一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種固態(tài)白酒酒糟三階段固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法。第一階段發(fā)酵，采用丟糟為底物，A組芽孢桿菌組合種子液進(jìn)行60℃高溫發(fā)酵，成酒糟醅料。經(jīng)過第一階段發(fā)酵的酒糟醅料加入槐樹葉粉、楊樹葉粉、麩皮等輔料，接入白地霉、酵母、木霉的種子液調(diào)配成發(fā)酵醅料，進(jìn)行第二階段發(fā)酵，第二階段發(fā)酵的終產(chǎn)物，接入B組芽孢桿菌組合種子液進(jìn)行第三階段發(fā)酵，發(fā)酵終產(chǎn)物為新鮮酒糟蛋白飼料或進(jìn)行烘干粉碎、造粒、包裝成顆粒酒糟蛋白飼料。采用本發(fā)明所述的方法制備的酒糟蛋白飼料，粗蛋白含量平均值為29～32%，與干酒糟粗蛋白對比，本發(fā)明制備的酒糟蛋白飼料的粗蛋白含量提高了58～74%。
【專利說明】一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】。具體涉及一種固態(tài)白酒酒糟三階段固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]固態(tài)白酒糟是固態(tài)白酒釀造行業(yè)的副產(chǎn)品，據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國每年產(chǎn)白酒酒糟達(dá)到2100萬噸，數(shù)量大而且集中。若未及時加以處理，酒糟容易腐敗變質(zhì)，這不僅造成資源大量浪費(fèi)，還會嚴(yán)重污染周圍環(huán)境。因此，酒糟的綜合利用對我國的資源開發(fā)和環(huán)境保護(hù)都具有非常重要的意義。
[0003]目前我國在酒糟綜合利用方面研究已經(jīng)取得了一定的成績，主要開發(fā)成飼料和農(nóng)月巴。在酒糟飼料加工方面，國內(nèi)多數(shù)企業(yè)采用直接利用固態(tài)白酒酒糟作畜禽飼料或酒糟烘干制成顆粒狀飼料出售，但由于酒糟中粗蛋白含量、消化能、代謝能均較低，造成這種飼料附加值不高，且其中的高纖維素含量直接影響禽畜對營養(yǎng)成分的有效利用，所以尋求更加有效的途徑開發(fā)酒糟資源生產(chǎn)飼料十分必要。研究表明，利用現(xiàn)代微生物發(fā)酵技術(shù)將多菌種組合接入酒糟中進(jìn)行混菌固態(tài)發(fā)酵，有益微生物群在適宜條件下能夠大量繁殖，分泌多種酶從而將纖維素等大分子營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行部分降解、轉(zhuǎn)化，并積累大量營養(yǎng)豐富的微生物菌體和有益代謝產(chǎn)物。采用現(xiàn)代生物技術(shù)的方法將酒糟轉(zhuǎn)化為蛋白飼料，是酒糟飼料加工的發(fā)展趨勢，它能實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)效益、社會效益、環(huán)保效益三者的同步增長，帶動釀酒業(yè)、飼料業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)進(jìn)入良性循環(huán)健康發(fā)展。
[0004]本專利技術(shù)采用三階段混菌固態(tài)發(fā)酵新工藝。利用醬香型固態(tài)白酒的丟糟分別采用多菌種組合接入酒糟中，進(jìn)行三階段混菌固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酒糟蛋白飼料。固態(tài)白酒酒糟通過多菌種組合微生物發(fā)酵及其所產(chǎn)酶類來消除飼料原料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，積累大量營養(yǎng)豐富的微生物菌體和有益代謝產(chǎn)物，提高酒糟蛋白質(zhì)的含量、降低纖維素含量和改善飼料適口性，提高營養(yǎng)物質(zhì)利用率和營養(yǎng)價值。三階段混菌固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酒糟蛋白飼料不僅含有營養(yǎng)物質(zhì)，而且還含有其他微生物代謝的產(chǎn)物如多種酶類和未知生長因子等，對動物促進(jìn)生長和提高飼料消化率，改善畜產(chǎn)品品質(zhì)等方面均是有益的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明利用醬香型固態(tài)白酒的丟糟固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料，是采用三階段混菌固態(tài)發(fā)酵新工藝。第一階段發(fā)酵(初發(fā)酵)，采用丟糟為底物，A組芽孢桿菌組合種子液進(jìn)行60°C高溫發(fā)酵，成酒糟醅料。經(jīng)過第一階段發(fā)酵的酒糟醅料加入槐樹葉粉、楊樹葉粉、麩皮等輔料，接入白地霉、酵母、木霉的種子液調(diào)配成發(fā)酵醅料，進(jìn)行第二階段發(fā)酵(中間發(fā)酵)，第二階段發(fā)酵的終產(chǎn)物，接入B組芽孢桿菌組合種子液進(jìn)行第三階段發(fā)酵(終發(fā)酵)，發(fā)酵終產(chǎn)物為新鮮酒糟蛋白飼料或進(jìn)行烘干粉碎、造粒、包裝成顆粒酒糟蛋白飼料。
