一種鐵皮石斛試管苗生根培養(yǎng)基及其配制方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鐵皮石斛試管苗生根培養(yǎng)基及其配制方法。所述生根培養(yǎng)基配方為：基本培養(yǎng)基+0.1-0.5mg/LNAA+0.4-1.0g/L活性炭+100g/L香蕉泥+50g/L土豆泥+20g/L白砂糖+5g/L瓊脂粉。所述生根培養(yǎng)基的配制方法為：配制基本培養(yǎng)基，按生根培養(yǎng)基配方稱取各組分；將稱取的香蕉、土豆制備成糊狀，然后加入水煮沸，冷卻至室溫；將配制好的基本培養(yǎng)基和稱取的NAA、活性炭、白砂糖、瓊脂粉各組分混合；將前述制備得到的各組分混合、定容，調(diào)節(jié)pH值至5.9-6.0，滅菌，冷卻凝固，制得所述生根培養(yǎng)基。按上述組成成分及配制方法制備的生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)的鐵皮石斛生根苗質(zhì)量更穩(wěn)定，可使生根培養(yǎng)周期縮短至1.5-2個月，組培室的周轉(zhuǎn)效率提高30％以上。
【專利說明】一種鐵皮石斛試管苗生根培養(yǎng)基及其配制方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種鐵皮石斛試管苗的生根培養(yǎng)基及其 配制方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 鐵皮石斛為蘭科多年生附生草本植物，是石斛屬藥用植物中最為珍稀名貴的一 種。鐵皮石斛被列為"中華九大仙草之首"，具有獨(dú)特的藥用價(jià)值，其莖、花都可入藥，具有益 胃生津，滋陰清熱的作用?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，鐵皮石斛還具有抗腫瘤、抗衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫力 的作用。鐵皮石斛因表皮呈鐵綠色而得名，中國鐵皮石斛主要分布于云南、浙江廣西、四川 貴州等地。
[0003] 近年來，越來越多的研究機(jī)構(gòu)或企業(yè)進(jìn)行鐵皮石斛的人工繁殖，尤其是利用組培 技術(shù)進(jìn)行試管苗的繁殖，相關(guān)的生產(chǎn)技術(shù)已日趨成熟，但是仍存在組織培養(yǎng)周期長的問題。 無論是試管苗的增殖培養(yǎng)還是生根培養(yǎng)，培養(yǎng)周期均為3個月左右。試管苗培養(yǎng)周期長造 成組培室周轉(zhuǎn)率低、試管苗的污染率升高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明旨在提供一種鐵皮石斛試管苗生根培養(yǎng)基及其配制 方法，確保培養(yǎng)的鐵皮石斛生根苗質(zhì)量更穩(wěn)定，使生根培養(yǎng)周期縮短，組培室的周轉(zhuǎn)效率提 商。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0006] -種鐵皮石斛試管苗生根培養(yǎng)基，該生根培養(yǎng)基的配方為：基本培養(yǎng)基 +0· 1-0. 5mg/LNAA+0. 4-1. Og/L 活性炭 +100g/L 香蕉泥 +50g/L 土豆泥 +20g/L 白砂糖 +5g/L 瓊脂粉；上述各組分嚴(yán)格按照制備工藝制成。
[0007] 其中，所述基本培養(yǎng)基的配方為：
[0008] 大量元素：硝酸鉀2200-2700 mg/L、硝酸銨500-600mg/L、七水硫酸鎂150-200mg/ L、磷酸二氫鉀 300-400 mg/L、二水氯化鈣 150-200mg/L ;
[0009] 微量元素：一水硫酸錳15-20mg/L、七水硫酸鋅70-100mg/L、碘化鉀(λ 8-L Omg/L、 六水氯化鈷〇· 02-0. 03mg/L ;
[0010] 有機(jī)物：肌醇100mg/L、維生素 BIO. lmg/L、維生素 B60. lmg/L、甘氨酸3mg/L ;
[0011] 鐵鹽：七水硫酸亞鐵27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg/L。
[0012] 本發(fā)明還提供一種鐵皮石斛試管苗生根培養(yǎng)基的配制方法，包括如下步驟：
[0013] (1)配制基本培養(yǎng)基，按照權(quán)利要求1所述的質(zhì)量配比稱取香蕉、土豆、NAA、活性 炭、白砂糖、瓊脂粉；
[0014] (2)將前述稱取的香蕉、土豆去皮后制備成糊狀，然后加入水煮沸，冷卻至室溫；
[0015] (3)將前述配制好的基本培養(yǎng)基和稱取的NAA、活性炭、白砂糖、瓊脂粉各組分混 合；
[0016] (4)將前述（1)和（2)制備得到的各組分混合、定容，調(diào)節(jié)pH值至5. 9-6.0,滅菌， 冷卻凝固，制得所述生根培養(yǎng)基。
[0017] 優(yōu)選地，前述步驟（4)中的滅菌條件為：溫度121°C、壓力0. IMPa條件下滅菌 18min〇
[0018] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下：
[0019] 1、利用本發(fā)明配制的生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)時間僅1.5-2個月，組培室的周轉(zhuǎn)效 率提高30%以上。
[0020] 2、本發(fā)明配制的生根培養(yǎng)基pH值較為穩(wěn)定，因此培養(yǎng)的鐵皮石斛生根苗質(zhì)量更 穩(wěn)定。本發(fā)明中，將香蕉泥和土豆泥的混合物加熱煮沸冷卻后，再和培養(yǎng)基其他組分混合定 容后，最后測定pH值。培養(yǎng)基滅菌后的pH變化較小，培養(yǎng)基穩(wěn)定培養(yǎng)的試管苗質(zhì)量更穩(wěn)定。

