擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因ugt79b2在提高植物抗鹽耐旱性中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因UGT79B2在提高植物抗鹽耐旱性中的應(yīng)用，其中所述糖基轉(zhuǎn)移酶基因UGT79B2的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示，其是通過RT-PCR技術(shù)從擬南芥中克隆的。本發(fā)明利用基因UGT79B2構(gòu)建植物過表達載體，進行植物轉(zhuǎn)基因操作，獲得轉(zhuǎn)基因植物。檢測表明轉(zhuǎn)基因植物的抗鹽耐旱性得到顯著提高，預(yù)示本發(fā)明實施后將會創(chuàng)造新型抗鹽耐旱植物，可用于后續(xù)的作物品種改良，對我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有重大意義。
【專利說明】擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2在提高植物抗鹽耐旱性中 的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一個糖基轉(zhuǎn)移酶基因及其應(yīng)用，尤其涉及一種擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2在提高植物抗鹽耐旱性中的應(yīng)用，屬于基因工程領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 糖基轉(zhuǎn)移酶是專門負責(zé)催化糖基化修飾反應(yīng)的酶類，它將活性糖基從供體（通 常是UDP-glucose)轉(zhuǎn)移到受體分子上。糖基化修飾往往會改變植物分子的生物活性、水 溶性、在細胞內(nèi)和整體植株的轉(zhuǎn)運特性、亞細胞定位以及與受體的相互識別與結(jié)合特性，另 外還能降低或消除內(nèi)源和外源物質(zhì)的毒性（Lim and Bowles, 2004 ;Bowles et al·，2006; Wang and Hou，2009)。因此，糖基轉(zhuǎn)移酶基因在調(diào)節(jié)植物細胞代謝平衡、維持植物正常生長 發(fā)育等方面有重要意義。例如，已有報道糖基轉(zhuǎn)移酶基因參與植物激素平衡調(diào)節(jié)、植物防御 反應(yīng)、植物次生代謝物合成以及植物信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等（Wang and Hou，2009)。
[0003] 生物界存在的糖基轉(zhuǎn)移酶按照所催化的底物性質(zhì)和序列相關(guān)性分屬94個不同 的家族。其中家族1包含的成員數(shù)量最多，與植物的關(guān)系最密切。在家族1中大多數(shù)基 因 C端具有一個由44個氨基酸組成的保守序列，即PSPG盒（plant secondary product glycosyltransferase box)。隨著擬南芥（Arabidopsis thaliana)全基因組測序的完成， 通過對PSPG盒的序列分析發(fā)現(xiàn)擬南芥中共有119個可能的糖基轉(zhuǎn)移酶，這些糖基轉(zhuǎn)移酶中 大部分的功能還不清楚。
[0004] 干旱是我國嚴(yán)重的自然災(zāi)害之一，它對農(nóng)作物的高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)產(chǎn)生很大的影響。鹽堿 是影響糧食產(chǎn)量的另一重要因素。據(jù)不完全統(tǒng)計，世界上現(xiàn)有耕地13. 7億平方公里，干旱 半干旱地區(qū)占世界土地面積的1/3,全球有8億公頃的土地受到不同程度的鹽漬化的影響 (Munns and Tester, 2008)，并且這一數(shù)目在還逐步擴大，我國大約有10%的耕地屬于鹽漬 化和次鹽漬化土地，其中大部分鹽漬化土地是由于干旱和半干旱地區(qū)的自然原因?qū)е麻L期 聚集鹽分而形成的。愈發(fā)嚴(yán)重的土地鹽漬化和干旱嚴(yán)重影響了全球農(nóng)作物的產(chǎn)量，使得糧 食生產(chǎn)和糧食安全成為全球關(guān)注的重要議題。因而，培育耐鹽耐旱作物已成為緩解糧食安 全問題的重要途徑。