一種火力楠的組織培養(yǎng)快繁方法
【專(zhuān)利摘要】一種火力楠的組織培養(yǎng)快繁方法，涉及火力楠（MicheliamacclureiDandy）通過(guò)無(wú)性快繁技術(shù)獲得株性穩(wěn)定種苗的育苗方法。本發(fā)明以火力楠帶節(jié)莖段或頂芽為外植體，通過(guò)不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及煉苗移栽等階段實(shí)現(xiàn)了火力楠種苗的組織培養(yǎng)快速繁殖。解決了這一珍貴鄉(xiāng)土樹(shù)種種苗供應(yīng)的問(wèn)題。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種火力楠的組織培養(yǎng)快繁方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說(shuō)，涉及一種火力楠的 組織培養(yǎng)快繁方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 火力捕(#icAe^/ia ?acc/arei Dandy)又名醉香含笑，為木蘭科(ifegflo/iaceae1)含 笑屬常綠闊葉喬木，屬于極速生類(lèi)珍貴樹(shù)種，是桂東南地區(qū)主要造林樹(shù)種之一?；鹆﹂静?結(jié)構(gòu)細(xì)致，紋理通直、切面光滑、強(qiáng)度和硬度較高，耐腐蝕，加工性能好，是建筑、家具、車(chē)船 廂板、玩具等方面的優(yōu)良用材?；鹆﹂址秩紵圆睿莾?yōu)良的防火樹(shù)種。
[0003] 火力楠作為南方珍貴鄉(xiāng)土樹(shù)種，其用途廣泛，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，發(fā)展火力楠是解決我國(guó) 珍貴樹(shù)種木材供需矛盾的重要途徑。目前廣西桂東南地區(qū)正掀起火力楠種植熱潮，優(yōu)質(zhì)火 力楠種苗供不應(yīng)求。然而，目前火力楠種苗主要依靠種子繁殖，但火力楠種子容易發(fā)霉，發(fā) 芽率低，而且實(shí)生苗造林林分分化明顯，個(gè)體之間差異大。因此，非常有必要建立一套完整 的火力楠組織培養(yǎng)快繁體系。目前，火力楠組織培養(yǎng)技術(shù)有少量報(bào)道，但研究還不夠成熟， 即完整的火力楠組織培養(yǎng)的研究報(bào)道尚未見(jiàn)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供出一種火力楠的組織培養(yǎng)快繁方法，通過(guò)不定芽的誘導(dǎo)、 叢生芽繼代、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等階段，使火力楠實(shí)現(xiàn)快速繁殖，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目 的。
[0005] 本發(fā)明的一種火力楠的組織培養(yǎng)快繁方法，包括以下的步驟： (1) 不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)：選取火力楠的嫩莖或頂芽作為外植體，經(jīng)消毒后接種到誘導(dǎo) 培養(yǎng)基上，先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)15?20天，然后置于每天光照10?12小時(shí)， 光照強(qiáng)度為1000?15001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C條件下培養(yǎng)，直至誘導(dǎo)形成不定芽。所述 的誘導(dǎo)培養(yǎng)基以1/2MS為基本培養(yǎng)基，配加2. 0%?3. 5%蔗糖、0. 35%?0. 5%瓊脂、0. 05%? 〇· 1%活性炭、〇· 03%?0· 1%蛋白胨、50?100ml/L椰子汁以及0· 8?1. 2mg/L 6-BA和0· 3? 0· 5mg/L NAA，pH 值為 5. 4 ?5. 8; (2) 叢生芽繼代培養(yǎng)：將不定芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后先在25? 28 °C條件下全暗培養(yǎng)5?7天，然后置于每天光照10?12小時(shí)，光照強(qiáng)度為1000? 15001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，35?45天轉(zhuǎn)接一次。所述的繼代培養(yǎng)基以 MS為基本培養(yǎng)基，配加1. 5%?2. 5%蔗糖、0. 35%?0. 5%瓊脂、0. 05%?0. 1%活性炭以及 0· 4 ?0· 8mg/L 6-ΒΑ、0· 1 ?0· 3mg/L IBA 和 0· 1 ?0· 4mg/L NAA，pH 值為 5. 4 ?5. 8 ; (3) 生根培養(yǎng)：將高度約為3?5cm的叢生芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)， 接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)5?7天，然后置于每天光照10?12小時(shí)，光照強(qiáng) 度為2000?25001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根，所述的生根培養(yǎng)基以SH 為基本培養(yǎng)基，配加1. 