一種野生米斛的選種培育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種野生米斛的選種培育方法生產(chǎn)工藝，包括采集野生種苗、人工培育和授粉、配制培養(yǎng)基、培養(yǎng)基培育、移植各個步驟。本發(fā)明能徹底改變了米斛自然授粉結(jié)實率低的問題，同時解決野外的種種環(huán)境因素制約，受氣候影響較大，且病蟲害嚴(yán)重且難以防治，保護了野生米斛，同時提高了野生米斛繁殖率，保護了米斛的繁殖。
【專利說明】一種野生米斛的選種培育方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品領(lǐng)域，具體涉及一種野生米斛的選種培育方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 米斛是我國瀕臨滅絕的珍稀物種，被譽為"中華仙草"之首，是霍山縣獨有的、擁有 原產(chǎn)地地理標(biāo)志的名貴中藥材，具有極高的藥用保健價值，具有生津益明、清熱養(yǎng)陰、消炎 止痛、清音明目功能及抗癌、抗衰老、抗輻射和增強免疫力等功效，尤其米斛多糖具有極高 的保健和醫(yī)療作用。但由于其生境狹窄，繁殖困難，植株數(shù)量極少，因此人工種植霍山米斛 具有廣闊的前景，但缺乏優(yōu)質(zhì)種苗是霍山米斛種植業(yè)的瓶頸之一。雖然國內(nèi)早有關(guān)于霍山 米斛種苗生產(chǎn)的專利和文獻報道，但是卻沒有見到利用試管開花授粉結(jié)果的方法來繁殖霍 山米斛的。
[0003] 安徽省霍山縣地處我省西部偏南，大別山北麓。介于北緯33° 03' -3Γ 33'， 東經(jīng)115° 52'-116° 32'之間。平均海拔500米，屬亞熱帶季風(fēng)氣候區(qū)。四季分明，雨 量充沛，年平均氣溫14. 2°C -16. 1°C，最冷月平均氣溫2°C，最熱月平均氣溫27. 8°C。年降 水量1100-1600mm，絕對濕度年平均15. 6mb，常年相對濕度80%，全年> 80%天數(shù)200天左 右。無霜期為220-270天，無霜期長。自然環(huán)境優(yōu)美，是霍山米斛品質(zhì)形成的重要條件。
[0004] 米斛為蘭科多年生附生草本植物，形曲不直，似蚱蜢髀，是米斛中的極品，為我縣 獨有，擁有原產(chǎn)地地理保護標(biāo)志和瀕臨滅絕的國家級珍惜名貴中藥材，是國家野生中藥材 二級保護品種，有"植物大熊貓"之稱，《本草綱目》記載：米斛生于懸崖峭壁之間、性微寒， 有養(yǎng)胃生津、滋陰除熱、補腎益精、明目之功效。以之代茶可開胃健脾，霍山米斛具有益精填 髓、補五臟內(nèi)絕不足，平胃氣、長肌肉、益智除煩、清虛熱、輕身延年之功效，清趙學(xué)敏、趙學(xué) 凱《本草綱目拾遺》《百草經(jīng)》語曰：米斛近時有一種形短祗寸許細(xì)如燈芯，色青黃、嚼之味 甘，微有滑涎。
[0005] 米斛喜陰涼濕潤環(huán)境，常附生于陰涼濕潤的樹上和巖石上。喜風(fēng)，又有"風(fēng)大貫"之 稱。尤其是半陰半陽的地方，附生有苔蘚植被石灰?guī)r石上和樹上最好。其生長條件苛刻，米 斛種子細(xì)小，不具胚乳(供幼苗生長的物質(zhì))，在自然狀態(tài)下，發(fā)芽率很低，成苗更難，20世 紀(jì)40年代kundson介紹了簡便萌發(fā)蘭花種子的培養(yǎng)基。為米斛種子培育試管苗奠定了基 礎(chǔ)，但米斛組織培養(yǎng)試管苗工作大多起步于20世紀(jì)70年代末至80年代初。20世紀(jì)90 年代，國內(nèi)許多教育科研植物園等單位均開展此項研究工作，發(fā)展很快，至90年代末組織 培養(yǎng)試管苗移栽大田成活率已達95%以上。
[0006] 由于野外的種種環(huán)境因素制約，受氣候影響較大，且病蟲害嚴(yán)重且難以防治，野生 的米斛瀕臨滅絕，屬于國家級珍惜名貴中藥材，野外養(yǎng)殖繁殖率低，且成本較高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種野生米斛的選種培育方法。
