一種快速繁殖白芨試管苗的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種快速繁殖白芨試管苗的方法，它是將白芨的種子經(jīng)萌發(fā)培養(yǎng)、原球莖分化培養(yǎng)、鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)和馴化后，得到白芨幼苗的方法。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法具有萌發(fā)率高、培養(yǎng)時(shí)間短、整齊性好和變異率小的優(yōu)點(diǎn)，具有良好的市場前景。
【專利說明】一種快速繁殖白芨試管苗的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物栽培【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種快速繁殖白芨試管苗的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 白藍(lán)，（學(xué)名：Bletilla striata)又名連及草、甘根、白給、箬蘭、朱蘭、紫蘭、紫 蕙、百笠，多年生草本球根植物（塊根），植株高18?60厘米。主要分布在中國、日本以及 緬甸北部。主要花期在春季，但依各地氣候之不同，晚冬至夏初都可能開花。白芨有廣泛的 藥用價(jià)值及園林價(jià)值。主要用于收斂止血，消腫生肌。花有紫紅、白、藍(lán)、黃和粉等色，可盆 栽室內(nèi)觀賞，亦可點(diǎn)綴于較為蔭蔽的花臺(tái)、花境或庭院一角。
[0003] 白芨喜溫暖、陰濕的環(huán)境，如野生山谷林下處。稍耐寒，長江中下游地區(qū)能露地栽 培。耐陰性強(qiáng)，忌強(qiáng)光直射，夏季高溫干旱時(shí)葉片容易枯黃。宜排水良好含腐殖質(zhì)多的沙壤 土。白芨常生長于較濕潤的石壁、苔蘚層中，常與灌木相結(jié)合，或者生長于林緣、草叢、有山 泉的地方，亦生于海拔1〇〇?3200米的常綠闊葉林下，棟樹林或針葉林下，在北京和天津有 栽培。白芨生長的石頭均是砂巖類，這樣白芨才能吸收到毛管水、從而牢牢地吸在上面。
[0004] 長期以來，白芨市場主要依靠野生資源。由于用途的廣泛、需求量的增加以及價(jià)格 的高漲，導(dǎo)致資源被掠奪式采挖，加上生態(tài)環(huán)境的破壞，野生資源日漸枯竭，白芨已成為我 國二級(jí)保護(hù)植物。因此，在快速繁殖白芨方面，有著的良好的市場前景。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題，是提供一種快速繁殖白芨試管苗的方法。
[0006] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0007] -種快速繁殖白芨試管苗的方法，它包括以下步驟：
[0008] (1)選取白芨人工授粉后120d的塑果，依次用去污劑和水清洗后移入接種室內(nèi)， 在超凈工作臺(tái)上用75v/v%酒精水溶液浸泡45?60s后,放置于氯化萊水溶液中浸泡10? 15min，得到白芨無菌塑果；
[0009] (2)將步驟（1)中所得的白芨無菌塑果在超凈臺(tái)上用解剖刀剖開，取出種子，接種 于液體培養(yǎng)基上，在22?25°C、80?120轉(zhuǎn)/min的條件下，培養(yǎng)45d，過濾得到白芨原球 莖；
[0010] (3)將步驟（2)中所得的白芨原球莖接種于原球莖分化培養(yǎng)基上，在25?28°C、 光照強(qiáng)度1000?15001UX、光照時(shí)間11?13h/d的條件下培養(yǎng)75d，得到白芨小苗；
[0011] (4)將步驟（3)中所得的白芨小苗接種到鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在25?28°C、光照 度1000?15001ux、光照時(shí)間11?13h/d的條件下培養(yǎng)70d，選取基部形成直徑4?7mm 鱗莖的白芨；
[0012] (5)將步驟⑷中選取的白芨用水清洗后，移置到鋪有馴化栽培基質(zhì)的苗床上，遮 陰80%，馴化6個(gè)月后，即可進(jìn)行大田移栽。
[0013] 其中，步驟（1)中，所述的去污劑為普通家用洗衣液；所述的氯化汞水溶液中，氯 化汞的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. I %?0. 15%。
[0014] 其中，步驟⑵中，所述的液體培養(yǎng)基為的組分為：N6培養(yǎng)基+萘乙酸0.5? I. Omg/L+ 鹿糖 25 ?30g/L，pH5. 6 ?5. 8。
[0015] 其中，步驟（2)中的培養(yǎng)條件為：在22?25°C條件下，前7d給予暗培養(yǎng)，之后光 照強(qiáng)度為1000?15001ux，光照時(shí)間11?13h/d。
[0016] 其中，步驟（3)中，所述的原球莖分化培養(yǎng)基的組分為：N6培養(yǎng)基+萘乙酸0.5? I. 5mg/L+ 鹿糖 25 ?30g/L+ 香蕉泥 60 ?80g/L+ 瓊脂 4. 5 ?6g/L，pH5. 6 ?5. 8。
