云紋石斑雌魚與七帶石斑雄魚雜交育種方法
【專利摘要】一種云紋石斑雌魚與七帶石斑雄魚雜交育種方法，屬于海水魚類育種【技術(shù)領(lǐng)域】，所述的方法包括親本選擇、親本培育、人工授精和孵化；所述的親本選擇：選擇4～5齡健康成熟云紋石斑雌魚作為雌性親本；選擇5～6齡健康成熟七帶石斑雄魚作為雄性親本；所述的親本培育：雌雄親本分別培育云紋石斑魚親本培育水溫為12～26℃，七帶石斑魚親本培育水溫為8～26℃，鹽度28～32‰，pH7.8～8.2，溶解氧≥5mg/L；本發(fā)明雜交培育方法通過溫度調(diào)控、營養(yǎng)調(diào)控等技術(shù)手段，使兩個品種的雌雄親本性腺同步發(fā)育成熟，采用人工授精手段獲得雜交后代，該雜交后代具有生長速度快、耐低溫的優(yōu)良特性。
【專利說明】云紋石斑雌魚與七帶石斑雄魚雜交育種方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于海水魚類育種【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地涉及一種云紋石斑雌魚與七帶石斑雄魚雜交育種技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002]云紋石斑魚(Epinephelus moara)和七帶石斑魚(E.septemfasciatus)同屬于魚盧形目(Perciformes)、鰭科(Serranidae)、石斑魚亞科(Epinephelinae)、石斑魚屬。云紋石斑魚為暖溫性中下層魚類，主要分布于東海和南海，在石斑魚類中屬于生長速度較快的大型魚種；七帶石斑魚為冷溫性礁棲魚類，主要分布在黃海和東海沿岸，是北方唯一一種冷溫性名貴魚類，具有個體大、耐低溫、營養(yǎng)價值高等特點(diǎn)，是海水養(yǎng)殖的優(yōu)良品種之一。將云紋石斑魚雌性親本與七帶石斑魚雄性親本進(jìn)行雜交，以期得到生長速度快、耐低溫、抗逆性強(qiáng)的具有雜種優(yōu)勢的優(yōu)良后代，為石斑魚類遺傳育種、品種選育提供基礎(chǔ)。
[0003]目前國內(nèi)外還沒有云紋石斑魚(早)與七帶石斑魚(? )雜交育種的報道，其他石斑魚類中的遠(yuǎn)緣雜交，雖有成功案例，但都屬于熱帶或亞熱帶品種，如棕點(diǎn)石斑魚與鞍帶石斑魚的雜交(萊州明波水產(chǎn)有限公司2013年公開專利《棕點(diǎn)石斑魚與鞍帶石斑魚的一種工廠化雜交育種方法》，可借鑒之處不多。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種云紋石斑雌魚與七帶石斑雄魚雜交育種方法，解決南、北方兩個不同品種間的地理隔離和生殖隔離問題，獲得一種生長速度快于親本、耐低溫的優(yōu)良雜交后代。
[0005]本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
[0006]一種云紋石斑雌魚與七帶石斑雄魚雜交育種方法，包括親本選擇、親本培育、人工授精和孵化；
[0007]所述的親本選擇:選擇4~5齡健康成熟的云紋石斑雌魚作為雌性親本；選擇5~6齡健康成熟的七帶石斑雄魚作為雄性親本；
[0008]所述的親本培育:雌雄親本分開培育，云紋石斑魚親本培育水溫為12~26°C，七帶石斑魚親本培育水溫為8~26°C，鹽度28~32%。，pH7.8~8.2，溶解氧≥5mg/L ；
[0009](1)親本溫度調(diào)控:
[0010]a.從12月份開始，云紋石斑雌魚親本養(yǎng)殖水溫從19°C逐漸降溫至12°C再逐漸升溫至16°C進(jìn)行培育，培育至云紋石斑雌魚性腺成熟；七帶石斑雄魚親本從水溫19°C逐漸降溫至8°C再逐漸升溫至16°C培育，培育至七帶石斑雄魚性腺成熟，升溫和降溫頻率均每5天升高或降低rc ；
[0011]b.至親本選擇后的次年4月份準(zhǔn)備繁殖，云紋石斑魚親魚從16°C升溫至22°C進(jìn)行培育，維持此溫度不變；七帶石斑魚從16°C升溫至19°C進(jìn)行培育，保持此溫度不變，升溫頻率每5天升高1°C ；[0012](2)親本營養(yǎng)強(qiáng)化:
[0013]于親本選擇后的次年I月份開始進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化，將強(qiáng)化劑黏附在配合飼料中，增加投餌量至魚體質(zhì)量的2~3% ;
[0014]所述的人工授精:
[0015]輕壓催產(chǎn)后的云紋石斑魚雌魚腹部，將擠出的成熟卵子放入塑料容器中，再輕壓七帶石斑雄魚腹部，將擠出的成熟精液擠入盛有云紋石斑魚卵子的容器中，精卵數(shù)量比按照5~IOml:1000g比例,攪拌均勻后迅速加入過濾海水,靜置15min后加入新鮮海水沖洗受精卵2~3次，靜置分離20min后，取上浮受精卵放入孵化池中孵化；[0016]所述的孵化:受精卵孵化條件為水溫21~22.5°C，鹽度28~30，pH8~8.1，孵化密度為2萬粒受精卵/m3，微充氣，流水孵化30小時，仔魚孵化即將出膜，此時收集上浮卵移至仔稚幼魚的培育池中培育。
[0017]進(jìn)一步，在人工授精之前為了獲得較多的精子和卵子，對云紋石斑魚雌魚和七帶石斑雄魚進(jìn)行催產(chǎn)，具體方法為:
[0018]a.于親本選擇后的次年5月份開始挑選腹部明顯膨脹的云紋石斑魚雌魚親本進(jìn)行催熟、催產(chǎn)，水溫維持在22°C，所用催產(chǎn)激素劑量為:500IU/kg魚體質(zhì)量的HCG+20ug/kg魚體質(zhì)量的LRH-A3，用0.9%的生理鹽水溶解，一次性進(jìn)行催產(chǎn)，催產(chǎn)部位為背部肌肉，效應(yīng)時間約為48小時左右；
[0019]b.挑選擠壓腹部后可排出成熟精液的七帶石斑魚雄魚親本進(jìn)行催產(chǎn)，水溫維持19 °C ;所用催產(chǎn)激素劑量為:200~300IU/kg魚體質(zhì)量的HCG+3~5ug/kg魚體質(zhì)量的LRH-A3，其余操作方法與步驟a相同。
[0020]本發(fā)明與其他海水魚類育種方法的不同之處和有益效果如下:
[0021]1、云紋石斑魚為南方暖溫性中下層魚類，個體大、生長速度快，七帶石斑魚為北方冷溫性礁棲魚類，耐低溫、營養(yǎng)價值高，兩個品種存在著地理隔離和生殖隔離，本發(fā)明雜交培育方法通過溫度調(diào)控、營養(yǎng)調(diào)控等技術(shù)手段，使兩個品種的雌雄親本性腺同步發(fā)育成熟，采用人工授精手段獲得雜交后代，該雜交后代該雜交后代具有生長速度快、耐低溫的優(yōu)良特性。
[0022]2、對親本培育的水溫進(jìn)行調(diào)控，溫度先降低后升高，親魚冬季經(jīng)歷低溫期，可提高卵子和精子質(zhì)量，提聞受:精率，并將未本繁殖時間控制在每年5~6月間。
[0023]3、進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化時，將強(qiáng)化劑黏附在配合飼料或添加在其他餌料中，可保證強(qiáng)化劑隨餌料被親魚吞食，并且增加投喂魷魚、蝦、海水螺旋藻、維生素C和維生素E，加大投餌量至魚體質(zhì)量的3%。
【具體實(shí)施方式】
[0024]本發(fā)明的原理是:將具備不同生物學(xué)特性、生活在不同海域的石斑魚魚種親本，進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交，染色體核型同為2n = 48t，具備了雜交的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。云紋石斑魚(早)與七帶石斑魚(? )雜交后可正常受精，且仔、稚、幼魚能夠正常生長，說明云紋石斑魚(早)與七帶石斑魚(? )兩親本相容性較好，從而獲得具有優(yōu)良特性和性狀的組合，采用親魚培育的溫度調(diào)控，并對親魚進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化，是保證其雙親和產(chǎn)生的后代(受精卵、仔稚幼魚)具備健康體質(zhì)、正確表達(dá)其優(yōu)良特性，甚至出現(xiàn)超親代優(yōu)良性狀的雜交后代。[0025]下面通過實(shí)施例詳述本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受實(shí)施例任何形式上的限制。