[0006](一)種子菌液、種子培養(yǎng)基、酒糟降解液、輔料的制備:
1、A組芽孢桿菌組合種子菌液: 地衣芽孢桿菌20166 二級種子菌液制備
(I)從斜面試管中挑出地衣芽孢桿菌20166，接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min，培養(yǎng)時間36h，得到地衣芽孢桿菌20166 —級種子菌液。
[0007](2)將地衣芽孢桿菌20166 —級種子菌液接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，接種量為芽孢桿菌種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0,培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05?0.1m3/(m3.min)，培養(yǎng)時間96h，得到地衣芽孢桿菌20166 二級種子菌液。
[0008]短小芽孢桿菌10440 二級種子菌液制備
(O從斜面試管中挑出短小芽孢桿菌10440，接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min，培養(yǎng)時間36h，得到短小芽孢桿菌10440 —級種子菌液。
[0009](2)將短小芽孢桿菌10440 —級種子菌液接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，接種量為芽孢桿菌種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0,培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05?0.1m3/(m3.min)，培養(yǎng)時間96h，得到短小芽孢桿菌10440 二級種子菌液。
[0010]將地衣芽孢桿菌20166 二級種子菌液與短小芽孢桿菌10440 二級種子菌液按照重量份3:1的比例配成A組芽孢桿菌組合種子菌液備用。
[0011]2、B組芽孢桿菌組合種子菌液:
枯草芽孢桿菌枯草亞種20872 —級種子菌液的制備
(I)斜面試管中挑出枯草芽孢桿菌枯草亞種20872，接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min,培養(yǎng)時間36h，得到枯草芽孢桿菌枯草亞種20872 —級種子菌液。
[0012](2)將枯草芽孢桿菌枯草亞種20872 —級種子菌液接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，接種量為芽孢桿菌種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0，培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05?
0.1m3/ (m3.min)，培養(yǎng)時間96h，得到枯草芽孢桿菌枯草亞種20872 二級種子菌液。
[0013]枯草芽孢桿菌22974 —級種子菌液的制備
(1)斜面試管中挑出枯草芽孢桿菌22974，接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min，培養(yǎng)時間36h，得到枯草芽孢桿菌22974 —級種子菌液。
[0014]枯草芽孢桿菌22974 二級種子菌液的制備
(2)將枯枯草芽孢桿菌22974—級種子菌液接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，接種量為芽孢桿菌種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0,培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05?0.1m3/(m3.min)，培養(yǎng)時間96h，得到枯草芽孢桿菌22974 二級種子菌液。
[0015]將枯草芽孢桿菌枯草亞種20872 二級種子菌液與枯草芽孢桿菌22974 二級種子菌液按照重量份1:4的比例配成B組芽孢桿菌組合種子菌液備用。
[0016]3、熱帶假絲酵母二級種子菌液:
(I)斜面試管中挑出熱帶假絲酵母1254，接入熱帶假絲酵母種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為
6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min,培養(yǎng)時間36h，得到熱帶假絲酵母1254 —級種子菌液。
[0017](2)將熱帶假絲酵母1254 —級種子菌液接入熱帶假絲酵母種子培養(yǎng)基，接種量為熱帶假絲酵母種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0,培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05?
