一種養(yǎng)心菜的組織培養(yǎng)一步成苗快速繁殖方法
【專利摘要】一種養(yǎng)心菜的組織培養(yǎng)一步成苗快速繁殖方法，屬于植物組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明解決養(yǎng)心菜常規(guī)繁殖方法系數(shù)低，生長緩慢，難以形成規(guī)?；a(chǎn)的問題。所述方法是按下述步驟進行的：步驟一、消毒滅菌；步驟二、一步成苗培養(yǎng)；步驟三、試管苗的馴化與移栽：將生根苗取出，放到光照充足的煉苗室內(nèi)，3至5天后將瓶口打開繼續(xù)煉苗2至3天；然后取出試管苗，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽基質(zhì)中，基質(zhì)由泥炭土與蛭石構(gòu)成，其中泥炭土與蛭石的重量份數(shù)比為1:1，起初7天保證每天給小苗噴霧2-3次。本發(fā)明用于養(yǎng)心菜的組織培養(yǎng)。
【專利說明】一種養(yǎng)心菜的組織培養(yǎng)一步成苗快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種養(yǎng)心菜的組織培養(yǎng)一步成苗快速繁殖方法，屬于植物組織培養(yǎng)技 術(shù)領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 目前養(yǎng)心菜的生產(chǎn)繁殖以分株繁殖和扦插繁殖為主。具體如下：1、扦插繁殖選取 當(dāng)年生長健壯枝條，切成10-15cm長的莖段，去掉基部葉片，每莖段留3. 4葉，打頂，插人畦 內(nèi)，人土 3 - 5cm，澆一次透水，一般7-10天生根成活，枝條最好隨剪隨種，20天后即可移栽 定植。也可在大田直接扦插，定植密度為行距25cm，穴距15cm，每穴2-3株。2、分株繁殖 將要分株的養(yǎng)心菜連根挖起，按每一段帶有2個以上根芽的標(biāo)準(zhǔn)進行分株，然后按株行距 15cm x25cm進行分植。挖苗時謹(jǐn)慎操作，盡量不破壞母株，切下的每一段根盡量多帶根芽， 以縮短緩苗時間。定植后鋪好滴灌帶，并滴適量的壓根水。
[0003] 上述養(yǎng)心菜常規(guī)繁殖方法系數(shù)低，生長緩慢，難以形成規(guī)?；a(chǎn)。用組織培養(yǎng)技 術(shù)，既可保持它的優(yōu)良特性，又能在短期內(nèi)獲得大量的試管苗，且移栽成活率高，生長迅速， 可克服常規(guī)繁殖方法的不足，對緩解人們對費菜的需求可能有一定的參考價值。
[0004] 常規(guī)的植物組織培養(yǎng)再生途徑主要為外植體完全脫分化形成愈傷組織，然后將愈 傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上分化出芽，再將其轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根。但該途徑較 煩瑣，種質(zhì)易產(chǎn)生變異，再生頻率不高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明為了解決問題，進而提供了一種養(yǎng)心菜的組織培養(yǎng)一步成苗快速繁殖方 法。
[0006] 本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采取的技術(shù)方案是：所述方法是按下述步驟進行的：
[0007] 步驟一、取無病蟲害、生長健壯的養(yǎng)心菜葉片作外植體，然后消毒滅菌；
[0008] 步驟二、一步成苗培養(yǎng)：將消毒滅完菌的葉片切成面積為0. 4-0. 6cm2塊狀后接種 到培養(yǎng)基上，接種后培養(yǎng)基置于溫度為25 士 2°C條件下，全黑暗培養(yǎng)，7至10天后進行光照 培養(yǎng)至生根；
[0009] 步驟三、試管苗的馴化與移栽：將生根苗取出，放到光照充足的煉苗室內(nèi)，3至5天 后將瓶口打開繼續(xù)煉苗2至3天；然后取出試管苗，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽基質(zhì)中，基質(zhì)由 泥炭土與蛭石構(gòu)成，其中泥炭土與蛭石的重量份數(shù)比為1:1，起初7天保證每天給小苗噴霧 2-3 次。
[0010] 進一步的，步驟一外植體的消毒滅菌方法如下：在洗潔精水中清洗IOmin后，除去 葉片表面污物，流水中沖洗30min ;在無菌條件下，用70%酒精浸泡45s，無菌水沖洗3次， 再在0. 1 %升汞溶液浸泡4min，然后用無菌水沖洗5次，無菌濾紙吸干表面水分。
[0011] 進一步的，步驟二的光強為20001x，14h/d的光照。