[0026]一種云紋石斑雌魚與七帶石斑雄魚雜交育種方法，包括親本選擇、親本培育、人工授精和孵化；
[0027]I)親本選擇:本實(shí)驗(yàn)于2010年12月進(jìn)行，選擇4~5齡體型正常、無病害、活力強(qiáng)的健康成熟云紋石斑雌魚作為雌性親本，平均體長46cm，平均體重4.1kg ;選擇5~6齡體型正常、無病害、活力強(qiáng)的健康成熟七帶石斑魚作為雄性親本，平均體長48cm，平均體重
4.2kg ；
[0028]2)親本培育:
[0029]a.雌雄親本分別置于不同親魚培育池內(nèi)培育，培育池為面積35m2的長方形水泥池，魚池四角取圓，池底池壁光滑，池深1.5m，水深1.1~1.2m，每池放養(yǎng)50~100尾；
[0030]b.云紋石斑雌魚親本培育水溫為12~26°C，七帶石斑雄魚親本培育水溫為8~26。。，鹽度 28 ~32%。，ρΗ7.8 ~8.2，溶解氧≥ 5mg/L ；
[0031]c.以新鮮或冰凍始魚、鲅魚及小雜魚為館料,每周投喂3次,每次投館量為魚體質(zhì)量的1% ;
[0032](I)親本溫度調(diào)控:
[0033]a.對親本培育的水溫進(jìn)行調(diào)控，將親本繁殖時間控制在次年5~6月間。方法為:從2010年12月份開始，云紋石斑雌魚親本養(yǎng)殖水溫從19°C逐漸降溫至12°C再逐漸升溫至16°C進(jìn)行培育，培育至云紋石斑雌魚性腺成熟；七帶石斑雄魚親本養(yǎng)殖水溫從19°C逐漸降溫至8°C再逐漸升溫至16°C培育，培育至七帶石斑雄魚性腺成熟，時長100天。升溫和降溫頻率每5天升高或降低1°C ；
[0034]b.至2011年4月份準(zhǔn)備繁殖，云紋石斑魚親魚從16°C升溫至22°C進(jìn)行培育，維持此溫度不變；七帶石斑魚從16°C升溫至19°C進(jìn)行培育，保持此溫度不變，升溫頻率每5天升高 I。。；
[0035](2)親本營養(yǎng)強(qiáng)化:
[0036]于2011年I月份開始進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化，將強(qiáng)化劑黏附在配合飼料中，增加投喂魷魚、蝦、海水螺旋藻、維生素C和維生素E，投餌量從魚體質(zhì)量的I %逐漸增至2~3% ;
[0037](3)親本催產(chǎn):
[0038]a.于2011年5~6月份開始挑選腹部明顯膨脹的云紋石斑魚雌魚親本進(jìn)行催熟、催產(chǎn)，水溫維持在22 °C，所用催產(chǎn)激素劑量為:500IU/kg魚體質(zhì)量的HCG+20ug/kg魚體質(zhì)量的LRH-A3，用0.9%的生理鹽水溶解，一次性進(jìn)行催產(chǎn)，催產(chǎn)部位為背部肌肉，效應(yīng)時間約為48小時左右；
[0039]b.挑選擠壓腹部后可排出成熟精液的七帶石斑魚雄魚親本進(jìn)行催產(chǎn)，水溫維持19 °C ;所用催產(chǎn)激素劑量為:200~300IU/kg魚體質(zhì)量的HCG+3~5ug/kg魚體質(zhì)量的LRH-A3，用0.9%的生理鹽水溶解，一次性進(jìn)行催產(chǎn)，催產(chǎn)部位為背部肌肉，效應(yīng)時間約為48小時左右；
[0040]3)人工授精:
[0041]輕壓催產(chǎn)后的云紋石斑魚雌魚腹部，將擠出的成熟卵子放入塑料容器中，再輕壓七帶石斑雄魚腹部，將擠出的成熟精液擠入盛有云紋石斑魚卵子的容器中，精卵數(shù)量比按照(5~10)ml:1000g比例,攪拌均勻后迅速加入過濾海水,靜置15min后加入新鮮海水沖洗受精卵2~3次，靜置分離20min后，取上浮受精卵放入孵化池中孵化；