0.1m3/ (m3.min),培養(yǎng)時間96h,得到熱帶假絲酵母1254 二級種子菌液。
[0018]4、白地霉二級種子菌液:
(1)斜面試管中挑出白地霉1315，接入白地霉種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min，培養(yǎng)時間36h，得到白地霉1315 —級種子菌液。
[0019](2)將白地霉1315 —級種子菌液接入白地霉種子培養(yǎng)基，接種量為白地霉種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0,培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05?0.1m3/ (m3 *min),培養(yǎng)時間96h，得到白地霉1315 二級種子菌液。
[0020]5、康寧木霉13037種子囷液:
(O從茄子瓶中刮下康寧木霉13037孢子粉，接入康寧木霉種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為
6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min，培養(yǎng)時間36h，得到康寧木霉13037 —級種子菌液。
[0021](2)將康寧木霉13037 —級種子菌液接入康寧木霉種子培養(yǎng)基，接種量為康寧木霉種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0，培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05?0.1m3/(m3.min)，培養(yǎng)時間96h，得到康寧木霉13037 二級種子菌液。
[0022]本發(fā)明所述的芽孢桿菌種子培養(yǎng)基:以酒糟降解液100重量份為基礎(chǔ)，添加葡萄糖1.21%，蛋白胨2.67%和酵母浸粉1.55% ;調(diào)節(jié)初始pH值為7.0。
[0023]本發(fā)明所述的熱帶假絲酵母種子培養(yǎng)基:以酒糟降解液100重量份為基礎(chǔ)，添加葡萄糖1.56%，蛋白胨1.88%和酵母浸粉0.77% ;調(diào)節(jié)初始pH值為6.0。
[0024]本發(fā)明所述的白地霉種子培養(yǎng)基:以酒糟降解液100重量份為基礎(chǔ)，添加葡萄糖
1.33%，蛋白胨2.50%和酵母浸粉0.71% ;調(diào)節(jié)初始pH值為4.5。
[0025]本發(fā)明所述的康寧木霉種子培養(yǎng)基:以酒糟降解液100重量份為基礎(chǔ)，添加葡萄糖1.56%，蛋白胨1.88%和酵母浸粉0.77% ;調(diào)節(jié)初始pH值為6.0。
[0026]本發(fā)明所述的酒糟降解液:取100重量份剛出窖的丟糟裝入攪拌罐，加丟糟50%的重量份的50°C熱水，加入由20%淀粉酶、20%糖化酶、40%蛋白酶、20%纖維素酶組分混合而成的復(fù)合酶，攪拌混合，酶解最適條件為:復(fù)合酶用量0.60 g / IOOg丟糟，溫度50°C，PH6.0。維持品溫經(jīng)過4小時降解，沉淀4?6小時，取上清液待用成酒糟降解液。40%蛋白酶由由枯草桿菌制備得到。
[0027]6、輔料:
Cl)槐樹葉粉:取曬干的槐樹葉，經(jīng)過飼料粉碎機(jī)粉碎過篩40目成槐樹葉粉；
(2)楊樹葉粉:取曬干的楊樹葉，經(jīng)過飼料粉碎機(jī)粉碎過篩40目成楊樹葉粉；
(3)麩皮:市售。
[0028](二)三階段混菌固態(tài)發(fā)酵酒糟生產(chǎn)蛋白飼料
(I)第一階段混菌固態(tài)發(fā)酵:以100重量份新鮮丟糟為底物，石灰調(diào)節(jié)pH值6.5，接入10% A組芽孢桿菌組合種子菌液，混勻裝入麻袋，堆積發(fā)酵自然升溫到60?65°C后，倒出麻袋平攤生產(chǎn)場地降溫到45°C，再堆積發(fā)酵升溫到60°C，采用翻堆、堆積、平攤方式維持發(fā)酵溫度在55?60°C之間，經(jīng)2?3d發(fā)酵后，得到酒糟醅料。
[0029](2)第二階段混菌固態(tài)發(fā)酵:在第一階段發(fā)酵結(jié)束的100重量份酒糟醅料中分別加入15?18%重量份槐樹葉粉、10?12%重量份楊樹葉粉、10?12%重量份麩皮、0.15%重量份磷酸氫二鉀，0.1%重量份硫酸鎂,2%重量份硫酸銨，同時在接入6%重量份白地霉二級種子菌液、6%重量份熱帶假絲酵母二級種子菌液、6%重量份康寧木霉的二級種子菌液，加水調(diào)節(jié)為含水量60~65%，混勻、揚(yáng)散后制成發(fā)酵醅料。將發(fā)酵醅料直接在生產(chǎn)場地堆積發(fā)酵，發(fā)酵溫度控制在32°C~34°C之間，堆積發(fā)酵時間6d，發(fā)酵過程采用翻堆、堆積、平攤方式維持發(fā)酵溫度32°C~34°C之間。
