一株辣椒溶桿菌nf87-2及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種生防菌劑，其中有效活性成分由辣椒溶桿菌(Lysobacter?capsici)NF87-2組成。其特征在于：該生防菌劑是水劑，其組成與重量百分含量為：5億辣椒溶桿菌水劑：94.4％；NNO：0.5％；十二烷基苯磺酸鈉：5％；苯甲酸鈉：0.1％。應(yīng)用時(shí)，將上述水劑葉面噴施或灌根，用于防治水稻細(xì)菌性條斑病或番茄枯萎病、油菜菌核病等多種植物真菌病害。其優(yōu)點(diǎn)是：通過引進(jìn)對(duì)人畜安全、對(duì)多種植物病害具有較好防治作用的辣椒溶桿菌NF87-2，達(dá)到利用生防菌劑防治植物病害；減少化學(xué)藥劑用藥量、降低用藥成本；同時(shí)改善生態(tài)環(huán)境、減少化學(xué)藥劑在農(nóng)產(chǎn)品中殘留量的目的。
【專利說明】-株辣椒溶桿菌NF87-2及其應(yīng)用 【技術(shù)領(lǐng)域】
[〇〇〇1] 本發(fā)明涉及一種生防菌劑及其應(yīng)用，尤其是一株辣椒溶桿菌NF87-2及其在防治 植物病害中的應(yīng)用。 【背景技術(shù)】
[0002] 隨著種植業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整和外來有害生物的入侵，近年來農(nóng)作物重大病害頻繁暴 發(fā)。目前，生產(chǎn)上防治植物病害主要依靠化學(xué)農(nóng)藥，這不僅造成生態(tài)環(huán)境嚴(yán)重污染，而且直 接增加農(nóng)產(chǎn)品中有毒化學(xué)物質(zhì)的殘留，對(duì)人類健康帶來嚴(yán)重危害。為了達(dá)到有效防治植物 病害、減少化學(xué)農(nóng)藥使用量的目的，使用生物防治技術(shù)控制植物病害的方法越來越受到各 國政府和人民的關(guān)注。生物防治技術(shù)主要是利用生物多樣性，通過在自然界釋放或引進(jìn)有 益微生物，可持續(xù)控制植物病害。1950年以來國內(nèi)外均開展了利用生防菌劑防治植物病 害的研究，已取得初步成效。如：利用枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)防治水稻紋枯 病、大豆銹病、大白菜軟腐病等；利用突光假單胞桿菌（Fluorescent pseudomonads)防治 棉花、亞麻、苜猜、黃瓜等作物的枯萎??；利用酵母菌（Candida saitoana)、丁香假單胞菌 (Pseudomonas syringae)和成團(tuán)泛菌（Pantoea agglomerans)防治植物病害等。
[0003] 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院從湖北省利川市采集的土樣中，分離純化獲得一株新穎的生 防菌株NF87-2。經(jīng)中國科學(xué)院微生物研究所檢測(cè)鑒定，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)、生理生化特征、 16S rRNA基因序列等實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)綜合分析，菌株NF87-2鑒定為辣椒溶桿菌（Lysobacter capsici)。同時(shí)，辣椒溶桿菌NF87-2已于2013年11月19日在中國微生物菌種保藏管理 委員會(huì)普通微生物中心登記入冊(cè)，保藏編號(hào)為CGMCC No. 8483。地址為北京市朝陽區(qū)北辰西 路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所。
[0004] 溶桿菌屬（Lysobacter)是一類具有滑移性，高G+C含量，對(duì)人畜安全、對(duì)多種病原 真菌、細(xì)菌和線蟲有溶菌活性的革蘭氏陰性桿菌。溶桿菌屬現(xiàn)隸屬于變形菌亞門，黃單 胞菌目，黃單胞菌科。它的分布十分廣泛，存在于土壤（根際）、河流、下水道等環(huán)境中。早 期根據(jù)菌株表型將溶桿菌屬分為4個(gè)種，分別為產(chǎn)酶溶桿菌（Lysobacter enzymogenes)、 抗生素溶桿菌（Lysobacter antibioticus)、變掠溶桿菌（Lysobacter brunescens)和膠 狀溶桿菌（Lysobacter gummosus)。已文獻(xiàn)報(bào)道的溶桿菌主要是產(chǎn)酶溶桿菌，對(duì)油菜菌核 病菌、甘薯軟腐病菌、辣椒疫霉病菌和瓜果腐霉病菌等具有顯著抑菌效果（Qian G L等， 2010 年，Biological Control);可有效防治 Bipolaris sorokiniana 引起的高羊茅草葉 斑病（Kilic-Ekici 0 等，2003 年，Phytopathology)和 Rhizoctonia solani 引起的草坪 草褐斑?。