駿棗脫毒組培快繁技術(shù)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)繁育技術(shù),尤其是一種涉及新疆地區(qū)駿棗工業(yè)化育苗脫毒組培快繁的技術(shù)。一種駿棗脫毒組培快繁技術(shù)，主要包括以下操作處理工藝步驟:(1)駿棗棗樹莖段外殖體快速啟動(dòng)；(2)駿棗莖尖脫毒培養(yǎng)；(3)駿棗脫毒組培苗增殖；(4)駿棗脫毒組培苗生根培養(yǎng)。本發(fā)明是一種技術(shù)合理、操作簡(jiǎn)便，適用于工業(yè)化育苗，大大提高成活率，有效防止棗瘋病的發(fā)生、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的駿棗脫毒組培快繁技術(shù)。
【專利說(shuō)明】駿棗脫毒組培快繁技術(shù)

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)繁育技術(shù)，尤其是一種涉及新疆地區(qū)駿棗工業(yè)化育苗脫毒組培 快繁的技術(shù)。

【背景技術(shù)】
[0002] 新疆幅員遼闊，水土光熱資源豐富，晝夜溫差大，具備發(fā)展棗樹產(chǎn)業(yè)得天獨(dú)厚的自 然條件。駿棗含糖量高，干物質(zhì)積累多，品質(zhì)上乘，果品暢銷，價(jià)格不斷攀升，種植棗樹成了 新疆廣大職工群眾致富的重要途徑。
[0003] 駿棗原產(chǎn)山西，現(xiàn)為南疆和十四師主栽品種之一，該品種適應(yīng)性較強(qiáng)，產(chǎn)量高而穩(wěn) 定。果大，適宜制干，品質(zhì)優(yōu)良，耐貯耐運(yùn)。駿棗傳統(tǒng)的繁殖方法主要有根蘗苗和嫁接苗，它 們的不足之處是需要繁殖材料多，繁殖系數(shù)低，不能周年生產(chǎn)，容易傳播病毒。而用組織培 養(yǎng)方法快速繁殖脫毒苗，具有整株的遺傳一致性，生長(zhǎng)健壯，根系發(fā)達(dá)、移栽成活率高，果品 品質(zhì)好，產(chǎn)量高等優(yōu)點(diǎn)，是發(fā)展優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、高效商品化駿棗生產(chǎn)的重要手段。
[0004] 棗病毒病致病力高，危害嚴(yán)重，不僅削弱樹勢(shì)，導(dǎo)致產(chǎn)量和果實(shí)品質(zhì)下降，甚至引 起棗樹急劇衰退，嚴(yán)重限制駿棗產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。樹體一旦感病，終生攜帶。傳統(tǒng)的病害防治技 術(shù)和栽培技術(shù)難以治愈。我區(qū)多數(shù)棗樹主栽品種對(duì)棗病毒病敏感，防治棗病毒病，培育駿棗 脫毒苗已成為我區(qū)棗產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要保證。鑒于棗樹重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值及棗病毒病的 嚴(yán)重破壞性，國(guó)內(nèi)外從20世紀(jì)40年代開始就將棗病毒病作為棗樹病害研究的焦點(diǎn)，先后研 究棗病毒病的病原及其存在部位、主要傳播途徑、棗病毒病病原的接種及檢測(cè)方法等。我國(guó) 對(duì)駿棗病毒病的研究基本上處于空白狀態(tài)。
[0005] 新疆兵團(tuán)計(jì)劃棗樹種植面積達(dá)到150萬(wàn)畝，而新疆每年只能滿足不到一半的苗木 需求，其余要靠從內(nèi)地調(diào)運(yùn)，駿棗苗木缺口較大，成為制約駿棗產(chǎn)業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵。由于對(duì)棗 苗的需求大，造成對(duì)棗樹苗木質(zhì)量的要求不嚴(yán)格，許多地方存在品種混雜，病蟲害嚴(yán)重甚 至有可能引進(jìn)帶有棗園毀滅性的棗瘋病苗木等問(wèn)題，以致駿棗品質(zhì)差，產(chǎn)量低，遠(yuǎn)距離運(yùn)輸 成活率低等不利因素存在。