[0030](3)第三階段混菌固態(tài)發(fā)酵:在第二階段混菌固態(tài)發(fā)酵得到的100重量份發(fā)酵醅料中，分別接入12~18%B組芽孢桿菌組合種子菌液，在生產(chǎn)場地堆積發(fā)酵自然升溫到60°C后，平攤降溫至45~50°C，再堆積發(fā)酵，采用翻堆、堆積、平攤方式維持發(fā)酵溫度50~60°C之間。堆積發(fā)酵時間2d，得到新鮮酒糟蛋白飼料。該新鮮酒糟蛋白飼料具有特有酒香及酵母香味。
[0031]繼續(xù)將新鮮酒糟蛋白飼料以55~65°C通風(fēng)烘干、粉碎后，輸送到造粒機(jī)制備成顆粒酒糟蛋白飼料。
[0032]采用本發(fā)明所述的方法制備的酒糟固態(tài)發(fā)酵制備的酒糟蛋白飼料，粗蛋白含量平均值為29~32%，與干 酒糟粗蛋白含量18.35%對比，本發(fā)明制備的酒糟蛋白飼料的粗蛋白含量提高了 58~74%。
[0033]本發(fā)明制備過程使用的菌種，均購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(ChinaCenter of Industrial Culture Collection, CICC),具體為:
1、短小芽抱桿菌10440；
2、地衣芽抱桿菌{Bacilluslicheniformis') 20166 ；
3、枯草芽抱桿菌枯草亞種{Bacillussubtil is subsp.subtil is、20872 ；
4、枯草芽抱桿菌{Bacillussubtil is、22974 ；
5、熱帶假絲酵母tropicalis)1254 ；
6、白地霉(Geotrichum candidum ) 1315 ；
7 > tJ2(Trichoderma koningii ) 13037。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0034]圖1是本發(fā)明所述的的酒糟三階段固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酒糟蛋白飼料制備過程流程圖?！揪唧w實(shí)施方式】
[0035]實(shí)施例中涉及的A組芽孢桿菌組合種子菌液、B組芽孢桿菌組合種子菌液、枯草芽孢桿菌22974 二級種子菌液、熱帶假絲酵母二級種子菌液、白地霉二級種子菌液、康寧木霉13037種子菌液以及輔料，均采用
【發(fā)明內(nèi)容】
技術(shù)方案所描述的方法制備。
[0036]實(shí)施例中涉及的芽孢桿菌種子培養(yǎng)基、熱帶假絲酵母種子培養(yǎng)基、白地霉種子培養(yǎng)基、康寧木霉種子培養(yǎng)基、酒糟降解液均采用
【發(fā)明內(nèi)容】
技術(shù)方案所描述的方法制備。
[0037]實(shí)施例中涉及的菌種，均購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心。
[0038]實(shí)施例1
(I)第一階段混菌固態(tài)發(fā)酵:以IOOkg新鮮丟糟為底物，石灰調(diào)節(jié)PH值6.5，接入IOkgA組芽孢桿菌組合種子菌液，混勻裝入麻袋，堆積發(fā)酵自然升溫到63°C后，倒出麻袋平攤生產(chǎn)場地降溫到45°C，再堆積發(fā)酵升溫到60°C，采用翻堆、堆積、平攤方式維持發(fā)酵溫度55~60°C之間，發(fā)酵時間2d，產(chǎn)物為酒糟醅料。
[0039](2)第二階段混菌固態(tài)發(fā)酵:在第一階段發(fā)酵結(jié)束后得到的IlOkg酒糟醅料中分別加入16kg槐樹葉粉、11.1kg重量份楊樹葉粉、Ilkg麩皮、0.16kg磷酸氫二鉀，0.1lkg硫酸鎂,2.2kg硫酸銨，同時在接入6.6kg白地霉二級種子菌液、6.6kg熱帶假絲酵母二級種子菌液、6.6kg康寧木霉的二級種子菌液，加水調(diào)節(jié)為含水量60-65%，混勻、揚(yáng)散后為發(fā)酵醅料。發(fā)酵醅料的在生產(chǎn)場地堆積發(fā)酵，發(fā)酵溫度控制在32°C?34°C之間，堆積發(fā)酵時間6d，發(fā)酵過程采用翻堆、堆積、平攤方式維持發(fā)酵溫度32°C?34°C之間。
[0040](3)第三階段混菌固態(tài)發(fā)酵:在第二階段混菌固態(tài)發(fā)酵結(jié)束后得到的含水量60-65%的發(fā)酵醅料約為180kg，以此為基數(shù)，分別接入22kgB組芽孢桿菌組合種子菌液，在生產(chǎn)場地堆積發(fā)酵自然升溫到60°C后，平攤降溫至47°C，再堆積發(fā)酵，采用翻堆、堆積、平攤方式維持發(fā)酵溫度50?60°C之間。堆積發(fā)酵時間2d，得到200kg新鮮酒糟蛋白飼料。該新鮮酒糟蛋白飼料具有特有酒香及酵母香味。
[0041](4)烘干、粉碎、造粒:將第三階段混菌固態(tài)發(fā)酵得到的新鮮酒糟蛋白飼料或以55?65°C通風(fēng)烘干、粉碎后，輸送到造粒機(jī)制備成顆粒酒糟蛋白飼料。
