家禽用植物乳桿菌膠囊的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種植物乳桿菌膠囊的制備方法，屬于微生物飼料添加劑【技術(shù)領(lǐng)域】。植物乳桿菌膠囊由壁材、植物乳桿菌、凍干保護劑、水蘇糖、羊肚菌酶解粉組成；壁材由酶解大豆分離蛋白、殼聚糖、黃原膠、卡拉膠、甘油和海藻糖組成，上述各物質(zhì)配成混合溶液時的濃度為：酶解大豆分離蛋白7-10％、殼聚糖1-2％、黃原膠1-3％、卡拉膠0.1-0.5％、甘油0.3-1％，海藻糖0.5-2％。本發(fā)明方法制備的植物乳桿菌膠囊增強了膠囊的耐胃酸性，具有很好的腸溶性，并且能夠有效抑制病原菌生長提高免疫力，降低畜禽發(fā)病率，提升養(yǎng)殖質(zhì)量和效益。CGMCC NO940520140702
【專利說明】家禽用植物乳桿菌膠囊的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種乳酸菌微膠囊的制備方法，屬于微生物飼料添加劑【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 抗生素等抗菌藥物在畜牧業(yè)的廣泛應(yīng)用，極大地促進了養(yǎng)殖畜牧業(yè)的發(fā)展。目前， 95%以上的預(yù)混料產(chǎn)品中都添加了抗菌藥物。但其弊端也日益顯著：畜牧產(chǎn)品中藥物殘留 嚴重，直接危害人體的健康；抗生素的濫用導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性，造成抗藥菌株的擴散和 蔓延；同時，動物體內(nèi)菌群失調(diào)，動物的免疫力下降，養(yǎng)殖環(huán)境惡化，疾病增多；引發(fā)動物內(nèi) 源性感染與二重交叉感染等一系列的嚴重問題。歐盟于2006年開始全面禁止在飼料中添 加抗生素，減少或禁止在飼料中添加抗菌藥物；美國也開始禁止抗生素的飼用。當前，規(guī)范 并減少養(yǎng)殖過程中抗菌藥物的使用，開發(fā)安全綠色的飼料添加劑作為其替代品已被世界各 國普遍關(guān)注。
[0003] 乳酸菌類微生態(tài)飼料添加劑是抗菌藥物的替代品中重要的一種。乳酸菌是腸道正 常菌群中有益菌的杰出代表之一，具有重要的生理和保健功能：它可以拮抗病原微生物，調(diào) 節(jié)動物消化道微生物區(qū)系平衡：活化免疫系統(tǒng)，增強免疫力，防止多種疾病和不良反應(yīng)的發(fā) 生；抑制腫瘤的發(fā)生，保護動物健康；合成營養(yǎng)物質(zhì)，產(chǎn)生消化酶類，提高動物消化酶的活 性，改善維生素的代謝，中和腸毒素，降低胺、氨等有害物質(zhì)的產(chǎn)生等。然而，乳酸菌在生長 過程中不形成芽抱，抗逆性較差，對外界環(huán)境，如氧、水分、高溫、機械擠壓、熱激及胃酸等都 非常敏感，在實際的應(yīng)用中難以保證有效的活菌存活數(shù)量。因此，如何篩選出優(yōu)良的乳酸菌 種并延長其商品活性，一直是世界各地乳酸菌生產(chǎn)廠商的研發(fā)重點。
[0004] 膠囊技術(shù)是保護菌體活力最為有效和實用的方法之一。將乳酸菌進行膠囊化，可 以將菌體與外界的不良環(huán)境分開，免受飼料中微量元素損害，減緩制粒過程中溫度和壓力 的影響；形成固體顆粒，利于在預(yù)混料中的均勻分布，也有利于儲存和運輸：采用腸溶性壁 材后，還能保證盡可能多的菌體到達腸道，真正起到保健和治療的功效。
