一種細胞保存液的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種細胞保存液，它由氯化鈉、乙二胺四乙酸二鈉、PEG10000、Proclin300、甲醇、醋酸-醋酸鈉緩沖液組成，本發(fā)明降低了使用成本，真正有效的保護了細胞的完整性和固定性，避免細胞溶解和膨脹，易推廣，兼容性強，節(jié)省了制備樣品的時間。
【專利說明】一種細胞保存液

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物制劑【技術領域】；具體涉及一種細胞保存液。

【背景技術】
[0002] 目前，正常人體活細胞在脫落前是具有生理學功能、生物學活性及完整的細胞形 態(tài)，在生物學研究和醫(yī)學檢驗中具有重要的價值。若是離開人體，脫落的細胞其生理學功 能、生物學活性及細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)也將發(fā)生改變。因此，如何有效保存脫落細胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)是 細胞學檢測中需要考慮的問題。主要從傳統(tǒng)和常規(guī)上有以下幾種檢查方法：
[0003] 在傳統(tǒng)的細胞學檢查方法巴氏涂片法（即宮頸刮片）制成的涂片，存在大量細胞 重疊現(xiàn)象，并且存在一些無檢驗價值的雜細胞，這給病理結(jié)果帶來了一定的誤差。
[0004] 而在常規(guī)的宮頸癌篩查中，有液基薄層細胞學、PCR、bDNA等技術方法。液基薄層 細胞學檢查（英文簡稱TCT)是常用的技術手段之一，目前在歐美和我國的大中城市，越來 越廣泛的應用于宮頸細胞學篩查中。TCT是一種現(xiàn)代化的宮頸細胞學涂片技術，通過采集人 體宮頸表面的脫落細胞，經(jīng)染色后用顯微鏡觀察這些細胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，并做出診斷。PCR 和bDNA技術是采用宮頸上皮細胞分別進行DNA和RNA的檢測。但是從上述幾種方法中可以 看出都是采用宮頸脫落細胞樣品進行檢測，因而細胞保存液是檢測前細胞保存的關鍵。目 前，美國新柏氏（Thinprep cytologic test)細胞保存液是與其儀器（Thinpreper-2000)配 套使用的專用試劑，但是價格昂貴，加重患者的治療成本。
[0005] 因此，本發(fā)明是在主要解決目前現(xiàn)有技術存在以上不足的基礎上研發(fā)出來的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 發(fā)明的目的是解決以上技術問題，特別提出一種降低成本、兼容性強、有效的對脫 落細胞樣品進行固定保存的細胞保存液。
[0007] 基于上述目的，本發(fā)明所解決的技術問題采用以下技術方案來實現(xiàn)：
[0008] 一種細胞保存液，它由氯化鈉、乙二胺四乙酸二鈉、PEG10000、Proclin300、甲醇、 醋酸-醋酸鈉緩沖液組成，按重量百分比計，其中 氯化鈉：0· 12-0. 14%乙二胺四乙酸二鈉：0· 05-0. 42% PEG10000 ：0. 15-0. 20% Proclin300 ：0. 01-0. 20% 甲醇：10. 0-45. 0% 醋酸-醋酸鈉緩沖液：64. 0-88. 0%。
[0009] 進一步，所述重量比為： 氯化鈉：0. 12g 乙二胺四乙酸二鈉：0. 42g PEG10000 ：0.15ml Proclin300 ：0.01ml 甲醇：10. Og 醋酸-醋酸鈉緩沖液：88. 0ml。
[0010] 本發(fā)明組分的技術原理： 氯化鈉：是一種滲透壓維持劑。 乙二胺四乙酸二鈉：是一種抗聚集試劑，能避免細胞堆積。 PEG10000 :是一種非滲透性大分子物質(zhì)，能保護細胞骨架的完整性，防止細胞水腫。 Proclin300 :是一種防腐劑，能有效地殺滅樣品中的細菌、真菌、酵母菌等病原體，延長 保存液的保存時間，同時能保護工作環(huán)境及工作人員健康。 甲醇：固定劑，能快速對樣品中的白細胞、上皮細胞等有檢驗價值的細胞進行固定保 存，有效保存細胞形態(tài)完好，同時也可以維持細胞內(nèi)核酸的完整性。 醋酸-醋酸鈉緩沖液：緩沖液PH4. 4,可有效維持細胞形態(tài)特征。
[0011] 本發(fā)明的有益效果是：1.該細胞保存液中包括ρ Η緩沖劑、滲透壓維持劑，能有 效保存細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，無細胞溶解和細胞腫脹現(xiàn)象，該細胞保存液含有細胞固定劑成 分，可有效快速對樣品中的上皮脫落細胞、白細胞等脫落細胞進行固定保存，防止細胞發(fā)生 自溶。 2、 該細胞保存液能有效降低核酸降解，易于后續(xù)核酸的檢測研究。 3、 兼容性強：保存的細胞可同時進行免疫細胞化學、TCT、HPV-PCR、bDNA等分子生物技 術檢測，無需多次采樣。 4、 成分簡單、價格低廉、易于推廣。 5、 使用簡單，操作方便，大大節(jié)省了制備樣品的時間。