雖然利用傳統(tǒng)的育種方式培育抗鹽抗旱的品種已經(jīng)取得了一定的進 展，但是借助轉(zhuǎn)基因分子手段培育新種質(zhì)越來越受到重視（王均華等，2008)。轉(zhuǎn)基因種質(zhì) 的獲得依賴于抗鹽抗旱機制的研究，通過研究克隆抗鹽抗旱基因，從而獲得耐鹽耐旱性高 的種質(zhì)，對于推動農(nóng)業(yè)生產(chǎn)將具有重要意義。目前已了解的植物耐鹽耐旱相關(guān)功能基因主 要包括離子轉(zhuǎn)運蛋白、滲透保護物質(zhì)合成酶、水通道蛋白、抗氧化酶、鹽脅迫應(yīng)答轉(zhuǎn)錄因子 等。這些研究發(fā)現(xiàn)為了解植物耐鹽機制作出了重要貢獻，獲得的轉(zhuǎn)基因植物也具有一定的 耐鹽性。然而目前的問題是，已有的發(fā)現(xiàn)可能只是反映了整個耐旱耐鹽機制中的某一個方 面。植物的耐旱耐鹽性涉及一系列復(fù)雜的生理生化反應(yīng)或過程，往往是多基因相互作用的 結(jié)果，目前的研究現(xiàn)狀也要求科研工作者繼續(xù)挖掘新型的耐旱耐鹽基因，更好地為大幅度 提高重要作物在整個生長周期的耐鹽耐旱性奠定技術(shù)基礎(chǔ)。
[0005] UGT79B2是擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶家族1中的一個成員，目前它的基因序列已公開于 核酸序列數(shù)據(jù)庫中。但是經(jīng)過檢索，擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2在增強植物抗鹽耐旱 性中的應(yīng)用目前未見報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] (1)本發(fā)明的目的
[0007] 針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供了 一種擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2在提高植物抗鹽耐旱性中的應(yīng)用。
[0008] (2)實現(xiàn)本發(fā)明的具體技術(shù)方案
[0009] 本發(fā)明所述擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2在提高植物抗鹽耐旱性中的應(yīng)用。
[0010] 其中：所述糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。所述植 物優(yōu)選是十字花科植物，進一步優(yōu)選擬南芥、芥菜、油菜、白菜或甘藍。
[0011] 本發(fā)明利用SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示的引物序列，通過RT-PCR技術(shù)從擬 南芥中克隆糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2,然后利用該基因構(gòu)建植物過表達載體，進行植物轉(zhuǎn)基 因操作，獲得轉(zhuǎn)基因植物。檢測表明轉(zhuǎn)基因植物的耐鹽抗旱性得到顯著提高。
[0012] (3)本發(fā)明實施后可能帶來的有益效果
[0013] 實驗證實，應(yīng)用本發(fā)明所述擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2進行植物轉(zhuǎn)基因操 作，可以顯著提高轉(zhuǎn)基因植物的抗鹽性（見附圖1、附圖2和附圖3)和耐旱性（見附圖4、 附圖5和附圖6)。預(yù)示本發(fā)明實施后將會創(chuàng)造新型耐旱抗鹽植物，可用于后續(xù)的作物品種 改良，對我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有重大意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0014] 圖1.含鹽培養(yǎng)基垂直培養(yǎng)實驗。其中WT為擬南芥對照植物，0E7和0E18為糖基 轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2的兩個過表達株系。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后均勻鋪在MS培 養(yǎng)基中垂直生長3天，然后選擇根長長度一致的幼苗移栽到含0、100mM、125mM、150mMNaCl 的MS培養(yǎng)基中生長14天，統(tǒng)計對照植物和過表達株系的根長。在不同濃度的NaCl培養(yǎng)基 上，能夠看到過表達株系的根長要比野生型的長。表明UGT79B2基因具有明顯的抗鹽作用。
