枚，于雙目實體顯微鏡下觀察其蠟腺孔和小孔的數(shù)目及其分布形態(tài)，記錄數(shù)據(jù)并分析；實驗數(shù)據(jù)用Excel進行處理，并利用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件的多重比較對各組實驗數(shù)據(jù)進行多重比較。
[0008]優(yōu)選的，步驟2中，所述的清洗蘋果綿蚜用的酒精濃度為75% ;所述的浸泡酒精的濃度為75%，浸泡時間為24-48h。
[0009]優(yōu)選的，步驟2中，所述的毛筆為小號、軟毛毛筆；步驟3中，所述的昆蟲針為零號昆蟲針。
[0010]優(yōu)選的，步驟3中，所述的酒精濃度為75%，所述的氫氧化鈉濃度為10%。
[0011]優(yōu)選的，步驟4中，所述的染色劑為亮綠，質量濃度為0.5%，染色時間為10分鐘。
[0012]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明提供了一種蘋果綿蚜蠟腺孔觀察方法，準確性高、操作性強、適用于關卡檢疫中的快速檢 疫，可以準確鑒定蘋果綿蚜，及時控制其傳播蔓延。
【專利附圖】

【附圖說明】[0013]圖1:蘋果綿蚜2齡若蚜體壁上四列蠟腺孔排列特征圖。
[0014]【具體實施方式】
下面結合實施例對本發(fā)明的蘋果綿蚜蠟腺孔觀察方法進一步詳細說明。
[0015]實施例1:
1、供試蟲源:
采自山東萊陽地區(qū)和城陽地區(qū)管理粗放的蘋果園內的蘋果綿蚜。
[0016]2、供試儀器與材料:
雙目實體顯微鏡、雙目實體解剖鏡、恒溫箱、標簽紙、鑷子、燒杯、量筒、玻璃棒、載玻片、凹玻片、蓋玻片、濾紙、吸水紙、霍氏封固劑、酒精溶液、亮綠染色劑、氫氧化鈉固體、蒸餾水
坐寸ο
[0017]3、試驗方法:
(O標本米集:
5~6月份蘋果綿蚜危害期，在蘋果園內選擇受藥劑影響小的果樹，用剪刀小心地把帶有蘋果綿蚜的枝條剪下，帶到室內，在此過程中，輕拿輕放采集的蘋果枝條，防止蟲體從枝條上掉落下來；用剪刀將蘋果葉剪下，僅留有葉柄，將處理好的蘋果枝插入裝有三分之二水的1000mL燒杯中,用紗布把燒杯口封住,放于陰涼通風處備用。
[0018](2)蘋果綿蚜初處理:
選取一個蘋果綿蚜蟲落，用鑷子把覆蓋在蘋果綿蚜蟲落上的綿絮去掉，用小號軟毛毛筆輕輕把蟲落掃至培養(yǎng)皿中，于雙目實體解剖鏡下分齡期，在此過程中，要輕柔地掃落或挑取蘋果綿蚜，防止其肢體損傷；將蘋果綿蚜掃落到培養(yǎng)皿中后，用75%酒精浸泡，并反復沖洗3次，使蘋果綿蚜上的蠟質和綿絮同蚜體分離；最后將各齡期蘋果綿蚜分別放入指形管中，用75%酒精浸潰48小時待用。
[0019](3)蘋果綿蚜脫脂處理:
(a)將已分好齡期的蘋果綿蚜從指形管中取出，用零號昆蟲針在其腹部扎一小孔，然后再放到盛有75%酒精溶液的指形管中靜置24h備用；
(b)浸泡結束后，將蘋果綿蚜從酒精溶液中取出，并用蒸餾水在培養(yǎng)皿中沖洗2-3次；
(c)將蘋果綿蚜分齡期浸泡于濃度為10%的氫氧化鈉溶液中，并置于37°C的恒溫箱中放置36h至蟲體發(fā)白透明；
Cd)將蘋果綿蚜從氫氧化鈉溶液中取出，用蒸餾水清洗3次，并再次用零號昆蟲針在其腹部扎另一小孔；然后將蘋果綿蚜按齡期轉移到裝有75%酒精溶液的指形管中，再次靜置至蟲體透明為止。
[0020] (4)玻片標本的制作:
(a)清洗:從指形管中取出已脫脂較好即蟲體透明的蘋果綿蚜，放于凹玻片上，用蒸餾水將酒精溶液漂洗干凈；
(b)染色:將蘋果綿蚜放到凹載玻片上，用吸水紙將水吸凈，使用0.5%亮綠染色劑進行染色，10分鐘后，用蒸餾水將染色劑沖洗干凈；若用水清洗后蟲體未染上顏色，可能是因蟲體未清洗干凈，將蘋果綿蚜重復(a)步驟后，再進行一次染色步驟；
(c)整姿:用吸管吸取一頭已染色的蘋果綿蚜，將其放置到載玻片上，并加一滴蒸餾水，然后將玻片放到雙目實體解剖鏡下，用零號昆蟲針對蟲體整姿，使其足肢不遮擋蚜蟲軀體，以免影響蠟腺孔的觀察；
Cd)干燥:用吸水紙沿蟲體整姿方向將水吸干，再將蟲體靜置5min ；
(e)壓片:用霍氏封固劑制作壓片；
(f)去泡透明:將制好的玻片放于酒精燈外焰處，加熱30秒，烘干至霍氏封固劑凝固并將玻片中的氣泡趕走；
(g)放置標本盒內保存待用:先將玻片標本平放，待封固劑完全干了之后再插入標本盒中。
[0021]4、玻片標本觀察和數(shù)據(jù)分析:
挑選制作較好、蠟腺孔較清楚的1-4齡若蚜、成蚜玻片標本各5枚，于雙目實體顯微鏡下觀察其蠟腺孔和小孔的數(shù)目及其分布規(guī)律，記錄數(shù)據(jù)并分析；對實驗數(shù)據(jù)用Excel進行處理，并利用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件的多重比較對各組實驗數(shù)據(jù)進行多重比較。