0%?1. 5%蔗糖、0. 35%?0. 45%瓊脂、0. 05%?0. 1%活性炭、30? 50ml/L 椰子汁以及 0· 3 ?0· 6mg/L IBA 和 0· 1 ?0· 3mg/L NAA，pH 值為 5· 4 ?5· 8 ; (4)煉苗移栽：試管苗生根后將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)至溫室培養(yǎng)30?45天以壯苗，將具有根、莖、 葉和芽的完整火力楠試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開(kāi)并置于自然光照下煉苗5?7天后，將試管 苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土和河沙混合成的基質(zhì)中并定植于大田 中。
[0006] 在上述（1)步驟中，所述的外植體為火力楠種子的月齡苗和1?2年生苗的帶節(jié) 嫩莖或頂芽。
[0007] 在上述步驟（1)所述的外植體消毒方法是將火力楠種子的月齡苗和1?2年生苗 的帶節(jié)嫩莖或頂芽浸泡于75%?80%的酒精溶液中10?30秒鐘，用無(wú)菌水沖洗2?5次 后置于添加有0. 1%?0. 15%吐溫的0. 1%升汞溶液中8?15分鐘，經(jīng)無(wú)菌水沖洗2?5次 后備用。
[0008] 本發(fā)明具有的特點(diǎn)，目前國(guó)內(nèi)關(guān)于火力楠組織培養(yǎng)技術(shù)有少量報(bào)道，但技術(shù)還不 夠成熟，而本發(fā)明具有簡(jiǎn)單、易行、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)。通過(guò)本發(fā)明育成的火力楠試管苗移栽成活 率達(dá)到90%以上，可以有效解決火力楠種植中的優(yōu)質(zhì)火力楠種苗供應(yīng)問(wèn)題。

【具體實(shí)施方式】
[0009] 以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0010] 實(shí)施例一 1、 外植體 從玉林市林業(yè)科學(xué)研究所火力楠育苗基地采集火力楠種子的月齡苗帶節(jié)嫩莖； 2、 培養(yǎng)過(guò)程 (1) 不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)：火力楠帶節(jié)嫩莖外植體經(jīng)75%的酒精消毒20秒鐘后，用無(wú) 菌水沖洗3次后轉(zhuǎn)入添加有0. 1%吐溫的0. 1%升汞溶液中消毒9分鐘，再經(jīng)無(wú)菌水沖洗3 次后轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，先在25°C條件下全暗培養(yǎng)15天，然后置于每天光照10小時(shí)， 光照強(qiáng)度為12001x，培養(yǎng)溫度為25°C條件下培養(yǎng)，直至誘導(dǎo)形成不定芽。誘導(dǎo)培養(yǎng)基為： l/2MS+0.8mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA +2.0% 蔗糖+0.4% 瓊脂+0.06% 活性炭+0.07% 蛋白胨 +70ml/L椰子汁，pH值為5.6; (2) 叢生芽繼代培養(yǎng)：將不定芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后先在26°C條 件下全暗培養(yǎng)6天，然后置于每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度為12001x，培養(yǎng)溫度為26°C的條 件下培養(yǎng)，35天繼代一次，繁殖系數(shù)達(dá)6?8。繼代培養(yǎng)基為：MS+0. 5mg/L 6-BA+O. lmg/L IBA+0. 2mg/L NAA +1. 8% 蔗糖 +0· 35% 瓊脂 +0· 1% 活性炭，pH 值為 5· 8 ; (3) 生根培養(yǎng)：將高度約為3?5cm的叢生芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)， 接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)7天，然后置于每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度為：25001x，培 養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)45天內(nèi)可以保證生根。生根培養(yǎng)基為：SH+0. 3mg/L IBA+0. 1 mg/L NAA +L 5% 蔗糖 +0· 45% 瓊脂 +0· 05% 活性炭 +30ml/L 椰子汁，pH 值為 5. 8 ; (4) 煉苗移栽：試管苗生根后將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)至溫室培養(yǎng)30天后，當(dāng)試管苗生至6?8cm時(shí) 將培養(yǎng)瓶瓶蓋打開(kāi)并置于自然光照下煉苗5天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培 養(yǎng)基，栽入由泥炭土和河沙（1 :1)混合成的基質(zhì)中并定植于大田中，成活率達(dá)到93%。