【具體實(shí)施方式】
[0021] 以下通過具體實(shí)施例來說明本發(fā)明的技術(shù)方案。本發(fā)明中所用的原料和試劑均市 售可得。下面結(jié)合實(shí)施例對鐵皮石斛試管苗生根培養(yǎng)基的配制進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0022] 以制備40升生根培養(yǎng)基為例，其制備過程如下：
[0023] (1)香蕉、土豆去皮，分別稱取香蕉4000克、土豆2000克，將香蕉、土豆切成小塊， 用攪拌機(jī)制成糊狀后加7-8升水加熱，加熱過程中，不斷攪拌防止粘鍋，直至煮沸，然后冷 卻至室溫。
[0024] (2)準(zhǔn)備一個體積為10升左右的容器，在容器中加入5-6升純水，分別量取 2000ml大量元素20倍母液、40ml微量元素1000倍母液、200ml鐵鹽200倍母液、40ml有機(jī) 物1000倍母液（以上均為優(yōu)化配方的母液）、40mlNAA0. 5mg/ml母液，倒入容器中；稱取40 克活性炭、800克白砂糖、200克瓊脂粉，分別倒入容器中并攪拌均勻。
[0025] (3)將前述制備好的（1)和（2)各組分倒入50L的容器中混合、攪拌，定容至40L， 調(diào)節(jié)pH值至6. 0,然后進(jìn)行分裝，每瓶灌裝量為60ml左右。最后在高溫121 °C，高壓0. IMPa 滅菌18分鐘，培養(yǎng)基冷卻凝固后使用。
[0026] 利用上述配制的生根培養(yǎng)基進(jìn)行鐵皮石斛試管苗培養(yǎng)，在1. 5-2個月的培養(yǎng)周期 內(nèi)試管苗根系數(shù)量4-5根，根到3cm以上，試管苗株高5cm以上。使得組培室的周轉(zhuǎn)效率提 高30%以上。
[0027] 常規(guī)的鐵皮石斛培養(yǎng)基配制步驟是：將包括香蕉、土豆在內(nèi)的所有組分混合、定容 后，調(diào)節(jié)pH值，再加熱、滅菌，這會造成培養(yǎng)基pH值因上述原因在滅菌后發(fā)生較大變化，因 此試管苗質(zhì)量因培養(yǎng)基pH值的差異而不穩(wěn)定。
[0028] 由于培養(yǎng)基中的香蕉泥和土豆泥是天然的添加物，所用香蕉和土豆產(chǎn)地或成熟度 的不同，使兩種添加物在加熱后的酸堿度發(fā)生不同的變化，致使經(jīng)過滅菌后，培養(yǎng)基的pH 值發(fā)生較大改變。
[0029] 本發(fā)明中，則是將香蕉泥和土豆泥的混合物加熱煮沸冷卻后，和培養(yǎng)基其他組分 混合定容，然后再測定pH值。因此，培養(yǎng)基滅菌后的pH值變化很小，從而使得培養(yǎng)的試管 苗質(zhì)量穩(wěn)定。
[0030] 上述本發(fā)明的實(shí)施例，并不用于限制本發(fā)明。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，本發(fā)明的 培養(yǎng)基配制方法可以有變化。凡在本發(fā)明的精神和原則內(nèi)，所作的等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)
【權(quán)利要求】
1. 一種鐵皮石斛試管苗生根培養(yǎng)基，其特征在于：所述生根培養(yǎng)基的配方為：基本培 養(yǎng)基 +0· 1-0. 5mg/LNAA+0. 4-L Og/L 活性炭 +100g/L 香蕉泥 +50g/L 土豆泥 +20g/L 白砂糖 +5g/L瓊脂粉； 所述基本培養(yǎng)基的配方為： 大量元素：硝酸鉀2200-2700 mg/L、硝酸銨500-600mg/L、七水硫酸鎂150-200mg/L、磷 酸二氫鉀 300-400 mg/L、二水氯化鈣 150-200mg/L ; 微量元素：一水硫酸錳15_20mg/L、七水硫酸鋅70-100mg/L、碘化鉀0· 8-1. Omg/L、六水 氯化鈷 〇· 02-0. 03mg/L ; 有機(jī)物：肌醇 80-100mg/L、維生素 Β1(λ 05-0. 15mg/L、維生素 Β6(λ 05-0. 15mg/L、甘氨酸 2-4mg/L ； 鐵鹽：七水硫酸亞鐵27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg/L。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛試管苗生根培養(yǎng)基的配制方法，包括如下步驟： (1) 配制基本培養(yǎng)基，按照權(quán)利要求1所述的質(zhì)量配比稱取去皮的香蕉和土豆，以及 NAA、活性炭、白砂糖、瓊脂粉； (2) 將前述稱取的香蕉、土豆制備成糊狀，然后加入水煮沸，冷卻至室溫； (3) 將前述配制好的基本培養(yǎng)基和稱取的NAA、活性炭、白砂糖、瓊脂粉各組分混合； ⑷將前述⑴和⑵制備得到的各組分混合、定容，調(diào)節(jié)pH值至5. 9-6.0,滅菌，冷卻 凝固，制得所述生根培養(yǎng)基。
3. 如權(quán)利要求2所述的一種鐵皮石斛試管苗生根培養(yǎng)基的配制方法，其特征在于，所 述步驟（4)中的滅菌條件為：溫度121°C、壓力0· IMPa條件下滅菌18min。
【文檔編號】A01H4/00GK104094851SQ201410351263
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月23日
【發(fā)明者】陳權(quán), 孫建, 肖建梅 申請人:上海農(nóng)業(yè)科技種子有限公司, 上海孫橋現(xiàn)代溫室種子種苗有限公司