[0012] 進一步的，步驟二中以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基，在ILMS培養(yǎng)基中，添加不同濃 度的6-芐基腺嘌呤、萘乙酸、2, 4-二氯苯氧乙酸、糖和瓊脂組合，糖為蔗糖或者葡萄糖，其 中6-芐基腺嘌呤濃度為I. 0mg/L、2. Omg/L或3. Omg/L，萘乙酸濃度為0? lmg/L、0. 2mg/L或 0? 4mg/L，2, 4-二氯苯氧乙酸濃度為 0? 0mg/L、0. lmg/L 或 0? 2mg/L。
[0013] 進一步的，步驟二的培養(yǎng)基配方為 MS+6-BA 2. 0mg/L、2, 4-D 0? 2mg/L、NAA 0? 2mg/ L、蔗糖25g/L和瓊脂7. Og/L，培養(yǎng)基的pH值為5. 8。
[0014] 進一步的，步驟二中培養(yǎng)基為 MS+6-BA I. 0mg/L、2, 4-D 0? 2mg/L、NAA 0? 2mg/L、葡 萄糖25g/L和瓊脂7. Og/L，培養(yǎng)基的pH值為5. 8。
[0015] 本發(fā)明的有益效果是：養(yǎng)心菜以葉片作為外植體一步成苗法是外植體在形成愈傷 組織后，不需要轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，而是直接在原培養(yǎng)基上分化，分化的順序通常是先根 后芽，直止形成健壯的全苗。再生周期短，繁殖系數(shù)和再生頻率高，易操作，培養(yǎng)程序簡單， 不影響增殖率，能保持原種特性，便于大規(guī)模生產(chǎn)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖1是養(yǎng)心菜葉片接種后，愈傷組織分化出的小芽照片；圖2是一步培養(yǎng)成的組培 苗照片；圖3是馴化移栽成功的組培苗。

【具體實施方式】

【具體實施方式】 [0017] 一：本實施方式以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步描述和說 明。所述方法是按下述步驟進行的：
[0018] 步驟一、取無病蟲害、生長健壯的養(yǎng)心菜葉片作外植體，然后消毒滅菌；
[0019] 步驟二、葉片愈傷組織的誘導(dǎo)：將消毒滅完菌的葉片切成面積為0. 4-0. 6cm2塊狀 后接種到培養(yǎng)基上，接種后培養(yǎng)基置于溫度為25 士 2°C條件下，全黑暗培養(yǎng)，7至10天后進 行光照培養(yǎng)至生根；
[0020] 步驟三、試管苗的馴化與移栽：將生根苗取出，放到光照充足的煉苗室內(nèi)，3至5天 后將瓶口打開繼續(xù)煉苗2至3天；然后取出試管苗，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽基質(zhì)中，基質(zhì)由 泥炭土與蛭石構(gòu)成，其中泥炭土與蛭石的重量份數(shù)比為1:1，起初7天保證每天給小苗噴霧 2-3 次。
[0021] 作為優(yōu)選，步驟一外植體的消毒滅菌方法如下：在洗潔精水中清洗IOmin后，除去 葉片表面污物，流水中沖洗30min ;在無菌條件下，用70%酒精浸泡45s，無菌水沖洗3次， 再在0. 1 %升汞溶液浸泡4min，然后用無菌水沖洗5次，無菌濾紙吸干表面水分。
[0022] 作為優(yōu)選，步驟二的光強為20001x，14h/d的光照。
[0023] 作為優(yōu)選，步驟二中以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基，在ILMS培養(yǎng)基中，添加不同濃 度的6-芐基腺嘌呤、萘乙酸、2, 4-二氯苯氧乙酸、糖和瓊脂組合，糖為蔗糖或者葡萄糖，其 中6-芐基腺嘌呤濃度為I. 0mg/L、2. Omg/L或3. Omg/L，萘乙酸濃度為0? lmg/L、0. 2mg/L或 0? 4mg/L，2, 4-二氯苯氧乙酸濃度為 0? 0mg/L、0. lmg/L 或 0? 2mg/L。
[0024] 作為優(yōu)選，步驟二的培養(yǎng)基配方為 MS+6-BA 2. 0mg/L、2, 4-D 0? 2mg/L、NAA 0? 2mg/ L、蔗糖25g/L和瓊脂7. 0g/L，培養(yǎng)基的pH值為5. 8。
[0025] 作為優(yōu)選，步驟二中培養(yǎng)基為 MS+6-BA I. 0mg/L、2, 4-D 0? 2mg/L、NAA 0? 2mg/L、葡 萄糖25g/L和瓊脂7. 0g/L，培養(yǎng)基的pH值為5. 8。其中6-芐基腺嘌呤、萘乙酸和2, 4-二 氯苯氧乙酸均為市售分析純化學(xué)試劑。所需激素的配制方法：6-芐基腺嘌呤出-BA):配 制濃度為lmg/ml，稱取0. Ig6-芐基腺嘌呤用少許0. lmol/L HCl溶解后用蒸餾水定容至 IOOml容量瓶中待用；萘乙酸（NAA):配制濃度為0. 5mg/ml，稱取0. 05g萘乙酸用少許無水 乙醇溶解后用蒸餾水定容至IOOml容量瓶中待用；2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D):配制濃度 為0. 5mg/ml，稱取0.05g萘乙酸用少許0. lmol/L HCl乙醇溶解后用蒸餾水定容至IOOml容 量瓶中待用；