[0005] 如：專利CN1613455中公開了一種采用三層保護層包被的益生菌微膠囊；專利 CN1569043中公開了一種采用海藻酸鈉、氯化鈣為壁材進行流化床噴霧包被制成的乳酸 菌微膠囊。上述專利在一定程度上提高了益生菌或乳酸菌的存活率，但不可避免的是， CN1613455中氫化油脂溫度超過55°C，會對芯材內(nèi)部的乳酸菌造成損傷，同時外層的控釋 包衣材料，使乳酸菌在腸道中不能快速地釋放，會導(dǎo)致一部分乳酸菌被排出體外，降低乳酸 菌的利用率。CN1569043中采用海藻酸鈉作為壁材，是目前微膠囊包被中經(jīng)常使用的，但海 藻酸鈉本身持水能力差，由海藻酸鈉包被的微膠囊凝膠易于失水硬化破裂，此外海藻酸鈉 包被的微膠囊不耐胃酸，使微膠囊過胃能力差。名稱為一種含有多層微膠囊乳酸菌的乳酸 菌粉的制備方法，專利申請?zhí)枮?01310743621. 4,其特征在于：將海洋魚皮膠原低聚肽粉 20份?30份，朽1檬酸5份?20份與多層微膠囊乳酸菌粉40份?50份混合攪拌。一種乳 酸菌微膠囊及其制備方法和用途，申請?zhí)枺?00810135259. 1，該發(fā)明也公開了一種乳酸菌微 膠囊及其制備方法和用途。該乳酸菌微膠囊是由外層壁材、凍干保護劑和乳酸菌組成。
[0006] 綜上所述，現(xiàn)有的微膠囊包被技術(shù)或者在其實施過程中會對乳酸菌產(chǎn)生較大的破 壞作用，或者制成的微膠囊對胃部環(huán)境的耐受性較差，這些都不利于微膠囊產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)化 和應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種植物乳桿菌膠囊的制備方法。
[0008] 所述植物乳桿菌膠囊由壁材、植物乳桿菌、凍干保護劑、水蘇糖、羊肚菌酶解粉組 成。
[0009] 所述的壁材由酶解大豆分離蛋白、殼聚糖、黃原膠、卡拉膠、甘油和海藻糖組成； 上述各物質(zhì)配成混合溶液時的濃度為：酶解大豆分離蛋白7-10%、殼聚糖1-2%、黃原膠 1-3%、卡拉膠 0. 1-0. 5%、甘油 0. 3-1 %，海藻糖 0. 5-2%。
[0010] 植物乳桿菌膠囊的制備方法步驟如下：
[0011] 1)制備芯材：向經(jīng)發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)的植物乳桿菌發(fā)酵液中添加發(fā)酵液質(zhì)量3-5% 的水蘇糖和5-8 %的羊肚菌酶解粉，然后與凍干保護劑溶液混合，-50°C下預(yù)凍0. 5h，然后 在真空冷凍干燥機中凍干l〇_18h，凍干后研磨粉碎制成芯材；
[0012] 所述發(fā)酵液與凍干保護劑溶液的比例優(yōu)選為1:1.4-0.8 ;所述凍干保護劑溶液由 脫脂奶粉、海藻糖、麥芽糊精溶液組成；三種溶液的體積比優(yōu)選為脫脂奶粉：海藻糖：麥芽 糊精=3:1: 0? 5 ;
[0013] 所述脫脂奶粉、海藻糖、麥芽糊精溶液的濃度優(yōu)選為：脫脂奶粉5%，海藻糖1%， 麥芽糊精2%。
[0014] 2)包被：將芯材懸浮在流化床中，壁材噴霧包被，從一個噴頭中噴入殼聚糖、甘油 和海藻糖的混合液，從另一個噴頭中噴入黃原膠、卡拉膠和酶解大豆分離蛋白的混合液，噴 霧速度控制相同，包被過程中流化床內(nèi)溫度在25-38°C之間，30分鐘后即形成膠囊。
[0015] 所述酶解大豆分離蛋白的制備方法為：配制濃度為10-13%大豆分離蛋白溶液 加熱到30-45°C，調(diào)整pH到3-5,加入大豆分離蛋白重量0. 1-1 %的酸性蛋白酶保溫酶解 0. 5-1. 5小時，酶解后溶液噴霧干燥獲得酶解大豆分離蛋白。
[0016] 所述羊肚菌酶解粉制備方法如下：
[0017] (1)羊肚菌子實體干燥粉碎；