[0042]采用本發(fā)明所述的方法制備的酒糟固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酒糟蛋白飼料，粗蛋白含量平均值為 29.64%ο
[0043]實(shí)施例2
(I)第一階段混菌固態(tài)發(fā)酵:以IOOkg新鮮丟糟為底物，石灰調(diào)節(jié)PH值6.5，接入IOkgA組芽孢桿菌組合種子菌液，混勻裝入麻袋，堆積發(fā)酵自然升溫到65°C后，倒出麻袋平攤生產(chǎn)場地降溫45°C，再堆積發(fā)酵升溫60°C，采用翻堆、堆積、平攤方式維持發(fā)酵溫度55?60°C之間，發(fā)酵時間3d，產(chǎn)物為酒糟醅料。
[0044](2)第二階段混菌固態(tài)發(fā)酵:稱取第一階段發(fā)酵結(jié)束的IOOkg酒糟醅料中分別加入18kg槐樹葉粉、IOkg楊樹葉粉、12kg麩皮、0.15kg磷酸氫二鉀，0.1kg硫酸鎂，2kg硫酸銨，同時在接入6kg白地霉二級種子菌液、6kg熱帶假絲酵母二級種子菌液、6kg康寧木霉的二級種子菌液，加水調(diào)節(jié)為含水量60-65%，混勻、揚(yáng)散后為發(fā)酵醅料。發(fā)酵醅料的在生產(chǎn)場地堆積發(fā)酵，發(fā)酵溫度控制在32°C?34°C之間，堆積發(fā)酵時間6d，發(fā)酵過程采用翻堆、堆積、平攤方式維持發(fā)酵溫度32°C?34°C之間。
[0045](3)第三階段混菌固態(tài)發(fā)酵:稱取第二階段混菌固態(tài)發(fā)酵發(fā)酵結(jié)束的IOOkg酒糟醅料中，分別接入ISkgB組芽孢桿菌組合種子菌液，在生產(chǎn)場地堆積發(fā)酵自然升溫到60°C后，平攤降溫至45?50°C，再堆積發(fā)酵，采用翻堆、堆積、平攤方式維持發(fā)酵溫度50?60°C之間。堆積發(fā)酵時間2d，得到新鮮酒糟蛋白飼料。該新鮮酒糟蛋白飼料具有特有酒香及酵母香味為酒糟蛋白飼料。
[0046](4)烘干、粉碎、造粒:經(jīng)第三階段混菌固態(tài)發(fā)酵得到的新鮮酒糟蛋白飼料或新鮮酒糟蛋白飼料以55?65°C通風(fēng)烘干、粉碎后，輸送到造粒機(jī)制備成顆粒酒糟蛋白飼料。
[0047]采用本發(fā)明所述的方法制備的酒糟固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料，粗蛋白含量平均值為31.27%。
【權(quán)利要求】
1.一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法，其特征是: (1)第一階段混菌固態(tài)發(fā)酵 以100重量份新鮮丟糟為底物，石灰調(diào)節(jié)pH值6.5，接入10% A組芽孢桿菌組合種子菌液，混勻裝入麻袋，堆積發(fā)酵自然升溫到60~65°C后，倒出麻袋平攤生產(chǎn)場地降溫到45°C，再堆積發(fā)酵升溫到60°C，采用翻堆、堆積、平攤方式維持發(fā)酵溫度在55~60°C之間，經(jīng)2~.3d發(fā)酵后，得到酒糟醅料； (2)第二階段混菌固態(tài)發(fā)酵 在第一階段發(fā)酵結(jié)束的100重量份酒糟醅料中分別加入15~18%重量份槐樹葉粉、10~12%重量份楊樹葉粉、10~12%重量份麩皮、0.15%重量份磷酸氫二鉀、0.1%重量份硫酸鎂和2%重量份硫酸銨，同時在接入6%重量份白地霉二級種子菌液、6%重量份熱帶假絲酵母二級種子菌液、6%重量份康寧木霉的二級種子菌液，加水調(diào)節(jié)為含水量60~65%，混勻、揚(yáng)散后制成發(fā)酵醅料； 將發(fā)酵醅料直接在生產(chǎn)場地堆積發(fā)酵，發(fā)酵溫度控制在32°C~34°C之間，堆積發(fā)酵時間6d，發(fā)酵過程采用翻堆、堆積、平攤方式維持發(fā)酵溫度32°C~34°C之間； (3)第三階段混菌固態(tài)發(fā)酵 在第二階段混菌固態(tài)發(fā)酵得到的100重量份發(fā)酵醅料中，分別接入12~18%B組芽孢桿菌組合種子菌液，在生產(chǎn)場地堆積發(fā)酵自然升溫到60°C后，平攤降溫至45~50°C，再堆積發(fā)酵，采用翻堆、堆積、平攤方式維持發(fā)酵溫度50~60°C之間，堆積發(fā)酵時間2d，得到新鮮酒糟蛋白飼料； 經(jīng)第三階段混菌固態(tài)發(fā)酵得到新鮮酒糟蛋白飼料，以55~65°C通風(fēng)烘干、粉碎后，輸送到造粒機(jī)制備成顆粒酒糟蛋白飼料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法，其特征是所述的A組芽孢桿菌組合種子菌液，其制備過程如下: (1)從斜面試管中挑出地衣芽孢桿菌20166，接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為.6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min，培養(yǎng)時間36h，得到地衣芽孢桿菌20166 —級種子菌液； (2)將地衣芽孢桿菌20166—級種子菌液接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，接種量為芽孢桿菌種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0，培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05~0.1m3/(m3.min)，培養(yǎng)時間96h，得到地衣芽孢桿菌20166 二級種子菌液； (3)從斜面試管中挑出短小芽孢桿菌10440，接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為.6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min，培養(yǎng)時間36h，得到短小芽孢桿菌10440 —級種子菌液； (4)將短小芽孢桿菌10440—級種子菌液接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，接種量為芽孢桿菌種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0,培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05~0.1m3/(m3.min)，培養(yǎng)時間96h，得到短小芽孢桿菌10440 二級種子菌液； 將地衣芽孢桿菌20166 二級種子菌液與短小芽孢桿菌10440 二級種子菌液按照重量份.3:1的比例配成A組芽孢桿菌組合種子菌液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法，其特征是所述的B組芽孢桿菌組合種子菌液，其制備過程如下:(1)斜面試管中挑出枯草芽孢桿菌枯草亞種20872，接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min,培養(yǎng)時間36h，得到枯草芽孢桿菌枯草亞種20872 —級種子菌液； (2)將枯草芽孢桿菌枯草亞種20872—級種子菌液接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，接種量為芽孢桿菌種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0，培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05~0.1m3/(m3.min)，培養(yǎng)時間96h，得到枯草芽孢桿菌枯草亞種20872 二級種子菌液； (3)斜面試管中挑出枯草芽孢桿菌22974，接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min，培養(yǎng)時間36h，得到枯草芽孢桿菌22974 —級種子菌液； (4)將枯枯草芽孢桿菌22974—級種子菌液接入芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，接種量為芽孢桿菌種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0,培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05~0.1m3/(m3.min)，培養(yǎng)時間96h，得到枯草芽孢桿菌22974 二級種子菌液； 將枯草芽孢桿菌枯草亞種20872 二級種子菌液與枯草芽孢桿菌22974 二級種子菌液按照重量份1:4的比例配成B組芽孢桿菌組合種子菌液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法，其特征是所述的熱帶假絲酵母二級種子菌液，其制備過程如下: (1)斜面試管中挑出熱帶假絲酵母1254，接入熱帶假絲酵母種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min,培養(yǎng)時間36h，得到熱帶假絲酵母1254 —級種子菌液； (2)將熱帶假絲酵母1254—級種子菌液接入熱帶假絲酵母種子培養(yǎng)基，接種量為熱帶假絲酵母種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0,培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05~0.1m3/(m3.min),培養(yǎng)時間96h,得到熱帶假絲酵母1254 