因此，采用駿棗脫毒技術(shù)、組織培養(yǎng)低成本工廠化快繁技術(shù)，批 量生產(chǎn)，周年供應(yīng)無(wú)病毒、根系發(fā)達(dá)、移栽成活率高的優(yōu)質(zhì)棗苗，是發(fā)展優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、高效商 品化駿棗生產(chǎn)的重要手段，也是促進(jìn)駿棗產(chǎn)業(yè)發(fā)展中的急需要解決的問(wèn)題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種技術(shù)合理、操作簡(jiǎn)便，適用于工業(yè)化育苗，大大提高成 活率，有效防止棗瘋病的發(fā)生、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的駿棗脫毒組培快繁技術(shù)。
[0007] 本發(fā)明公開了一種駿棗脫毒組培快繁技術(shù)，其特征在于主要包括以下操作處理工 藝步驟：
[0008] (1)、駿棗棗樹莖段外殖體快速啟動(dòng)：
[0009] 5?6月份采1?2年生根蘗苗，取3?5cm帶棗腋芽的棗樹莖段，清洗、殺菌消 毒，經(jīng)45?50°C熱水處理50?60min后，使材料中的病毒鈍化，將上述駿棗棗樹莖段進(jìn)行 啟動(dòng)培養(yǎng)，所述啟動(dòng)過(guò)程中用到的培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 8?I. 2mg/L+NAA0. 15?0. 25mg/L ;
[0010] ⑵、駿棗莖尖脫毒培養(yǎng)：
[0011] 取上述啟動(dòng)培養(yǎng)后的棗樹莖段，在解剖鏡下剝離〇. 5?0. 7cm的莖尖分生組織進(jìn) 行培養(yǎng)，脫毒苗培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 8?I. 2mg/L+NAA0. 25?0? 35mg/L ;得到的組培苗在 37?39°C下進(jìn)行熱處理40?60d后，剝?nèi)?. 1?0. 3cm的莖尖，所得莖尖試管苗為脫除棗 瘋病的脫毒苗；
[0012] (3)、駿棗脫毒組培苗增殖：
[0013] 以MS作為基本培養(yǎng)基，進(jìn)行所述駿棗脫毒苗的增殖組培快繁，駿棗脫毒苗的最佳 增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1. 3?I. 5mg/L+IBA0. 7?0. 9mg/L ;在所述增殖培養(yǎng)基中添加有機(jī) 物，有機(jī)物分別為：甘氨酸1. 9?2. lmg/L、VBl為0? 5?0? 7mg/L、VB6為0? 7?0? 8mg/L、 肌醇 95 ?105mg/L、煙酸 0? 45 ?0? 55mg/L ;
[0014] (4)、駿棗脫毒組培苗生根培養(yǎng)：
[0015] 當(dāng)光照強(qiáng)度為1500?2500Lx，環(huán)境溫度為24?26°C時(shí)，1/2MS培養(yǎng)基條件下，優(yōu) 化的生長(zhǎng)素為：IBA1. 4 ?I. 6mg/L+NAA0. 08 ?0. 12mg/L+IAA0. 45 ?0. 55mg/L 時(shí)，經(jīng)過(guò) 4 ? 7代的增殖繼代培養(yǎng)，對(duì)培養(yǎng)后的駿棗組培脫毒苗進(jìn)行生根繁育。
[0016] 所述的第（1)步驟中，所述的殺菌消毒最好是利用升汞進(jìn)行5min?7min殺菌消 毒。
[0017] 所述第⑴步驟中所述的啟動(dòng)過(guò)程中用到的培養(yǎng)基最好為MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. 2mg/L〇
[0018] 所述第（2)步驟中所述脫毒苗培養(yǎng)基最好為MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
[0019] 所述第（3)步驟中所述駿棗脫毒苗的最佳增殖培養(yǎng)基最好為MS+6-BA 1.5mg/ L+IBAO. 8mg/L。