[0015] 圖2.含鹽培養(yǎng)基中水平培養(yǎng)實驗。其中WT為擬南芥對照植物，0E7和0E18為糖基 轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2的兩個過表達株系。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后均勻鋪在MS培 養(yǎng)基中水平培養(yǎng)14天，然后將生長狀態(tài)一致的幼苗移栽到含0mM、125mM、150mM、175mMNaCl 的MS培養(yǎng)基中生長14天，觀察對照野生型和過表達株系的生長狀態(tài)。在不同濃度的NaCl 培養(yǎng)基上，過表達株系的生長狀態(tài)要比野生型好，野生型葉片多有白化，而過表達體葉片多 數(shù)保持綠色。表明UGT79B2基因具有明顯的抗鹽作用。
[0016] 圖3. 土壤中澆鹽水實驗。其中WT為擬南芥對照植物，0E7和0E18為糖基轉(zhuǎn)移酶 基因 UGT79B2的兩個過表達株系。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后點種在培養(yǎng)盤中，正常 培養(yǎng)三周，停止?jié)菜ㄍＶ節(jié)菜耙惶?，在培養(yǎng)盤中充分澆水后過夜。第二天早上，將培養(yǎng) 盤中多余的水分倒出，停止?jié)补啵?。隨后兩周進行鹽水澆灌，第四周的第一天在培養(yǎng)盤中充 分澆灌含150mM NaCl的鹽水1次。第五周的第一天在培養(yǎng)盤中充分澆灌含200mM NaCl的 鹽水1次。第六周停止?jié)阐}水，并觀察表型。在澆灌鹽水實驗中，觀察到過表達株系的生長 狀態(tài)明顯好于野生型，野生型植株已經(jīng)接近死亡，而過表達體仍然生長良好。表明UGT79B2 基因具有明顯的抗鹽作用。
[0017] 圖4.含甘露醇培養(yǎng)基垂直培養(yǎng)實驗。其中WT為擬南芥對照植物，0E7和0E18為糖 基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2的兩個過表達株系。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后均勻鋪在MS 培養(yǎng)基中垂直生長3天，然后選擇根長長度一致的幼苗移栽到含0mM、200mM、250mM、300mM 甘露醇的MS培養(yǎng)基中生長14天，統(tǒng)計對照野生型和過表達株系的根長。在不同濃度的甘 露醇培養(yǎng)基上，能夠觀察到過表達株系的根長要比野生型的長。表明UGT79B2基因具有明 顯的抗旱作用。
[0018] 圖5.含甘露醇培養(yǎng)基中水平培養(yǎng)實驗。其中WT為擬南芥對照植物，0E7和0E18為 糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2的兩個過表達株系。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后均勻鋪在 MS培養(yǎng)基中水平培養(yǎng)14天，然后將生長狀態(tài)一致的幼苗移栽到含0mM、300mM、350mM、400mM 甘露醇的MS培養(yǎng)基中生長14天，觀察對照野生型和過表達株系的生長狀態(tài)。在不同濃度 的甘露醇培養(yǎng)基上，過表達株系多數(shù)葉片保持綠色，生長狀態(tài)要比野生型好。表明UGT79B2 基因具有明顯的抗旱作用。
[0019] 圖6. 土壤中干旱實驗。其中WT為擬南芥對照植物，0E7和0E18為糖基轉(zhuǎn)移酶基 因 UGT79B2的兩個過表達株系。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后點種在培養(yǎng)盤中，正常培 養(yǎng)三周，停止?jié)菜ㄍＶ節(jié)菜耙恢?，在培養(yǎng)盤中充分澆水后過夜。第二天早上，將培養(yǎng)盤 中多余的水分倒出，停止?jié)补啵榱朔乐褂酌缭诳諝庵兄苯痈稍?，在停止?jié)菜谝惶炫囵B(yǎng) 盤上蓋上透明的塑料蓋。干旱處理兩周左右，再在培養(yǎng)盤中充分澆水，正常培養(yǎng)三天后觀察 幼苗生長的恢復(fù)情況。在土壤干旱實驗中，觀察到過表達株系生長良好，而野生型對照已經(jīng) 接近死亡。表明UGT79B2基因具有明顯的抗旱作用。

【具體實施方式】