[0042]4)孵化:
[0043]受精卵孵化條 件為水溫21~22.5°C，鹽度28~30，pH8~8.1，孵化密度為2萬粒受精卵/m3，微充氣，流水孵化30小時，仔魚孵化即將出膜，此時收集上浮卵移至仔稚幼魚的培育池中培育。本實(shí)施例中2對親本共獲得受精卵500g，孵化率為78%。
【權(quán)利要求】
1.一種云紋石斑雌魚與七帶石斑雄魚雜交育種方法，其特征在于所述的方法包括親本選擇、親本培育、人工授精和孵化； 所述的親本選擇:選擇4~5齡健康成熟的云紋石斑雌魚作為雌性親本；選擇5~6齡健康成熟的七帶石斑雄魚作為雄性親本； 所述的親本培育:雌雄親本分開培育，云紋石斑魚親本培育水溫為12~26°C，七帶石斑魚親本培育水溫為8~26°C，鹽度28~32%。，pH7.8~8.2，溶解氧≥5mg/L ； (1)親本溫度調(diào)控: a.從12月份開始，云紋石斑雌魚親本養(yǎng)殖水溫從19°C逐漸降溫至12°C再逐漸升溫至16°C進(jìn)行培育，培育至云紋石斑雌魚性腺成熟；七帶石斑雄魚親本從水溫19°C逐漸降溫至8°C再逐漸升溫至16°C培育，培育至七帶石斑雄魚性腺成熟，升溫和降溫頻率均每5天升高或降低rc ； b.至親本選擇后的次年4月份準(zhǔn)備繁殖，云紋石斑魚親魚從16°C升溫至22°C進(jìn)行培育，維持此溫度不變；七帶石斑魚從16°C升溫至19°C進(jìn)行培育，保持此溫度不變，升溫頻率每5天升高1°C ； (2)親本營養(yǎng)強(qiáng)化: 于親本選擇后的次年1月份開始進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化，將強(qiáng)化劑黏附在配合飼料中，增加投館量至魚體質(zhì)量的2~3% ; 所述的人工授精: 輕壓催產(chǎn)后的云紋石斑魚雌魚腹部，將擠出的成熟卵子放入塑料容器中，再輕壓七帶石斑雄魚腹部，將擠出的成熟精液擠入盛有云紋石斑魚卵子的容器中，精卵數(shù)量比按照5~1Oml =1000g比例，攪拌均勻后迅速加入過濾海水，靜置15min后加入新鮮海水沖洗受精卵2~3次，靜置分離20min后，取上浮受精卵放入孵化池中孵化； 所述的孵化:受精卵孵化條件為水溫21~22.5°C，鹽度28~30，pH8~8.1，孵化密度為2萬粒受精卵/m3，微充氣，流水孵化30小時，仔魚孵化即將出膜，此時收集上浮卵移至仔稚幼魚的培育池中培育。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種云紋石斑雌魚與七帶石斑雄魚雜交育種方法，其特征在于在所述人工授精之前，對云紋石斑魚雌魚和七帶石斑雄魚進(jìn)行催產(chǎn)，具體方法為: a.于親本選擇后的次年5月份開始挑選腹部明顯膨脹的云紋石斑魚雌魚親本進(jìn)行催熟、催產(chǎn)，水溫維持在22°C，所用催產(chǎn)激素劑量為:500IU/kg魚體質(zhì)量的HCG+20ug/kg魚體質(zhì)量的LRH-A3，用0.9%的 生理鹽水溶解，一次性進(jìn)行催產(chǎn)，催產(chǎn)部位為背部肌肉，效應(yīng)時間約為48小時左右； b.挑選擠壓腹部后可排出成 熟精液的七帶石斑魚雄魚親本進(jìn)行催產(chǎn)，水溫維持19°C；所用催產(chǎn)激素劑量為:200~300IU/kg魚體質(zhì)量的HCG+3~5ug/kg魚體質(zhì)量的LRH-A3，其余操作方法與步驟a相同。
【文檔編號】A01K61/00GK103891662SQ201410175266
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年4月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月28日
【發(fā)明者】陳超, 李炎璐, 翟介明, 李波 申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所