[0020] 所述步驟（3)中各種有機(jī)物的濃度的最佳組合為：甘氨酸為2. Omg/L、VBl為 0? 6mg/L、肌醇為 100mg/L、VB6 為 0? 75mg/L、煙酸為 0? 5mg/L。
[0021] 所述第⑷步驟中所述優(yōu)化的生長(zhǎng)素濃度和配比為IBAL 5mg/L+NAA0. Img/ L+IAAO. 5mg/L〇
[0022] 下面通過(guò)實(shí)驗(yàn)分別對(duì)各步驟進(jìn)行具體說(shuō)明：
[0023] -、駿棗外植體快速啟動(dòng)技術(shù)：
[0024] 駿棗無(wú)性系的建立是組織培養(yǎng)、工廠化生產(chǎn)的基礎(chǔ)，而高效、大量無(wú)菌組培苗是迅 速形成規(guī)?；a(chǎn)的前提。駿棗是多年生木本植物，由于駿棗的生長(zhǎng)特性及木質(zhì)化程度、腋 芽生長(zhǎng)結(jié)構(gòu)為無(wú)性系建立設(shè)置了很多困難，所以研究篩選出快速啟動(dòng)的培養(yǎng)基是駿棗脫毒 種苗工廠化生產(chǎn)的重要步驟。
[0025] 試驗(yàn)材料為優(yōu)良棗樹品種駿棗，取材于新疆農(nóng)墾科學(xué)院林園所棗樹苗圃基地。試 驗(yàn)采用組織培養(yǎng)方法對(duì)外植體進(jìn)行培養(yǎng)，再采用對(duì)組培苗莖尖加熱方法進(jìn)行脫毒苗培養(yǎng)。
[0026] 外植體初始培養(yǎng)的啟動(dòng)快慢與當(dāng)時(shí)取材的年齡、時(shí)間和部位有關(guān)：我們?cè)谕庵搀w 采取時(shí)間上做了 3?4月份的硬枝水培后的棗芽、5?6月份萌發(fā)的棗頭枝、8?9月份的棗 頭枝研究；外植體采用的部位做了棗頭芽和帶腋芽莖段的研究；外植體取材來(lái)源做了 1?2 年生根蘗苗萌發(fā)的枝條、1?2年生嫁接苗萌發(fā)的枝條、6年左右樹齡萌發(fā)的棗頭研究。
[0027] 根據(jù)細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素效能與不同配比對(duì)駿棗快速啟動(dòng)培養(yǎng)的影響，我們選擇 以MS為基本培養(yǎng)，采用兩種激素6 -芐基腺嘌呤（6 - BA)和萘乙酸（NAA)的不同配比對(duì) 駿麥快速啟動(dòng)的試驗(yàn)。
[0028] 在相同的培養(yǎng)條件下進(jìn)行外植體培養(yǎng)，以5?6月份萌發(fā)的棗頭枝容易啟動(dòng)成 功，成芽率較高；1?2年生根蘗苗萌發(fā)的枝條啟動(dòng)比較容易；接入帶腋芽莖段的會(huì)從腋芽 處萌發(fā)出健壯的芽，比較適于外植體的培養(yǎng)；駿棗外植體的啟動(dòng)培養(yǎng)在MS+6 - BAL Omg/ L+NAAO. 2mg/L中生長(zhǎng)的比較好，并且轉(zhuǎn)接到同培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好。
[0029] 因此，在駿棗外植體啟動(dòng)培養(yǎng)過(guò)程中，5?6月份采1?2年生根蘗苗進(jìn)行啟動(dòng) 培養(yǎng)比較好，最適外植體部位是帶腋芽莖段，最適外植體啟動(dòng)培養(yǎng)基為MS+6 - BAL Omg/ L+NAAO. 2mg/L，最適脫毒苗培養(yǎng)基為MS+6 - BAL 0mg/L+NAA0. 3mg/L。試驗(yàn)取得了良好的效 果，使駿棗組培苗在35d左右得到52%的分化率，40d內(nèi)增殖倍數(shù)在4,脫毒苗莖葉生長(zhǎng)良 好，為進(jìn)一步進(jìn)行增殖奠定了良好的基礎(chǔ)。
[0030] 下面是對(duì)駿棗離體培養(yǎng)的外植體啟動(dòng)研究試驗(yàn)。
[0031] (一）、材料與方法
[0032] I. 1材料與來(lái)源：
[0033] 試驗(yàn)材料為優(yōu)良棗樹品種駿棗，取材于新疆農(nóng)墾科學(xué)院林園所棗樹苗圃基地。
[0034] 1. 2試驗(yàn)方法
[0035] 試驗(yàn)采用組織培養(yǎng)方法對(duì)外植體進(jìn)行培養(yǎng)，再采用對(duì)組培苗莖尖加熱方法進(jìn)行脫 毒苗培養(yǎng)。