二級種子菌液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法，其特征是所述的白地霉二級種子菌液，其制備過程如下: (1)斜面試管中挑出白地霉1315，接入白地霉種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min，培養(yǎng)時間36h，得到白地霉1315 —級種子菌液； (2)將白地霉1315—級種子菌液接入白地霉種子培養(yǎng)基，接種量為白地霉種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0,培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05~0.1m3/ (m3 *min),培養(yǎng)時間96h，得到白地霉1315 二級種子菌液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法，其特征是所述的康寧木霉13037種子菌液，其制備過程如下: (O從茄子瓶中刮下康寧木霉13037孢子粉，接入康寧木霉種子培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為6.8，培養(yǎng)溫度34°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r / min，培養(yǎng)時間36h，得到康寧木霉13037 —級種子菌液； (2)將康寧木霉13037 —級種子菌液接入康寧木霉種子培養(yǎng)基，接種量為康寧木霉種子培養(yǎng)基重量的10%，調(diào)節(jié)pH值為6.0,培養(yǎng)溫度34°C，通氣量0.05~0.1m3/ (m3 *min),培養(yǎng)時間96h，得到康寧木霉13037 二級種子菌液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法，其特征是所述的芽孢桿菌種子培養(yǎng)基，其制備過程如下:以酒糟降解液100重量份為基礎(chǔ)，添加葡萄糖1.21%，蛋白胨2.67%和酵母浸粉1.55% ;調(diào)節(jié)初始pH值為7.0。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法，其特征是所述的熱帶假絲酵母種子培養(yǎng)基，其制備過程如下:以酒糟降解液100重量份為基礎(chǔ)，添加葡萄糖1.56%，蛋白胨1.88%和酵母浸粉0.77% ;調(diào)節(jié)初始pH值為6.0。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法，其特征是所述的白地霉種子培養(yǎng)基:以酒糟降解液100重量份為基礎(chǔ)，添加葡萄糖1.33%，蛋白胨2.50%和酵母浸粉0.71% ;調(diào)節(jié)初始pH值為4.5。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法，其特征是所述的康寧木霉種子培養(yǎng)基:以酒糟降解液100重量份為基礎(chǔ)，添加葡萄糖1.56%，蛋白胨1.88%和酵母浸粉0.77% ;調(diào)節(jié)初始pH值為6.0。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法，其特征是所述的酒糟降解液:取100重量份剛出窖的丟糟裝入攪拌罐，加丟糟50%的重量份的50°C熱水，加入 由20 %淀粉酶、20%糖化酶、40 %蛋白酶、20 %纖維素酶組分混合而成的復(fù)合酶，攪拌混合，酶解最適條件為:復(fù)合酶用量0.60 g / 100g丟糟，溫度50°C，pH6.0。維持品溫經(jīng)過4小時降解，沉淀4~6小時，取上清液待用成酒糟降解液。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法，其特征是所述的槐樹葉粉，其制備過程如下:取曬干的槐樹葉，經(jīng)過飼料粉碎機(jī)粉碎過篩40目成槐樹葉粉。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三階段混菌固態(tài)發(fā)酵制備酒糟蛋白飼料的方法，其特征是所述的楊樹葉粉，其制備過程如下:取曬干的楊樹葉，經(jīng)過飼料粉碎機(jī)粉碎過篩40目成楊樹葉粉。
【文檔編號】A23K1/06GK104000006SQ201410174205
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年4月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月28日
【發(fā)明者】黃祖新, 黃鎮(zhèn), 賴玉城, 楊玉強(qiáng) 申請人:福建師范大學(xué)