[0018] (2)水溶均質(zhì)：將粉碎的羊肚菌子實體加入不銹鋼筒中，加入子實體3-6倍重量的 水，浸泡3-5小時，然后將此羊肚菌子實體液通過膠體磨，膠體磨操作條件為：調(diào)整膠體磨 定子與轉(zhuǎn)子的間隙為〇. 5-1微米，膠體磨流量為0. 4-1噸/小時；
[0019] (3)升溫酶解：將經(jīng)過膠體磨處理的羊肚菌子實體液混合液轉(zhuǎn)移到不銹鋼酶解罐 中加熱到50-60°C，調(diào)整pH到4. 5-6. 0,加入羊肚菌子實體重量0. 05-0. 1 %的纖維素酶、 0. 01-0. 1 %的￠-葡聚糖酶、0.01-0. 1%的蛋白酶，保溫酶解0.5-1. 5小時，酶解過程中不 斷攪拌。
[0020] (4)干燥：酶解后的醪液過濾后干燥獲得羊肚菌酶解粉。
[0021] 所述干燥可以采用常規(guī)噴霧干燥、冷凍干燥等干燥形式。
[0022] 所述凍干保護劑由脫脂奶粉、海藻糖、麥芽糊精組成。
[0023] 本發(fā)明膠囊產(chǎn)品包含的植物乳桿菌優(yōu)選菌株tlj-2014,該菌株已于2014年7月 2日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址為：中國北 京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，郵編：100101)，分類命名為植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum)，保藏號為 CGMCC NO. 9405。
[0024] 本發(fā)明中植物乳桿菌CGMCC No. 9405菌株生理特點如下：在顯微鏡下觀察，該菌 株為短桿狀，革蘭氏染色呈陽性，無鞭毛，不產(chǎn)芽孢；在固體培養(yǎng)基上，該菌菌落為白色，表 面光滑，致密，形態(tài)為圓形，邊緣較整齊。
[0025] 理化特征為：過氧化氫酶（_)，明膠液化（_)，吲哚實驗（+)，運動性（_)，發(fā)酵產(chǎn)氣 (-)，亞硝酸鹽還原（-)，發(fā)酵產(chǎn)氣（-)，產(chǎn)硫化氫氣體（-)，？114.01?3培養(yǎng)基中生長（+)。 ((_)表示反應(yīng)結(jié)果呈陰性，（+)表示反應(yīng)結(jié)果呈陽性。）
[0026] 本發(fā)明的膠囊產(chǎn)品作為飼料添加劑可以廣泛應(yīng)用于各類動物的飼料中，但優(yōu)選用 于禽類動物的飼料中。本發(fā)明膠囊產(chǎn)品在飼料中的添加量為3-5 %，或每只畜禽每日使用 10-20 克。
[0027] 有益效果：
[0028] 本發(fā)明提供的乳酸菌微膠囊，其壁材中添加了改性大豆分離蛋白，改性大豆分離 蛋白比大豆分離蛋白乳化能力提高25%、膠凝能力提高15-25%，改性大豆分離蛋白黃原 膠和卡拉膠及殼聚糖的配合使用，凝膠強度提高了 10%以上，增強了膠囊的耐胃酸性；
[0029] 本發(fā)明膠囊采用改性大豆分離蛋白，具有很好的腸溶性，膠囊到達腸道后在1-1. 5 小時內(nèi)即可完全崩解釋放出植物乳桿菌，并迅速增殖成為優(yōu)勢菌群，從而達到抑制病原菌 生長等作用。
[0030] 本發(fā)明利用羊肚菌酶解粉復(fù)配而成，經(jīng)過酶解處理，不僅使其營養(yǎng)成分有效釋放 到產(chǎn)品中，同時也使得羊肚菌的特殊香味通過酶解得到有效釋放，使產(chǎn)品兼具羊肚菌的營 養(yǎng)特性。

【具體實施方式】
[0031] 實施例1
[0032] 本發(fā)明所用植物乳桿菌CGMCC No. 9405的選育過程如下：
[0033] 原始出發(fā)菌種一試管活化一硫酸二乙酯（DES)誘變一亞硝基胍（NTG)誘變一等離 子體誘變一平板初篩一搖瓶復(fù)篩一傳代穩(wěn)定性試驗。