[0008] 本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)： 一種野生米斛的選種培育方法，包括以下步驟： (1) 采集健康、生長性狀良好的野生米斛，將采集的米斛幼苗置于大棚栽培生長，保持 大棚濕度為60%，夏季棚中的溫度控制在20-25°C，冬季棚內(nèi)溫度控制在10-15°c ; (2) 待野生米斛生長開花至花期綻放，一般開花后一個星期授粉為佳，授粉環(huán)境須天氣 晴朗且無風(fēng)，溫度以20°C為佳，采用人工授粉的方式： a、 選取茁壯的米斛植株的花朵，拔除唇瓣； b、 用牙簽挑取花藥，將牙簽上的花藥送入蕊柱腔，花粉粘在蕊柱腔內(nèi)即可，動作要輕， 以免刺傷花朵； c、 一周內(nèi)可觀察授粉是否成功，若授粉成功，得到果莢； (3) 配制培養(yǎng)基， ① 培養(yǎng)基工作液包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機物質(zhì)， a、 所述大量元素濃度和成分為：1650mg/L的NH4N03,1900mg/L的KN03,440mg/L的 CaC12 · 2H20,370mg/L 的 MgS04 · 7H20,170mg/L 的 KH2P04 ;所述微量元素濃度和成分為： 0· 83mg/L 的 KI，6. 3mg/L 的 H3B03,22. 3mg/L 的 MnS04 · 4H20,8. 6mg/L 的 ZnS04 · 7H20， 0· 25mg/L 的 Na2Mo04 · 2Η20,0· 025mg/L 的 CuS04 · 5Η20,0· 025mg/L 的 CoC12 · 6H20 ;所述 鐵鹽濃度和成分為：27. 8mg/L的FeS04 · 7H20, 37. 3mg/L的Na2-EDTA · 2H20 ;所述有機物質(zhì) 濃度和成分為：l〇〇mg/L的肌醇，0. 5mg/L的煙酸，0. 5mg/L的鹽酸批咳醇，0. lmg/L的鹽酸硫 胺素，2.0mg/L的甘氨酸； b、 大量元素母液的配制，在分析天平上按a中分別稱取大量元素藥品，置于三角瓶中， 分別加蒸餾水l〇〇ml左右于三角瓶中，再放到磁力攪拌器攪拌溶解，然后一一倒入1000ml 的容量瓶中，注意CaC12要后加，最后加蒸餾水定容至刻度，此為10倍液的大量元素母液； c、 微量元素母液的配制，在分析天平上按a中分別稱取微量元素藥品，按大量元素母 液配制方法，配成100倍液的微量元素母液； d、 鐵鹽母液的配制，在分析天平上按a中稱取FeS04. 7H2 0和Na2 - EDTA藥品，配成 100倍液的鐵鹽母液； e、 有機物母液的配制，用分析天平按a中分別稱取甘氨酸VB1、Vpp、VB6、肌醇，配成50 倍有機物質(zhì)母液； ② 培養(yǎng)基的合成： a、 加入藥品用量筒取大量元素母液100ml倒入1000ml定容瓶中；用專用的移液管分別 移取微量元素母液l〇ml，鐵鹽母液10ml，有機物母液10ml，均加入該定容瓶中，再用蒸餾 水定容至刻度，搖勻，取3/1至1/2液體培養(yǎng)基移入白瓷缸中，稱取瓊脂絲7 - 9g和蔗糖 30g放入白瓷缸中； b、 加熱通電加熱，燒開后改用文火，至瓊脂全部融化，透澈見底為止； c、 調(diào)整PH值從電爐上取下冷卻后，用0. 1N的NaOH或0. 1N的HC1調(diào)整pH值為5. 8; d、 培養(yǎng)基的分裝攪拌均勻后，分裝到三角瓶中，每瓶約25-30 ml，即1升培養(yǎng)基分裝 40-35瓶，最后用封口塑料膜包上瓶口，用線繩扎口，寫上標(biāo)號； (4) 待種子成熟后，將種子掰開，取出殼內(nèi)果實，用酒精進行消毒后，同時對配制好的培 養(yǎng)基進行高溫消毒滅菌，再放入培養(yǎng)室內(nèi)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：要求每日光照12-16 小時，光照度1000-50001x，溫度以23-27°C為宜，濕度為100%，保持暢通的空氣； (5)將在培養(yǎng)室培養(yǎng)后的幼苗取出，洗去培養(yǎng)基，移栽到無菌的混合土中，保持濕度為 60%和溫度為25°C，當(dāng)長出新葉時，即可移栽到種植地中。