[0036] 1. 2. 1外植體的培養(yǎng)：把帶有棗芽的枝條去掉大葉，截成3_5cm長(zhǎng)的莖段，用稀釋 的洗潔精溶液洗滌15min，然后用自來(lái)水沖洗干凈，放在超凈工作臺(tái)上，在無(wú)菌條件下，用 70%的乙醇消毒30s，無(wú)菌水沖洗，用0. 1 %升汞消毒若干分鐘，再用無(wú)菌水沖洗4?5遍， 將接觸消毒液的截面切掉，接入培養(yǎng)基中。
[0037] 試驗(yàn)主要對(duì)外植體消毒過(guò)程中升汞的消毒時(shí)間、外植體采取時(shí)間、取材來(lái)源、取材 部位、培養(yǎng)基成分等因素進(jìn)行了研究。
[0038] 外植體采取時(shí)間：3?4月份的硬枝水培后的棗芽，5?6月份萌發(fā)的棗頭枝，8? 9月份的棗頭枝（詳見表1-1)。外植體取材來(lái)源：1?2年生根蘗苗萌發(fā)的枝條，1?2年 生嫁接苗萌發(fā)的枝條，6年左右樹齡萌發(fā)的棗頭（詳見表1-2)。取材部位選擇：棗頭芽和帶 腋芽莖段（詳見表1-3)。
[0039] 外植體消毒時(shí)升萊的殺菌時(shí)間：3, 5, 7min (詳見表1-4);培養(yǎng)基的選擇：以MS為 基本培養(yǎng)基，瓊脂0. 5%，白糖30g/L，;pH值為6. 5,采用兩種激素6 -芐基腺嘌呤（6 - BA) 和萘乙酸（NAA)的不同配比（詳見表1-5)。培養(yǎng)條件為溫度白天28°C，夜間25°C，光照強(qiáng) 度為2500Lx，試驗(yàn)中每瓶接5個(gè)芽，35d周轉(zhuǎn)一次。
[0040] 1. 2. 2脫毒苗的培養(yǎng)：采用熱處理與莖尖培養(yǎng)結(jié)合脫毒法。先把誘導(dǎo)出的試管苗 在38°C光照培養(yǎng)箱內(nèi)熱處理60d。將經(jīng)過(guò)熱處理的試管苗在無(wú)菌條件下剝?nèi)?. 1?0. 3cm 的莖尖，在啟動(dòng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)出試管苗。檢測(cè)莖尖試管苗，證明完全脫除了棗瘋病。
[0041] 快速啟動(dòng)培養(yǎng)基的選擇：以MS為基本培養(yǎng)基，瓊脂0.6 %，白糖30g/L，；pH值為 6. 3,采用兩種激素6 -芐基腺嘌呤（6 - BA)和萘乙酸（NAA)的不同配比（詳見表6)。培 養(yǎng)條件為25?28°C，光照強(qiáng)度為2500Lx，試驗(yàn)中每瓶接5個(gè)芽，40d切段增殖培養(yǎng)。
[0042] (二）、結(jié)果與分析
[0043] 2. 1不同取材時(shí)間對(duì)外植體啟動(dòng)的影響
[0044] 由表1-1可以看出，在相同的培養(yǎng)條件下進(jìn)行外植體培養(yǎng)，以5?6月份萌發(fā)的棗 頭枝容易啟動(dòng)成功，成芽率較高。
[0045] 表1-1外植體取材時(shí)間不同對(duì)啟動(dòng)培養(yǎng)的影響
[0046]

【權(quán)利要求】
1. 一種駿棗脫毒組培快繁技術(shù)，主要包括以下操作處理工藝步驟： (1) 、駿棗棗樹莖段外殖體快速啟動(dòng)： 5?6月份采1?2年生根蘗苗，取3?5cm帶棗腋芽的棗樹莖段，清洗、殺菌消毒，經(jīng) 45?50°C熱水處理50?60min后，使材料中的病毒鈍化，將上述駿棗棗樹莖段進(jìn)行啟動(dòng)培 養(yǎng)，所述啟動(dòng)過(guò)程中用到的培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 8?1. 2mg/L+NAA0. 15?0. 25mg/L ; (2) 、駿棗莖尖脫毒培養(yǎng)： 取上述啟動(dòng)培養(yǎng)后的棗樹莖段，在解剖鏡下剝離〇. 5?0. 7cm的莖尖分生組織進(jìn)行培 養(yǎng)，脫毒苗培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 8?1. 2mg/L+NAA0. 25?0? 35mg/L ;得到的組培苗在37? 39°C下進(jìn)行熱處理40?60d后，剝?nèi)?. 1?0. 