[0034] 本發(fā)明所采用的出發(fā)菌株在MRS葡萄糖培養(yǎng)基中，其乳酸的生產(chǎn)速率為1.5g/L/ d，當培養(yǎng)基pH為3. 5時幾乎停止生長，對亞硝酸鈉的分解速率為0. 34mg/h/kg白菜。出發(fā) 菌株由李政采集于寧夏鹽池縣育肥羊場的青儲飼料，采集時間2013年9月15日。
[0035] 為了提高其乳酸生產(chǎn)速率、耐酸能力和亞硝酸鹽的分解速率，依次采用DES和NTG 技術(shù)對該菌種進行誘變，誘變后菌株采用MRS碳酸鈣平板進行初篩，然后采用500mL搖瓶發(fā) 酵，生物傳感器分析儀對高產(chǎn)菌進行復(fù)篩，選育優(yōu)良的植物乳桿菌菌株，然后做傳代實驗， 評價其遺傳穩(wěn)定性。
[0036] 植物乳桿菌tlj-2014遺傳穩(wěn)定性結(jié)果表明：經(jīng)過連續(xù)傳代十次，各項性能指標都 比較穩(wěn)定，遺傳性較好，性狀沒有回復(fù)，因此把植物乳桿菌tlj-2014作為選育得到的目的 菌株。
[0037] 經(jīng)驗證發(fā)現(xiàn)：該誘變菌株的乳酸生產(chǎn)速率可以達到35g/L/d，該菌株經(jīng)過71小時 發(fā)酵后乳酸濃度達到95g/L ;能夠在pH為I. 80的條件下存活。降解亞硝酸鹽速度快，分解 能力達到9. 8mg/h/kg(自然發(fā)酵過程亞硝酸鹽積累的速率大約為I. lmg/h/kg)，能夠耐1% 膽鹽。
[0038] 1)DES誘變選育
[0039] a.在超凈臺上取試管斜面上的植物乳桿菌L 一環(huán)（出發(fā)菌），接入裝有50mL培養(yǎng) 基MRS (無瓊脂，葡萄糖20g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)ia左右，使菌體處于 對數(shù)生長前期。
[0040] b?取5mL菌液，5000rpm離心IOmin收集菌體，用生理鹽水洗滌2次。
[0041] c.用pH7. 0磷酸緩沖液稀釋成IO7個/mL菌懸液。
[0042] d.取32mL pH7. 0的磷酸鉀緩沖液、8mL菌懸液、0. 4mL DES在預(yù)先放入轉(zhuǎn)子的 150mL三角瓶中充分混合，使DES最終濃度為1 % (v/v)。
[0043] e?在 37°C搖床中 150rpm 反應(yīng) 30min，取 ImL 混合液，加入 0? 5mL 25% Na2S2O3 溶 液中止反應(yīng)。
[0044] f.適當稀釋，取最后稀釋度的菌液0.2mL，涂布于碳酸鈣篩選培養(yǎng)基（含100g/L 葡萄糖的碳酸鈣MRS培養(yǎng)基）平皿中。在37°C培養(yǎng)2?3天后，采用影印法將該篩選平板 的菌株轉(zhuǎn)印到PH為1. 5、1. 8和2. 0的LPHMRS培養(yǎng)基（低pH值改性MRS培養(yǎng)基）上和亞 硝酸鈉篩選培養(yǎng)基（單一氮源為2g/L亞硝酸鈉的改性MRS篩選培養(yǎng)基）上。
[0045] g.在37°C培養(yǎng)2?3天后，挑選菌落較大，分別能在LPHMRS培養(yǎng)基、亞硝酸鈉篩 選培養(yǎng)基上生長并且在碳酸鈣篩選培養(yǎng)基上。經(jīng)初步篩選，挑取出的菌落命名為植物乳桿 菌L1。
[0046] 2)亞硝基胍誘變
[0047] a.在超凈臺上取試管斜面上的植物乳桿菌Ll 一環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS (無 瓊脂）（葡萄糖濃度為60g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)ia左右，使菌體處于 對數(shù)生長前期。