[0026] 采用下述試驗驗證本實施方式的效果：
[0027] 以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并在ILMS培養(yǎng)基中，添加不同濃度的6-芐基腺嘌 呤、萘乙酸和2,4_二氯苯氧乙酸的不同組合，采用三因素三水平L 9(34)正交試驗設(shè)計設(shè) 計，配制成養(yǎng)心菜組織培養(yǎng)一步成苗培養(yǎng)基，其中6-芐基腺嘌呤濃度為I. 0mg/L、2. Omg/L、 3. Omg/L，萘乙酸濃度為 0? lmg/L、0. 2mg/L、0. 4mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸濃度為 0? Omg/L、 0? lmg/L、0. 2mg/L，見表一。
[0028] 表一

【權(quán)利要求】
1. 一種養(yǎng)心菜的組織培養(yǎng)一步成苗快速繁殖方法，其特征在于：所述方法是按下述步 驟進行的： 步驟一、取無病蟲害、生長健壯的養(yǎng)心菜葉片作外植體，然后消毒滅菌； 步驟二、一步成苗培養(yǎng)：將消毒滅完菌的葉片切成面積為0. 4-0. 6cm2塊狀后接種到培 養(yǎng)基上，接種后培養(yǎng)基置于溫度為25 士 2°C條件下，全黑暗培養(yǎng)，7至10天后進行光照培養(yǎng) 至生根； 步驟三、試管苗的馴化與移栽：將生根苗取出，放到光照充足的煉苗室內(nèi)，3至5天后將 瓶口打開繼續(xù)煉苗2至3天；然后取出試管苗，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽基質(zhì)中，基質(zhì)由泥炭土 與蛭石構(gòu)成，其中泥炭土與蛭石的重量份數(shù)比為1: 1，起初7天保證每天給小苗噴霧2-3次。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種養(yǎng)心菜的組織培養(yǎng)一步成苗快速繁殖方法，其特征在于步 驟一外植體的消毒滅菌方法如下：在洗潔精水中清洗lOmin后，除去葉片表面污物，流水中 沖洗30min ;在無菌條件下，用70%酒精浸泡45s，無菌水沖洗3次，再在0. 1 %升汞溶液浸 泡4min，然后用無菌水沖洗5次，無菌濾紙吸干表面水分。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種養(yǎng)心菜的組織培養(yǎng)一步成苗快速繁殖方法，其特征在于步 驟二的光強為20001x，14h/d的光照。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種養(yǎng)心菜的組織培養(yǎng)一步成苗快速繁殖方法，其特征在于步 驟二中以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基，在1LMS培養(yǎng)基中，添加不同濃度的6-芐基腺嘌呤、萘 乙酸、2, 4-二氯苯氧乙酸、糖和瓊脂組合，糖為蔗糖或者葡萄糖，其中6-芐基腺嘌呤濃度為 1. 0mg/L、2. Omg/L 或 3. Omg/L，萘乙酸濃度為 0· lmg/L、0. 2mg/L 或 0· 4mg/L，2, 4-二氯苯氧 乙酸濃度為 〇. 〇mg/L、0. lmg/L 或 0. 2mg/L。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種養(yǎng)心菜的組織培養(yǎng)一步成苗快速繁殖方法，其特征在于步 驟二的培養(yǎng)基配方為 MS+6-BA 2. 0mg/L、2, 4-D 0· 2mg/L、NAA 0· 2mg/L、蔗糖 25g/L 和瓊脂 7. Og/L，培養(yǎng)基的pH值為5.8。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種養(yǎng)心菜的組織培養(yǎng)一步成苗快速繁殖方法，其特征在于： 步驟二中培養(yǎng)基為 MS+6-BA L 0mg/L、2, 4-D 0· 2mg/L、NAA 0· 2mg/L、葡萄糖 25g/L 和瓊脂 7. Og/L，培養(yǎng)基的pH值為5.8。
【文檔編號】A01H4/00GK104255532SQ201410570569
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月22日
【發(fā)明者】李媛, 侯可雷 申請人:李媛, 侯可雷