【具體實施方式】
[0012] 以下通過具體的實施方式，進一步闡述本發(fā)明。
[0013] 一種細胞保存液，它由氯化鈉、乙二胺四乙酸二鈉、PEG10000、Proclin300、甲醇、 醋酸-醋酸鈉緩沖液組成，按重量百分比計，其中 氯化鈉：0· 12-0. 14%乙二胺四乙酸二鈉：0· 05-0. 42% ; PEG10000 ：0. 15-0. 20% Proclin300 ：0. 01-0. 20% ； 甲醇：10. 0-45. 0% 醋酸-醋酸鈉緩沖液：64. 0-88. 0%。
[0014] 實施例1，本發(fā)明的細胞保存液配制方法為， 氯化鈉：0. 12g 乙二胺四乙酸二鈉：0. 42g ; PEG10000 ：0.15ml Proclin300 ：0.01ml ； 甲醇：10. Og 醋酸-醋酸鈉緩沖液：88. 0ml。 讓上述各組分均勻攪拌溶解即可。
[0015] 實施例2,本發(fā)明的細胞保存液配制方法為， 氯化鈉：0. 14g 乙二胺四乙酸二鈉：0. 05g ; PEG10000 ：0.20ml Proclin300 ：0. 15ml ； 甲醇：30. Og 醋酸-醋酸鈉緩沖液：64. 0ml。 讓上述各組分均勻攪拌溶解即可。
[0016] 實施例3,本發(fā)明的細胞保存液配制方法為， 氯化鈉：0. 14g 乙二胺四乙酸二鈉：0. 30g ; PEG10000 ：0.18ml Proclin300 ：0.20ml ； 甲醇：40. Og 醋酸-醋酸鈉緩沖液：70. 0ml。 讓上述各組分均勻攪拌溶解即可。
[0017] 通過以上實施例配制出的細胞保存液，使用過程中，降低了使用成本，真正有效的
【權利要求】
1. 一種細胞保存液，其特征在于，它由氯化鈉、乙二胺四乙酸二鈉、PEG10000、 Pr〇clin300、甲醇、醋酸-醋酸鈉緩沖液組成，按重量百分比計，其中 氯化鈉：0· 12-0. 14%乙二胺四乙酸二鈉：0· 05-0. 42% ; PEG10000 ：0. 15-0. 20% Proclin300 ：0. 01-0. 20% ； 甲醇：10. 0-45. 0%醋酸-醋酸鈉緩沖液：64. 0-88. 0%。
2. 根據(jù)權利要求1所述的細胞保存液，其特征在于，所述以下重量比為： 氯化鈉 ：0. 12g乙二胺四乙酸二鈉 ：0. 42g ; PEG10000 ：0. 15ml Proclin300 ：0. 01ml ； 甲醇：10. Og 醋酸-醋酸鈉緩沖液：88. 0ml。
【文檔編號】A01N1/00GK104041484SQ201410232820
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年5月23日 優(yōu)先權日:2014年5月23日
【發(fā)明者】張鷺鷺, 李小磊, 李先坤, 程昀靜, 郭利杰 申請人:科蒂亞(新鄉(xiāng))生物技術有限公司