[0011] 實(shí)施例二 1、 外植體 從玉林市林業(yè)科學(xué)研究所火力楠優(yōu)樹(shù)種子園中1年生苗的頂芽； 2、 培養(yǎng)過(guò)程 (1) 不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)：火力楠帶節(jié)嫩莖外植體經(jīng)75%的酒精消毒10秒鐘后，用無(wú)菌 水沖洗5次后轉(zhuǎn)入添加有0. 15%吐溫的0. 1%升汞溶液中消毒8分鐘，再經(jīng)無(wú)菌水沖洗5 次后轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，先在28°C條件下全暗培養(yǎng)20天，然后置于每天光照12小時(shí)， 光照強(qiáng)度為lOOOlx，培養(yǎng)溫度為28°C條件下培養(yǎng)，直至誘導(dǎo)形成不定芽。誘導(dǎo)培養(yǎng)基為： 1/2MS+1. Omg/L 6-BA+0. 5mg/L NAA +3. 5% 蔗糖 +0· 5% 瓊脂 +0· 1% 活性炭 +0· 03% 蛋白胨 +100ml/L椰子汁，pH值為5. 8; (2) 叢生芽繼代培養(yǎng)：將不定芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后先在28°C條 件下全暗培養(yǎng)7天，然后置于每天光照10小時(shí)，光照強(qiáng)度為ΙΟΟΟΙχ，培養(yǎng)溫度為28°C的條 件下培養(yǎng)，40天繼代一次，繁殖系數(shù)達(dá)4?6。繼代培養(yǎng)基為：MS+0. 8mg/L 6-BA+O. 2mg/L IBA+0. 2mg/L NAA +2. 5% 蔗糖 +0· 5% 瓊脂 +0· 1% 活性炭，pH 值為 5· 8 ; (3) 生根培養(yǎng)：將高度約為3?5cm的叢生芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)， 接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)5天，然后置于每天光照10小時(shí)，光照強(qiáng)度為20001x，培 養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)30天內(nèi)可以保證生根。生根培養(yǎng)基為：SH+0. 6mg/L ΙΒΑ+0. 3 mg/L NAA +L 5%蔗糖+0· 4%瓊脂+0· 1%活性炭+40ml/L椰子汁，pH值為5. 8 ; (4) 煉苗移栽：試管苗生根后將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)至溫室培養(yǎng)35天后，當(dāng)試管苗生至6?8cm時(shí) 將培養(yǎng)瓶瓶蓋打開(kāi)并置于自然光照下煉苗6天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培 養(yǎng)基，栽入由泥炭土和河沙（1 :1)混合成的基質(zhì)中并定植于大田中，成活率達(dá)到96%。
[0012] 實(shí)施例三 1、 外植體 從玉林市林業(yè)科學(xué)研究所火力楠優(yōu)樹(shù)種子園中2年生苗的帶節(jié)莖段； 2、 培養(yǎng)過(guò)程 (1) 不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)：火力楠帶節(jié)嫩莖外植體經(jīng)80%的酒精消毒30秒鐘后，用無(wú)菌 水沖洗2次后轉(zhuǎn)入添加有0. 1%吐溫的0. 1%升汞溶液中消毒15分鐘，再經(jīng)無(wú)菌水沖洗3 次后轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，先在27°C條件下全暗培養(yǎng)18天，然后置于每天光照11小時(shí)， 光照強(qiáng)度為15001x，培養(yǎng)溫度為27°C條件下培養(yǎng)，直至誘導(dǎo)形成不定芽。誘導(dǎo)培養(yǎng)基為： l/2MS+1.2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA +3.0% 蔗糖+0.4% 瓊脂+0.08% 活性炭+0.08% 蛋白胨 +60ml/L椰子汁，pH值為5. 8; (2) 叢生芽繼代培養(yǎng)：將不定芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后先在27°C條 件下全暗培養(yǎng)6天，然后置于每天光照11小時(shí)，光照強(qiáng)度為13001x，培養(yǎng)溫度為27°C的條 件下培養(yǎng)，38天繼代一次，繁殖系數(shù)達(dá)5?7。繼代培養(yǎng)基為：MS+0. 4mg/L 6-BA+O. lmg/L IBA+0. lmg/L NAA +2. 0% 蔗糖 +0· 5% 瓊脂 +0· 06% 活性炭，pH 值為 5· 8 ; (3) 生根培養(yǎng)：將高度約為3?5cm的叢生芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)， 接種后先在27°C條件下全暗培養(yǎng)7天，然后置于每天光照11小時(shí)，光照強(qiáng)度為25001x，培 養(yǎng)溫度為27°C的條件下培養(yǎng)30天內(nèi)可以保證生根。生根培養(yǎng)基為：SH+0. 4mg/L IBA+0. 1 mg/L NAA +L 0%蔗糖+0· 4%瓊脂+0· 05%活性炭+50ml/L椰子汁，pH值為5. 8 ; (4) 煉苗移栽：試管苗生根后將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)至溫室培養(yǎng)30天后，當(dāng)試管苗生至6?8cm時(shí)