[0020] 實施例1克隆擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2
[0021] 1.擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2的克隆
[0022] 通過公開網(wǎng)站http://www. cazy. org獲得UGT79B2基因的cDNA序列。根據(jù)cDNA 序列設(shè)計引物，正向引物為79B2-F:5'-GGATCCCAGAAATGGGTGGTTTGAAGTTTC-3'，反向引物為 79B2-R:5'-GAGCTCTACCAACCTTATTGATCACTCCCT-3'。利用 TRIzol 試劑盒從擬南芥葉片提取 RNA，通過RT-PCR方法擴增UGT79B2基因的全長cDNA序列。將cDNA克隆的過程是先經(jīng)過 BamHI和Sac I酶切，之后連入相應(yīng)酶切的pBluescript II SK(+)載體（從寶生物工程有 限公司購得）中，構(gòu)建成測序中間載體，稱為PK79B2,然后用載體進行基因全長PCR擴增和 BamHI和Sac I酶切驗證，最后進行序列測定，驗證克隆序列的正確性。
[0023] 2.擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2的序列信息與特性分析
[0024] UGT79B2基因的編碼區(qū)cDNA為1368bp，編碼455個氨基酸的50. 6kDa蛋白，C端 具有44個氨基酸的PSPG盒，為植物次生代謝物糖基轉(zhuǎn)移酶所共同具有的保守序列。
[0025] 3.擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2受鹽和干旱的誘導(dǎo)表達分析
[0026] 為了調(diào)查UGT79B2基因表達是否受鹽、干旱等逆境條件的誘導(dǎo)，第一階段的工作 首先構(gòu)建PUGT79B2啟動子 ：：⑶S表達載體。做法是先克隆UGT79B2啟動子區(qū)域1600bp 的片段，然后構(gòu)建到pBI 121 (⑶S表達載體，從寶生物工程有限公司購得），取代該載體上的 35S啟動子，即獲得了 pUGT79B2啟動子：：⑶S表達載體。第二階段的工作是將該載體轉(zhuǎn)入 農(nóng)桿菌GV3101，借助于農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化擬南芥，對轉(zhuǎn)基因植株進行篩選獲得pUGT79B2啟動子：： ⑶S純系植株。第三階段工作是⑶S染色分析。將兩周大小的pUGT79B2啟動子 ：：⑶S轉(zhuǎn) 基因株系做逆境脅迫處理，一種處理是用150mM NaCl處理植株311、611、1211、2411，另一種處 理是用300禮甘露醇處理植株311、611、1211、2411。然后對處理的植株進行^3染色分析，不處 理的轉(zhuǎn)基因株系作為對照同樣進行⑶S染色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在NaCl、甘露醇處理之后，UGT79B2 基因的表達明顯上調(diào)。說明了 UGT79B2基因受鹽和干旱的誘導(dǎo)，參與植物的抗鹽耐旱反應(yīng)。
[0027] 實施例2擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2的轉(zhuǎn)基因應(yīng)用
[0028] 1.含有UGT79B2編碼區(qū)cDNA表達載體的構(gòu)建
[0029] 上述實施例1中獲得了含有UGT79B2編碼區(qū)cDNA的pK79B2中間測序載體，該 載體經(jīng)過BamHI和Sac I雙酶切后，獲得帶有酶切粘性末端的UGT79B2cDNA基因片段。 PBI121載體（從寶生物工程有限公司購得）也用同樣的BamHI和Sac I雙酶切，回收帶有 CaMV35S啟動子的載體片段。將UGT79B2cDNA基因片段與載體片段用連接酶進行連接，得到 以CaMV35S啟動子驅(qū)動糖基轉(zhuǎn)移酶基因過表達的植物表達載體，稱為pB79B2。
[0030] 2.農(nóng)桿菌介導(dǎo)植物的遺傳轉(zhuǎn)化