[0017] 其中，步驟（4)中，所述的鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組分為：1/2MS培養(yǎng)基+萘乙酸1? 2mg/L+ 鹿糖 25 ?30g/L+ 香蕉泥 60 ?80g/L+ 瓊脂 4. 5 ?6g/L，pH 5. 6 ?5. 8 ;
[0018] 其中，步驟（5)中，所述的的馴化栽培基質(zhì)由田園土、泥炭土和蛭石以重量比1 :1 : 0.5組成。
[0019] 有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0020] 1、白芨塑果消毒后，置于超凈工作臺(tái)上用解剖刀剖開塑果，取出種子，接種到步驟 (2)中液體培養(yǎng)基上，采用N6培養(yǎng)基并配以生長素NAA 0. 5?I. Omg/L，在轉(zhuǎn)速為80?120 轉(zhuǎn)/min條件下進(jìn)行培養(yǎng)，與現(xiàn)有的白芨種子萌發(fā)培養(yǎng)基相比，該方法腋芽萌發(fā)時(shí)間縮短了 一倍，且萌發(fā)率高（80 %以上），整齊性好，變異率小于1%。
[0021] 2、步驟（4)所述的鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，采用1/2MS(大量元素減半）并配以生長素 NAAl?2mg/L，與傳統(tǒng)的培養(yǎng)技術(shù)相比，該方法能更好更快的促進(jìn)白芨小苗基部膨大，形成 鱗莖，70d內(nèi)即可使白芨組培苗的鱗莖膨大到直徑4?7_。

【具體實(shí)施方式】
[0022] 根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí) 施例所描述的內(nèi)容僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本 發(fā)明。
[0023] 實(shí)施例1 : 一種高效快速繁殖白芨試管苗的方法，該方法包括以下步驟：
[0024] (1)9月，剪取白芨人工授粉后120d的塑果，用去污劑清洗lOmin，再用流水沖洗 IOmin,帶入接種室，在超凈工作臺(tái)上用75v/v%酒精浸泡45?60s，再放置于氯化萊水溶液 中浸泡；
[0025] (2)將步驟⑴得到的白芨無菌塑果在超凈工作臺(tái)上用解剖刀剖開，取出種子，接 種于液體培養(yǎng)基上，在22?25°C、120轉(zhuǎn)/min的條件下，培養(yǎng)20d，種子開始萌發(fā)，45d后， 通過顯微鏡觀察，約85%的種子形成直莖0. 7?Imm的原球莖，變異率約為0. 8%，濾出原 球莖備用；其中，光照條件為：前7d給予暗培養(yǎng)，以后光照度為1000?15001uX、光照時(shí)間 12h/d ;所述的液體培養(yǎng)基組成為：萘乙酸0. 5mg/L+蔗糖30g/L+N6培養(yǎng)基+pH5. 8 ;
[0026] (3)將步驟（2)得到的白芨原球莖置于原球莖分化培養(yǎng)基中，在25?28°C、光照 度1000?15001UX、光照時(shí)間12h/d的條件下培養(yǎng)75d，白芨長至5cm高左右；其中，所述的 原球莖分化培養(yǎng)基組成為：萘乙酸I. 〇mg/L+蔗糖30g/L+N6培養(yǎng)基+香蕉泥80g/L+瓊脂 6g/L+pH5. 8 ；
[0027] (4)將步驟（3)中得到的白芨小苗接種到鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在25?28°C、光照 度1000?15001UX、光照時(shí)間12h/d的條件下培養(yǎng)70d，白芨的基部膨大形成鱗莖，經(jīng)過測 量，形成的鱗莖大多直徑為4?7_，平均直徑為5. 81_，這時(shí)可進(jìn)行馴化移栽，其中，所述 的鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為：萘乙酸2mg/L+蔗糖230g/L+香蕉泥80g/L+l/2MS培養(yǎng)基+瓊脂 6g/L+pH 5. 8 ；
[0028] (5)將步驟（4)得到的成苗從瓶內(nèi)取出用清水沖洗去除培養(yǎng)基后，移置鋪有馴化 栽培基質(zhì)的苗床上，并遮陰保濕，馴化6個(gè)月后，即可進(jìn)行大田移栽。
[0029] 實(shí)施例2 :
[0030] 與實(shí)施例1基本相同，步驟（2)、步驟（3)、步驟（4)中種子萌發(fā)，原球莖分化培養(yǎng)、 鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)三個(gè)階段分別以表1所列培養(yǎng)基組合進(jìn)行篩選，以優(yōu)選最適培養(yǎng)基組合配 方。表1說明如下：
[0031] ①培養(yǎng)基配方優(yōu)化主要是設(shè)計(jì)不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、激素濃度、天然附加物等對(duì)培 養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化設(shè)計(jì)，培養(yǎng)環(huán)境為溫度25°c、光照度1000?15001UX、光照時(shí)間12h/d培養(yǎng) 室內(nèi)。