╕uan G Y，2001 年，International Turf grass Society Research Journal)。 姬廣海等報(bào)道抗生素溶桿菌13-1能抑制水稻白葉枯病菌等多種病原細(xì)菌（Ji G H等， 2008年，Biological Control)。已有溶桿菌屬相關(guān)專利主要是產(chǎn)酶溶桿菌（專利申請(qǐng) 號(hào)：200710190998. 6 ;201310207022· 0)和抗生素溶桿菌（專利申請(qǐng)?zhí)枺?00510011078. 4 ; 201310405482.4)。目前，辣椒溶桿菌（Lysobacter capsici)的生防應(yīng)用國內(nèi)外未見報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一株具有較好應(yīng)用前景的生防菌株-辣椒溶桿菌 (Lysobacter capsici)NF87_2,該菌株已于2013年11月19日在中國微生物菌種保藏中心 登記入冊(cè)，保藏編號(hào)為CGMCC No. 8483。
[0006] 本發(fā)明提供了一種生防菌劑，其中有效活性成分由辣椒溶桿菌NF87-2組成。
[0007] 本發(fā)明所述的生防菌劑，其中辣椒溶桿菌NF87-2分泌的代謝產(chǎn)物中包括蛋白酶、 纖維素酶和嗜鐵素三種抗菌相關(guān)物質(zhì)。
[0008] 本發(fā)明所述的生防菌劑，它是水劑。
[0009] 本發(fā)明所述的水劑，其特征在于：各組成及重量百分含量如下：活性成分 10% -99% ;助劑0· 5% -20% ;表面活性劑0· 5% -20% ;防腐劑0· 1% -0· 5%。其中活性 成分由辣椒溶桿菌NF87-2組成；助劑選自ΝΝ0、氮酮、噻酮中的一種或多種；表面活性劑選 自十二烷基磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈉、茶枯粉、皂角粉中的一種或多種；防 腐劑選自苯甲酸鈉、山梨酸鉀、脫氫乙酸鈉、丙酸鈣、雙乙酸鈉中的一種或多種。
[〇〇1〇] 本發(fā)明所述的水劑，各組成及重量百分含量如下：5億辣椒溶桿菌NF87-2 : 94. 4% ;ΝΝ0:0. 5% ;十二烷基苯磺酸鈉：5% ;苯甲酸鈉：0. 1%。
[〇〇11] 本發(fā)明所述的水劑噴施植物葉面或灌根，用于防治水稻細(xì)菌性條斑病或番茄枯萎 病、油菜菌核病等多種植物真菌病害。
[0012] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：開發(fā)出一株對(duì)人畜安全、具有較好應(yīng)用前景的生防菌株-辣 椒溶桿菌NF87-2,豐富生防資源。該生防菌劑可以用來防治多種植物病害，減少生產(chǎn)中化學(xué) 藥劑的使用量，降低用藥成本；同時(shí)改善生態(tài)環(huán)境、減少化學(xué)藥劑在農(nóng)產(chǎn)品中的殘留量。 【專利附圖】

【附圖說明】
[0013] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明。
[0014] 圖1是辣椒溶桿菌NF87-2對(duì)病原細(xì)菌的抑制作用
[0015] 圖2是辣椒溶桿菌NF87-2對(duì)病原真菌的抑制作用。
[0016] 圖3是辣椒溶桿菌NF87-2產(chǎn)生蛋白酶。
[0017] 圖4是辣椒溶桿菌NF87-2產(chǎn)生纖維素酶。
[0018] 圖5是辣椒溶桿菌NF87-2產(chǎn)生嗜鐵素。
[0019] 圖中A :辣椒溶桿菌NF87-2 ;B :巨大芽孢桿菌；C :水稻細(xì)菌性條斑病菌；D :番茄枯 萎病菌；E :水稻紋枯病菌；F :番茄灰霉病菌；G :油菜菌核病菌；Η :甘藍(lán)黑斑病菌。 【具體實(shí)施方式】：
[0020] 實(shí)施例1、
[0021] 辣椒溶桿菌NF87-2對(duì)兩種病原細(xì)菌的抑制作用
[0022] Α、供試病原細(xì)菌
[0023] 病原細(xì)菌包括巨大芽孢桿菌和水稻細(xì)菌性條斑病菌，由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保 護(hù)研究所提供。用LB培養(yǎng)液（蛋白胨10. 0g，酵母粉5. 0g，NaC110g，蒸餾水1000mL)28°C、 150rpm振蕩培養(yǎng)2d，用無菌水稀釋至106cfu/mL，備用。
[0024] B、試驗(yàn)方法：