[0031] 農(nóng)桿菌GV3101具有侵染植物和轉(zhuǎn)移基因的能力，故將構(gòu)建的UGT79B2植物表達載 體（PB79B2)轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，然后進行PCR驗證和酶切驗證。利用浸花法（本領(lǐng)域公開的常規(guī) 方法），使含有植物表達載體的農(nóng)桿菌GV3101浸染擬南芥花蕾。待其長出的角果成熟之后， 收集T1代種子并在篩選培養(yǎng)基（MS培養(yǎng)基附加30mg/L卡那霉素）上進行篩選，將能夠正 常生長的綠色轉(zhuǎn)化苗移栽至營養(yǎng)土中培養(yǎng)，分別收獲其T2代種子再進行下一輪的卡那霉 素篩選，挑選出綠苗：白苗為3 :1的培養(yǎng)皿。將此培養(yǎng)皿上的綠苗移栽，單株收獲種子（T3 代）。對每一單株的種子部分用于卡那霉素平皿篩選，直到選出在篩選培養(yǎng)基上為全綠的株 系，即為純合轉(zhuǎn)基因株系。
[0032] 3.轉(zhuǎn)基因植株分子鑒定
[0033] 對上述轉(zhuǎn)基因植株進行基因表達水平的檢測。分別提取轉(zhuǎn)基因植株和野生型 植株的RNA，反轉(zhuǎn)錄后進行RT-PCR擴增，分析過表達植株和野生型植株的基因表達差異。 UGT79B2在過表達植株中的表達量都明顯高于野生型植株。利用兩個UGT79B2表達量高的 株系，即79B20E7、79B20E18,來進行后續(xù)的工作。
[0034] 4. UGT79B2基因的抗鹽抗旱性功能驗證
[0035] (1)各株系在添加 NaCl的培養(yǎng)基中種子萌發(fā)情況。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅 菌后均勻鋪在含100mM、125mM、150mM NaCl的MS培養(yǎng)基中黑暗低溫（4°C )處理3天，然后 在正常情況下培養(yǎng)，培養(yǎng)一周并統(tǒng)計它們的萌發(fā)情況。在l〇〇mM NaCl中，對照野生型的萌 發(fā)率略低于過表達株系，在125mM和150mM NaCl中，對照野生型的萌發(fā)率明顯低于過表達 株系。表明UGT79B2基因具有抗鹽的作用。
[0036] (2) NaCl培養(yǎng)基中的子葉轉(zhuǎn)綠實驗。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后均勻鋪在含 0、100mM、125mM、150mM NaCl的MS培養(yǎng)基中生長10天，統(tǒng)計子葉的綠化率。在lOOmMNaCl 培養(yǎng)基中對照野生型略低于2個過表達株系，但是在含125mM NaCl和含150mM NaCl的培 養(yǎng)基中，過表達株系的子葉轉(zhuǎn)綠比例明顯比野生型多。表明UGT79B2基因具有抗鹽的作用。
[0037] (3)NaCl培養(yǎng)基中的垂直培養(yǎng)實驗。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后均勻鋪 在MS培養(yǎng)基中垂直生長3天，然后選擇根長長度一致的幼苗移栽到含0、100mM、125mM、 150mMNaCl的MS培養(yǎng)基中生長14天，統(tǒng)計對照野生型和過表達株系的根長。在不同濃度的 NaCl培養(yǎng)基上，過表達株系的根的生長明顯超過野生型（見圖1)。表明UGT79B2基因具有 明顯的抗鹽作用。
[0038] (4)含鹽培養(yǎng)基中水平培養(yǎng)實驗。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后均勻鋪在MS 培養(yǎng)基中水平培養(yǎng)14天，然后將生長狀態(tài)一致的幼苗移栽到含OmM、125mM、150mM、175mM NaCl的MS培養(yǎng)基中生長14天，觀察對照野生型和過表達株系的生長狀態(tài)。在不同濃度的 NaCl培養(yǎng)基上，過表達株系的生長狀態(tài)要比野生型好，野生型葉片多有白化，而過表達體葉 片多數(shù)保持綠色（見圖2)。表明UGT79B2基因具有明顯的抗鹽作用。
[0039] (5) 土壤中澆鹽水實驗。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后點種在培養(yǎng)盤中，正常 培養(yǎng)三周，停止?jié)菜ㄍＶ節(jié)菜耙恢?，在培養(yǎng)盤中充分澆水后過夜。第二天早上，將培養(yǎng) 盤中多余的水分倒出，停止?jié)补啵ｋS后兩周進行鹽水澆灌，第四周的第一天在培養(yǎng)盤中充 分澆灌含150mM NaCl的鹽水1次。第五周的第一天在培養(yǎng)盤中充分澆灌含200mM NaCl的 鹽水1次。第六周停止?jié)阐}水，并觀察表型。在澆灌鹽水實驗中，觀察到過表達株系的生長 狀態(tài)明顯好于野生型，野生型植株已經(jīng)接近死亡，而過表達體仍然生長良好（見圖3)。表明 UGT79B2基因具有明顯的抗鹽作用。