[0032] ②針對(duì)生產(chǎn)，不同的培養(yǎng)階段設(shè)計(jì)了三組培養(yǎng)基配方，種子萌發(fā)階段主要觀察種 子萌發(fā)的快慢、長勢、顏色（翠綠為佳）等指標(biāo)判斷配方是否合理；原球莖分化階段主要觀 察白芨原球莖的分化率及分化后小苗高度（越高越好）、粗度（越粗越好）、玻璃化程度（越 低越好）等指標(biāo)判斷配方是否合理；鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)階段，主要通關(guān)觀察白芨苗基部的膨大 程度（越大越好）、玻璃化程度（越低越好）、顏色等指標(biāo)來判斷配方的好壞。通過觀察和 各項(xiàng)指標(biāo)的測定，并用"★"和"☆"的多少代表配方的好壞，★越多表示越好，☆比★要低 一個(gè)等次。
[0033] 表1培養(yǎng)基配方篩選
[0034]

【權(quán)利要求】
1. 一種快速繁殖白芨試管苗的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 選取白芨人工授粉后120d的塑果，依次用去污劑和水清洗后移入接種室內(nèi)，在 超凈工作臺(tái)上用75v/v%酒精水溶液浸泡45?60s后,放置于氯化萊水溶液中浸泡10? 15min，得到白芨無菌塑果； (2) 將步驟（1)中所得的白芨無菌塑果在超凈臺(tái)上用解剖刀剖開，取出種子，接種于液 體培養(yǎng)基上，在22?25°C、80?120轉(zhuǎn)/min的條件下，培養(yǎng)45d，過濾得到白芨原球莖； (3) 將步驟（2)中所得的白芨原球莖接種于原球莖分化培養(yǎng)基上，在25?28°C、光照 強(qiáng)度1000?15001ux、光照時(shí)間11?13h/d的條件下培養(yǎng)75d，得到白芨小苗； (4) 將步驟（3)中所得的白芨小苗接種到鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在25?28°C、光照度 1000?15001ux、光照時(shí)間11?13h/d的條件下培養(yǎng)70d，選取基部形成直徑4?7mm鱗莖 的白藍(lán)； (5) 將步驟（4)中選取的白芨用水清洗后，移置到鋪有馴化栽培基質(zhì)的苗床上，遮陰 80%，馴化6個(gè)月后，即可進(jìn)行大田移栽。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速繁殖白芨試管苗的方法，其特征在于，步驟（1)中，所 述的去污劑為普通家用洗衣液；所述的氯化汞水溶液中，氯化汞的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 1 %? 0· 15%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速繁殖白芨試管苗的方法，其特征在于，步驟（2)中，所述 的液體培養(yǎng)基為的組分為：N6培養(yǎng)基+萘乙酸0. 5?1. 0mg/L+蔗糖25?30g/L，pH5. 6? 5. 8〇
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速繁殖白芨試管苗的方法，其特征在于，步驟（2)中的培養(yǎng) 條件為：在22?25°C條件下，前7d給予暗培養(yǎng)，之后光照強(qiáng)度為1000?15001u X，光照時(shí) 間 11 ?13h/d。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速繁殖白芨試管苗的方法，其特征在于，步驟（3)中，所述 的原球莖分化培養(yǎng)基的組分為：N6培養(yǎng)基+萘乙酸0. 5?1. 5mg/L+蔗糖25?30g/L+香 蕉泥 60 ?80g/L+ 瓊脂 4. 5 ?6g/L，ρΗ5· 6 ?5. 8。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速繁殖白芨試管苗的方法，其特征在于，步驟（4)中，所述 的鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組分為：1/2MS培養(yǎng)基+萘乙酸1?2mg/L+蔗糖25?30g/L+香蕉泥 60 ?80g/L+ 瓊脂 4. 5 ?6g/L，pH 5. 6 ?5. 8 ;
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速繁殖白芨試管苗的方法，其特征在于，步驟（5)中，所述 的的馴化栽培基質(zhì)由田園土、泥炭土和蛭石以重量比1 :1 :〇. 5組成。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104255496SQ201410489589
【公開日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年9月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月23日
【發(fā)明者】史俊, 席剛俊, 徐超, 蔣新宇, 楊鶴同 申請(qǐng)人:江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院