【權(quán)利要求】
1. 一種火力楠的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)：選取火力楠的嫩莖或頂芽作為外植體，經(jīng)消毒后接種到誘導(dǎo) 培養(yǎng)基上，先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)15?20天，然后置于每天光照10?12小時(shí)， 光照強(qiáng)度為1000?15001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C條件下培養(yǎng)，直至誘導(dǎo)形成不定芽；所述 的誘導(dǎo)培養(yǎng)基以1/2MS為基本培養(yǎng)基，配加2. 0%?3. 5%蔗糖、0. 35%?0. 5%瓊脂、0. 05%? 〇· 1%活性炭、〇· 03%?0· 1%蛋白胨、50?100ml/L椰子汁以及0· 8?1. 2mg/L 6-BA和0· 3? 0· 5mg/L NAA，pH 值為 5. 4 ?5. 8; (2) 叢生芽繼代培養(yǎng)：將不定芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后先在25? 28 °C條件下全暗培養(yǎng)5?7天，然后置于每天光照10?12小時(shí)，光照強(qiáng)度為1000? 15001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，35?45天轉(zhuǎn)接一次；所述的繼代培養(yǎng)基以 MS為基本培養(yǎng)基，配加1. 5%?2. 5%蔗糖、0. 35%?0. 5%瓊脂、0. 05%?0. 1%活性炭以及 0· 4 ?0· 8mg/L 6-ΒΑ、0· 1 ?0· 3mg/L IBA 和 0· 1 ?0· 4mg/L NAA，pH 值為 5. 4 ?5. 8 ; (3) 生根培養(yǎng)：將高度約為3?5cm的叢生芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)， 接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)5?7天，然后置于每天光照10?12小時(shí)，光照強(qiáng) 度為2000?25001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根，所述的生根培養(yǎng)基以SH 為基本培養(yǎng)基，配加1. 0%?1. 5%蔗糖、0. 35%?0. 45%瓊脂、0. 05%?0. 1%活性炭、30? 50ml/L 椰子汁以及 0· 3 ?0· 6mg/L IBA 和 0· 1 ?0· 3mg/L NAA，pH 值為 5. 4 ?5. 8 ; (4) 煉苗移栽：試管苗生根后將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)至溫室培養(yǎng)30?45天以壯苗，將具有根、莖、 葉和芽的完整火力楠試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開(kāi)并置于自然光照下煉苗5?7天后，將試管 苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土和河沙混合成的基質(zhì)中并定植于大田 中。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種火力楠的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于步驟（1)所述 的外植體為火力楠種子的月齡苗和1?2年生苗的帶節(jié)嫩莖或頂芽。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種火力楠的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于步驟（1)所 述的外植體消毒方法是將火力楠種子的月齡苗和1?2年生苗的帶節(jié)嫩莖或頂芽浸泡于 75%?80%的酒精溶液中10?30秒鐘，用無(wú)菌水沖洗2?5次后置于添加有0. 1%?0. 15% 吐溫的0. 1%升汞溶液中8?15分鐘，經(jīng)無(wú)菌水沖洗2?5次后備用。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104082139SQ201410297285
【公開(kāi)日】2014年10月8日 申請(qǐng)日期:2014年6月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月28日
【發(fā)明者】梁鈞淞, 甘耀坤, 莫昭展, 吳鳳娟, 梁林英, 梁曉菊, 潘潔明, 嚴(yán)翠瓊, 張燕飛 申請(qǐng)人:玉林師范學(xué)院