[0040] (6)各株系在添加甘露醇的培養(yǎng)基中種子萌發(fā)情況。甘露醇添加在培養(yǎng)基中可以 模擬干旱環(huán)境，是一種常用的檢測植物抗旱性的方法。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后均 勻鋪在含150mM、200mM、300mM甘露醇的MS培養(yǎng)基中黑暗低溫（4°C )處理3天，然后在正常 情況下培養(yǎng)，培養(yǎng)一周并統(tǒng)計它們的萌發(fā)情況。在低濃度甘露醇培養(yǎng)基中對照野生型的萌 發(fā)率略低于過表達株系0E-7、0E-18,在300mM的甘露醇培養(yǎng)基中，過表達株系的萌發(fā)率明 顯高于對照野生型，表明UGT79B2基因具有增強抗旱性的作用。
[0041] (7)甘露醇培養(yǎng)基中的水平培養(yǎng)實驗。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后均勻鋪在 含0、200mM、250mM、300mM甘露醇的MS培養(yǎng)基中生長10天，統(tǒng)計子葉的綠化率。在不同濃 度的甘露醇培養(yǎng)基上，過表達株系的子葉轉(zhuǎn)綠都明顯比野生型多。表明UGT79B2基因具有 明顯的抗旱作用。
[0042] (8)甘露醇培養(yǎng)基中的垂直培養(yǎng)實驗。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后均勻鋪在 MS培養(yǎng)基中垂直生長3天，然后選擇根長長度一致的幼苗移栽到含0、200mM、250mM、300mM 甘露醇的MS培養(yǎng)基中生長14天，統(tǒng)計對照野生型和過表達株系的根長。在不同濃度的甘 露醇培養(yǎng)基上，過表達株系的根長要比野生型長（見圖4)。表明UGT79B2基因具有明顯的 抗旱作用。
[0043] (9)含甘露醇培養(yǎng)基中水平培養(yǎng)實驗。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后均勻鋪在 MS培養(yǎng)基中水平培養(yǎng)14天，然后將生長狀態(tài)一致的幼苗移栽到含0、300mM、350mM、400mM甘 露醇的MS培養(yǎng)基中生長14天，觀察對照野生型和過表達株系的生長狀態(tài)。在不同濃度的 甘露醇培養(yǎng)基上，過表達株系多數(shù)葉片保持綠色，生長狀態(tài)要比野生型好（見圖5)。表明 UGT79B2基因具有明顯的抗旱作用。
[0044] (10) 土壤中干旱實驗。選取生長狀態(tài)一致的種子，滅菌后點種在培養(yǎng)盤中，正常培 養(yǎng)三周，停止?jié)菜ㄍＶ節(jié)菜耙恢?，在培養(yǎng)盤中充分澆水后過夜。第二天早上，將培養(yǎng)盤 中多余的水分倒出，停止?jié)补啵榱朔乐褂酌缭诳諝庵兄苯痈稍?，在停止?jié)菜牡谝惶炫?養(yǎng)盤上蓋上透明的塑料蓋。干旱處理兩周左右，再在培養(yǎng)盤中充分澆水，正常培養(yǎng)三天后觀 察幼苗生長的恢復(fù)情況。在土壤干旱實驗中，觀察到過表達株系生長良好，而野生型對照已 經(jīng)接近死亡（見圖6)。表明UGT79B2基因具有明顯的抗旱作用。
【權(quán)利要求】
1. 擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2在提高植物抗鹽耐旱性中的應(yīng)用。
2. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述糖基轉(zhuǎn)移酶基因 UGT79B2的核苷酸序 列如SEQ ID No. 1所示。
3. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述植物是十字花科植物。
4. 如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：所述十字花科植物是擬南芥、芥菜、油菜、白 菜或甘藍。
【文檔編號】A01H5/00GK104195150SQ201410498089
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年9月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月25日
【發(fā)明者】侯丙凱, 李攀, 李燕潔 申請人:山東大學(xué)