[0025] 將江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院篩選獲得的辣椒溶桿菌NF87-2在LB培養(yǎng)基上進(jìn)行活化，然 后移入50mL LB培養(yǎng)液中，于28°C、150rpm振蕩培養(yǎng)2d，用無菌水稀釋至5 X 108cfu/mL，備 用。
[0026] 吸取辣椒溶桿菌NF87-2菌液5μ L，點(diǎn)接在LB平板中央，28°C培養(yǎng)48h后用病原細(xì) 菌稀釋液噴霧，28°C培養(yǎng)過夜，調(diào)查抑菌圈直徑。每處理重復(fù)3次，取平均值。設(shè)清水對(duì)照。
[0027] C、試驗(yàn)結(jié)果：
[0028] 試驗(yàn)結(jié)果見圖1。辣椒溶桿菌NF87-2菌液對(duì)對(duì)供試的2種病原細(xì)菌均有一定的 抑制作用，對(duì)巨大芽孢桿菌的抑菌圈直徑為17mm ;對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病菌的抑菌圈直徑為 18mm〇
[0029] 如圖1所示。
[0030] 實(shí)施例2
[0031] 辣椒溶桿菌NF87-2對(duì)五種植物病原真菌的抑制作用
[0032] A、供試病原真菌：
[0033] 病原真菌包括番茄枯萎病菌、水稻紋枯病菌、番茄灰霉病菌、油菜菌核病菌和甘藍(lán) 黑斑病菌，均由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所提供。用PDA培養(yǎng)基（200g馬鈴薯、20g 葡萄糖、20g瓊脂和1000mL蒸餾水，pH5. 6-6. 6) 28°C培養(yǎng)5d，備用。
[0034] B、試驗(yàn)方法：
[0035] 辣椒溶桿菌NF87-2菌液制備同實(shí)施例1。
[0036] 將病原真菌菌餅（直徑為6mm)置于空白PDA平板一側(cè)，距平板邊緣30mm。平板另 一側(cè)，距平板邊緣30mm，點(diǎn)接辣椒溶桿菌NF87-2菌液5 μ L。28°C恒溫培養(yǎng)，設(shè)清水對(duì)照，待 對(duì)照平板病原菌菌落長滿時(shí)調(diào)查各處理病原菌生長直徑，計(jì)算抑制率。每處理重復(fù)3次，取 平均值。
[0037] 病原真菌抑制率=[(對(duì)照病原菌生長直徑-處理病原菌生長直徑）/對(duì)照病原菌 生長直徑]X 100%。
[0038] C、試驗(yàn)結(jié)果：
[0039] 試驗(yàn)結(jié)果見表1和圖2。結(jié)果表明：辣椒溶桿菌NF87-2菌液對(duì)供試的5種病原真 菌有明顯的抑制作用，抑制率均大于30%。
[0040] 表1辣椒溶桿菌NF87-2對(duì)供試病原真菌的抑制作用
[0041]
【權(quán)利要求】
1. 一種生防菌劑及其應(yīng)用，其特征在于：所述生防菌劑中有效活性成分由辣椒溶桿菌 (Lysobacter capsici)NF87-2組成；所述辣椒溶桿菌NF87-2分泌的代謝產(chǎn)物中包括蛋白 酶、纖維素酶和嗜鐵素三種抗菌相關(guān)物質(zhì)；所述生防菌劑為水劑；所述生防菌劑可用于防 治水稻細(xì)菌性條斑病、番茄枯萎病、油菜菌核病等多種植物病害。
2. -種用于防治多種植物病害的辣椒溶桿菌NF87-2水劑，其特征在于：各組成及重量 百分含量如下：活性成分10% -99% ;助劑0. 5% -20% ;表面活性劑0. 5% -20% ;防腐劑 0. 1% -0. 5%。其中活性成分由辣椒溶桿菌NF87-2組成；助劑選自NN0、氮酮、噻酮中的一 種或多種；表面活性劑選自十二烷基磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈉、茶枯粉、皂 角粉中的一種或多種；防腐劑選自苯甲酸鈉、山梨酸鉀、脫氫乙酸鈉、丙酸鈣、雙乙酸鈉中的 一種或多種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的辣椒溶桿菌NF87-2水劑，各組成及重量百分含量如下： 5億辣椒溶桿菌水劑：94.4% ;NN0 :0.5% ;十二烷基苯磺酸鈉：5% ;苯甲酸鈉：0. 1% ; ρΗ6· 0-7. 0。
【文檔編號(hào)】A01P3/00GK104082346SQ201410308723
【公開日】2014年10月8日 申請(qǐng)日期:2014年6月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月27日
【發(fā)明者】劉郵洲, 梁雪杰, 喬俊卿, 杜艷, 胡永紅 申請(qǐng)人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院