[0048] b?取5mL菌液5000rpm離心IOmin收集菌體，用生理鹽水洗滌2次。
[0049] c.用pH6. 0磷酸緩沖液稀釋成IO7個/mL菌懸液。
[0050] d?取IOmL菌懸液轉(zhuǎn)移至IOOmL三角瓶中，加入IOmg的NTG，配制成終濃度為IOmg/ mL的NTG溶液，并加入4-5滴丙酮，以利于NTG溶解。
[0051] e.在37°C下200rpm振蕩反應(yīng)30min，5000rpm離心IOmin收集菌體，用無菌生理 鹽水洗滌數(shù)次，中止反應(yīng)。
[0052] f.適當稀釋，取最后稀釋度的菌液0.2mL，涂布于碳酸鈣篩選培養(yǎng)基（含100g/L 葡萄糖的碳酸鈣MRS培養(yǎng)基）平皿中。在37°C培養(yǎng)2?3天后，采用影印法將該篩選平板 的菌株轉(zhuǎn)印到PH為1. 5、1. 8和2. 0的LPHMRS培養(yǎng)基（低pH值改性MRS培養(yǎng)基）上和亞 硝酸鈉篩選培養(yǎng)基（單一氮源為2g/L亞硝酸鈉的改性MRS篩選培養(yǎng)基）上。
[0053] g.挑選菌株方法：挑選菌落較大，分別能在LPHMRS培養(yǎng)基、亞硝酸鈉篩選培養(yǎng)基 上生長并且在碳酸鈣篩選培養(yǎng)基上。經(jīng)初步篩選，挑取100支符合以上條件的菌落。
[0054] 3)搖瓶復(fù)篩
[0055] a.在超凈臺上分別取各試管斜面上的植物乳桿菌一環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基 MRS(無瓊脂）（葡萄糖濃度為100g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)15h左右，使菌 體處于對數(shù)生長中期。
[0056] b.分別取5mL菌液，接入裝有50mL碳酸鈣篩選液體培養(yǎng)基（含250g/L葡萄糖的 碳酸鈣MRS培養(yǎng)基）平皿中、pH為L 5、L 8和2. 0的LPHMRS液體培養(yǎng)基（低pH值改性MRS 培養(yǎng)基）和亞硝酸鈉液體篩選培養(yǎng)基（單一氮源為2g/L亞硝酸鈉的改性MRS篩選培養(yǎng)基） 上（注：采用250mL三角瓶）。200rpm，37°C培養(yǎng)3-4天，每天分別檢測碳酸鈣篩選液體培 養(yǎng)基中L-乳酸產(chǎn)生速率、LPHMRS液體培養(yǎng)基中的生物量和亞硝酸鈉液體篩選培養(yǎng)基中亞 硝酸鹽的消耗速率。發(fā)酵結(jié)束后，比較100株菌種的碳酸鈣篩選液體培養(yǎng)基中L-乳酸產(chǎn)生 速率、LPHMRS液體培養(yǎng)基中的生物量和亞硝酸鈉液體篩選培養(yǎng)基中亞硝酸鹽的消耗速率。
[0057] c.選擇兼具高L-乳酸產(chǎn)生速率、耐受低pH(該菌種僅能在最低為pHl. 8的培養(yǎng)基 中生長）和亞硝酸鹽的消耗速率高的菌株，將其命名為L2菌。
[0058] 4)遺傳穩(wěn)定性試驗
[0059] 將L2菌在斜面上連續(xù)十次傳代，并用搖瓶復(fù)篩的方法檢測每次傳代后的發(fā)酵 情況。實驗發(fā)現(xiàn)，在斜面上連續(xù)十次傳代，該菌種性狀沒有明顯變化，各項性能指標都正 常，說明該菌種的遺傳穩(wěn)定性較強。菌株命名為植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum) tlj-2014。
[0060] 5) 5L發(fā)酵罐試驗
[0061] a.取斜面上的植物乳桿菌L2 -環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS (無瓊脂）（葡萄糖 濃度為150g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12h左右，使菌體處于對數(shù)生長中期。