[0009] 本發(fā)明的有益效果：能徹底改變了米斛自然授粉結(jié)實率低的問題，同時解決野外 的種種環(huán)境因素制約，受氣候影響較大，且病蟲害嚴(yán)重且難以防治，保護了野生米斛，同時 提高了野生米斛繁殖率，保護了米斛的繁殖。

【具體實施方式】
[0010] 一種野生米斛的選種培育方法，包括以下步驟： (1) 采集健康、生長性狀良好的野生米斛，將采集的米斛幼苗置于大棚栽培生長，保持 大棚濕度為60%，夏季棚中的溫度控制在22°C，冬季棚內(nèi)溫度控制在12°C ; (2) 待野生米斛生長開花至花期綻放，一般開花后一個星期授粉為佳，授粉環(huán)境須天氣 晴朗且無風(fēng)，溫度以20°C為佳，采用人工授粉的方式： a、 選取茁壯的米斛植株的花朵，拔除唇瓣； b、 用牙簽挑取花藥，將牙簽上的花藥送入蕊柱腔，花粉粘在蕊柱腔內(nèi)即可，動作要輕， 以免刺傷花朵； c、 一周內(nèi)可觀察授粉是否成功，若授粉成功，得到果莢； (3) 配制培養(yǎng)基， ① 培養(yǎng)基工作液包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機物質(zhì)， a、 所述大量元素濃度和成分為：1650mg/L的NH4N03,1900mg/L的KN03,440mg/L的 CaC12 · 2H20,370mg/L 的 MgS04 · 7H20,170mg/L 的 KH2P04 ;所述微量元素濃度和成分為： 0· 83mg/L 的 KI，6. 3mg/L 的 H3B03,22. 3mg/L 的 MnS04 · 4H20,8. 6mg/L 的 ZnS04 · 7H20， 0· 25mg/L 的 Na2Mo04 · 2Η20,0· 025mg/L 的 CuS04 · 5Η20,0· 025mg/L 的 CoC12 · 6H20 ;所述 鐵鹽濃度和成分為：27. 8mg/L的FeS04 · 7H20, 37. 3mg/L的Na2-EDTA · 2H20 ;所述有機物質(zhì) 濃度和成分為：l〇〇mg/L的肌醇，0. 5mg/L的煙酸，0. 5mg/L的鹽酸批咳醇，0. lmg/L的鹽酸硫 胺素，2.0mg/L的甘氨酸； b、 大量元素母液的配制，在分析天平上按a中分別稱取大量元素藥品，置于三角瓶中， 分別加蒸餾水l〇〇ml左右于三角瓶中，再放到磁力攪拌器攪拌溶解，然后一一倒入1000ml 的容量瓶中，注意CaC12要后加，最后加蒸餾水定容至刻度，此為10倍液的大量元素母液； c、 微量元素母液的配制，在分析天平上按a中分別稱取微量元素藥品，按大量元素母 液配制方法，配成100倍液的微量元素母液； d、 鐵鹽母液的配制，在分析天平上按a中稱取FeS04. 7H2 0和Na2 - EDTA藥品，配成 100倍液的鐵鹽母液； e、 有機物母液的配制，用分析天平按a中分別稱取甘氨酸VB1、Vpp、VB6、肌醇，配成50 倍有機物質(zhì)母液； ② 培養(yǎng)基的合成： a、加入藥品用量筒取大量元素母液100ml倒入1000ml定容瓶中；用專用的移液管分別 移取微量元素母液l〇ml，鐵鹽母液10ml，有機物母液10ml，均加入該定容瓶中，再用蒸餾 水定容至刻度，搖勻，取3/1液體培養(yǎng)基移入白瓷缸中，稱取瓊脂絲8g和蔗糖30g放入白 瓷缸中；
【權(quán)利要求】