[0022]實施例2:
不同齡期蘋果綿蚜形態(tài)學鑒定特征如表1所示:
表1蘋果綿蚜若蚜形態(tài)特征鑒別
【權利要求】
1.一種蘋果綿蚜蠟腺孔觀察方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)樣本采集:于5~6月份蘋果綿蚜危害期，選剪帶有蘋果綿蚜的枝條，剪下蘋果葉僅留有葉柄，將處理好的蘋果枝插入裝有三分之二水的1000mL燒杯中，用紗布把燒杯口封住，放于陰涼通風處備用； (2)蘋果綿蚜初處理:選取一個蘋果綿蚜蟲落，將覆蓋在蟲落上的綿絮去掉，用毛筆將蟲落掃至培養(yǎng)皿中于解剖鏡下分辯齡期，用體積濃度為70-90%酒精反復沖洗蘋果綿蚜3次，然后將各齡期蘋果綿蚜分別放入指形管中，用體積濃度為70-80%酒精浸潰24小時以上待用； (3)蘋果綿蚜脫脂處理:將步驟2中不同齡期的蘋果綿蚜從指形管中取出，用昆蟲針在其腹部扎一小孔后于體積濃度為70-80%酒精中浸泡24-48h后沖洗干凈，再于質量濃度為8-15%的氫氧化鈉溶液中恒溫靜置至蟲體發(fā)白透明，蒸餾水清洗后再次在腹部扎另一小孔，于體積濃度為70-80%酒精溶液中再次靜置至蟲體透明； (4)蘋果綿蚜玻片標本的制作:取步驟3中透明的蟲體放于凹玻片上，用蒸餾水沖洗3-5次，吸水紙將水吸凈后用染色劑染色5-15分鐘，再用蒸餾水將染色劑沖洗干凈；蟲體經整姿、干燥靜置、壓片、去泡透明后放于標本盒中待用； (5)玻片標本觀察及數(shù)據(jù)處理:挑選1-4齡若蚜、成蚜玻片標本各5枚，于雙目實體顯微鏡下觀察其蠟腺孔和小孔的數(shù)目及其分布規(guī)律，記錄數(shù)據(jù)，實驗數(shù)據(jù)用Excel進行處理并利用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行多重比較。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2中，所述的清洗蘋果綿蚜用的酒精濃度為75% ;所述的浸泡酒精的濃度為75%，浸泡時間為24-48h。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2中，所述的毛筆為小號、軟毛毛筆；步驟3中，所述的昆蟲針為零號昆蟲針。
4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3所述的脫脂處理過程包括以下步驟: (a)將已分好齡期的蘋果綿蚜從指形管中取出，用零號昆蟲針在其腹部扎一小孔，然后再放到盛有75%酒精溶液的指形管中靜置24-48h備用； (b)浸泡結束后，將蘋果綿蚜從酒精溶液中取出，并用蒸餾水在培養(yǎng)皿中沖洗2-3次； (c)將蘋果綿蚜分齡期浸泡于濃度為10%的氫氧化鈉溶液中，并置于37°C的恒溫箱中放置36-48h至蟲體發(fā)白透明； Cd)將蘋果綿蚜從氫氧化鈉溶液中取出，用蒸餾水清洗3次，并再次用零號昆蟲針在其腹部扎另一小孔；然后將蘋果綿蚜按齡期轉移到裝有75%酒精溶液的指形管中，再次靜置至透明為止。
5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4中所述的標本制作過程包括以下步驟: (a)清洗:從指形管中取出已脫脂較好即蟲體透明的蘋果綿蚜，放于凹玻片上，用蒸餾水沖洗3-5次將酒精溶液漂洗干凈； (b)染色:將蘋果綿姆放到凹載玻片上,用吸水紙將水吸凈,使用染色劑染色5-15分鐘后，用蒸餾水將染色劑沖洗干凈； (c)整姿:用吸管吸取一頭已染色的蘋果綿蚜，將其放置到載玻片上，并加一滴蒸餾水，然后將玻片放到雙目實體解剖鏡下，用零號昆蟲針對蟲體整姿； Cd)干燥:用吸水紙沿蟲體整姿方向將水吸干，再將蟲體靜置5min ； (e)壓片:用霍氏封固劑制作壓片； (f)去泡透明:將制好的玻片放于酒精燈外焰處，加熱約30-50秒，烘干至霍氏封固劑凝固并將玻片中的氣泡趕走； (g)放置標本盒內保存待用:先將玻片平放，待封固劑完全干了之后再插入標本盒中。
6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特 征在于，步驟b中，所述的染色劑為亮綠，質量濃度為0.5%，染色時間為10分鐘。
【文檔編號】A01K67/033GK103947609SQ201410156956
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年4月18日 優(yōu)先權日:2014年4月18日
【發(fā)明者】周洪旭, 譚秀梅, 孫立寧, 趙川德 申請人:青島農業(yè)大學