[0062] b.將對數(shù)期的菌種接入裝有3L MRS液體培養(yǎng)基（初始葡萄糖為150g/L)的5L發(fā) 酵罐中。接種量為10%，37°C下IOOrpm培養(yǎng)8小時，對數(shù)前期溶氧控制10% (通氣0.5L/ min)，后期厭氧培養(yǎng)63小時。發(fā)酵結(jié)束后，植物乳桿菌L2的乳酸產(chǎn)量達到95g/L。
[0063] c.將對數(shù)期的菌種接入裝有3L pH為1. 8的LPHMRS液體培養(yǎng)基（初始葡萄糖為 5(^/1)的51發(fā)酵罐中。接種量為10%，371：下100印111培養(yǎng)8小時，對數(shù)前期溶氧控制10% (通氣0. 5L/min)，后期厭氧，整個過程用0. 5mol/L的氫氧化鈉將發(fā)酵液pH控制在1. 8,總 培養(yǎng)時間為48小時。發(fā)酵結(jié)束后，檢測植物乳桿菌L2的生物量為2. 5g/L，說明植物乳桿菌 L2能夠在pHl. 8的環(huán)境中生存。
[0064] d.將對數(shù)期的菌種接入裝有3L亞硝酸鈉液體篩選培養(yǎng)基（單一氮源為2g/L亞 硝酸鈉的改性MRS篩選培養(yǎng)基）的5L發(fā)酵罐中。接種量為10%，37°C下IOOrpm培養(yǎng)8小 時，對數(shù)前期溶氧控制10% (通氣〇.5L/min)，后期厭氧，發(fā)酵過程根據(jù)亞硝酸鹽的消耗速 率流加20g/L的亞硝酸鈉溶液，培養(yǎng)2-3天。發(fā)酵結(jié)束后，計算發(fā)酵過程植物乳桿菌L2對 亞硝酸鈉的降解速率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在該條件下，L2對亞硝酸鈉的降解速率可以達到563mg/ h/L〇
[0065] 實施例2
[0066] 植物乳桿菌膠囊產(chǎn)品由壁材、植物乳桿菌、凍干保護劑、水蘇糖、羊肚菌酶解粉組 成。
[0067] 所述的壁材由酶解大豆分離蛋白、殼聚糖、黃原膠、卡拉膠、甘油和海藻糖組成；上 述各物質(zhì)配成混合溶液時的濃度分別為：酶解大豆分離蛋白10%、殼聚糖1 %、黃原膠3%、 卡拉膠0. 1 %、甘油0.5%，海藻糖0.5%。
[0068] 酶解大豆分離蛋白的制備方法為：配制濃度為10-13%大豆分離蛋白溶液加熱到 30-33°C，調(diào)整pH到3,加入大豆分離蛋白重量0. 2%的酸性蛋白酶保溫酶解I. 5小時，酶解 后溶液噴霧干燥獲得酶解大豆分離蛋白。
[0069] 植物乳桿菌為保藏編號CGMCC NO. 9405菌種。
[0070] 所述羊肚菌酶解粉的制備方法如下：
[0071] (1)羊肚菌子實體干燥粉碎；
[0072] (2)水溶均質(zhì)：將粉碎的羊肚菌子實體加入不銹鋼筒中，加入子實體3倍重量的 水，浸泡5小時，然后將此羊肚菌子實體液通過膠體磨，膠體磨操作條件為：調(diào)整膠體磨定 子與轉(zhuǎn)子的間隙為〇. 6±1微米，膠體磨流量為0. 5噸/小時；
[0073] (3)升溫酶解：將經(jīng)過膠體磨處理的羊肚菌子實體液混合液轉(zhuǎn)移到不銹鋼酶解罐 中加熱到50°C，調(diào)整pH到6.0,加入羊肚菌子實體重量0.05%的纖維素酶、0.01%的￠-葡 聚糖酶、0. 1 %的蛋白酶，保溫酶解1. 5小時，酶解過程中不斷攪拌。
[0074] (4)干燥：酶解后的醪液過濾后噴霧干燥獲得羊肚菌酶解粉。
[0075] 上述植物乳桿菌膠囊的制備方法步驟如下：