1. 一種野生米斛的選種培育方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 采集健康、生長性狀良好的野生米斛，將采集的米斛幼苗置于大棚栽培生長，保持 大棚濕度為60%，夏季棚中的溫度控制在20-25°C，冬季棚內(nèi)溫度控制在10-15°c ; (2) 待野生米斛生長開花至花期綻放，一般開花后一個星期授粉為佳，授粉環(huán)境須天氣 晴朗且無風(fēng)，溫度以20°C為佳，采用人工授粉的方式： a、 選取茁壯的米斛植株的花朵，拔除唇瓣； b、 用牙簽挑取花藥，將牙簽上的花藥送入蕊柱腔，花粉粘在蕊柱腔內(nèi)即可，動作要輕， 以免刺傷花朵； c、 一周內(nèi)可觀察授粉是否成功，若授粉成功，得到果莢； (3) 配制培養(yǎng)基， ① 培養(yǎng)基工作液包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機物質(zhì)， a、 所述大量元素濃度和成分為：1650mg/L的NH4N03,1900mg/L的KN03,440mg/L的 CaC12 · 2H20,370mg/L 的 MgS04 · 7H20,170mg/L 的 KH2P04 ;所述微量元素濃度和成分為： 0· 83mg/L 的 KI，6. 3mg/L 的 H3B03,22. 3mg/L 的 MnS04 · 4H20,8. 6mg/L 的 ZnS04 · 7H20， 0· 25mg/L 的 Na2Mo04 · 2Η20,0· 025mg/L 的 CuS04 · 5Η20,0· 025mg/L 的 CoC12 · 6H20 ;所述 鐵鹽濃度和成分為：27. 8mg/L的FeS04 · 7H20, 37. 3mg/L的Na2-EDTA · 2H20 ;所述有機物質(zhì) 濃度和成分為：l〇〇mg/L的肌醇，0. 5mg/L的煙酸，0. 5mg/L的鹽酸批咳醇，0. lmg/L的鹽酸硫 胺素，2.0mg/L的甘氨酸； b、 大量元素母液的配制，在分析天平上按a中分別稱取大量元素藥品，置于三角瓶中， 分別加蒸餾水l〇〇ml左右于三角瓶中，再放到磁力攪拌器攪拌溶解，然后一一倒入1000ml 的容量瓶中，注意CaC12要后加，最后加蒸餾水定容至刻度，此為10倍液的大量元素母液； c、 微量元素母液的配制，在分析天平上按a中分別稱取微量元素藥品，按大量元素母 液配制方法，配成100倍液的微量元素母液； d、 鐵鹽母液的配制，在分析天平上按a中稱取FeS04. 7H2 0和Na2 - EDTA藥品，配成 100倍液的鐵鹽母液； e、 有機物母液的配制，用分析天平按a中分別稱取甘氨酸VB1、Vpp、VB6、肌醇，配成50 倍有機物質(zhì)母液； ② 培養(yǎng)基的合成： a、 加入藥品用量筒取大量元素母液100ml倒入1000ml定容瓶中，用專用的移液管分 別移取微量元素母液l〇ml，鐵鹽母液10ml，有機物母液10ml，均加入該定容瓶中，再用蒸 餾水定容至刻度，搖勻，取3/1至1/2液體培養(yǎng)基移入白瓷缸中，稱取瓊脂絲7 - 9g和蔗 糖30g放入白瓷缸中； b、 加熱通電加熱，燒開后改用文火，至瓊脂全部融化，透澈見底為止； c、 調(diào)整PH值從電爐上取下冷卻后，用0. 1N的NaOH或0. 1N的HC1調(diào)整pH值為5. 8; d、 培養(yǎng)基的分裝攪拌均勻后，分裝到三角瓶中，每瓶約25-30 ml，即1升培養(yǎng)基分裝 40-35瓶，最后用封口塑料膜包上瓶口，用線繩扎口，寫上標(biāo)號； (4) 待種子成熟后，將種子掰開，取出殼內(nèi)果實，用酒精進行消毒后，同時對配制好的 培養(yǎng)基進行高溫消毒滅菌，再放入培養(yǎng)室內(nèi)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：要求每日光照 12-16小時，光照度1000-50001x，溫度以23-27°C為宜，濕度為100%，保持暢通的空氣； (5)將在培養(yǎng)室培養(yǎng)后的幼苗取出，洗去培養(yǎng)基，移栽到無菌的混合土中，保持濕度為 60%和溫度為25°C，當(dāng)長出新葉時，即可移栽到種植地中。
【文檔編號】A01H4/00GK104054575SQ201410236942
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2014年5月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月30日
【發(fā)明者】李維寶 申請人:霍山寶信園石斛開發(fā)有限公司