3cm的莖尖，所得莖尖試管苗為脫除棗瘋病 的脫毒苗； (3) 、駿棗脫毒組培苗增殖： 以MS作為基本培養(yǎng)基，進(jìn)行所述駿棗脫毒苗的增殖組培快繁，駿棗脫毒苗的最佳增殖 培養(yǎng)基為MS+6-BA 1. 3?1. 5mg/L+IBA0. 7?0. 9mg/L ;在所述增殖培養(yǎng)基中添加有機(jī)物， 有機(jī)物分別為：甘氨酸1. 9?2. lmg/L、VBl為0? 5?0? 7mg/L、VB6為0? 7?0? 8mg/L、肌醇 95 ?105mg/L、煙酸 0? 45 ?0? 55mg/L ; (4) 、駿棗脫毒組培苗生根培養(yǎng)： 當(dāng)光照強(qiáng)度為1500?2500Lx，環(huán)境溫度為24?26°C時(shí)，1/2MS培養(yǎng)基條件下，優(yōu)化的 生長(zhǎng)素為：IBA1. 4 ?1. 6mg/L+NAA0. 08 ?0? 12mg/L+IAA0. 45 ?0? 55mg/L 時(shí)，經(jīng)過(guò)4 ?7代 的增殖繼代培養(yǎng)，對(duì)培養(yǎng)后的駿棗組培脫毒苗進(jìn)行生根繁育。
2. 如權(quán)利要求1所述的駿棗脫毒組培快繁技術(shù)，其特征在于所述的第（1)步驟中，所述 的殺菌消毒是利用升萊進(jìn)行5min?7min殺菌消毒。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的駿棗脫毒組培快繁技術(shù)，其特征在于所述第（1)步驟中所 述的啟動(dòng)過(guò)程中用到的培養(yǎng)基為MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
4. 如權(quán)利要求1或2所述的駿棗脫毒組培快繁技術(shù)，其特征在于所述第（2)步驟中所 述脫毒苗培養(yǎng)基為 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
5. 如權(quán)利要求3所述的駿棗脫毒組培快繁技術(shù)，其特征在于所述第（2)步驟中所述脫 毒苗培養(yǎng)基為 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
6. 如權(quán)利要求1或2所述的駿棗脫毒組培快繁技術(shù)，其特征在于所述第（3)步驟中所 述駿棗脫毒苗的最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1. 5mg/L+IBA0. 8mg/L。
7. 如權(quán)利要求5所述的駿棗脫毒組培快繁技術(shù)，其特征在于所述第（3)步驟中所述駿 棗脫毒苗的最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1. 5mg/L+IBA0. 8mg/L。
8. 如權(quán)利要求1或2所述的駿棗脫毒組培快繁技術(shù)，其特征在于所述步驟（3)中各種 有機(jī)物的濃度的最佳組合為：甘氨酸為2. 0mg/L、VB1為0. 6mg/L、肌醇為100mg/L、VB6為 0? 75mg/L、煙酸為 0? 5mg/L。
9. 如權(quán)利要求7所述的駿棗脫毒組培快繁技術(shù)，其特征在于所述步驟（3)中各種有 機(jī)物的濃度的最佳組合為：甘氨酸為2. 0mg/L、VB1為0. 6mg/L、肌醇為100mg/L、VB6為 0? 75mg/L、煙酸為 0? 5mg/L。
10. 如權(quán)利要求1或2所述的駿棗脫毒組培快繁技術(shù)，其特征在于所述第（4)步驟中所 述優(yōu)化的生長(zhǎng)素濃度和配比為IBA1. 5mg/L+NAA0. lmg/L+IAA0. 5mg/L。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104381126SQ201410526726
【公開日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年10月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月6日
【發(fā)明者】付超, 周雪玲, 張凡, 華東來(lái) 申請(qǐng)人:新疆農(nóng)墾科學(xué)院