[0076] 1)制備芯材：向經(jīng)發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)的植物乳桿菌發(fā)酵液中添加發(fā)酵液質(zhì)量3%的 水蘇糖和8 %的羊肚菌酶解粉，然后與凍干保護劑溶液混合，-50°C下預(yù)凍0. 5h，然后在真 空冷凍干燥機中凍干l〇h，凍干后研磨粉碎制成芯材；發(fā)酵液與凍干保護劑溶液的比例為 1:1. 4 ;凍干保護劑溶液由脫脂奶粉、海藻糖、麥芽糊精溶液組成；三種溶液的體積比為脫 脂奶粉：海藻糖：麥芽糊精=3:1:0. 5 ;
[0077] 所述脫脂奶粉、海藻糖、麥芽糊精溶液的濃度分別為：脫脂奶粉5%，海藻糖1%， 麥芽糊精2%。
[0078] 2)包被：將芯材懸浮在流化床中，壁材噴霧包被，從一個噴頭中噴入殼聚糖、甘油 和海藻糖的混合液，從另一個噴頭中噴入黃原膠、卡拉膠和酶解大豆分離蛋白的混合液，噴 霧速度控制相同，包被過程中流化床內(nèi)溫度在28°C，30分鐘后即形成膠囊。
[0079] 實施例3
[0080] 植物乳桿菌膠囊產(chǎn)品由壁材、植物乳桿菌、凍干保護劑、水蘇糖、羊肚菌酶解粉組 成。
[0081] 所述的壁材由酶解大豆分離蛋白、殼聚糖、黃原膠、卡拉膠、甘油和海藻糖組成；上 述各物質(zhì)配成混合溶液時的濃度分別為：酶解大豆分離蛋白7%、殼聚糖2%、黃原膠1%、 卡拉膠0.5%、甘油1 %，海藻糖2%。
[0082] 酶解大豆分離蛋白的制備方法為：配制濃度為10-13%大豆分離蛋白溶液加熱到 42-45°C，調(diào)整pH到5,加入大豆分離蛋白重量1 %的酸性蛋白酶保溫酶解0. 5小時，酶解后 溶液噴霧干燥獲得酶解大豆分離蛋白。
[0083] 羊肚菌酶解粉制備方法如下：
[0084] (1)羊肚菌子實體干燥粉碎；
[0085] (2)水溶均質(zhì)：將粉碎的羊肚菌子實體加入不銹鋼筒中，加入子實體6倍重量的 水，浸泡3小時，然后將此羊肚菌子實體液通過膠體磨，膠體磨操作條件為：調(diào)整膠體磨定 子與轉(zhuǎn)子的間隙為1微米，膠體磨流量為1噸/小時；
[0086] (3)升溫酶解：將經(jīng)過膠體磨處理的羊肚菌子實體液混合液轉(zhuǎn)移到不銹鋼酶解罐 中加熱到60°C，調(diào)整pH到4. 5,加入羊肚菌子實體重量0. 1%的纖維素酶、0. 1%的￠-葡 聚糖酶、0. Ol %的蛋白酶，保溫酶解0. 5小時，酶解過程中不斷攪拌。
[0087] (4)干燥：酶解后的醪液過濾后真空冷凍干燥獲得羊肚菌酶解粉。
[0088] 上述植物乳桿菌膠囊的制備方法步驟如下：
[0089] 1)制備芯材：向經(jīng)發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)的植物乳桿菌發(fā)酵液中添加發(fā)酵液質(zhì)量3%的 水蘇糖和8 %的羊肚菌酶解粉，然后與凍干保護劑溶液混合，-50°C下預(yù)凍0. 5h，然后在真 空冷凍干燥機中凍干l〇_18h，凍干后研磨粉碎制成芯材；
[0090] 所述發(fā)酵液與凍干保護劑溶液的比例為1:0.8;所述凍干保護劑溶液由脫脂 奶粉、海藻糖、麥芽糊精溶液組成；三種溶液的體積比為脫脂奶粉：海藻糖：麥芽糊精= 3:1:0? 5 ;
[0091] 2)包被：將芯材懸浮在流化床中，壁材噴霧包被，從一個噴頭中噴入殼聚糖、甘油 和海藻糖的混合液，從另一個噴頭中噴入黃原膠、卡拉膠和酶解大豆分離蛋白的混合液，噴 霧速度控制相同，包被過程中流化床內(nèi)溫度在38°C，30分鐘后即形成膠囊。
[0092] 植物乳桿菌為保藏編號CGMCC NO. 9405菌種。
[0093] 實施例4
[0094] 植物乳桿菌膠囊產(chǎn)品耐膽鹽測試。
