一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法，包括九里香無(wú)菌葉片的消毒、愈傷組織的誘導(dǎo)、液體懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)化等步驟，本發(fā)明方法所制備的九里香懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，可以獲得較高的懸浮細(xì)胞，可以建立一個(gè)快速生長(zhǎng)的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系，維持其可持續(xù)開(kāi)發(fā)和利用。
【專利說(shuō)明】 一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種九里香懸浮培養(yǎng)的快繁方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]九里香,又稱:石辣椒、九秋香、九樹(shù)香等,蕓香科,iforraja exotica Z.,小喬木，九里香喜溫暖，最適宜生長(zhǎng)的溫度為20_32°C，不耐寒。常見(jiàn)于離海岸不遠(yuǎn)的平地、緩坡、小丘的灌木叢中。喜生于砂質(zhì)土、向陽(yáng)地方。九里香產(chǎn)于:云南、貴州、湖南、廣東、廣西、福建、海南、中國(guó)臺(tái)灣等地，以及亞洲其他一些熱帶及亞熱帶地區(qū)。產(chǎn)臺(tái)灣、福建、廣東、海南、廣西五省區(qū)南部。九里香葉含多種香豆精類化合物,從廣東、云南、海南、臺(tái)灣等各地產(chǎn)品中已分離得到:九里香甲素，九里香乙素，九里香丙素，長(zhǎng)葉九里香內(nèi)酯二醇，長(zhǎng)葉九里香醛，5，7-二甲氧基-8- (3’ -甲基-2’-酮基丁基)香豆精，海南九里香內(nèi)酯等，行氣活血；散瘀止痛；解毒消腫。主胃脘疼痛；跌撲腫痛；瘡癰；蛇蟲(chóng)咬傷。主治跌打腫痛，風(fēng)濕骨痛，胃痛，牙痛，破傷風(fēng)，流行性乙型腦炎，蟲(chóng)、蛇咬傷，局部麻醉。用于胃痛，風(fēng)濕痹痛；外治牙痛，跌撲腫痛，蟲(chóng)蛇咬傷。種植方法為種子繁殖，壓條繁殖，扦插繁殖。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法，由該方法所制備的九里香懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，可以獲得較高的懸浮細(xì)胞，建立一個(gè)快速生長(zhǎng)的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系，維持其可持續(xù)開(kāi)發(fā)和利用。
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的:
取九里香幼嫩的葉片，流水沖洗20min,超凈工作臺(tái)上0.1%的升萊處理8min,無(wú)菌水沖洗5次，吸水紙吸干，消毒處理過(guò)的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BA10mg/L+2mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養(yǎng)，溫度25°C，相對(duì)濕度75%，誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織放入液體培養(yǎng)基MSB+4-5Mmol/L2, 4-D+l-l.5Mmol/L6-BA進(jìn)行液體懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照45001x，溫度25°C，接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速110r/min，懸浮培養(yǎng)兩周后的出來(lái)的細(xì)胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養(yǎng)基中，30d后測(cè)定懸浮細(xì)胞的增長(zhǎng)率。
[0005]采用本發(fā)明制備的懸浮細(xì)胞增長(zhǎng)率高，周期短，產(chǎn)量大，污染小，利于大規(guī)模種植。
[0006]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。

【具體實(shí)施方式】
[0007]實(shí)施例1
取九里香幼嫩的葉片，流水沖洗20min,超凈工作臺(tái)上0.1%的升萊處理8min,無(wú)菌水沖洗5次，吸水紙吸干，消毒處理過(guò)的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BAlOmg/L+2mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養(yǎng)，溫度25°C，相對(duì)濕度75%，誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織放入液體培養(yǎng)基MSB+4Mmol/L2，4-D+lMmol/L6-BA進(jìn)行液體懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照45001x，溫度25°C，接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速110r/min，懸浮培養(yǎng)兩周后的出來(lái)的細(xì)胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養(yǎng)基中，30d后測(cè)定懸浮細(xì)胞的增長(zhǎng)率，增長(zhǎng)率提高50%。
[0008]實(shí)施例2
取九里香幼嫩的葉片，流水沖洗20min,超凈工作臺(tái)上0.1%的升萊處理8min,無(wú)菌水沖洗5次，吸水紙吸干，消毒處理過(guò)的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BAlOmg/L+2mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養(yǎng)，溫度25°C，相對(duì)濕度75%，誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織放入液體培養(yǎng)基MSB+5Mmol/L2，4-D+1.5Mmol/L6-BA進(jìn)行液體懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照45001x，溫度25°C，接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速110r/min，懸浮培養(yǎng)兩周后的出來(lái)的細(xì)胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養(yǎng)基中，30d后測(cè)定懸浮細(xì)胞的增長(zhǎng)率，增長(zhǎng)率提高45%。
[0009]實(shí)施例3
取九里香幼嫩的葉片，流水沖洗20min,超凈工作臺(tái)上0.1%的升萊處理8min,無(wú)菌水沖洗5次，吸水紙吸干，消毒處理過(guò)的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BAlOmg/L+2mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養(yǎng)，溫度25°C，相對(duì)濕度75%，誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織放入液體培養(yǎng)基MSB+4Mmol/L2，4-D+1.5Mmol/L6-BA進(jìn)行液體懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照45001x，溫度25°C，接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速110r/min，懸浮培養(yǎng)兩周后的出來(lái)的細(xì)胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養(yǎng)基中，30d后測(cè)定懸浮細(xì)胞的增長(zhǎng)率，增長(zhǎng)率提高47%。
【權(quán)利要求】
1.一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法，包括九里香無(wú)菌葉片的消毒、愈傷組織的誘導(dǎo)、液體懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)化，其主要步驟如下: (1)取九里香幼嫩的葉片，進(jìn)行消毒處理； (2)取步驟(I)消毒處理過(guò)的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAAl.0mg/L+6-BAlOmg/L+2mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養(yǎng)，溫度25 °C，相對(duì)濕度75%; (3)取步驟(2)誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織放入液體培養(yǎng)基MSB+4-5Mmol/L2, 4-D+l-l.5Mmol/L6-BA進(jìn)行液體懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照45001x，溫度 25 0C ； (4)取步驟(3)懸浮培養(yǎng)兩周后的出來(lái)的細(xì)胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養(yǎng)基中。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(O中所述九里香無(wú)菌葉片的獲得為取九里香幼嫩的葉片，流水沖洗20min，超凈工作臺(tái)上0.1%的升萊處理8min,無(wú)菌水沖洗5次,吸水紙吸干。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種九里香懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(3)中九里香懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的條件為無(wú)菌抽濾后接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速110r/min，培養(yǎng)周期為30d。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104255478SQ201410463221
【公開(kāi)日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月12日
【發(fā)明者】楊存 申請(qǐng)人:南京通澤農(nóng)業(yè)科技有限公司