[0095] 將實施例2-3中制備的膠囊產(chǎn)品置于37°C的豬膽鹽溶液（溶液濃度3. 0% )中保 溫并不斷攪拌，2h后取出，用滅菌生理鹽水洗滌，用解囊液溶解，測定乳酸菌存活率，并與未 包埋的菌液進行比較。測試結(jié)果如下表所示。
[0096]

【權(quán)利要求】
1. 一種植物乳桿菌膠囊的制備方法，所述膠囊由壁材、植物乳桿菌、凍干保護劑、水蘇 糖、羊肚菌酶解粉組成，所述的壁材由酶解大豆分離蛋白、殼聚糖、黃原膠、卡拉膠、甘油和 海藻糖組成，上述各物質(zhì)配成混合溶液時的濃度分別為：酶解大豆分離蛋白7-10%、殼聚 糖1-2%、黃原膠1-3%、卡拉膠0. 1-0. 5%、甘油0. 3-1 %，海藻糖0. 5-2% ;所述植物乳桿 菌的保藏號為CGMCC NO. 9405 ;所述制備方法步驟如下： 1) 制備芯材：向經(jīng)發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)的植物乳桿菌發(fā)酵液中添加發(fā)酵液質(zhì)量3-5%的 水蘇糖和5-8%的羊肚菌酶解粉，然后與凍干保護劑溶液混合，-50°C下預(yù)凍0. 5h，然后在 真空冷凍干燥機中凍干l〇_18h，凍干后研磨粉碎制成芯材；所述凍干保護劑溶液由脫脂奶 粉、海藻糖、麥芽糊精三種溶液體積比3:1:0. 5組成； 2) 包被：將芯材懸浮在流化床中，壁材噴霧包被，從一個噴頭中噴入殼聚糖、甘油和海 藻糖的混合液，從另一個噴頭中噴入黃原膠、卡拉膠和酶解大豆分離蛋白的混合液，噴霧速 度控制相同，包被過程中流化床內(nèi)溫度在25-38°C之間，30分鐘后即形成膠囊。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種植物乳桿菌膠囊的制備方法，其特征在于，所述酶解大豆 分離蛋白的制備方法為：配制濃度為10-13%大豆分離蛋白溶液加熱到30-45°C，調(diào)整pH到 3-5,加入大豆分離蛋白重量0. 1-1 %的酸性蛋白酶保溫酶解0. 5-1. 5小時，酶解后溶液噴 霧干燥獲得酶解大豆分離蛋白。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種植物乳桿菌膠囊的制備方法，其特征在于，所述羊肚菌酶 解粉的制備方法如下： (1) 羊肚菌子實體干燥粉碎； (2) 水溶均質(zhì)：將粉碎的羊肚菌子實體加入不銹鋼筒中，加入子實體3-6倍重量的水， 浸泡3-5小時，然后將此羊肚菌子實體液通過膠體磨，膠體磨操作條件為：調(diào)整膠體磨定子 與轉(zhuǎn)子的間隙為〇. 5-1微米，膠體磨流量為0. 4-1噸/小時； (3) 升溫酶解：將經(jīng)過膠體磨處理的羊肚菌子實體液混合液轉(zhuǎn)移到不銹鋼酶解罐中 加熱到50-60°C，調(diào)整pH到4. 5-6. 0,加入羊肚菌子實體重量0. 05-0. 1 %的纖維素酶、 0. 01-0. 1%的￠-葡聚糖酶、0.01-0. 1%的蛋白酶，保溫酶解0.5-1. 5小時，酶解過程中不 斷攪拌。 (4) 干燥：酶解后的醪液過濾后干燥獲得羊肚菌酶解粉。
4. 如權(quán)利要求1所述的一種植物乳桿菌膠囊的制備方法，其特征在于，所述發(fā)酵液與 凍干保護劑溶液混合時的比例為1:1. 4-0. 8。
5. 如權(quán)利要求1所述的一種植物乳桿菌膠囊的制備方法，其特征在于，所述凍干保護 劑中三種溶液的濃度分別為：脫脂奶粉5%，海藻糖1 %，麥芽糊精2%。
【文檔編號】A23K1/16GK104381599SQ201410564632
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月21日
【發(fā)明者】邵素英, 李建樹 申請人:邵素英